Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học của một số dịch chiết lá cây dứa dại ở cù lao chàm quảng nam

i  ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HƠI NGUYỄN THỊ SƠN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT LÁ CÂY DỨA DẠI Ở CÙ LAO CHÀM, QUẢNG NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Đà Nẵng - 2014 ii  ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HƠI Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT LÁ CÂY DỨA DẠI Ở CÙ LAO CHÀM, QUẢNG NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực : Nguyễn Thị Sơn Lớp : 10 CHD Giáo viên hướng dẫn : GS TS Đào Hùng Cường Đà Nẵng - 2014 iii  ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA ….# "…   NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Nguyễn Thị Sơn Lớp : 10CHD Tên đề tài: “Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học số dịch chiết dứa dại Cù Lao Chàm, Quảng Nam” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị • Nguyên liệu: bột dứa dại khơ • Hóa chất: dung mơi n-hexan, etyl axetat, diclometan, metanol • Dụng cụ thiết bị: - Cốc thủy tinh 100ml, 250ml, 500ml, 1000ml; - Bình tam giác 250ml, 500ml; - Bộ chiết soxhlet, phễu lọc, bếp điện, bếp cách thủy, tủ sấy, cân phân tích; - Đũa thủy tinh, nhiệt kế, pipet, bình nón, ống đong; - Máy đo AAS - Máy đo GC-MS Nội dung nghiên cứu • Điều tra sơ bộ, thu gom xử lí ngun liệu; • Dùng phương pháp chiết soxhlet để chiết tách chất; • Xác định số số hóa lý nguyên liệu: độ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại nặng; • Khảo sát thời gian chiết tối ưu với loại dung mơi • Định danh thành phần hóa học dịch chiết thu Giáo viên hướng dẫn: GS.TS Đào Hùng Cường iv  Ngày giao đề tài: 01/11/2014 Ngày hoàn thành: 10/05/2014 Chủ nhiệm Khoa Giáo viên hướng dẫn PGS.TS Lê Tự Hải GS.TS Đào Hùng Cường Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày … tháng 05 năm 2014 Kết điểm đánh giá: Ngày… tháng 05 năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) v  LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo GS.TS Đào Hùng Cường tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo giảng dạy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa, trường đại học Sư phạm; cán Trung tâm kỹ thuật tiêu chuẩn đo lường chất lượng II, thành phố Đà Nẵng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đề tài Đà nẵng, ngày 22 tháng 05 năm 2014 Sinh viên Nguyễn Thị Sơn vi  MỤC LỤC MỞ ĐẦU .i Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng: .2 3.2 Phạm vi nghiên cứu: Phương pháp nghiên cứu: 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm Bố cục luận văn CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT CÂY DỨA DẠI Phân loại khoa học: 1.1.1 Đặc điểm thực vật Họ Pandanaceae 1.1.2 Một số thuộc chi Freycinetia có Việt Nam 1.1.2.1 Freycinetia sumatrana Hemsl 1.1.2.2 Freycinetia webbiana Gaud .4 1.1.3 Một số thuộc chi Pandanus 1.1.3.1 Pandanus amaryllifollus Roxb (Lá Dứa, Dứa thơm) 1.1.3.2 Pandanus kaida Kurz (Dứa gai) 1.1.3.3 Pandanus capusii Mart (Dứa nhiếm) 1.1.3.4 Pandanus fibrosus Gagn (Dứa sợi) .6 1.1.3.5 Pandanus affinis Kurz (Dứa Cam) 1.1.3.6 Pandanus tectorius Park (Dứa trổ) 1.1.3.7 Pandanus humilis Lour (Dứa nhỏ) .6 1.1.3.8 Pandanus tonkinensis Mart (Dứa bắc bộ) 1.1.3.9 Pandanus bipollicaris St-John (Dứa chót chè) 1.1.3.10 Pandanus cornifer St-John (Dứa sừng) 1.1.3.11 Pandanus horizontalis St-John (Dứa nuốm ngang) 