Nghiên cứu tỷ lệ các biến đổi phân tử kras, nras, braf, pik3ca và pten trong carcinôm tuyến đại trực tràng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN HỒNG PHONG NGHIÊN CỨU TỶ LỆ CÁC BIẾN ĐỔI PHÂN TỬ KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA VÀ PTEN TRONG CARCINÔM TUYẾN ĐẠI - TRỰC TRÀNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC TP HỒ CHÍ MINH - NĂM 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ********** NGUYỄN HỒNG PHONG NGHIÊN CỨU TỶ LỆ CÁC BIẾN ĐỔI PHÂN TỬ KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA VÀ PTEN TRONG CARCINÔM TUYẾN ĐẠI - TRỰC TRÀNG Chuyên ngành: Giải phẫu bệnh pháp y Mã số: 62720105 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS HUỲNH QUYẾT THẮNG TS BS HỒNG ANH VŨ TP HỒ CHÍ MINH - NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết nêu luận án hoàn tồn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tác giả NGUYỄN HỒNG PHONG MỤC LỤC Trang phụ bìa Trang Lời cam đoan Mục lục Bảng đối chiếu thuật ngữ Việt – Anh Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục sơ đồ Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 DỊCH TỄ HỌC UNG THƢ ĐẠI TRỰC TRÀNG 1.2 CƠ CHẾ PHÂN TỬ TRONG BỆNH SINH CARCINÔM TUYẾN ĐẠI - TRỰC TRÀNG 1.3 ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC CỦA CARCINÔM ĐẠI - TRỰC TRÀNG 16 1.4 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ GEN, PROTEIN LIÊN QUAN ĐƢỜNG TRUYỀN TÍN HIỆU HẠ NGUỒN EGFR 22 1.5 TỔNG QUAN ĐẶC ĐIỂM ĐỘT BIẾN CÁC GEN KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA TRONG CARCINÔM TUYẾN ĐẠI - TRỰC TRÀNG 30 1.6 ĐIỀU TRỊ CARCINÔM TUYẾN ĐẠI – TRỰC TRÀNG 40 1.7 MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP KHẢO SÁT ĐỘT BIẾN GEN 42 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 46 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46 2.3 Y ĐỨC 55 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 57 3.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, LÂM SÀNG 57 3.2 BIỂU HIỆN PROTEIN PTEN VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, LÂM SÀNG 62 3.3 ĐẶC ĐIỂM ĐỘT BIẾN GEN KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA 68 CHƯƠNG BÀN LUẬN 84 4.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, LÂM SÀNG 84 4.2 BIỂU HIỆN CỦA PROTEIN PTEN VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, LÂM SÀNG 88 4.3 ĐẶC ĐIỂM ĐỘT BIẾN GEN KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA 93 KẾT LUẬN 125 KIẾN NGHỊ 127 CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO Phụ lục PHIẾU THU THẬP SỐ LIỆU Phụ lục PHIẾU CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU DANH SÁCH BỆNH NHÂN BẢNG ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH Bất ổn định gen Genomic instability Bất ổn định nhiễm sắc thể Chromosomal instability Bất ổn định vi vệ tinh Microsatellite instability Bất ổn định vi vệ tinh mức độ cao Microsatellite instability - high Bất ổn định vi vệ tinh mức độ thấp Microsatellite instability - low Bệnh đa polýp tuyên gia đình Familial adenomatous polyposis Biểu sinh Epigenetic Chết tế bào theo lập trình Programmed cell death Đảo CpG CpG island Điểm nóng đột biến Mutation hotspot Đột biến sinh dƣỡng Somatic mutation Đột biến dòng mầm Germ line mutation Gen đè nén u Tumour suppressor gene Gen sinh ung Oncogene Gen sửa lỗi bắt cặp sai Mismatch repair gene Hội chứng bệnh đa polýp thiếu niên Juvenile polyposis syndrome Kiểu hình methyl hóa đảo CpG