Nghiên cứu chiết xuất và xác định thành phần hóa học trong dịch chiết ethanol của thịt quả mướp đắng ở huyện phú vang tỉnh thừa thiên huế

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA - DƯƠNG CÁT TIÊN Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT ETHANOL, CỦA THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG Ở HUYỆN PHÚ VANG, TỈNH THỪA THIÊN HUẾ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA DƯỢC Đà Nẵng, 05/ 2013 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Độc lập - Tự - Hạnh phúc KHOA HÓA   NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Dương Cát Tiên Lớp : 09CHD Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC TRONG DỊCH CHIẾT ETHANOL CỦA THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG Ở HUYỆN PHÚ VANG, TỈNH THỪA THIÊN HUẾ Nguyên liệu, dụng cụ, thiết bị, hóa chất  Nguyên liệu: Quả mướp đắng huyện Phú Vang tỉnh Thừa Thiên Huế  Dụng cụ, thiết bị: - Cân phân tích điện tử, cốc thủy tinh, bình tam giác, cốc sứ, bình hút ẩm,  Hóa chất: EtOH Nội dung nghiên cứu:  Nghiên cứu trình chiết tách hợp chất mướp đắng phương pháp ngâm chiết  Xác định số thành phần hóa học mướp đắng phương pháp sắc khí ghép khối phổ GC-MS Giáo viên hướng dẫn: GVC.ThS Võ Kim Thành Ngày giao đề tài: 11/2012 Ngày hoàn thành: 05/2013 Chủ nhiệm khoa Giáo viên hướng dẫn GS TS Lê Tự Hải GVC ThS Võ Kim Thành Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày 22 tháng năm 2013 LỜI MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài: Mướp đắng hay gọi khổ qua, có tên khoa học Momordica charantia (L.), thuộc họ Bầu bí, loại rau ăn trồng phổ biến nước ta Mướp đắng việc dùng làm thực phẩm sử dụng phương thuốc Đông y giúp hạ đường huyết (hỗ trợ bệnh nhân tiểu đường type 2), kích thích ăn uống, tiêu viêm, giải nhiệt, giải độc gan, ho dai dẳng, táo bón, Các nhà khoa học giới có nhiều cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng chữa bệnh mướp đắng, nhiên Việt Nam có nghiên cứu hệ thống đầy đủ mướp đắng Với mong muốn tìm hiểu số thành phần hóa học có hoạt tính sinh học mướp đắng đồng thời góp thêm nguồn tư liệu phục vụ cho công tác nghiên cứu khoa học, chọn đề tài “Nghiên cứu chiết xuất xác định thành phần hóa học dịch chiết ethanol thịt mướp đắng huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế” Mục tiêu nghiên cứu: - Nghiên cứu trình chiết tách hợp chất từ mướp đắng - Xác định thành phần hóa học, cơng thức cấu tạo số chất Đối tượng phạm vi nghiên cứu: - Đối tượng nghiên cứu: Quả mướp đắng - Phạm vi nghiên cứu: Đề tài thực nghiên cứu mướp đắng làng Tây Hồ, xã Phú Hồ, huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế Phương pháp nghiên cứu: 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: - Thu thập liệu thực vật học thành phần hóa học mướp đắng - Tổng hợp, phân tích liệu mướp đắng - Tham khảo cơng trình nghiên cứu trước liên quan đến đề tài nghiên cứu 4.2 Phương pháp thực nghiệm: - Quan sát thực tế vườn trồng mướp đắng huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế - Phương pháp phân tích để xác định số vật lý (độ ẩm, hàm lượng chất hữu cơ, ) - Phương pháp chiết: Sử dụng phương pháp ngâm chiết - Phương pháp vật lý như: quang phổ hấp thụ AAS, UV-VIS; sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS để xác định thành phần hóa học từ dịch chiết Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học - Cung cấp thơng tin khoa học quy trình chiết tách, xác định