1.1.3.12 Pandanus multidrupaceus St-John (Dứa nhiều nhân) 1.1.3.13 Pandanus nanofrutex Stones (Dứa bụi nhỏ) .7 1.1.3.14 Pandanus urophyllus Hance (Dứa đuôi) 1.1.3.15 Pandanus kaida Kurz (Dứa cai-đa) vii  1.1.4 Dứa dại 1.1.4.1 Pandanus odoratissimus L f var vietnamensis Stones (Dứa Việt) 1.1.4.2 Pandanus odoratissimus var hueensis Stones (Dứa Huế) .8 1.2 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY DỨA DẠI 1.2.1 Bài thuốc rễ dứa dại 1.2.2 Bài thuốc dứa dại 10 1.2.3 Bài thuốc hoa dứa dại .10 1.2.4 Bài thuốc dứa dại .10 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI VỀ CÂY DỨA DẠI 11 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 NGUYÊN LIỆU 12 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.2.1 Phương pháp thu gom xử lý mẫu 12 2.2.2 Phương pháp phân tích trọng lượng 12 2.2.2.1 Bản chất phương pháp phân tích trọng lượng 12 2.2.2.2 Phân loại phương pháp phân tích trọng lượng 13 2.2.3 Phương pháp phân hủy mẫu phân tích (tro hóa mẫu) 13 2.2.4 Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) .13 2.2.4.1 Cơ sở phương pháp hấp thụ nguyên tử 13 2.2.4.2 Nguyên tắc phép đo hấp thụ nguyên tử 14 2.2.4.3 Trang bị máy quang phổ hấp thụ nguyên tử 15 2.2.5 Phương pháp chiết mẫu thực vật 16 2.2.5.1 Giới thiệu chung 16 2.2.5.2 Kỹ thuật chiết Shoxlet 16 2.2.6 Phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) 18 2.2.6.1 Phương pháp sắc kí khí (GC) 18 2.2.6.2 Phương pháp khối phổ (MS) .18 2.2.6.3 Sắc kí khí kết hợp Khối phổ (GC-MS) 19 2.2.6.4 Công dụng máy sắc kí khí kết hợp khối phổ GC-MS 19 3.1 SƠ ĐỒ QUI TRÌNH THỰC NGHIỆM 20 3.2.1 Xử lý nguyên liệu 21 3.2.2 Xác định thơng số hóa lý ngun liệu 21 3.2.2.1 Xác định độ ẩm .21 3.2.2.2 Xác định hàm lượng tro .22 viii  3.2.2.3 Xác định hàm lượng số kim loại nặng 23 3.2.3 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi n-hexan .24 3.2.3.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu 24 3.2.3.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết n-hexan .25 3.2.4 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi etyl axetat 28 3.2.4.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu 28 3.2.4.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết etyl axetat 29 3.2.5 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi diclometan (CH2Cl2) 31 3.2.5.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu 31 3.2.5.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết diclometan 32 3.2.6 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi metanol (MeOH) .34 3.2.6.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu 34 3.2.6.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết metanol .36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 KẾT LUẬN .40 KIẾN NGHỊ 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 ix  DANH MỤC CÁC BẢNG Số Tên Trang Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm 23 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro 24 Bảng 3.3 Bảng hàm lượng số kim loại dứa dại 25 Bảng 3.4 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung môi nhexan 26 Bảng 3.5 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại vơi dung môi nhexan 27 Bảng 3.6 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung môi etyl axetat 29 Bảng 3.7 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi etyl axetat 31 Bảng 3.8 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung môi diclometan 32 Bảng 3.9 