CpG island methylator phenotype Lộ trình đè nén u Suppressor pathway Lộ trình cổ điển Classical pathway Mất tính dị hợp tử Loss of Heterozygosity Ổ tuyến bất thƣờng niêm mạc đại tràng Aberrant crypt focus Ổ tuyến bất thƣờng niêm mạc đại tràng nghịch sản Dysplastic aberrant crypt focus Protein hoạt hóa Activating protein Sự bắt cặp loại Homodimerization Sự bắt cặp khác loại Heterodimerization Tâm động Kinetochore Tiền gen sinh ung Proto-oncogene Thụ thể yếu tố tăng trƣởng biểu bì Epithelial growth factor receptor Tự nhiên Wildtype Trạm kiểm soát phân bào Checkpoint Ung thƣ đại – trực tràng di truyền không bệnh đa polyp Hereditary nonpolyposis colorectal cancer U tuyến cƣa không Sessile serrated adenoma Vi vệ tinh Microsatellite Yếu tố tăng trƣởng chuyển dạng β Transformation growth factor - β Yếu tố chuyển đổi guanine Guanine exchange factors Yếu tố phiên mã Transcription factor DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ TIẾNG VIỆT BOĐNST Bất ổn định nhiễm sắc thể BOCVVT Bất ổn định vi vệ tinh SLBCS Sửa lỗi bắt cặp sai UTĐTT Ung thƣ đại – trực tràng TIẾNG ANH ACF Aberrant Crypt Foci APC Adenomatous Polyposis Coli BRAF v-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B CIN Chromosomal instability (Bất ổn định nhiễm sắc thể) del deletion (Đột biến đoạn) dup duplication (Đột biến lặp đoạn) EGFR Epidermal Growth Factor Receptor (Thụ thể yếu tố tăng trƣởng biểu bì) FDA Food and Drug Administration (Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm) GAP GTPase Activating Proteins (Protein hoạt hóa GTPase) GEF Guanine nucleotide Exchange Factors (Yếu tố trao đổi nucleotid Guanine) GLOBOCAN Global Cancer Burden (Gánh nặng ung thƣ toàn cầu) GTP Guanosine triphosphate IARC International Agency for Research on Cancer (Cơ quan nghiên cứu ung thƣ quốc tế) ins insertion (Đột biến chèn đoạn) KRAS v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog LDL Low-Density Lipoprotein (Lipoprotein trọng lƣợng phân tử thấp) LINE Long Interspersed Nucleotide Elements (Các đoạn nucleotid kéo dài nằm xen kẽ ADN có khả chuyển vị) LRP LDL-receptor-related protein (Protein liên quan thụ thể LDL) MAPK Mitogen - activated protein kinase (Men phosphoryl hóa protein hoạt hóa phân bào) MEK Mitogen extracellular signal-regulated kinase (Men phosphoryl hóa điều hịa tín hiệu phân bào ngoại bào) MMR Mismatch repair (Sửa lỗi bắt cặp sai) MSI Microsatellite instability (Bất ổn định vi vệ tinh) NRAS Neuroblastoma RAS viral oncogene homolog PIK3CA Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate3 kinase, catalytic subunit alpha PIP2 Phosphatidylinositol 3,4-diphosphate PIP3 Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate PTEN Phosphatase and tensin homolog DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Các kiểu đột biến KRAS thƣờng gặp carcinôm tuyến đại trực tràng theo sở liệu COSMIC 32 Bảng 1.2: Một số đột biến gặp gene BRAF 34 Bảng 1.3: Tổng hợp kiểu đột biến thƣờng gặp PIK3CA 38 Bảng 2.1: Phân loại giai đoạn bệnh theo TNM 49 Bảng 2.2: Chu kỳ luân nhiệt theo kỹ thuật COLD-PCR 53 Bảng 2.3: Chu kỳ luân nhiệt cycle sequencing 54 Bảng 3.1: Liên quan tình trạng biểu PTEN với tuổi 64 Bảng 3.2: Liên quan tình trạng biểu PTEN với giới tính 64 Bảng 3.3: Liên quan tình trạng biểu PTEN với vị trí u 65 Bảng 3.4: Liên quan tình trạng biểu PTEN với loại mô học 65 Bảng 3.5: Liên quan tình trạng biểu PTEN với độ mô học 66 Bảng 3.6: Liên quan