Tách và xác định cấu trúc hợp chất tritecpenooit từ vỏ cây vối (cleistocalyx operculatus (roxb) mer et perry) ở nghệ an

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH ===  === KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HỢP CHẤT TRITECPENOIT TỪ VỎ CÂY VỐI (CLEISTOCALYX OPERCULATUS (ROXB) MERR ET PERRY) Ở NGHỆ AN CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỌC Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS Hoàng Văn Lựu Sinh viên thực : TRẦN THỊ HUẾ Lớp : 49A Hoá Mã sinh viên : 0852010374 VINH, 2012 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành gửi lời cảm ơn tới: PGS TS Hoàng Văn Lựu – Khoa Hóa học – Trường Đại học Vinh Thầy giao đề tài, tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hồn thiện khố luận Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới thầy giáo khoa Hóa học, khoa Sau đại học – trường Đại học Vinh, thầy giáo, giáo trường THPT Đặng Thai Mai gia đình, người thân, bạn bè tạo điều kiện để giúp đỡ vật chất lẫn tinh thần để tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn! Vinh, ngày tháng năm 2012 Tác giả Trần Thị Huế MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT DANH SÁCH BẢNG DANH SÁCH HÌNH VÀ SƠ ĐỒ MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài .1 Nhiệm vụ ngiên cứu Đối tượng nghiên cứu .2 Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 CÂY VỐI .3 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Mô tả thực vật .3 1.4 Thành phần hóa học vối .4 1.1.5 Về tác dụng dược lí: 17 Chương 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 19 2.1 PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU 19 2.2 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH, TÁCH VÀ PHÂN LẬP CÁC CHẤT 19 2.3 PHƯƠNG PHÁP KHẢO SÁT CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT .19 2.4 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT .20 2.4.1 Thiết bị 20 2.4.2 Hoá chất 20 2.5 TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HỢP CHẤT TỪ VỎ CÂY VỐI 20 2.5.1 Tách hợp chất từ vỏ vối 20 2.5.2 Xác định cấu trúc hợp chất 23 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất B (TDV10) 24 KẾT LUẬN 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO .44 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT CC : Column Chromatography (Sắc ký cột) TLC : Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) : Proton Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ H – NMR cộng hưởng từ 13 C – NMR : hạt nhân proton) Carbon Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon – 13) DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer s : Singlet br s : singlet tù br d : doublet tù d : Doublet m : multiplet DANH SÁCH BẢNG Bảng 1.4 Thành phần hóa học tinh dầu vối Quảng Châu, Trung Quốc Bảng 1.5 Thành phần hóa học tinh dầu nụ vối Bảng 1.6 Thành phần hóa học tinh dầu vối thành phố Vinh, Nghệ An Bảng 1.7 Thành phần hoá học tinh dầu nụ vối non nụ vối già Bảng 1.8 Thành phần hoá học tinh dầu hoa vối thành phố Vinh, Nghệ An 10 Bảng 2.1: Số liệu trình