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi diclometan 34 Bảng 3.10 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung mơi metanol 36 Bảng 3.11 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi metanol 38 Bảng 3.12 Công thức cấu tạo số cấu tử dịch chiết dứa dại 39 x  DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒTHỊ Số Tên Trang Hình 1.1 Cây, hoa hột thuộc chi Freycinetia Hình 1.2 Dứa thơm Hình 1.3 Dứa gai Hình 1.4 Dứa nhiếm Hình 1.5 Dứa cam Hình 1.6 Cây, dứa dại Hình 2.1 Dụng cụ chiết soxhlet 17 Hình 2.2 Máy GC-MS 19 Hình 2.3 Sơ đồ thu gọn máy sắc kí kết hợp khối phổ 19 Hình 3.1 Lá dứa dại tươi 22 Hình 3.2 Bột dứa dại khơ 22 Hình 3.3 Dịch chiết n-hexan thời gian khác 27 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung mơi n-hexan 28 Hình 3.5 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết n-hexan 31 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung mơi etyl axetat 32 Hình 3.7 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết etyl axetat 33 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung môi diclometan 37 Hình 3.9 Các mẫu dịch chiết dứa dại đo GC-MS 37 Hình 3.10 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết diclometan 38 27  Benzene, 1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4methyl1,6-Cyclodecadiene, 1-methyl-5-methylene8- (1-methylethyl)-, [s-(E,E)]Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro3,6-dimethyl-5-isopropenyl-,transCyclohexene, 3-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-6methylene-,[S-(R*,S*)]- C15H22 6.643 0.16 6.743 1.16 6.910 26.6 7.176 0.41 10 7.636 0.2 Cadina-1(10),6,8-triene C15H22 11 7.805 0.34 Cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2-(1methylethenyl) -4-1-methylethylidene)- C15H24 12 9.585 2.43 Ar-tumerone C15H20O 13 9.684 5.02 Tumerone C15H22O 14 10.424 3.27 Curlone C15H22O 15 29.431 0.22 Pentacosane       46.3 Thành phần không định danh C15H24O C15H20O C15H24 C25H52 Nhận xét: Từ kết bảng 3.5 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 15 cấu tử dịch chiết n-hexan từ dứa dại Thành phần hóa học dịch chiết nhexan chủ yếu cấu tử có độ phân cực yếu đến không phân cực, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol, acid mạch dài 6-18C este chúng, ankan mạch thẳng dài 20-28C, steroid Các cấu tử có hàm lượng cao Ar-tumerone, curlone, gamma.-Elemene,Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5 isopropenyl-,trans- Các cấu tử cịn lại có hàm lượng thấp, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol chủ yếu acid ankan mạch dài Cịn lại 46.3% cấu tử khơng định danh Dịch chiết n-hexan chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao đáng quan tâm Ar-tumeron, tumerone, eugenol, gamma.-Elemene … Đây cấu tử có hoạt tính sinh học mạnh Ar-tumerone, tumerone, curlone chất có tác dụng chống viêm chống oxy hóa, giúp ngăn ngừa phát sinh phát triển bệnh ung thư giai đoạn đầu[10] 28  3.2.4 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi etyl axetat 3.2.4.