thành phần hóa học số hợp chất mướp đắng tỉnh Thừa Thiên Huế - Cung cấp thông tin, tư liệu làm sở cho việc nghiên cứu sau 5.2 Ý nghĩa thực tiễn - Nhằm giúp cho việc ứng dụng mướp đắng phạm vi rộng cách khoa học - Giải thích cách khoa học số kinh nghiệm dân gian ứng dụng mướp đắng - Tổng hợp kiến thức hợp chất thiên nhiên CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.2 TỔNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.3 TỔNG QUAN VỀ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ VÀ CÔNG DỤNG CHƯƠNG 2:NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU - Quả mướp đắng Momordica charantia L thu hái tươi làng Tây Hồ, xã Phú Hồ, huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế vào tháng năm 2013 2.2 DỤNG CỤ, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU  Các loại dung môi dùng để ngâm chiết mẫu loại tinh khiết (pure), loại dung mơi dùng phân tích hay dùng để chạy sắc ký khí ghép khối phổ loại tinh khiết phân tích (pa)  Một số hóa chất sử dụng trình nghiên cứu: - Ethanol C2H5OH  99,7%; có M = 46,07 g/mol; AR, Trung Quốc - Nước cất tinh khiết - Dung dịch HNO3 loãng - Dung mơi dùng cho sắc ký khí ghép khối phổ (Merck) đạt tiêu chuẩn  Dụng cụ: - Cân phân tích điện tử - Tủ nung - Bếp điện - Bình định mức 5, 10, 50, 100ml - Đũa thủy tinh - Cốc thủy tinh, bình tam giác, cốc sứ, bình hút ẩm, 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM  Tìm hiểu kỹ thuật gieo trồng mướp đắng  Xác định số tiêu vật lý hóa học (độ ẩm, hàm lượng tro hàm lượng kim loại) mướp đắng  Khảo sát trình chiết xuất hợp chất thịt mướp đắng dung môi EtOH  Xác định định danh thành phần hóa học có dịch chiết thịt mướp đắng phương pháp GC-MS 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.5 XÂY DỰNG QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 3: TIẾN TRÌNH NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 3.1 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU LÝ HÓA 3.2 KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH CHIẾT XUẤT THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG BẰNG DUNG MƠI ETHANOL Để lựa chọn tỷ lệ dung mơi nước:ethanol thích hợp, ta tiến hành ngâm chiết mẫu dung môi nước:ethanol với tỷ lệ khác 50:50, 40:60, 30:70, 20:80, 10:90 điều kiện thời gian chiết - Sau lọc lấy dịch chiết - Cô cách thủy để dung môi bay hết, thu cắn chiết (ethanol) cân để xác định khối lượng cắn thu mẫu 3.3 XÁC ĐỊNH VÀ ĐINH DANH CÁC THÀ NH PHẦN HÓA HỌC TRONG ̣ DỊCH CHIẾT THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP GC-MS  Xác định thành phần hóa học dịch chiết thịt mướp đắng CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 4.1 TÌM HIỂU VỀ KỸ THUẬT GIEO TRỒNG MƯỚP ĐẮNG Cây mướp đắng (khổ qua) có nguồn gốc châu Phi Do có biên độ sinh thái rộng, nên vùng nhiệt đới mướp đắng sinh trưởng quanh năm, dễ mẫn cảm với điều kiện úng ngập nước Mướp đắng trồng nhiều loại đất sinh trưởng thuận lợi đất giàu dinh dưỡng thoát nước tốt 4.2 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU LÝ HÓA * Nhận xét: Độ ẩm trung bình thịt mướp đắng 89,141% Từ kết cho thấy hàm lượng nước thịt mướp đắng cao Với độ ẩm cao vậy, nguyên liệu dễ bị ẩm mốc, hư hỏng, khó giữ chất lượng trình làm thử nghiệm Do đó, việc bảo quản dược liệu đóng vai trị quan trọng đến kết 4.