ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU_TESTKIT

Vieâm gan loaïi B laø beänh gan nghieâm troïng thoâng thöôøng nhaát treân theá giôùi. Beänh naøy do sieâu vi khuaån vieâm gan loaïi B (HBV) gaây ra vì sieâu vi khuaån naøy taán coâng caùc teá baøo gan vaø coù theå laøm hö gan, xô gan (seïo), hoaëc ung thö gan. Sieâu vi khuaån naøy truyeàn nhieãm khi tieáp xuùc vôùi maùu vaø chaát dòch cô theå coù dính maùu. Ña soá moïi ngöôøi coù theå choáng laïi vieâm gan loaïi B vaø loaïi tröø sieâu vi khuaån naøy trong maùu cuûa hoï. Tuy nhieân, 5-10% ngöôøi lôùn, 30-50% treû em, vaø 90% em beù seõ khoâng loaïi döùt haún ñöôïc sieâu vi khuaån naøy vaø bò nhieãm kinh nieân. Nhöõng ngöôøi bò nhieãm kinh nieân cuõng deã bò beänh gan nhieàu hôn sau naøy trong ñôøi. Sieâu vi khuaån vieâm gan loaïi B deã truyeàn nhieãm hôn gaáp 100 laàn so vôùi sieâu vi khuaån AIDS. Nhöng coù thuoác ngöøa vieâm gan loaïi B an toaøn vaø hieäu quaû. Ñoái vôùi 400 trieäu ngöôøi bò nhieãm vieâm gan loaïi B kinh nieân thì thuoác chuûng naøy khoâng coù ích gì. Để xác định một người có bị nhiễm viêm gan B không, người đó cần phải trải qua nhiều xét nghiệm phức tạp. Việc dùng test kit ngày nay như là 1 công cụ hỗ trợ bác sĩ trong chẩn đoán và điều trị viêm gan vì tiết kiệm nhiều thời gian, công sức mà vẫn có độ chính xác.

Bộ công thương Trường Đại học công nghiệp thực phẩm TP HCM Khoa Công nghệ Sinh Học Kỹ Thuật Mơi Trường BÀI TIỂU LUẬN NHẬP MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC Đề tài: Thực tiểu luận: Nhóm 10 GVHD: Ths Trần Hoàng Ngâu TP HCM, NĂM HỌC 2014 - 2015 Bộ công thương Trường Đại học công nghiệp thực phẩm TP HCM TIỂU LUẬN NHẬP MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chủ đề: TEST KIT CHẨN ĐOÁN VIÊM GAN B GVHD: Ths Trần Hoàng Ngâu Thực tiểu luận: Nhóm 10 Lời mở đầu Viêm gan loại B bệnh gan nghiêm trọng thông thường giới Bệnh siêu vi khuẩn viêm gan loại B (HBV) gây siêu vi khuẩn công tế bào gan làm hư gan, xơ gan (sẹo), ung thư gan Siêu vi khuẩn truyền nhiễm tiếp xúc với máu chất dịch thể có dính máu Đa số người chống lại viêm gan loại B loại trừ siêu vi khuẩn máu họ Tuy nhiên, 5-10% người lớn, 30-50% trẻ em, 90% em bé không loại dứt hẳn siêu vi khuẩn bị nhiễm kinh niên Những người bị nhiễm kinh niên dễ bị bệnh gan nhiều sau đời Siêu vi khuẩn viêm gan loại B dễ truyền nhiễm gấp 100 lần so với siêu vi khuẩn AIDS Nhưng có thuốc ngừa viêm gan loại B an toàn hiệu Đối với 400 triệu người bị nhiễm viêm gan loại B kinh niên thuốc chủng ích Để xác định người có bị nhiễm viêm gan B khơng, người cần phải trải qua nhiều xét nghiệm phức tạp Việc dùng test kit ngày công cụ hỗ trợ bác sĩ chẩn đốn điều trị viêm gan tiết kiệm nhiều thời gian, cơng sức mà có độ xác Để giúp người hiểu rõ thêm kiểm tra nhanh - Test kit, tìm hiểu kỹ viêm gan siêu vi B, cách phát đơn giản, an tồn, nhanh chóng xác, nhóm chúng em định chọn đề tài “TEST KIT CHẨN ĐOÁN VIÊM GAN B” cho tiểu luận Kính mong nhận ý kiến đóng góp từ thầy cô bạn để tiểu luận hoàn thiện MỤC LỤC: A GIỚI THIỆU VỀ TEST KIT: I Test kit gì? II Lịch sử phát triển test kit? III Phân loại Test kit: 1) Test kit ứng dụng thực phẩm: 2) Test kit ứng dụng môi trường 3) Test kit ứng dụng Y dược: B TEST KIT CHẨN ĐOÁN BỆNH VIÊM GAN SIÊU VI B: I BỆNH VIÊM GAN SIÊU VI B: 11 1) Cấu tạo virus viêm gan B (HBV) 11 2) Lịch sử phát bệnh: 13 3) Triệu chứng bệnh: 13 II TEST KIT CHẨN ĐOÁN VIÊM GAN B (HBSAG) LÀ DỤNG CỤ XÉT NGHIỆM MIỄN DỊCH: 15 1) Mục Đích Sử Dụng 15 2) Tổng Quan 16 3) Nguyên Lý Hoạt Động 16 4) Cảnh Báo Và Phòng Ngừa 17 5) Lấy Và Chuẩn Bị Mẫu Phẩm 17 6) Cách sử dụng: 18 III MẶT LỢI VÀ HẠN CHẾ CỦA VIỆC DÙNG TEST KIT CHO VIÊM GAN SIÊU VI B: 21 1) Lợi Ích Của Kit Thử 21 2) Hạn Chế Của Kit Thử 21 Tài liệu tham khảo 22 Thực tiểu luận Stt Họ tên Khâu Đăng Quang Nguyển Thị Thanh Phương Nguyễn Thị Minh Kiều Bùi Thị Ngọc Diễm Đoàn Minh Tú Lê Văn Anh Dương Phan Thanh Thái Phạm Thị Cẩm Thúy Lớp 03DHSH2 03DHSH1 03DHSH1 03DHSH1 03DHSH1 03DHSH1 03DHSH1 03DHSH1 A I GIỚI THIỆU VỀ TEST KIT: Test kit gì? Test-Kits dụng cụ y tế kiểm tra mẫu bệnh phẩm thực phẩm, thường sử dụng để tiến hành xét nghiệm nhanh mẫu cho kết cụ thể, thường sử dụng để chẩn đoán nghiên cứu khoa học đời sống Test-kits sử dụng để kiểm tra diện virus vi khuẩn cụ thể xác định loại nhóm máu kháng thể II Lịch sử phát triển test kit? Ban đầu vào thời kì trước cơng nguyên, người muốn tìm hiểu cách thức để nhận biết người phụ nữ mang thai Trải qua nhiều thời kỳ nghiên cứu, thử họ cho nhiều loại thuốc để kiểm tra có biết người phụ nữ có thai hay không Bất cập thay việc sư dụng dung dịch nhận biết đắt đỏ bất tiện việc lưu trữ; phần ảnh hướng đến kết Năm 1970 – 2003 giai đoạn nhà khoa học tìm hiểu vấn đề Họ đưa nhiều phương pháp để thực 1970, Các giáo sư trường Đại Học Northwestern thực nhiều thí nghiệm đưa phương pháp thử test nhanh phương pháp sơ sài gặp nhiều trở ngại, test nhanh không thỏa mản Hướng dẫn thông tin kỹ thuật UCG-TEST, năm 1970, theo ghi chép lịch sưu tập đặc biệt, Thư viện Đại học Northwestern thời gian nhanh thuận tiện, phụ nữ phải gặp bác sĩ để tư vấn sử dụng họ không chủ động Năm 1979, tạp chí phụ nữ McCall’s magazines đăng tải thơng điệp “Phụ nữ không muốn bác sĩ kiểm tra biết rõ hoạt động sinh lý nhạy cảm chúng tơi, làm chúng tơi cảm thấy thụ động phụ thuộc vào kết bác sĩ, làm thời gian cho chúng tơi, chúng tơi muốn giữ riêng kết q lưu giữ cách cá nhân chúng tơi chủ động chăm sóc sức khỏe chờ bác sĩ.” - Mademoiselle, April 1978, p 86 từ thành gợi ý ý tưởng táo bạo cho ngành y học Năm 1980 nhà khoa học bắt đầu nghiên cứu ý tưởng này, tương