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu Cân khoảng 10g bột nguyên liệu, gói vào giấy lọc, tiến hành chiết soxhlet 85oC 150ml dung môi etyl axetat với thời gian chiết (M1), (M2), (M3), 10 (M4) 12 (M5) Dịch chiết thu được, tiến hành cô quay đuổi dung mơi đến cịn lại khoảng 30ml dịch chiết, đong lấy thể tích (V) sau đem cân khối lượng (m) Lập tỉ số d = m/V(g/ml) dịch chiết, thu kết bảng sau: Bảng 3.5 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung môi etyl axetat STT Thời gian (giờ) V(ml) mcốc(g) mcốc+dịch(g) mdịch(g) d(g/ml) M1 30 53,561 76.085 22.524 0.7508 M2 30 54,764 82.541 27.777 0.9259 M3 30 61,711 89.640 27.929 0.9309 M4 10 30 48,401 76.414 28.013 0.9337 M5 12 30 54,689 82.765 28.076 0.9358 Từ kết Bảng 3.5, ta vẽ đồ thị sau: d (g/ml) 0.8 0.6 d (g/ml) 0.4 0.2 0 10 12 14 t (h) Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung môi etyl axetat 29  Nhận xét: Từ đồ thị Hình 3.6 cho thấy giá trị d tăng dần chiết khoảng thời gian từ 4h – 6h, chứng tỏ lượng chất chiết tăng theo thời gian Từ 6h trở đi, giá trị d có tăng khơng đáng kể Do đó, chúng tơi chọn thời gian chiết tối ưu 6h tương ứng với mẫu M2 3.2.4.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết etyl axetat Hình 3.7 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết etyl axetat Tiến hành chiết soxhlet nguyên liệu với dung môi etyl axetat thời gian tối ưu xác định 6h Dịch chiết thu được, đem cô quay đuổi dung môi, để nguội lọc lần đến khơng cịn thấy cặn cho mẫu vào ống lấy mẫu gửi đo GC-MS phòng phân tích số 02 Ngơ Quyền, thành phố Đà Nẵng Dịch chiết có màu xanh đậm, sau đo GC-MS thu kết thể sắc kí đồ GC-MS Từ kết thu sắc kí đồ GC-MS, so sánh kiện phổ cấu tử với phổ chuẩn cơng bố có thư viện NIST, ta bảng định danh thành phần hóa học sau: 30  Bảng 3.7 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi etyl axetat STT RT Area% 3.889 0.09 5.246 0.64 7.733 2.22 6.142 8.09 gamma.-Elemene C15H24 6.439 0.57 alpha.-Caryophyllenenol C15H24 6.644 0.18 C15H22 6.746 0.88 6.907 23.88 7.179 0.45 Benzene, 1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4methyl1,6-Cyclodecadiene, 1-methyl-5methylene-8- (1-methylethyl)-, [s-(E,E)]Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7tetrahydro 3,6-dimethyl-5-isopropenyl,transCyclohexene, 3-(1,5-dimethyl-4hexenyl)-6- methylene-,[S-(R*,S*)]- 10 7.639 0.23 Cadina-1(10),6,8-triene C15H22 11 7.810 0.4 Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2(1-methylethenyl)-4-1-methylethylidene)- C15H24 12 9.589 2.88 Ar-tumerone C15H20O 13 9.687 5.32 Tumerone C15H22O 14 10.427 4.24 Curlone C15H22O 15 29.431 0.15 Pentacosane 16 19.239 0.22 n-Hexadecanoic acid C16H32O2 17 26.177 0.57 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (Z,Z,Z)- C18H30O2 49.64 Thành phần không định danh       Name Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7trimethyl-, (1R)Cyclohexene, 4-ethenyl-4-methyl-3-(1methylethenyl)-1-(1-methylethyl)-,3Rtrans)Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2,4bis(1- ethylethenyl)-, [1S(1.alpha.,2.beta.,4.beta.)]- CTPT C10H16O C15H24 C15H24 C15H24O C15H20O C15H24 C25H52 31  Nhận xét: Từ kết bảng 3.7 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 17 cấu tử dịch chiết etyl axetat từ dứa dại Thành phần hóa học dịch chiết etyl axetat chủ yếu cấu tử có độ phân cực trung bình đến khơng phân cực, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol, acid mạch dài 6-18C este chúng, ankan mạch thẳng dài 20-28C, steroid, có cấu trúc tương tự nên cấu tử dễ dàng phân bố vào pha dung mơi etyl axetat Các cấu tử có hàm lượng cao tumerone, gamma.