tình trạng biểu PTEN với độ xâm lấn 66 Bảng 3.7: Liên quan tình trạng biểu PTEN với di hạch 67 Bảng 3.8: Liên quan tình trạng biểu PTEN với di xa 67 Bảng 3.9: Tóm tắt loại đột biến KRAS 69 Bảng 3.10: Liên quan tình trạng đột biến KRAS tuổi 76 Bảng 3.11: Liên quan tình trạng đột biến KRAS giới tính 77 Bảng 3.12: Liên quan tình trạng đột biến KRAS loại mô học 78 Bảng 3.13: Liên quan tình trạng đột biến KRAS với độ xâm lấn (pT) 79 Bảng 3.14: Liên quan đột biến PIK3CA với vị trí u 81 Bảng 3.15: Liên quan đột biến PIK3CA với độ xâm lấn 82 Bảng 4.1: Tỉ lệ đột biến gen KRAS ung thƣ đại - trực tràng 93 Bảng 4.2: Phân bố vị trí đột biến KRAS theo codon 95 Bảng 4.3: :Tỉ lệ đột biến BRAF nghiên cứu trƣớc 102 Bảng 4.4: Tỉ lệ đáp ứng với kháng thể đơn dòng kháng EGFR theo tình trạng đột biến BRAF 104 125 Pauline A.M, Roest R G., Roberts S S., et al (1993) “Protein truncation test (PTT) for rapid detection of translation-terminating mutations” Human Molecular Genetics, (10), pp.1719–1721 126 Perkins G., Pilati C., Blons H., Laurent-Puig P (2014), "Beyond KRAS status and response to anti-EGFR therapy in metastatic colorectal cancer".Pharmacogenomics, 15 (7), pp 1043-52 127 Perrone F., Lampis A., Orsenigo M., et al (2009), "PI3KCA/PTEN deregulation contributes to impaired responses to cetuximab in metastatic colorectal cancer patients".Ann Oncol, 20 (1), pp 84-90 128 Pollock A.M., (1991) “Quirke P Adenoma screening and colorectal cancer” BMJ 303, pp.1202 129 Prenen H., De Schutter J., Jacobs B., et al (2009), "PIK3CA mutations are not a major determinant of resistance to the epidermal growth factor receptor inhibitor cetuximab in metastatic colorectal cancer".Clin Cancer Res, 15 (9), pp 3184-8 130 Rajagopalan H., Lengauer C (2004) “Aneuploidy and cancer” Nature 432, pp.338–341 131 Rashid A., Issa J.P (2004) “CpG island methylation in gastroenterologic neoplasia: a maturing field” Gastroenterology 127, pp.1578–1588 132 Rosty C., Young J P., et al (2013), "Colorectal carcinomas with KRAS mutation are associated with distinctive morphological and molecular features".Mod Pathol, 26 (6), pp 825-34 133 Rosty C., Young J P., Walsh M D., et al (2013), "PIK3CA activating mutation in colorectal carcinoma: associations with molecular features and survival".PLoS One, (6), pp e65479 134 Roszkowski K., Zurawski B., Jozwicki W., Basta P., Lewandowska M A (2014), "Impact of Specific KRAS Mutation in Exon on Clinical Outcome of Chemotherapy- and Radiotherapy-Treated Colorectal Adenocarcinoma Patients".Mol Diagn Ther 135 Roth A D., Tejpar S., Delorenzi M., et al (2010), "Prognostic role of KRAS and BRAF in stage II and III resected colon cancer: results of the translational study on the PETACC-3, EORTC 40993, SAKK 6000 trial".J Clin Oncol, 28 (3), pp 466-74 136 Ruddon Raymond W (2007), "Cancer_biology", Oxford University Press, Inc, pp 343-378 137 Salahshor S., Kressner U., Pâhlman L., et al (1999) “Colorectal cancer with and without microsatellite instability involves different genes” Genes Chromosomes Cancer 26, pp 247–252 138 Saltz L.B., Meropol N.J., et al (2004) “Phase II trial of cetuximab in patients with refractory colorectal cancer that expresses the epidermal growth factor receptor” J Clin Oncol, 22, pp.1201-1208 139 Samuels Y (2004), "High frequency of mutations of the PIK3CA gene in human cancers".ScienceScience, 304 (5670), pp 554 140 Sanchez-Cespedes M (2011), "PIK3CA (phosphoinositide-3-kinase, catalytic, alpha polypeptide)".Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology, (3) 141 Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R (1977) "DNA sequencing with chain-terminating inhibitors" Proc Natl Acad Sci 74 (12), pp 5463–77 142 Sarasqueta Fariña (2011), "PIK3CA kinase domain mutation identifies a subgroup of stage III colon cancer patients with poor prognosis".Cell Oncol, 34 (6), pp 523-531 143 Saridaki Z., Tzardi M., Papadaki C., et al (2011), "Impact of KRAS, BRAF, PIK3CA mutations, PTEN, AREG, EREG expression and skin rash in >/= line cetuximab-based therapy of colorectal cancer patients".PLoS One, (1), pp e15980 144 Sartore Bianchi A., Martini M., et al (2009), "PIK3CA mutations in colorectal cancer are associated with clinical resistance to EGFRtargeted monoclonal antibodies" Cancer Res, 69(5), pp 1851-7 145 Sawai H., Yasuda A., Ochi N., et al (2008), “Loss of PTEN expression is associated with colorectal cancer liver metastasis and poor patient survival” BMC Gastroenterology, 8, pp 56 doi: 10.1186/1471-230X-8-56 146 Schubbert S Shannon K, Bollag G (2007), "Schubbert S, Shannon K, Bollag G Hyperactive Ras in developmental disorders and cancer Nat Rev Cancer 2007;7, pp 295–308 147 Shaukat A (2010), "Is BRAF mutation associated with interval colorectal cancers?".Dig Dis Sci, 55 (8), pp 2352-6 148 Shen H., Yuan Y., Hu H G., et al (2011), "Clinical significance of K-ras and BRAF mutations in Chinese colorectal cancer patients".World J Gastroenterol, 17, pp 809 – 816 149 Shen Y., Wang J., Han X., et al (2013), "Effectors of epidermal growth factor receptor pathway: the genetic profiling ofKRAS, BRAF, PIK3CA, NRAS mutations in colorectal cancer characteristics and personalized medicine".PLoS One, (12), pp e81628 150 Shi Y., Wang J., Chandarlapaty S., et al (2014) "PTEN is a protein tyrosine phosphatase for IRS1" Nature Structural & Molecular Biology 21 (6), pp 522–7 151 Shnitsar I., Bashkurov M., et al (2015) "PTEN regulates cilia through Dishevelled" Nature Communications 6, pp 8388 152 Siraj Abdul K, Bu Rong, Prabhakaran Sarita (2014), "A very low incidence of BRAF mutations in Middle Eastern colorectal carcinoma".Molecular Cancer, 13, pp 168 153 Smith Christopher G., Fisher David, Claes Bart, et al (2013), "Somatic Profiling of the Epidermal Growth Factor Receptor Pathway in Tumors from Patients with Advanced Colorectal Cancer Treated with Chemotherapy ± Cetuximab".Clinical Cancer Research, 19 (15), pp 4104-4113 154 Smith G., Carey F.A., Beattie J., et al (2002) “Mutations in APC, Kirsten-ras, and p53 alternative genetic pathways to colorectal cancer” Proc Natl Acad Sci USA 99, pp.9433–9438 155 Spano J P., Fagard R., Soria J C., et al (2005), "Epidermal growth factor receptor signaling in colorectal cancer: preclinical data and therapeutic perspectives".Ann Oncol, 16 (2), pp 189-94 156 Steck P.A., Pershouse M.A., Jasser S.A., et al (1997) "Identification of a candidate tumour suppressor gene, MMAC1, at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers" Nature Genetics 15 (4), pp 356–62 157 Stryker S.J., Wolff B.G., Culp C.E., et al (1987) “Natural history of untreated colonic polyps” Gastroenterology 93, pp.1009–1013 158 Sugai T., et al (2006), "Analysis of molecular alterations in left- and right-sided colorectal carcinomas reveals distinct pathways of carcinogenesis: proposal for new molecular profile of colorectal carcinomas".J Mol Diagn, (2), pp 193-201 159 Takayama T., Ohi M., Hayashi T., et al (2001) “Analysis of K-ras, APC, and beta-catenin in aberrant crypt foci in sporadic adenoma, cancer, and familial adenomatous polyposis” Gastroenterology 121, pp.599–611 160 Taub, Floyd (1983) "Laboratory methods: Sequential comparative hybridizations analyzed by computerized image processing can identify and quantitate regulated RNAs" DNA (4), pp 309 -11 161 Tejpar S., Celik I., Schlichting M., et al (2012), "Association of KRAS G13D tumor mutations with outcome in patients with metastatic colorectal cancer treated with first-line chemotherapy with or without cetuximab".J Clin Oncol, 30 (29), pp 3570-7 162 Therkildsen C., Bergmann T K., et al (2014), "The predictive value of KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA and PTEN for anti-EGFR treatment in metastatic colorectal cancer: A systematic review and meta-analysis" Acta Oncol, pp 221-227 163 Thibodeau S.N., Bren G., Schaid D (1993) “Microsatellite instability in cancer of the proximal colon” Science 260, pp.816–819 164 Thirunavukarasu P, Sathaiah M, Singla S, et al (2010) “Medullary carcinoma of the large intestine: a population based analysis” Int J Oncol, 37, pp 901-907 165 Tol Jolien (2009), "BRAF Mutation in Metastatic Colorectal Cancer".N Engl J Med 361, pp 98-99 166 Tong J H., Lung R W., Sin F M., et al (2014), "Characterization of rare transforming KRAS mutations in sporadic colorectal cancer".Cancer Biol Ther, 15 (6), pp 768-76 167 Toyota M., Ahuja N., Ohe-Toyota M., et al (1999) “CpG island methylator phenotype in colorectal cancer” Proc Natl Acad Sci USA 96, pp.8681–8686 168 Tran B., Kopetz S., et al (2011), "Impact of BRAF mutation and microsatellite instability on the pattern of metastatic spread and prognosis in metastatic colorectal cancer" Cancer, 117 (20), pp 4623-32 169 Trust Sanger Institute Genome Research Limited Catalogue of somatic mutations in cancer 2014; Available at: http://cancer.sanger.ac.uk/cosmic/gene 170 Tural D., Batur S., et al (2014), "Analysis of PTEN, BRAF and PI3K status for determination of benefit from cetuximab therapy in metastatic colorectal cancer patients refractory to chemotherapy with wild-type KRAS" Tumour Biol, 35 (2), pp 1041-9 171 Turnpenny P., Ellard S (2005) Emery's Elements of Medical Genetics (12th ed.) London: Elsevier, pp 2001-2011 172 Van Cutsem E., Kohne C H., Lang I., et al (2011), "Cetuximab plus irinotecan, fluorouracil, and leucovorin as first-line treatment for metastatic colorectal cancer: updated analysis of overall survival according to tumor KRAS and BRAF mutation status" J Clin Oncol, 29 (15), pp 2011-9 173 Vaughn C P., Zobell S D., Furtado L V., Baker C L., Samowitz W S (2011), "Frequency of KRAS, BRAF, and NRAS mutations in colorectal cancer".Genes Chromosomes Cancer, 50 (5), pp 307-12 174 Velho S (2005), "The prevalence of PIK3CA mutations in gastric and colon cancer".Eur J Cancer Care 41 (11), pp 1649-54 175 Vivanco I (2002), "The phosphatidylinositol 3-Kinase AKT pathway in human cancer.".Nat Rev Cancer, (7), pp 489-501 176 Vogelstein B., Fearon E.R., Hamilton S.R., et al (1988) “Genetic alterations during colorectal-tumor development” N Engl J Med 319, pp 525–532 177 Von Einem J C., Heinemann V., von Weikersthal L F., et al (2014), "Left-sided primary tumors are