chạy cột cao vỏ vối .21 Bảng 3.1 : Số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân hợp chất TDV10 dung môi CDCl3 29 DANH SÁCH HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1 Ảnh vối Hình 1.2: Phổ 1H-NMR hợp chât B 25 Hình 1.3: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất B .26 Hình 1.5 : Phổ 13C – NMR hợp chất B 32 Hình 1.6 : Phổ giãn 13C – NMR hợp chất B 33 Hình 1.7: Phổ DEPT hợp chất B 34 Hình 1.8: Phổ giãn DEPT hợp chất B 35 Hình 1.9: Phổ HMBC hợp chất B 36 Hình 1.11: Phổ giãn HMBC hợp chất B .38 Hình 1.12: Phổ giãn HMBC hợp chất B .39 Hình 1.14: Phổ HSQC hợp chất B 40 Hình 1.15: Phổ giãn HSQC hợp chất B 41 Hình 1.16: Phổ giãn HSQC hợp chất B 42 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, cận xích đạo, lượng mưa nhiều, độ ẩm cao nên có thảm thực vật phong phú Mặc dù nay, việc nghiên cứu hệ thực vật nước ta chưa tiến hành cách đầy đủ quy mô, theo tổng hợp từ nguồn tài liệu nhiều tác giả Việt Nam có 7.000 lồi thực vật học bậc cao Trong số có 2000 loài thực vật nhân dân ta sử dụng làm nguồn lương thực, thực phẩm, lấy gỗ, tinh dầu, thuốc chữa bệnh… Các nhà nghiên cứu tổng hợp nhiều hợp chất có tác dụng chữa bệnh, song hợp chất có số hạn chế định, gây phản ứng phụ không mong muốn Mặt khác, Việt Nam nước phát triển, loại thuốc chữa bệnh hầu hết nhập từ nước ngồi có giá thành cao, gây nên khó khăn cho người sử dụng Do đó, nhà nước có chủ trương tăng cường sản xuất thuốc nước, hạn chế nhập khẩu, hạ giá thành sản phẩm Một nguồn nguyên liệu sản xuất thuốc lấy từ thiên nhiên Vì vậy, vấn đề đặc biệt quan tâm nghiên cứu hợp chất tách từ sản phẩm thiên nhiên Trong số loài cần quan tâm nghiên cứu có vối (Cleistocslyx operculatus Roxb) Ở nước ta, vối mọc nhiều nơi, tập trung nhiều miền Trung Từ nhiều đời nay, vối nhân dân ta, vùng nông thôn trồng để lấy lá, nụ đun nước uống ngày Theo đông y, vối có tác dụng kiện tỳ, giúp ăn ngon, tiêu hóa tốt Ngồi vối nụ vối làm thuốc chữa mụn nhọn, lở loét, ghẻ Mới đây, viện Đông y thử áp dụng vối làm thuốc chữa bệnh đường ruột, viêm họng, bệnh da Từ năm 1991 trở lại đây, số cơng trình nước giới nghiên cứu vối cho thấy hàm lượng flavonoit chứa cao số chất có hoạt tính kháng HIV Đặc biệt, nghiên cứu gần cho thấy nước chiết nụ vối thành phần thuốc trợ tim, chống khối u Chính vậy, chúng tơi chọn đề tài "Tách xác định cấu trúc hợp chất tritecpenoit từ vỏ vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb) Merr et Perry) Nghệ An" nhằm góp phần xác định thành phần hóa học vối, tìm nguồn ngun liệu cho ngành công nghiệp dược liệu, công nghiệp hương liệu, khai thác sử dụng có hiệu nguồn tài nguyên quý giá địa phương Nhiệm vụ ngiên cứu - Lấy mẫu vỏ vối - Ngâm với dung môi MeOH chiết với dung môi khác - Phân lập hợp chất phương pháp sắc ký cột sắc ký lớp mỏng - Làm chất phương pháp rửa kết tinh phân đoạn - Xác định cấu trúc hợp chất phương pháp: phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu vỏ vối, mẫu lấy thành phố Vinh, tỉnh Nghệ An Chương TỔNG QUAN 1.1 CÂY VỐI Hình 1.1 Ảnh vối 