Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của cá trắm cỏ (ctenopharyngodon idellus c v ) nuôi tại khu vực hà nội đối với vi khuẩn aeromonas hydrophila

ir ' p r GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO T M /Ờ N ií ĐAí HOC TttUỶ T o - IỊ ịỉ VO UCNG TlííiV ; !< I ị ịỊ lị i ỉ >1: : N o T ' T - ^ õ T ^ : 0|C(: BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO T R Ư Ờ N G Đ Ạ I HỌC TH ỦY SẢN VŨ D Ũ N G TIẾN NGHIÊN CỨU ĐÁP ÚNG MIÊN DỊCH CỦA CÁ TRẮM Cỏ (Ctenopharyngodon idellus c.& v.) NUÔI TẠI KHU V ự c HÀ NỘI ĐỐI VỚI VI KHUẨN Aeromonas hydrophila C h u y ê n ngành: N uôi cá nước nghề cá nước M ã số: 4.05.01 L U Ậ N Á N T IẾ N S ĩ N Ô N G N G H IỆ P NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS-TS Đỗ N gọc Liên TS Lại Văn H ùng Nha Trang, 2005 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu riêng Tất số liệu, nhận xét, kểt Luận án trung thực chưa công bố cơng trình nào, ngoại trừ số liệu công b ố số cơng trình tơi Tác giả Luận án Ị Vũ Dũng Tiến LỜI CÁM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS-TS Đỗ Ngọc Liên TS Lại Văn Hùng - người thầy tận tình chăm lo hướng dẫn chu đáo cho suốt q trình làm nghiên cứu sinh tơi; Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới TS Nguyễn Đình Mão - Chủ nhiệm Khoa, TS Nguyễn Hữu Dũng, TS Đồ Thị Hồ, Khoa Ni trồng thủy sản Trường Đại học Thuỷ sản nhiệt tình giúp đỡ tơi việc viết Luận án; Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới PGS-TS Nguyễn Văn Mùi, TS Phan Tuấn Nghĩa, PGS-TS Nguyễn Thị Quỳ thầy, cô giáo Ban Chủ nhiệm Khoa Sinh học Trường Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tiến hành thí nghiệm suốt năm thực đê tài nghiên cứu này; Tôi xỉn chân thành cám ơn TS Lê Thanh Litu, Viện trưởng TS Phạm Anh Tuấn, Phó Viện trưởng Viện Nghiên cứu ni trồng thuỷ sản I, TS Bùi Quang Tề, ThS Phan Thị Vân, ThS Bạch Thị Tuyết bạn đồng nghiệp Viện Nghiên cứu nuôi trồng thuỷ sản ỉ (Bộ Thuỷ sản), CN Ngố Văn Quang (Viện Hoá học Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam) nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thu mẫu cá bệnh ngồi tự nhiên, tiến hành thí nghiệm ướt Viện điều kiện thuận lợi khác cho việc thực Luận án; Tôi xin chân thành cám ơn Dự án Tăng cường lực quản lý ngành thuỷ sản (STOFA) hỗ trợ tơi phần chi phí lại, in ấn mua hố chất Tơi xin chân thành cám ơn cấc đồng chí lãnh đạo Vụ Khoa học & Công nghệ, Vụ Nuôi trồng thủy sản Vụ Tổ chức-Cán (Bộ Thủy sản) bạn bè, đồng nghiệp động viên mặt tinh thần q trình tơi thực Luận án; Và cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân tình với mẹ vợ, vợ chịu đựng khó khăn, gian khổ để tạo điều kiện thuận lợi tối đa cho việc thực Luận án Một lần nữa, xin chân thành cám ơn tất người dành cho giúp đỡ chân tình quỷ báu rry s • Tác giá MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cám ơn Mục lục i Các chữ viết tắt V Danh mục bảng vi Danh mục hình, ảnh viii MỒ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Miễn dịch cá xương 1.1.1 Miễn dịch tự nhiên cá xương 1.1.2 Miễn dịch tiếp thu cá xương 1.2 1.3 1.1.3 Ảnh hưởng số yếu tố miễn dịch cá xương 15 Vi khuẩn Aeromonas bệnh chúng gây cá 16 1.2.1 Các tác nhân gây độc từ vi khuẩn gây bệnh 18 1.2.2 Nhận dạng chẩn đoán vi khuẩn A hydrophila 20 1.2.3 Các phương pháp kiểm soát bệnh cá Aeromonas di động gây nên 20 Dùng vacxin để phòng bệnh cho cá 21 1.3.1 Sơ lược lịch sử dùng vacxin cho cá 21 1.3.2 Hiệu việc dùng vacxin cho cá 22 1.3.3 Các loại vacxin quy trình chủng vacxin 23 1.3.4 Tối ưu hoá yếu tố việc dùng vacxin cho cá 25 1.3.5 Tiêu chuẩn vacxin 26 1.3.6 Dùng vacxin chống vi khuẩn Aeromonas di động 26 1.3.7 Quản lý việc sản xuất vacxin 29 11 1.4 Một số bệnh thường gặp cá trắm cỏ 1.4.1 Bệnh đốm đỏ 1.4.2 Một số