tác, đặc điểm nhận dạng thay đổi màu quỳ tím tiếp xúc với Axit Bazơ Và đến năm 2003, FDA chấp thuận thông qua Test kit để xác định người phụ nữ có thai hay khơng qua sử đổi bắt màu xanh test kit hay gọi que thử thai Và phát triển qua nhiều thời kỳ Test kit “Một biên tập báo McCall’s Magazines nhận định: Các dụng cụ thử thai nhà có lẽ thử nghiệm sử dụng rộng rãi thay hematocrit hemoglobin [các xét nghiệm máu để đo lường tế bào máu đỏ sắt phần tế bào máu mà thưởng kiểm tra văn phòng bác sĩ].” III Phân loại Test kit: 1) Test kit ứng dụng thực phẩm: a Test kit kiểm tra nhanh hàn the: - Ứng dụng: Dùng để kiểm tra nhanh Hàn The thực phẩm như: thịt, cá tươi, … sản phẩm chế biến từ tinh bột - Dương tính: Vùng giấy thử phía (thứ nhất) chuyển từ màu vàng tươi sang màu đỏ gạch đến đỏ đậm khác với giấy thử (thứ hai) phía - Âm tính: vùng giấy có màu vàng giống b Test Kiểm Tra Nhanh Formaldehyde(Formol) Bộ test FRM-03 cho kết nhanh chóng dể sử dụng để phân tích formaldehyde thức ăn thức uống Tesr dùng để xác định có mặt formaldehyde nước nước tiểu Test dự chọn lọc hóa hoạc nên tránh xảy tượng âm tính hay dương tính giả Thời gian cho lần phân tích phút Được thiết kế đơn giản dể sử dụng Không thải chất độc hại 2) Test kit ứng dụng môi trường a) Test kit kiểm tra nhanh nitrit (NO2) Ứng dụng: Dùng để kiểm tra nhanh Nitrit nước uống, nước giải khát không màu * Đọc kết quả: - Dương tính: Nếu dung dịch túi xuất màu hồng đậm sơ với vạch màu tương ứng với nồng độ Nitrit 0,3mg/lít - Âm tính: Nếu dung dịch ống khơng xuất màu đỏ hồng có màu nhạt so với vạch màu tương ứng với nồng độ nitrit 0,3mg/lít b) Test kit kiểm tra nhanh nitrat (NO3) Ứng dụng: Dùng để kiểm tra nhanh Nitrat trong: da muối, cà muối Cách sử dụng: * Xử lý mẫu: - Thực phẩm dạng rắn: Lấy khoảng 3g cắt nhỏ cỡ hạt đậu cho vào cốc Thêm 0,5ml nước sach Ngâm 10-15 phút, trộn đều, sau gạn lấy phần dịch để thí nghiệm * Đọc kết quả: + Nếu màu xanh đen xuất hiện, vịng phút rõ nét, ổn định hồn tồn hàm lượng Nitrat có mẫu cao 500mg/kg Vợt mức tối đa cho phép + Nếu màu xanh đen xuất sau 3-4 phút sau 8-9 phút rõ nét ổn định hoàn tồn hàm lượng Nitrat có mẫu 500mg/kg Là mức tối đa cho phép 3) Test kit ứng dụng Y dược: a Test thử thai Human chorionic gonadotropin (hCG) nội tiết tố glycoprotein sản xuất thai phát triển thời gian ngắn sau thụ tinh Trong thai kỳ bình thường, hCG phát nước tiểu huyết giai đoạn từ đến 10 ngày sau thụ thai b Test thử nhanh chất gây nghiện Morphin/Heroin Kit thử phát sử dụng chất gây nghiện MOP nước tiểu xét nghiệm sắc ký miễn dịch dựa vào nguyên lý phản ứng cạnh tranh Thuốc diện mẫu nước tiểu cạnh tranh với liên hợp thuốc vị trí gắn kết kháng thể Trong trình xét nghiệm, mẫu nước tiểu thấm lên dọc theo màng thấm kít thử nhờ mao dẫn MOP, có mặt nước tiểu với nồng độ thấp 300 