1.1.1 Tên gọi Cây vối gọi chè vối, chè gội có tên khoa học Cleistocalyx operculatus (Roxb) Merr Et Perry; Syzygium nervosum DC 1.1.2 Phân bố Vối mọc hoang trồng hầu hết khắp tỉnh nước ta Còn thấy vùng nhiệt đới Châu á, Trung Quốc 1.1.3 Mô tả thực vật Cây vối cỡ vừa , cao 5-6m Cành trịn hay hình cạnh, nhẵn Cuống dài 1-1,5cm, phiến dai, cứng, bầu dục hay trái xoan ngược, hình trứng rộng, giảm nhọn gốc, có mũi nhọn ngắn, hai mặt màu nhạt có đốm màu nâu, dài 8-9cm, rộng 4-5cm Hoa gần khơng có cuống, màu lục, nhạt, trắng Cụm hoa hình tháp, trải kẽ rụng Quả hình cầu hay hình trứng, đường kính 7-12 mm, nhám, có dịch Tồn lá, cành non nụ có mùi thơm dễ chịu Cây mọc hoang trồng khắp nơi Cần phân biệt với vối rừng, mọc hoang vùng núi Nó thuộc họ sim đông y dùng vỏ làm thuốc gọi hậu phác [1, 10, 18] 1.4 Thành phần hóa học vối Các nhà hóa học Trung Quốc xác định vối có 0,08% tinh dầu, cịn nụ hoa vối có 0,18% tinh dầu Bảng 1.4 Thành phần hóa học tinh dầu vối Quảng Châu, Trung Quốc Thành phần hóa học %  - pinen 0,85  - pinen 1,80  - myrcen 1,80 (Z) -  - ocimen 53,18 (E) -  - ocimen 4,5 2,5,5 - trimethyl – 1,6 – heptadien 0,90 3,4 - dimethyl – 2,4,6 – octatrien 1,27 Carvyl axetat 1,28 Terpynyl acetate 0,15 Geraniol 1,03 (Z) – caryophyllen 3,62 Aromandendren 0,55 Humulen 1,05  - Muurolen 0,36  - guaien 0,66  - guaien 0,47 Nerolidol 2,16 Octahydro - 3,6,8,8 – tetramethy - 3,7 – metanazulen 4,19  - cadinol 0,54 Hình 1.6 : Phổ giãn 13C – NMR hợp chất B 33 Hình 1.7: Phổ DEPT hợp chất B 34 Hình 1.8: Phổ giãn DEPT hợp chất B 35 Hình 1.9: Phổ HMBC hợp chất B 36 Hình 1.10: Phổ giãn HMBC hợp chất B 37 Hình 1.11: Phổ giãn HMBC hợp chất B 38 Hình 1.12: Phổ giãn HMBC hợp chất B 39 Hình 1.14: Phổ HSQC hợp chất B 40 Hình 1.15: Phổ giãn HSQC hợp chất B 41 Hình 1.16: Phổ giãn HSQC hợp chất B 42 KẾT LUẬN 1.Từ cao clorofom vỏ vối, phương pháp tách cột silicagel, hệ dung môi rửa giải clorofom- methanol với tăng dần độ phân cực tách chất A B Bằng phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H – NMR, 13C – NMR so sánh với phổ tài liệu công bố xác định cấu trúc của: Hợp chất B axit 3--O-axetylbetulinic CH2 29 20 H3C 21 30 19 12 11 CH3 25 O 10 1' H3C 2' O H3C 24 18 CH3 17 26 14 28 15 CH 27 CH3 23 43 COOH 16 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam (2005), Viện Dược liệu Nguyễn Xuân Dũng, Đào Hữu Vinh cộng (1985), phương pháp sắc ký, NXB Khoa học Kỹ thuật Nguyễn Xn Dũng, Hồng Văn Lựu, Tạ Thị Khơi and Piet A Leclercq (1984), "GC and GC/MS Analysis of the leaf oil of cleistocalyx operculatus (Roxb) Merr et Perry", Journal of Essential Oil Reseach, 6, 661-662 Nguyễn Xuân Dũng, Trần Đình Thắng, Hồng Văn Lựu,"Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu hoa sim ", Tạp chí dược liệu, số -, tập 4, Tr 108 - 109 Lê Thị Anh Đào, Nguyễn Xuân Dũng, Hoàng Văn Lựu (1997), "Nghiên cứu thành phần hóa học vối Nghệ An", Tạp chí hóa hóa học, T 35, số 3, Tr 47 - 51 Nguyễn Văn Đậu, Nguyễn thị Thuận, Đỗ Thị Thanh, "Phân lập số hợp chất từ vối (2007)", Tuyển tập cơng trình hội