-Elemene Các cấu tử cịn lại có hàm lượng thấp < 5%, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol chủ yếu acid ankan mạch dài Cịn lại 49.64% cấu tử khơng định danh Dịch chiết etyl axetat chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao Artumeron, tumerone, …nhưng có hàm lượng thấp so sánh với dịch chiết n-hexan Ngoài ra, với thành phần chủ yếu acid hữu cơ, dịch chiết etyl axetat dứa dại dự đốn có khả kháng khuẩn, vi khuẩn nhạy cảm với pH 3.2.5 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi diclometan (CH2Cl2) 3.2.5.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu Cân khoảng 10g bột nguyên liệu, gói vào giấy lọc, tiến hành chiết soxhlet 40oC 150ml dung môi diclometan với thời gian chiết (M1), (M2), (M3), 10 (M4) 12 (M5) Dịch chiết thu được, tiến hành cô quay đuổi dung mơi đến cịn lại khoảng 30ml dịch chiết, đong lấy thể tích (V) sau đem cân khối lượng (m) Lập tỉ số d = m/V(g/ml) dịch chiết, thu kết bảng sau: Bảng 3.8 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung môi diclometan STT Thời gian (giờ) V(ml) mcốc(g) mcốc+dịch(g) mdịch(g) d(g/ml) M1 30 40,025 75.551 35.526 1.1842 M2 30 48,432 86.019 37.587 1.2529 M3 30 49,567 87.325 37.758 1.2586 M4 10 30 47,037 84.891 37.854 1.2618 M5 12 30 40,682 78.491 37.809 1.2603 32  Từ kết bảng 3.8, ta vẽ đồ thị sau: d (g/ml) 1.28 1.26 1.24 1.22 d (g/ml) 1.2 1.18 10 12 14 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung môi diclometan Nhận xét: Từ đồ thị hình 3.8 cho thấy giá trị d tăng dần chiết khoảng thời gian từ 4h – 6h Tuy nhiên, giá trị d tăng rõ rệt ứng với thời gian 6h mẫu M2 Từ 6h trở đi, giá trị d có tăng khơng đáng kể Do đó, chúng tơi chọn thời gian chiết tối ưu 6h tương ứng với mẫu M3 3.2.5.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết diclometan Hình 3.9 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết diclometan 33  Tiến hành chiết soxhlet bột nguyên liệu với dung môi diclometan thời gian tối ưu xác định 6h Dịch chiết thu được, đem cô quay đuổi dung môi, để nguội lọc lần đến khơng cịn thấy cặn cho mẫu vào ống lấy mẫu gửi đo GC-MS phịng phân tích số 02 Ngơ Quyền, thành phố Đà Nẵng Dịch chiết có màu xanh đậm, sau đo GC-MS thu kết Từ kết thu sắc kí đồ GC-MS, so sánh kiện phổ cấu tử với phổ chuẩn cơng bố có thư viện NIST, ta bảng định danh thành phần hóa học sau: Bảng 3.9 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi diclometan STT RT 3.857 3.936 5.004 Area % Name Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,70.22 trimethyl-, (1R)0.13 Cyclohexene, 4-ethenyl-4-methyl-3-(1methylethenyl)-1-(1-methylethyl)-,3Rtrans)0.38 Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2,4bis(1- ethylethenyl)-, [1S(1.alpha.,2.beta.,4.beta.)]- CTPT C10H16O C15H24 C15H24 5.205 0.39 gamma.-Elemene C15H24 5.686 2.20 alpha.-Caryophyllenenol C15H24 6.087 C15H22 6.385 6.585 6.688 8.64 Benzene, 1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4methyl0.61 1,6-Cyclodecadiene, 1-methyl-5methylene-8- (1-methylethyl)-, [s-(E,E)]0.18 Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro 3,6-dimethyl-5-isopropenyl-,trans0.75 Cyclohexene, 3-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)6- methylene-,[S-(R*,S*)]- 10 6.829 12.07 Cadina-1(10),6,8-triene C15H24O C15H20O C15H24 C15H22 7.117 0.41 12 8.419 8.23 Ar-tumerone C15H20O 13 9.499 3.90 Tumerone C15H22O 11 Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2(1-methylethenyl)-4-1-methylethylidene)- C15H24 34  14 9.594 4.91 Curlone 15 10.331 5.30 Pentacosane 16 19.094 0.73 n-Hexadecanoic acid C16H32O2 17 26.042 0.51 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (Z,Z,Z)- C18H30O2 18 26.131 1.12 19 8.419 8.23 20 39.930 0.74       40.74 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z).beta.