ng/ml, khơng thể bão hịa vị trí gắn kết phần tử phủ kháng thể kit thử Để kit thử, mẫu nước tiểu…ở nhiệt độ phòng (15 – 30oC) trước làm xét nghiệm Lấy kit thử khỏi túi kín đựng sản phẩm sử dụng kit thử nhanh tốt Để đạt kết tốt nhất, toàn q trình xét nghiệm phải hồn thành vịng kể từ mở túi đựng sản phẩm Nhúng que thử theo chiều mũi tên hướng xuống mẫu nước tiểu, 10 – 15 giây Khơng nhúng vạch MAX que thử Đặt que thử mặt phẳng nằm ngang, không thấm nước, bắt đầu tính thời gian đợi vạch đỏ xuất Kết nên đọc vòng – 10 phút Không đọc kết sau 10 phút ÂM TÍNH: Xuất hai vạch đỏ rõ rệt: vùng chứng gọi vạch chứng, vạch vùng kết gọi vạch kết (T) Kết âm tính nghĩa nồng độ MOP ngưỡng phát (300 ng/ml) Lưu ý: Độ đậm màu vạch kết (T) khác tùy theo nồng độ MOP có mẫu bệnh phẩm Tuy nhiên, vạch mờ vùng kết coi âm tính DƯƠNG TÍNH: Chỉ xuất vạch chứng Không thấy xuất vạch kết (T) dù đậm hay mờ Kết dương tính có nghĩa nồng độ MOP vượt ngưỡng phát (300 ng/ml) KẾT QUẢ KHƠNG CĨ GIÁ TRỊ: Khơng thấy xuất vạch chứng Nguyên nhân thường gặp lượng mẫu bệnh phẩm không đủ thao tác xét nghiệm sai Đọc lại hướng dẫn làm lại xét nghiệm kit thử khác Nếu như, tình trạng cũ, liên lạc với đại lý phân phối để giải đáp 10 B TEST KIT CHẨN ĐOÁN BỆNH VIÊM GAN SIÊU VI B: Và Test Kit đáng quan tâm Test kit chẩn đoán bệnh viêm gan siêu vi B Với mức độ nghiêm trọng bệnh khiến nhà khoa học điên đầu với việc nhận biết bệnh để điều trị sớm Việc lấy miếng gan người để xét nghiệm đưa bệnh lý vơ phức tạp Chính Test Kit chuẩn đốn bệnh viêm gan B hình thành giúp đỡ khơng nhỏ cho bác sĩ việc phát điều trị bệnh I BỆNH VIÊM GAN SIÊU VI B: 1) Cấu tạo virus viêm gan B (HBV) HBV thuộc loại siêu vi trùng (hay virus) Hepadna với khả tồn cao Là loại virus hướng gan, có cấu trúc DNA HBV gây bệnh cho người khỉ đột đen Phi Châu Ở giai đoạn nhân đôi, HBV tồn huyết dạng cấu trúc hạt tử siêu vi hay virion hoàn chỉnh, cấu trúc hình cầu cấu trúc hình ống Hạt tử virus hay virion bao gồm lớp vỏ bọc 11 bên lipoprotein chứa dạng kháng nguyên bề mặt ( HBsAg) pre-S1, Pre-S2, S phần lõi bên casid bao gồm protein lõi (core protein) bao bọc DNA DNA polymerase Bộ gen cấu trúc kép gồm gen:S,C,P,X Đây vùng mã hóa để tổng hợp protein virus - Gen s protein vỏ, bao gồm vùng s, pres1, pres2 Tổng hợp kháng nguyên bề mặt HbsAg (s: surface) - Gen c mang kháng nguyên HBcAg HBeAg - Gen p chiếm 80% chiều dài gen.tổng hợp AND- polymerase cần thiết cho nhân lên virus tham gia vào q trình chép ngược DNA từ ARN tiền gen - Gen x có vai trị chuyển hoạt tính q trình nhân đôi virus Virus HBV gồm loại protein protein S(small), protein M(medium), protein L(large) Được mã hóa gen S - Protein S (s):chiếm đa số lượng protein bề mặt - Proein M(226s+55Pres2): Giúp cho virus bám vào màng xâm nhập vào nhờ chế kết hợp với thụ thể albumin Phsa có huyết thành tế bào gan - Protein L (s, Pres1, Pres2) protein lớn kháng nguyên bề mặt.Có vùng hoạt động nằm chuỗi Pres1 nên có vai trị quan trọng việc gắn vào thụ thể xâm nhập vào tế bào gan 12 2) Lịch sử phát bệnh: - Bệnh biết từ năm 1883 qua vụ dịch viêm gan 191 người số 1289 cơng nhân đóng tàu Bremen (Anh) chủng đậu Tất bệnh nhân người chủng chung loại vacxin đậu - Năm 1965 Blumberg phát kháng nguyên gây bệnh viêm gan lây truyền qua huyết thanh, đặt tên kháng nguyên Úc Châu (vì tìm thấy người Châu Úc) - HBV Dane phát năm 1970 huyết bệnh nhân viêm gan kĩ thuật miễn dịch hiển vi điện tử gọi hạt Dane 3) Triệu chứng bệnh: a) Viêm gan siêu vi cấp: Bệnh chia thành thời kỳ:  Thời kỳ ủ bệnh: Viêm gan siêu vi B: 4-24 tuần  Thời kì khởi bệnh: - Sốt nhẹ - Mệt mỏi, chán ăn, nơn ói - Đau vùng gan - Có thể biểu giống viêm hô hấp trên: đau cơ, nhức đầu, ho, sổ mũi - Có thể biểu hội chứng bệnh huyết mè đay, phù mạch, phát ban, viêm khớp,… thường gặp viêm gan siêu vi B cấp Đây phàn ứng kháng nguyên kháng thể với diện siêu vi  Thời kỳ toàn phát: - Xuất tiểu sậm màu trước tiên, sau phát vàng da, vàng niêm mạc, kết mạc mắt Lúc sốt giảm dần hết hẳn - Triệu chứng suy nhược thể (mệt,ăn kém, ói …) - Gan to, đau tức khám - Có thể ngứa 13 - Có thể rối loạn tiêu: tiêu chảy táo bón - Có thể diễn tiến nặng thành thể viêm gan tối cấp với biểu suy nhược chức gan cấp gây rối loạn đông máu (xuất huyết da niêm, xuyết huyết tiêu hóa…), rối loạn tri giác, dần vào mê gan vòng tuần từ khởi bệnh, tử vong Trong thể suy gan cấp, tình trạng phù chân, báng bụng thường nhẹ tình trạng rối loạn đơng máu rối loạn tri giác lại bật - Tỷ lệ diễn tiến nặng đến tử vong vào khoảng 0,1-1% trường hợp VGSV B  Thời kỳ hồi phục: Các triệu chứng giảm dần, biến mất, bệnh nhân hồi phục hoàn toàn sau 1-2 tháng Một số bệnh nhân bị vàng da kéo dài không tháng b) Viêm gan siêu vi mãn tính: Giai đọan dầu thường thường khơng có triệu chứng lâm sàng rõ Bệnh nhân cảm thấy mệt mỏi, ăn kém, vàng da niêm nhẹ… hồn tồn khơng có triệu chứng Sau nhiều năm, triệu chứng khiến bệnh nhân quan tâm thường biểu biến chứng xơ gan bù (phù chân, báng bụng, tiểu ít, xuất huyết da niêm bất thường…) ung thư gan (gan to, cứng đau, suy giảm tổng trạng nhanh chóng) Xét nghiệm chẩn đốn tình trạng viêm gan Định lượng men gan AST (SGOT) ALT (SGBT ) Trị số bình thường AST, ALT < 100 µmol% hay < 40 UI/L Trong trường hợp VGSV cấp, hai men thường tăng cao, thường lần so với giá trị bình thường Trong trường hợp VGSV mạn AST, ALT thường tăng nhẹ, khoảng lần giá trị bình thường gia tăng kéo dài tháng Đây thơng số tốt để theo dõi tình trạng viêm gan Xét nghiệm đánh giá chức gan:  Chức tiết mật bị ảnh hưởng dẫn đến tình trạng tăng bilirubin máu gây vàng da 14  Đánh giá chức tổng hợp yếu tố đông máu gan khảo sát