nghị khoa học cơng nghệ hóa học hữu toàn quốc lần thứ IV, Hà Nội, Tr 311 - 315 Phan Minh Giang, Trần Thị Hà, Nguyễn Hồng Anh, Phan Tống Sơn (2007), "Nghiên cứu hóa thực vật sim (Rhodomyrtus tomentosa (Ait) Hassk Myrtaceae", Tuyển tập cơng trình hội nghị khoa học cơng nghệ hóa học hữu toàn quốc lần thứ IV, Hà Nội, Tr 340 - 345 Nguyễn Quang Huy, Phan Tuấn Nghĩa, Ngô Văn Quang, Phan Văn Kiên (2007), "Axit asiatic phân lập từ sắn thuyền (Syzygium resinosum) có tác dụng lên vi khuẩn Streptoccus mutans", Tạp chí Dược học số Văn Ngọc Hướng, Nguyễn Xuân Sinh (2003), "Isolasion and Identification of two triterpenoids from the leaves of Syzygium resinosum Gagnep" 8th Eurasia comference on chemical sciences, Ha Noi, october 21 - 24, p.p.355 44 10 Đỗ Tất Lợi (2005), thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học 11 Hoàng văn Lựu (1996), Nghiên cứu thành phần hóa học số thuộc họ Sim (Myrtaceae) Nghệ An, Luận án Phó tiến sĩ khoa học Hóa học ĐHQGHN, Trường ĐHSP Hà Nội 12 Hoàng Văn Lựu, Nguyễn Xuân Dũng, Lê Thị Anh Đào (1994), "Đặc trưng hóa học tinh dầu hoa vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry) Việt Nam", Thông báo khoa học, Đại học sư phạm Hà Nội I, (4), 32 - 34 13 Hoàng Văn Lựu, Nguyễn Quang Tuệ (2004), "Thành phần hóa học gioi", Tạp chí phân tích hóa, lý sinh học, Tập 9, số 1, tr 20 - 23 14 Nguyễn Đức Minh (1975), Tính kháng khuẩn thuốc Việt Nam, NXB Y học 15 Hoàng Văn Lựu, Trần Thị Thanh, Nguyễn Văn Thanh Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ vỏ vối ((Cleistocalyx operculatus (Roxb) Merr et perry) Nghệ An Tạp húa học ứng dụng số 1/2010, trang 38-40 16 Nguyễn Văn Thanh, Hồng Văn Lựu, Chu Đình Kính, Phạm Thị Thanh Mỹ (2008), "Xác định cấu trúc số hợp chất từ rễ sắn thuyền (Syzygium resinosum Gagnep Merr et Perry)", Tạp chí Hố học T46, 5A 17 Nguyễn Văn Thanh, Hồng Văn Lựu, Chu Đình Kính (2009), "Nghiên cứu thành phần cấu trúc hoá học số hợp chất tách từ rễ vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry)", Tạp chí Hố học T47, 4A 18 Hồng Văn Lựu, Nguyễn Văn Thanh, Chu Đình Kính Tách xác định cấu trúc hợp chất tritecpenoit, Flavonoit từ rễ vối Tạp chí khoa học cơng nghệ 49(3A) (2011) 118-124 19 Trịnh Thị Thuỷ, Trần Văn Sung (1993 - 1994), "Kết nghiên cứu hóa học số thuốc Việt Nam" Tuyển tập báo cáo Khoa học - Viện Hóa học, 213 45 20 Http://www thay thuoc cua ban gov.vn 21 C l ye, J W Liu, D z Wei, Y H Lu, F Quian In vivo antitumor activity by 2’,4’- dihydroxy- 6’- methoxy- 3’,5’- dimethylchalcone in a solid human carcinoma xenograft model Cancer chemother Pharmacol 2005, 55(5), 447 - 452 22 Corie Djadjo, Michel Delmee, Joelle Quetin - Leclercq, "Antimicrobial activity of bark extract of Syzygium jambor (L) Alston (Myrtaceae)", Journal of Ethnopharmacology 71, issues 1-2, july 2000, p 307-313 23 Dachriyanus, Salni, Meloyn V Sargent, Brian W Skelton, Iwang Soediro, Mumu Sutisna, Allan H White and Elin Yulinal (2002), "Rhodomyrtone, an antibiotic from Rhodomyrtus tomentosa", Austr J Chem, 55, 229 - 232 24 Karla