-Elemenone gamma.-Sitosterol C15H22O C25H52 C17H36 C15H24 C29H50O Thành phần không định danh Nhận xét: Từ kết bảng 3.9 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 20 cấu tử dịch chiết diclometan từ dứa dại Thành phần hóa học dịch chiết diclometan chủ yếu cấu tử có độ phân cực yếu đến không phân cực, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol, acid mạch dài este chúng, ankan mạch thẳng dài 20-28C, steroid Các cấu tử có hàm lượng cao Benzene, 1-(1,5-dimethyl4-hexenyl)-4-methyl-, Cadina-1(10),6,8-triene, Pentacosane, beta.-Elemenone, Ar- tumerone,… Các cấu tử lại có hàm lượng thấp, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol số hợp chất sterol chủ yếu acid ankan mạch dài Còn lại 40.74% cấu tử không định danh Dịch chiết diclometan chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao Artumeron, tumerone, eugenol, gamma– Sitosterol… Đây cấu tử có hoạt tính sinh học mạnh Ar-tumerone, tumerone, curlone chất có tác dụng chống viêm chống oxy hóa, giúp ngăn ngừa phát sinh phát triển bệnh ung thư giai đoạn đầu[10] 3.2.6 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi metanol (MeOH) 3.2.6.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu Cân khoảng 10g bột nguyên liệu, gói vào giấy lọc, tiến hành chiết soxhlet 40oC 150ml dung môi metanol với thời gian chiết (M1), (M2), (M3), 10 (M4) 12 (M5) 35  Dịch chiết thu được, tiến hành cô quay đuổi dung môi đến cịn lại khoảng 30ml dịch chiết, đong lấy thể tích (V) sau đem cân khối lượng (m) Lập tỉ số d = m/V(g/ml) dịch chiết, thu kết bảng sau: Bảng 3.10 Sự phụ thuộc giá trị d(g/ml) vào thời gian chiết với dung môi metanol STT Thời gian (giờ) V(ml) mcốc(g) mcốc+dịch(g) mdịch(g) d(g/ml) M1 30 53.561 80.086 26.525 0.8841 M2 30 54.764 82.542 27.778 0.9264 M3 30 61.711 89.541 27.830 0.9273 M4 10 30 48.401 80.473 32.072 1.0691 M5 12 30 54.689 86.887 32.198 1.0734 Từ kết bảng 3.10, ta vẽ đồ thị sau: Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung môi metanol Nhận xét: Từ đồ thị hình 3.10 cho thấy giá trị d tăng dần chiết khoảng thời gian từ 4h – 12h Tuy nhiên, giá trị d tăng rõ rệt ứng với thời gian 10h mẫu M4 Từ 10h – 12h, giá trị d có tăng khơng đáng kể Do đó, chúng tơi chọn thời gian chiết tối ưu 10h tương ứng với mẫu M4 36  3.2.6.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết metanol Hình 3.11 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết metanol Tiến hành chiết soxhlet bột nguyên liệu với dung môi metanol thời gian tối ưu xác định 10h Dịch chiết thu được, cho mẫu vào ống lấy mẫu gửi đo GCMS Dịch chiết có màu xanh đậm, sau đo GC-MS thu kết sắc kí đồ Từ kết thu sắc kí đồ GC-MS, so sánh kiện phổ cấu tử với phổ chuẩn cơng bố có thư viện NIST, ta bảng định danh thành phần hóa học sau: Bảng 3.11 Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại với dung môi metanol STT RT Area % Name CTPT 3.778 Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,70.93 trimethyl-, (1R)- C10H16O 4.932 1.60 2-Methoxy-4-vinylphenol C9H10O2 5.611 Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2,41.36 bis(1- ethylethenyl)-, [1S(1.alpha.,2.beta.,4.beta.)]- C15H24 6.003 2.60 gamma.-Elemene C15H24 37  6.297 6.492 6.596 6.735 9.446 10 10.170 11 C15H24 0.93 alpha.-Caryophyllenenol Benzene, 1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-40.83 methyl1,6-Cyclodecadiene, 1-methyl-51.19 methylene-8- (1-methylethyl)-, [s-(E,E)]Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro 14.52 3,6-dimethyl-5-isopropenyl-,trans- C15H22 C15H24O C15H20O 3.32 Tumerone C15H22O C15H22O 10.639 5.17 Curlone 6,10-Dimethyl-3-(1-methylethyl)-62.50 cyclodecene-1,4-dione C15H24O2 12 26.049 1.53 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (Z,Z,Z)- C18H30O2 13 25.960 0.54 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)-     62.98 C17H36 Thành phần không định danh Nhận xét: Từ kết bảng 3.11 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 18 cấu tử dịch chiết metanol từ dứa dại Thành phần hóa học dịch chiết metanol chủ yếu cấu tử có độ phân cực yếu đến khơng phân cực, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol, acid mạch dài este chúng, ankan mạch thẳng dài 20-28C, steroid Các cấu tử có hàm lượng cao 2-Methoxy-4-vinylphenol, tumerone, Curlone … Các cấu tử cịn lại có hàm lượng thấp, bao gồm dẫn xuất benzene, phenol số hợp chất sterol chủ yếu acid ankan mạch dài Còn lại 62.98% cấu tử không định danh Dịch chiết metanol chứa số cấu tử có hoạt tính sinh học cao tumerone, Curlone, gamma.-Elemene… Bảng 3.12 Công thức cấu tạo số cấu tử dịch chiết dứa dại STT CTPT C15H20O CTCT Danh pháp Ar-tumerone O 38  C15H22O Tumerone O Curlone C15H22O O O 9,12Octadecadienoic acid (z,z) - C18H32O2 OH H C29H50O gamma -Sitosterol H H H HO Bảng 3.13 Tổng hợp thành phần định danh dịch chiết dứa dại Area% STT Name Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7trimethyl-, (1R)Cyclohexene, 4-ethenyl-4-methyl-3(1-methylethenyl) -1-(1-methylethyl)-,3R-trans)Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl2,4-bis(1- ethylethenyl)-, [1S(1.alpha.,2.beta.,4.beta.)].gamma.-Elemene alpha.-Caryophyllenenol Benzene, 1-(1,5-dimethyl-4hexenyl)-4-methyl1,6-Cyclodecadiene, 1-methyl-5methylene-8- (1-methylethyl)-, [s(E,E)]Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7tetrahydro-3, 6-dimethyl-5-isopropenyl-,trans- n-hexan etyl axetat 0.29 0.09 0.22 0.93 1.04 0.64 0.39 1.6 0.23 2.22 2.2 1.36 11.09 0.84 8.09 0.57 8.64 8.64 2.6 0.93 0.16 0.18 0.18 0.83 1.16 0.88 0.75 0.19 26.6 23.88 12.07 14.52 diclometan metanol 39  10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Cyclohexene, 3-(1,5-dimethyl-4hexenyl)-6- methylene-,[S-(R*,S*)]Cadina-1(10),6,8-triene Cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2(1-methylethenyl) -4-1-methylethylidene)Ar-tumerone Tumerone Curlone Pentacosane n-Hexadecanoic acid 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (Z,Z,Z)9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)Vitamin E 0.41 0.45 0.41 - 0.2 0.23 - - 0.34 0.4 - - 2.43 5.02 3.67 0.22 - 2.8 5.32 4.24 0.15 0.22 3.9 4.91 5.3 0.73 3.32 5.17 - - 0.57 1.12 1.53 - 0.09 - 0.51 0.32 0.54 - 8.23 beta.-Elemenone gamma.-Sitosterol 0.74 46.3 49.64 40.74 62.98 Thành phần không định danh Nhận xét: Từ kết bảng 3.13 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 21 cấu tử dịch chiết từ dứa dại Trong đó, dung môi diclometan etylaxetat chiết tách nhiều cấu tử (18 cấu tử), dung môi metanol tách 13 cấu tử Như ta thấy rằng, dung môi tối ưu để chiết tách, xác định thành phần dứa dại etylaxetat diclometan Trong thành phần cấu tử định danh, có 13 cấu tử trùng tìm thấy dung mơi Các cấu tử có hoạt tính sinh học cao Ar-tumeron, tumerone, eugenol, gamma– Sitosterol tìm thấy dịch chiết với dung mơi Đây cấu tử có hoạt tính sinh học mạnh Ar-tumerone, tumerone, curlone chất có tác dụng chống viêm chống oxy hóa, giúp ngăn ngừa phát sinh phát triển bệnh ung thư giai đoạn đầu[10] 40  KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong trình triển khai nghiên cứu, đề tài đạt số kết sau: Xác định số tiêu hóa lý như: Độ ẩm bột dứa dại khơ 3,084%; hàm lượng tro 5,93%; hàm lượng kim loại nặng As, Cu, Pb, Zn nằm giới hạn cho phép loại rau quy định Quyết định số 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y Tế ngày tháng năm 1998 Đã thực trình chiết hợp chất từ dứa dại phương pháp chiết soxhlet với dung môi n-hexan, etyl axetat, diclometan, metanol thời gian chiết tối ưu xác định 8h, 6h, 6h 10h Thành phần hóa học dịch chiết dứa dại Cù Lao Chàm, Quảng Nam định danh phương pháp phân tích sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) xác định 21 hợp chất, có số cấu tử sesquitecpen xeton có hàm lượng cao ar-tumerone, tumerone, curlone …và số cấu tử sterol gamma -sitosterol, …Các cấu tử có hoạt tính sinh học mạnh, sử dụng nhiều dược phẩm KIẾN NGHỊ Thử hoạt tính sinh học dịch chiết dứa dại Nghiên cứu phân lập hoạt chất có hàm lượng cao dứa dại Mở rộng phạm vi nghiên cứu thành phần hóa học phận thân, dứa dại địa bàn khác 41  TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích, Bùi Xuân Chương (1980), Sổ tay thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học [2] Võ Văn Chi (1999), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Hà Nội [3] Trần Văn Cừ, Nguyễn Thu Hiền, Trần Bá Hoành, Trần Mạnh Kỳ, Đặng Văn Sử, Lê Dĩnh Thái, Nguyễn Văn Thân, Phạm Ngọc Thịnh (2003), Từ điển bách khoa sinh học, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội [4] GS.TS Nguyễn Văn Đàn (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nhà xuất y học, Hà Nội [5] Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất trẻ, Tp Hồ Chí Minh [6] Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Hà Nội [7] Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt (1985), Các phương pháp sắc kí, Nhà xuất Khoa học kĩ thuât [8] Bùi Xuân Vững, Giáo trình phân tích cơng cụ [9] Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học Khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng, Đà Nẵng 2010 [10] http://diendan.thuocbietduoc.com.vn/Diendan_postst2406_tinh-bot-nghe.aspx Tiếng Anh [11] V K Raina, Ajai Kumar, S K Srivastava, K V Syamsundar and A P Kahol (2003), Essential oil composition of ‘kewda’ (Pandanus odoratissimus) from India, Flavour and Fragrance Journal Flavour Fragr J 2004; 19: 434–436 [12] Ting-Ting Jong, Shang-Whang Chau (1998), Antioxidative activieties of constituents isolated from Pandanus Odoratissimus, Department of Chemistry, National Chunghsing University, Tai Chung, Taiwan   ...ii  ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HƠI Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT LÁ CÂY DỨA DẠI Ở CÙ LAO CHÀM, QUẢNG NAM KHÓA LUẬN... tính sinh học loài dứa dại Việt Nam hướng nghiên cứu có nhiều triển vọng Vì vậy, chọn đề tài ? ?Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học số dịch chiết dứa dại Cù Lao Chàm, Quảng Nam? ?? Với... tượng: Lá dứa dại thu hái Cù Lao Chàm, Hội An, Quảng Nam 3.2 Phạm vi nghiên cứu: - Định danh thành phần hóa học số dịch chiết từ dứa dại với dung mơi khác - Thử hoạt tính sinh học dịch chiết dứa dại