associated with favorable prognosis in patients with KRAS codon 12/13 wild-type metastatic colorectal cancer treated with cetuximab plus chemotherapy: an analysis of the AIO KRK-0104 trial".J Cancer Res Clin Oncol 178 Waddell T (2014), "Targeting EGFR in colorectal cancer: beyond KRAS exon 2" Lancet Oncol, 15 (6), pp 540-1 179 Wan Paul T.C (2004), "Mechanism of Activation of the RAF-ERK Signaling Pathway by Oncogenic Mutations of B-RAF".Cell, 116, pp 855-867 180 Wang Q., Zhong M., Lu Y L., Yuan J., Wei L X (2012), "Correlation of KRAS gene mutations and clinicopathologic parameters in colorectal carcinom]".Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi, 41 (9), pp 603-6 181 Wangefjord S., Sundstrom M., Zendehrokh N., et al (2013), "Sex differences in the prognostic significance of KRAS codons 12 and 13, and BRAF mutations in colorectal cancer: a cohort study".Biol Sex Differ, (1), pp 17 182 Watanabe T., Yoshino T., Uetake H., et al (2013), "KRAS mutational status in Japanese patients with colorectal cancer: results from a nationwide, multicenter, cross-sectional study" Jpn J Clin Oncol, 43 (7), pp 706-12 183 Weber Georg F (2007), "Molecular_Mechanisms_of_Cancer", Springer, pp 45-215 184 Weisenberger D.J., Siegmund K.D., Campan M., et al (2006) “CpG island methylator phenotype underlies sporadic microsatellite instability and is tightly associated with BRAF mutation in colorectal cancer” Nat Genet 38, pp.787–793 185 Weizmann Institute of Science (2014), The human gene database Available at: www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene" 186 Wetterstrand, Kris "DNA Sequencing Costs: Data from the NHGRI Genome Sequencing Program (GSP)" National Human Genome Research Institute” Retrieved 30 May 2013 187 Whitehall V.L., Walsh M.D., Young J., et al (2001) “Methylation of O-6-methylguanine ADN methyltransferase characterizes a subset of colorectal cancer with low-level ADN microsatellite instability” Cancer Res 61, pp.827–830 188 Woodford-Richens K.L., Rowan A.J., Gorman P., et al (2001) “SMAD4 mutations in colorectal cancer probably occur before chromosomal instability, but after divergence of the microsatellite instability pathway” Proc Natl Acad Sci USA 98, pp.9719–9723 189 Worthley D.L., Whitehall V.L., Spring K.J., Leggett B.A (2007) “Colorectal carcinogenesis: Road maps to cancer” World J Gastroenterol; 13(28), pp 3784-3791 190 Yamashita K., Dai T., Dai Y., et al (2003) “Genetics supersedes epigenetics in colon cancer phenotype” Cancer Cell 4, pp.121–131 191 Yamauchi M., Morikawa T., Kuchiba A., et al (2012), "Assessment of colorectal cancer molecular features along bowel subsites challenges the conception of distinct dichotomy of proximal versus distal colorectum".Gut, 61 (6), pp 847-54 192 Yang Zu-Yao (2013), "Promising biomarkers for predicting the outcomes of patients with KRAS wild-type metastatic colorectal cancer treated with anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibodies: A systematic review with meta-analysis".International Journal of Cancer, 133 (8), pp 1914–1925 193 Yarden Y., Sliwkowski M.X (2001), "Untangling the ErbB signalling network".Nat Rev Mol Cell Biol, 2, pp 127–37 194 Yokota T, Ura T, Shibata N, et al (2011), "BRAF mutation is a powerful prognostic factor in advanced and recurrent colorectal cancer".Br J Cancer, 104, pp 856 - 862 195 Yokota T., Shibata N., Ura T., et al (2010), "Cycleave