bệnh khác 30 30 30 1.5 Tình hình nghiên cứu miễn dịch cá Việt Nam 30 CHƯƠNG ĐƠÌ TƯỢNG, NGUN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚƯ 34 2.1 Đối tượng nghiên cứu nguyên liệu 2.1.1 Cá trăm cỏ 2.1.2 Vi khuẩn 34 34 41 2.2 Phương pháp nghiên cứu 42 2.2.1 Thu bảo quản huyết cá 42 2.2.2 Xác định hàm lượng protein huyết cá 43 2.2.3 Xác định thành phần protein huyết cá trắm cỏ 43 2.2.4 Phân tích chất lượng protein huyết cá trắm cỏ kỹ thuật sắc ký lọc gel 2.2.5 Phân tích izozym 44 45 2.2.6 Điều chế dùng thử vacxin phòng bênh đốm đỏ cho cá trắm cỏ 46 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CÚƯ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Đáp ứng miễn dịch cá trắm cỏ biểu qua hàm lượng protein huyết chúng 3.1.1 Hàm lượng protein huyết số nhóm cá trắm cỏ 3.1.2 Hàm lượng protein huyết cá trắm cỏ bố mẹ trước sau bị bệnh 3.1.3 Hàm lượng protein huyết cá trắm cỏ giống tiêm vi khuẩn với liều lượng khác 3.1.4 Hàm lượng protein huyết cá trắm cỏ giống lớn tiêm vacxin gây nhiễm trùng 49 49 49 50 51 53 111 3.2 » Đáp ứng miễn dịch cá trắm cỏ biểu qua chất lượng protein huyết chúng 3.2.1 Chất lượng protein số cá khoẻ 57 58 3.2.2 Chất lượng protein huyết cá bố mẹ sau đẻ 60 3.2.3 Chất lượng protein huyết cá bố mẹ 62 3.2.4 Phổ protein huyết cá giống 64 3.2.5 Phổ protein huyết cá giống tiêm nước muối sinh lý 3.2.6 Phổ protein huyết cá giống bị gây nhiễm trùng dịch chiết ổ dịch 3.2.7 Phổ protein huyết cá giống tiêm vacxin dto Viện Nghiên cứu nuôi trồng thuỷ sản I điều chế thử 3.2.8 Phổ protein huyết cá giống bị gây nhiễm vi khuẩn Aeromonas hydrophila 3.2.9 Phổ protein huyết cá trắm cỏ bị bệnh tự nhiên 65 67 69 72 75 3.2.10 Sự thay đổi chất lượng protein huyết cá trước saụ bị tiêm dịch chiết ổ dịch 3.3 3.4 3.5 78 Bàn luận đáp ứng miễn dịch cá trắm cỏ biểu qua chất lượng protein huyết chúng 3.3.1 Sự khác chất lượng protein huyết nhóm cá khoẻ cá bị bệnh 3.3.2 Sự khác chất lượng protein protein huyết nhóm cá khoẻ có khối lượng khác 3.3.3 Phổ protein huyết cá sau bị nhiễm bệnh 81 3.3.4 Chất lượng protein huyết cá chủng vacxin 83 3.3.5 Chất lượng protein huyết cá đối chứng 83 Kết phân tích chất lượng protein huyết cá trắm cỏ kỹ thuật sắc ký lọc gel 3.4.1 Kết sắc ký cột ultrogel AcA-22 84 84 3.4.2 Kết sắc ký cột gel sepharoza 4B 85 Khối lượng phân tử IgM cá trắm cỏ , 81 82 82 iv 3.6 3.7 Phổ điện di izozym huyết cá ừắm cỏ 88 3.6.1 Phổ điện di izozym esteraza huyết cá trăm cỏ 88 3.6.2 Phổ điện di izozym a xít photphataza huyết cá trắm cỏ 3.6.3 Nhận xét biến đổi chất lượng izozym ỏ cá bệnh 91 94 Kết bàn luận việc điều chế thử nghiệm vacxin phòng bệnh đốm đỏ cho cá trăm cỏ 95 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 100 4.1 Kết luận 100 4.2 Đề nghị 101 DANH MỤC CÁC BÀI BÁO CÔNG Bố KẾT QUẢ NGHIÊN c ú u CỦA LUẬN ÁN 102 TÀI LIỆU THAM KHẢO 103 PHỤ LỤC 132 Phụ lục Thành phần hệ thống miễn dịch bậc tiến hoá Phụ lục Sơ đồ hệ thống bổ thể Phụ lục Một số loài cá nghiên cứu miễn dịch Phụ lục Sơ đồ phân lập vi khuẩn Aeromonas hydrophiỉa A spp Phụ lục Xây dựng đồ thị chuẩn để xác định hàm lượng protein Phụ lục Cách điều chế số dung dịch Phụ lục Cách xác định khối lượng phân tử theo phương pháp Weber Osbom cải tiến để giảm mức độ sai số trị số khối lượng phân tử protein 132 133 135 140 143 148 Ị 53 Phụ lục Đ iện di đồ protein huyết số mẫu cá trắm cỏ bảng trị số khối lượng phân tử vạch protein chúng Phụ lục Trích Cơng văn số 1249/TS-KHCN ngày 2/6/2005 Bộ Thuỷ sản gửi Bộ Khoa học Công nghệ việc đăng ký danh mục nhiệm vụ nghiên cứu khoa học và phát triển công nghệ kiến nghị thực từ năm 2006 Công văn số 277/VTSI ngày 18/5/2005 Viện Nghiên cứu nuôi trồng thuỷ sản I gửi Bộ Thuỷ sản việc đăng ký nhiêm vụ khoa học công nghệ giai đoạn 2006-2010 năm 2006 154 J