Prothrombin Time Bình thường 8,2 – 10,3 giây  Đánh giá chức tổng hợp Albumin máu gan  Khảo sát chức thải NH3 : Nồng độ NH3 máu bình thường -33 µmol/L Siêu âm bụng tổng quát  Giúp chẩn đoán loại trừ nguyên nhân gây tắc mật khác sỏi mật, u đường mật, u đầu tụy tổn thương khác abces gan, ung thư gan, sán gan…  Khảo sát cấu trúc gan Xét nghiệm để chẩn đoán nguyên nhân: điểm huyết siêu vi HBsAg thể tình trạng nhiễm HBV, định khả lây Người có HBsAg (+)là nguồn lây HBsAg xuất từ – 10 tuần sau tiếp xúc Anti HBs phản ánh khả chống lại HBV thể Sau chủng ngừa, nồng độ Anti HBs tăng cao chứng tỏ chủng ngừa có hiệu Một số trường hợp VGSV cấp, sau hồi phục hoàn toàn, thể tạo Anti HBs Nồng độ Anti HBs>10UI/L xem có khả bảo vệ thể chống xâm nhập HBV II TEST KIT CHẨN ĐOÁN VIÊM GAN B (HBSAG) LÀ DỤNG CỤ XÉT NGHIỆM MIỄN DỊCH: Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) dùng để định tính phát kháng nguyên bề mặt vi rút Viêm gan B (HBsAg) huyết huyết tương Là dụng cụ chuyên sử dụng cho việc xét nghiệm chẩn đốn 1) Mục Đích Sử Dụng Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) dụng cụ xét nghiệm sắc ký miễn dịch định tính phát có mặt kháng nguyên vi rút Viêm gan B huyết huyết tương 15 2) Tổng Quan Bệnh viêm gan vi rút bệnh chủ yếu liên quan đến gan Hầu hết trường hợp cấp tính bệnh viêm gan virút virút Viêm gan A, Viêm gan B (HBV) Viêm gan C gây Phức hợp kháng nguyên (complex antigen) tìm thấy bề mặt HBV gọi HBsAg Những nghiên cứu trước nhận diện kháng nguyên Australia hay gọi kháng nguyên Au Sự có mặt HBsAg huyết huyết tương cho thấy dấu hiệu bị lây nhiễm virút Viêm gan B cấp mãn tính, HBsAg bị phát từ đến tuần trước men gan ALT có biến đổi khác thường từ đến tuần trước có triệu trứng bệnh triệu chứng vàng da HBsAg có nhóm phụ bản: adw, ayw, adr ayr Do tính khơng đồng định thức kháng ngun, nên có 10 kiểu vi rút Viêm gan B (serotypes) Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) dụng cụ xét nghiệm nhanh định tính phát có mặt HBsAg huyết huyết tương Kit thử sử dụng hoá hợp kháng thể đơn dịng đa dịng vơ tính để phát cách có chọn lọc nồng độ lên cao HBsAg huyết huyết tương 3) Nguyên Lý Hoạt Động Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) dụng cụ xét nghiệm sắc ký miễn dịch định tính phương pháp dịng chảy chiều để phát có mặt kháng nguyên vi rút Viêm gan B huyết huyết tương Màng kit thử phủ lớp kháng thể kháng HBsAg vùng kết Trong trình làm xét nghiệm, mẫu huyết huyết tương phản ứng với phần tử mang theo kháng thể kháng HBsAg Hỗn hợp tạo thành thấm theo màng di chuyển hướng lên nhờ mao dẫn, gặp phản ứng kết tủa màu với kháng thể kháng HBsAg lớp màng tạo vạch màu Sự có mặt vạch màu vùng kết kit thử cho biết kết dương tính, ngược lại trường hợp khơng có vạch màu kết âm tính Nhằm mục đích kiểm tra quy trình thao tác xét nghiệm, vạch màu luôn xuất vùng chứng (gọi vạch chứng) để khẳng định lượng mẫu đủ lớp màng thấm tốt 16 4) Cảnh Báo Và Phòng Ngừa - Kit thử HBsAg dụng cụ chuyên sử dụng cho việc xét nghiệm chẩn đoán Không sử dụng kit thử hết hạn sử dụng - Không ăn, không uống hút thuốc khu vực làm xét nghiệm (khu vực có mẫu phẩm kit thử) - Thận trọng với tất mẫu phẩm chúng có chứa tác nhân lây nhiễm Tuân thủ lời cảnh báo để tránh rủi ro nhiễm trùng suốt trình xét nghiệm Tuân thủ quy định tiêu huỷ mẫu phẩm - Mặc đồ bảo hộ y tế áo choàng, găng tay sử dụng lần, bảo vệ mắt trình xét nghiệm - Độ ẩm nhiệt độ khơng đảm bảo ảnh hưởng khơng tốt đến kết xét nghiệm  Hạn Dùng: Thời hạn sử dụng Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) 24 tháng kể từ ngày sản xuất bảo quản quy định túi nhơm kín có chất chống ẩm  Bảo Quản Và Độ Ổn Định: Kit thử bảo quản nhiệt độ phịng làm lạnh (2-30°C) Kit thử giữ tính ổn định ngày hết hạn sử dụng in túi đựng sản phẩm Kit thử phải bảo quản túi hàn kín lấy sử dụng Không làm đông băng sản phẩm 5) Lấy Và Chuẩn Bị Mẫu Phẩm - Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) sử dụng mẫu huyết huyết tương để làm xét nghiệm - Tách huyết huyết tương nhanh tốt để tránh tượng tan huyết (hemolysis) Chỉ dùng mẫu phẩm sạch, không bị tượng tan huyết (nonhemolyzed) - Xét nghiệm phải tiến hành sau lấy mẫu Khơng để mẫu phẩm nhiệt độ phịng thời gian dài Mẫu huyết huyết tương bảo quản nhiệt độ 2-8°C vòng ngày Muốn bảo quản lâu hơn, mẫu phẩm phải giữ nhiệt độ thấp -20°C 17 Mẫu máu tồn phần lấy từ tĩnh mạch bảo quản nhiệt độ 2-8°C vịng ngày Khơng làm đơng băng mẫu máu tồn phần - Để mẫu phẩm nhiệt độ phòng trước làm xét nghiệm Các mẫu đông băng phải tan hoàn toàn lắc trước làm xét nghiệm Không lặp lại việc đông băng làm tan mẫu phẩm - Nếu mẫu phẩm cần phải di chuyển, chúng phải đóng gói vận chuyển phù hợp với quy định an toàn vận chuyển chất có nguy lây nhiễm cao  Dụng Cụ - Các kit thử - Các ống nhỏ mẫu dùng lần - Các phụ kiện khác hướng dẫn sử dụng  Dụng cụ không kèm cần có • Dụng cụ đựng mẫu phẩm • Máy li tâm • Thiết bị đo thời gian 6) Cách sử dụng: Các loại kit chuẩn đoán HBV thị trường dựa nguyên tắt Nếu muốn chuẩn đốn HBV có hai cách:  Chuẩn đốn phịng khám, bệnh viện  Sử dụng lọai kit thị trường Một loại kit thị trường dùng chuẩn đoán HBV: BioTracer HBsAg (Cassette): Xét nghiệm nhanh chẩn đoán viêm gan B 18  Quy Trình Thử Nghiệm Các mẫu xét nghiệm que thử phải để ổn định nhiệt độ phòng 15 – 20 phút trước tiến hành thử nghiệm Lấy que thử khỏi bao, đặt lên bề mặt phẳng Chuyển 100 µl huyết huyết tương cho vào giếng thử (vùng ký hiệu S) Thử nghiệm bắt đầu, đợi cửa sổ kết xuất vạch màu đỏ tím Đọc kết thử nghiệm sau 15 – 20 phút Lưu ý: Tiến hành thử nghiệm lấy que thử khỏi bao  Diển Giải Kết Quả Thử Nghiệm Vạch màu xuất vùng