polymerase chain reaction method is practically applicable for V-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog (KRAS)/V-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1 (BRAF) genotyping in colorectal cancer".Transl Res, 156 (2), pp 98-105 196 Zhang L., Ma L., Zhou Q (2011), "Overall and KRAS-specific results of combined cetuximab treatment and chemotherapy for metastatic colorectal cancer: a meta-analysis".Int J Colorectal Dis, 26 (8), pp 1025-33 197 Zhang L., Wang Y., et al (2014), "Comparative analysis of real-time quantitative PCR-Sanger sequencing method and TaqMan probe method for detection of KRAS/BRAF mutation in colorectal carcinomas".Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi, 43 (2), pp 77-82 198 Zhao L., Vogt P K (2008), "Helical domain and kinase domain mutations in p110alpha of phosphatidylinositol 3-kinase induce gain of function by different mechanisms".Proc Natl Acad Sci U S A, 105 (7), pp 2652-7 199 Zhu K., Yan H., Wang R., et al (2014), "Mutations of KRAS and PIK3CA as independent predictors of distant metastases in colorectal cancer".Med Oncol, 31 (7), pp 16 200 Zhu X.L., Cai X., Zhang L., et al (2012), "KRAS and BRAF gene mutations in correlation with clinicopathologic features of colorectal carcinoma in Chinese".Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi, 41(9), pp.584589 201 Zhu Y.F., Yu B.H., Li D.L., et al (2012), "PI3K expression and PIK3CA mutations are related to colorectal cancer metastases" World J Gastroenterol, 18 (28), pp 3745-51 202 Zlobec I., Bihl M P., Schwarb H., Terracciano L., Lugli A (2010), "Clinicopathological and protein characterization of BRAF- and KRAS-mutated colorectal cancer and implications for prognosis" Int J Cancer, 127 (2), pp 367-80 Phụ lục PHIẾU THU THẬP SỐ LIỆU Họ tên: …………………………… Tuổi: … Giới: nam/ nữ Địa chỉ: ……………………………………………………………………… Điện thoại liên lạc:………………………………………………………… Ngày vào viện: ………………Số nhập viện:…………………………… Mã số Giải phẫu bệnh:………………………… LÂM SÀNG *Vị trí u: Manh tràng □ ĐT Trái □ *Di căn: Phổi □ Ruột thừa □ ĐT Phải□ ĐT Sigma □ Gan □ Trực tràng □ ĐT Ngang □ Hậu môn □ Khác (ghi rõ):………………… GIẢI PHẪU BỆNH Loại mô học:………………………………………………………………………… Độ mô học:………………………………………………………………………… Hạch : Số lượng hạch khảo sát……… Số lượng hạch di căn:…………… Vị trí hạch di căn:…………………………………………………… * Kiểu biệt hóa phối hợp: □ Thành phần dạng nhầy (tỉ lệ:………….%) □ Thành phần dạng tủy (tỉ lệ:………….%) □ Kém biệt hóa (tỉ lệ:………….%) Mức độ xâm lấn vi thể: □ Trong niêm mạc □ Xâm lấn lớp niêm đến lớp niêm □ Xâm lấn □ Xâm lấn đến mạc mô xung quanh đại - trực tràng □ Xâm lấn đến bề mặt mạc □ Xâm lấn quan lân cận (ghi rõ):… *pTNM: T……….N……….M………………pStage:…………………………… HĨA MƠ MIỄN DỊCH PTEN:  âm tính  Dương tính PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GEN KRAS: □ Khơng đột biến □ Đột biến (ghi rõ loại đột biến):……………………………… BRAF: □ Không đột biến □ Đột biến (ghi rõ loại đột biến):……………………………… NRAS: □ Không đột biến □ Đột biến (ghi rõ loại đột biến):……………………………… PIK3CA: □ Không đột biến □ Đột biến (ghi rõ loại đột biến):……………………………… Phụ lục PHIẾU CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Mẫu đơn đồng ý có số từ mà quý vị không hiểu Nên nhờ bác sĩ nhân viên nghiên cứu giải thích từ ngữ thông tin mà quý vị chưa hiểu rõ Quý vị đem chưa ký tên mẫu phiếu chấp thuận nhà để suy nghĩ bàn bạc với gia đình bạn bè trước định Quyền hạn quý vị: Những người tham gia vào nghiên cứu y sinh học có quyền hạn định, bao gồm:  Được thơng báo tính chất mục đích nghiên cứu  Được giải thích phương thức thực nghiên cứu y sinh học  Được mô tả nỗi lo lắng nguy gặp phải  Được thơng báo cách chữa trị y tế có cho người tham gia nghiên cứu dựa kết nghiên cứu  Có hội để hỏi nghiên cứu phương thức liên hệ  Có quyền biết kết xét nghiệm y sinh học thực mô bệnh phẩm q vị  Có quyền đồng ý khơng đồng ý với nghiên cứu y sinh học Về nghiên cứu: quý vị mời tham gia vào nghiên cứu mà thu thập mẫu bệnh phẩm mô u quý vị Các mẫu mô u dùng để thực xét nghiệm giải trình tự gen để xác định đột biến gen KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA nhuộm hóa mơ miễn dịch để xác định biểu PTEN Các kết có giá trị tiên lượng bệnh cho quý vị dự đốn đáp ứng với thuốc nhắm trúng đích cetuximab hay panitumumab quý vị có định điều trị với loại thuốc Quý vị có quyền hỏi câu hỏi để làm rõ vấn đề quý vị thắc mắc, trước quý vị định có đồng ý hay không Mẫu thử nghiệm y sinh học: thứ lấy từ thể người có nguồn gốc từ mơ, máu, nước tiểu Mẫu thử nghiệm sinh học là: mô bệnh phẩm phẫu thuật, tế bào, máu, chất lỏng thể nước bọt, dịch màng,… Trong nghiên cứu này, lấy mẫu thử nghiệm mô bệnh phẩm phẫu thuật sau lấy khỏi thể quý vị Sử dụng mẫu mô: mẫu bệnh phẩm phẫu thuật quý vị chúng tơi sử dụng cho mục đích nghiên cứu y sinh học Không sử dụng vào mục đích khác Bảo mật thơng tin: chúng tơi cam kết thông tin quý vị bảo mật tuyệt đối Mọi rị rỉ thơng tin lỗi chúng tơi chúng tơi chịu trách nhiệm trước quý vị trước pháp luật Phí tổn: quý vị trả chi phí để tham gia vào nghiên cứu Sự tự nguyện tham gia rút lui: Sự tham gia quý vị vào nghiên cứu tự nguyện Q vị có quyền khơng tham gia vào nghiên cứu Nếu quý vị tham gia, quý vị rút lui khỏi nghiên cứu vào lúc nào, cách báo với nghiên cứu viên Quyết định quý vị không làm thay đổi việc chăm sóc y tế quý vị tương lai bệnh viện Thắc mắc: Nếu q vị có thắc mắc liên quan đến nghiên cứu này, lúc quý vị cho bị chịu tổn thương liên quan đên nghiên cứu này, xin liên lạc với nghiên cứu viên: BS ………………………………………Điện thoại: …….……………… Đồng ý: chữ ký quý vị chứng tỏ quý vị đọc hiểu đồng ý chấp thuận tham gia nghiên cứu Quý vị bàn bạc với nghiên cứu viên quý vị định tham gia vào nghiên cứu Quý vị lưu ý, phiếu ghi ngày, tháng, năm ký tên đưa lại cho quý vị lưu giữ Bằng việc ký thỏa thuận này, quý vị không miễn trừ quyền hạn pháp lý mà có với tư cách bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu Họ tên bệnh nhân:………………………………………………………… Chữ ký bệnh nhân vào lúc: … giờ….ngày….tháng…….năm………… Họ tên nghiên cứu viên:…………………………………………………… Chữ ký nghiên cứu viên … giờ…., ngày…….tháng… năm…… ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ********** NGUYỄN HỒNG PHONG NGHIÊN CỨU TỶ LỆ CÁC BIẾN ĐỔI PHÂN TỬ KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA VÀ PTEN TRONG CARCINÔM TUYẾN ĐẠI - TRỰC TRÀNG... biến đổi phân tử gen KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA protein PTEN carcinôm tuyến đại – trực tràng Việt Nam MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU: Khảo sát số đặc điểm lâm sàng, mô bệnh học carcinôm tuyến đại - trực tràng. .. đột biến tăng chức gen KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA nghiên cứu Mao [108], Sawai [145] biểu PTEN yếu tố tiên lượng xấu ung thư đại trực tràng Nhiều nghiên cứu nước biến đổi phân tử gen KRAS, NRAS, BRAF,