Slowing, Monica Sollhuber, Emilia Carretero and Angel Villor (1994), "Flavonoid glycosid from Eugenia jambor", Phytochemistry, Vol 37 No 1, pp 255 - 258 25 Ebrhard Breitmaier (2002), "Structure elucidation by NMR in Organic chemistry", John Wiley & son, ltd, p, 1-65 26 Myint Myint Khine (2006), "Isolation and Characterization of phytoconstituents from Myanmar Medicinal Plants", Dissertation, p, 29-33 27 L, John Goad, Toshihiro Akihisa (1997), "Analysis of Sterols", Blackie Academic & Professional 28 Zhang Fengxian, Liu Meifang and Lu Renrong (1990), "Chemical constituents from the bud of Cleistocalyx operculatus" Zhwu xuebao 32 (6), 469 29 Wai Hean Hui and Man Moon Li (1997), "Two new tritecpenoids from Rhodomyrtus tomentosa", Phytochemitry, Vol 15, pp 1741 - 1743 30 Byung Sun Min, Cao Van Thu, Nguyen Tien Dat, Nguyen Hai Dang, Han – Han Su and Tran Manh Hung Antioxidative flavonoids from Cleistocalyx operculatus Buds Chem Pharm Bull 56(12) 1725 - 1728 (2008) 46 31 Mah moud L Nassar, Ahmed H Gaara, Ahmed H El Ghorab, Abdel Razic H Farrag Huishen, Enamul Huo and Tomj Marby Chemical constituent of clove (Syzygium aromaticum Fam Myrtaceae) and their antioxidant activity, Rev Latinoamer Quim 35/3 (2007) 32 Phytochemical analysis of Bioactive constituents From edible Myrtaceae Fruif By Kurt Allerslev Reynertson A dissertation Submitted to the Graduate Faculty in Biolog in Partial Fulfillment For the degree of doctor of Philosophy, the city university of New York 33 Kuiate J.R Mouokeu S Wabo H.K TaneP.(2007) Antidermatophytic triterpenoids From Syzygium Jambos (L.) Alston ( Myrtaceae) Phytother Res 2007 Feb: 21(2) : 149-52 34 Trong Tuan Dao, Bui Thanh Tung, Phi Hung Nguyen, Phuong Thien Thuong, Sung Sik Yoo Eun Hee Kim, Sang Kyum Kim and Won Keun Oh C-Methylated flavonoids from Cleistocalyx Operculatus and Their Inhibitory EFFeđs on Novel InFluenza A (H1N10) Neuraminidase J.Nat.Prod, 2010,73 (10),PP 1636-1642 35 Carbohydrate Research volume 341, issue 1, 16 january 2006 pages 160 - 163 36 Hyo Hyun Yang, Jong-Keun Son, Bochan Jung, Ming Shan Zheng, JaeRyong Kim Epifriedelanol from the Root Bark of Ulmus davidiana inhibits Cellular Senescence inhuman primary cells Supporting information PLAMED2010-07-0734-op 37 Buying Sun Min, To Dao Cuong, Joo-Sang Lee, Mi Hee Woo and Tran Manh Hung (2011) Flavonoids from Cleistocalyx operculatus Buds and cytotocyx activity 47 ... 95:5 Hợp chất A TDV Hỵp chÊt B TDV 10 Sơ đồ tách hợp chất từ vỏ vối 22 2.5.2 Xác định cấu trúc hợp chất Để xác định cấu trúc hợp chất, sử dụng kết hợp phương pháp phổ: • Phổ cộng hưởng từ hạt... 2.5.1 Tách hợp chất từ vỏ vối - Chiết tách hợp chất từ vỏ vối Vỏ vối sau thu hái cân 5,0 kg, sau ngâm metanol thời gian 30 ngày Lọc chưng cất thu hồi dung môi áp suất giảm thu cao metanol Cao metanol... Thanh, Nguyễn Văn Thanh Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ vỏ vối ((Cleistocalyx operculatus (Roxb) Merr et perry) Nghệ An Tạp húa học ứng dụng số 1/2010, trang 38-40 16 Nguyễn Văn Thanh,