C cửa sổ kết cho biết thử nghiệm tiến hành Vạch màu vùng T cho biết kết thử nghiệm ÂM TÍNH: Nếu có vạch màu xuất vùng C DƯƠNG TÍNH: Nếu xuất vạch màu vùng C vùng T chứng tỏ thử nghiệm dương tính, vạch màu xuất trước KHƠNG CĨ GIÁ TRỊ CHẨN ĐỐN: Vạch màu không xuất vùng C cửa sổ kết sau tiến hành thử nghiệm, thử nghiệm xem khơng có giá trị Ngun nhân bước tiến hành không que thử bị hư Khuyến cáo thử nghiệm lại mẫu que thử 19  Giới Hạn Kết âm tính khơng loại trừ khả nhiễm HBV Nếu có nghi ngờ kết xét nghiệm, nên tiến hành thử lại thử nghiệm lâm sàng có sẵn khác  Độ Chính Xác Một nghiên cứu tiến hành 256 mẫu huyết bao gồm dương tính lẫn âm tính Mỗi mẫu xét nghiệm định tính BioTracerTM HBsAg Rapid Card thử nghiệm HBsAg khác có sẵn thị trường (phương pháp ELISA) với hướng dẫn sử dụng tương ứng: BioTracerTM HBsAg Rapid Card ELISA Dương tính Âm tính Dương tính 163 Âm tính 92 Độ nhạy 99,4% (163/164) độ đặc hiệu > 99,9% (92/92) Kết luận: BioTracerTM HBsAg Rapid Card chứng minh cho kết đến 99,6% so với thử nghiệm ELISA 20 III MẶT LỢI VÀ HẠN CHẾ CỦA VIỆC DÙNG TEST KIT CHO VIÊM GAN SIÊU VI B: 1) Lợi Ích Của Kit Thử Việc dùng test kit công cụ hỗ trợ bác sĩ chẩn đoán điều trị viêm gan Cịn mặt hạn chế thân vai trò test kit Y Học chắn khơng có mà mặt ý nghĩa, nguyên lý áp dụng, công nghệ để sản xuất test kit Ví dụ: Test nhanh chẩn đoán viêm gan B độ nhạy cao đặc hiệu thấp, test kit Elisa chẩn đốn xác test nhanh độ xác phụ thuộc vào trình độ kĩ thuật viên XN test kit miễn dịch huỳnh quang tốt chẩn đoán siêu vi B giá thành mắc 2) Hạn Chế Của Kit Thử Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) sử dụng cho mục đích chẩn đốn bệnh Kit thử dùng để phát HBsAg huyết huyết tương, vậy, kit thử khơng thể sử dụng để xét nghiệm định lượng giá trị tốc độ tăng lên nồng độ HbsAg Kit thử chẩn đoán Viêm gan B (HBsAg) phát có mặt kháng nguyên bề mặt vi rút Viêm gan B mẫu phẩm không sử dụng phương pháp để khám bệnh Viêm gan B Virus Cũng tất xét nghiệm chẩn đoán bệnh, Cần phải tư vấn với bác sỹ tất kết xét nghiệm với triệu chứng lâm sàng khác Test Kit thử chẩn đốn Viêm gan B (HBsAg) khơng thể phát HBsAg nồng độ HBsAg mẫu phẩm thấp ng/mL Nếu kết xét nghiệm âm tính mà triệu chứng lâm sàng còn, cần phải làm thêm xét nghiệm phương pháp khác Vì vậy, kết xét nghiệm âm tính khơng phải loại trừ khả bị lây nhiễm virus Viêm gan B 21 Tài liệu tham khảo: http://history.nih.gov/exhibits/thinblueline/timeline.html http://123doc.vn http://en.wikipedia.org/wiki/HBsAg http://benhviemgan.net/ http://hongthienmy.vn/userupload/documents/HBeAg%20Cas%20Acon.pdf http://testkitplus.com/product/mdma-test-kit/ http://alobacsi.com/ http://medlatec.vn/ http://www.thuocbietduoc.com.vn/ http://vietbao.vn/ http://tuelinh.vn/y-nghia-dinh-luong-hbsag-trong-dieu-tri-viem-gan-b-16552 22