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH CHIẾT XUẤT THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG Từ bảng 4.4 hình 4.4., ta nhận thấy khả hịa tan thịt mướp đắng dung môi tăng mạnh với tỷ lệ dung môi H2O:EtOH khoảng 50:50 đến 30:70.Như vậy, hệ dung môi nước:EtOH với tỷ lệ 30:70 sử dụng cho tất thí nghiệm Vậy tỷ lệ rắn/lỏng 1/20 sử dụng để tiếp tục khảo sát cho thí nghiệm Vì vậy, ứng với thời gian ngâm chiết 48 thời gian mà q trình chiết đạt trạng thái cân 4.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG * Nhận xét: Kết phân tích phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC – MS) cho thấy dịch chiết từ thịt mướp đắng thu từ phương pháp ngâm chiết, có 40 cấu tử, định danh 13 cấu tử Một số cấu tử có hàm lượng cao như: Stigmasterol chiếm 23,70%; Sitosterol chiếm 6,78%; Squalene chiếm 5,12%; Lanostan-3β-ol chiếm 4,67%; Linoleic acid chiếm 3,21%; Phenylethyl alcohol chiếm 3,10%; 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- chiếm 2,78%; 2Furanmethanol chiếm 2,30%; n-Hexadecanoic acid chiếm 1,91%; 1,2- Cyclopentanedione,3-methyl- chiếm 1,87%; Benzeneacetaldehyde chiếm 1,58%; Octadecanoic acid chiếm 1,53%; 2(5H) – Furanone, -methyl- chiếm 1,37%; Butyrolactone chiếm 1,35% KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Qua tháng thực đề tài khóa luận tốt nghiệp “Nghiên cứu chiết xuất xác định thành phần hóa học dịch chiết ethanol thịt mướp đắng huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế”, so với mục tiêu thân, tác giả đạt số kết sau: Đã xác định số tiêu lý hóa thịt mướp đắng:  Độ ẩm trung bình lớn chiếm khoảng 89,141%  Hàm lượng tro trung bình chiếm khoảng 9,95%  Hàm lượng số kim loại Cu, Zn nằm khoảng cho phép Riêng Pb có hàm lượng cao so với mức cho phép theo định số 46/2007 Bộ Y tế Đã xác định điều kiện chiết xuất tối ưu phương pháp ngâm chiết thịt mướp đắng trong:  Tỷ lệ dung môi nước:ethanol 30:70  Tỷ lệ rắn/lỏng 1/20  Thời gian chiết xuất 48 Bằng phương pháp GC-MS định danh xác định công thức cấu tạo số cấu tử dịch chiết thịt mướp đắng Trong có hợp chất chiếm hàm lượng cao như: Stigmasterol chiếm 23,70%; Sitosterol chiếm 6,78%; Squalene chiếm 5,12%; Lanostan-3β-ol chiếm 4,67%  Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu sâu việc tinh chế, phân lập thử nghiệm hoạt tính sinh học hoạt chất có mướp đắng để ứng dụng cơng nghệ hóa dược DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT [1] Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, [tr 337] [2] GS.TS Trần Mạnh Bình, PGS.TS Nguyễn Quang Đạt (2006), Hóa học hữu – Sách đào tạo dược sĩ đại học, NXB Y học, [tr 208, 209] [3] Tạ Duy Chân (1999), Những phương thuốc hay “chữa bệnh hoa”, NXB Nghệ An, [tr 161-255] [4] Tạ Duy Chân (1999), Những phương thuốc hay “rau cỏ trị bệnh”, NXB Nghệ An, [ tr 293-297] [5] Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, [tr 795]  ... Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC TRONG DỊCH CHIẾT ETHANOL CỦA THỊT QUẢ MƯỚP ĐẮNG Ở HUYỆN PHÚ VANG, TỈNH THỪA THIÊN HUẾ Nguyên liệu, dụng cụ, thiết bị, hóa chất ... LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Qua tháng thực đề tài khóa luận tốt nghiệp ? ?Nghiên cứu chiết xuất xác định thành phần hóa học dịch chiết ethanol thịt mướp đắng huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế? ??,... Đối tượng nghiên cứu: Quả mướp đắng - Phạm vi nghiên cứu: Đề tài thực nghiên cứu mướp đắng làng Tây Hồ, xã Phú Hồ, huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế Phương pháp nghiên cứu: 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: