Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học của một số dịch chiết từ cam thảo dây

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA LÊ THỊ HỬU NGUYỆT Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TỪ CAM THẢO DÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƢ PHẠM Đà Nẵng, Năm 2015 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TỪ CAM THẢO DÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƢ PHẠM Sinh viên thực hiện: LÊ THỊ HỬU NGUYỆT Lớp: 11SHH Giáo viên hƣớng dẫn: TS TRẦN MẠNH LỤC Đà Nẵng, Năm 2015 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập –Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên : Lê Thị Hửu Nguyệt Lớp : 11SHH Tên đề tài: Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học số dịch chiết từ Cam thảo dây Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ: - Nguyên liệu: thân Cam thảo dây - Hóa chất: n-hexan, clorofom, etylaxxetat, metanol, HNO3 đặc, HCl đặc - Dụng cụ: chiết soxhlet, chƣng ninh, bếp cách thủy, tủ sấy, lò nung, chén sứ, cân phân tích,bình tam giác có nút nhám,… Nội dung nghiên cứu - Xác định đặc tính hóa lý: độ ẩm, hàm lƣợng tro, hàm lƣợng kim loại - Nghiên cứu chiết tách (chiết soxhlet) xác định thành phần hóa học (GC-MS) thân, Cam thảo dây - Khảo sát điều kiện chƣng ninh: thời gian, nhiệt độ, tỉ lệ rắn - lỏng (dung môi clorofom) Giáo viên hƣớng dẫn : TS Trần Mạnh Lục Ngày giao đề tài: 04/2014 Ngày hoàn thành: 05/2015 Chủ nhiệm khoa Giáo viên hƣớng dẫn PGS.TS Lê Tự Hải TS Trần Mạnh Lục Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày … tháng … năm 2015 Kết điểm đánh giá: Ngày .tháng năm 2015 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo TS Trần Mạnh Lục giao đề tài tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ cho em suốt thời gian nghiên cứu hoàn thành tốt khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo môn thầy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa trƣờng Đại học Sƣ phạm- Đại học Đà Nẵng nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian nghiên cứu làm khóa luận vừa qua Bƣớc đầu làm quen với nghiên cứu khoa học nên khóa luận khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp, bổ sung thầy cô để em thu nhận thêm nhiều kiến thức kinh nghiệm cho thân sau Cuối cùng, em xin chúc quý thầy cô sức khỏe, hạnh phúc thành công sống nhƣ nghiệp giảng dạy Em xin chân thành cảm ơn Đà Nẵng, ngày tháng .năm 2015 Sinh viên Lê Thị Hửu Nguyệt MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Bố cục luận văn CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Cam thảo dây 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Phân loại khoa học Error! Bookmark not defined 1.1.3 Đặc điểm thực vật 1.1.4 Phân bố, sinh thái 1.1.5.Cách trồng 1.1.6 Sơ lƣợc thành phần hóa học Cam thảo dây 1.1.7 Công dụng, định phối hợp 1.1.8 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc thân, Cam thảo dây 1.2 Phƣơng pháp phân tích trọng lƣợng 11 1.2.1 Bản chất phƣơng pháp phân tích trọng lƣợng 11 1.2.2 Thao tác thực nghiệm phƣơng pháp 11 1.2.3 Ƣu, nhƣợc điểm phƣơng pháp phân tích trọng lƣợng 12 1.3 Phƣơng pháp hấp thụ nguyên tử 12 1.3.1 Sự xuất phổ hấp thụ nguyên tử 12 1.3.2 Nguyên tắc phận phép đo AAS 12 1.3.3 Những ƣu điểm nhƣợc điểm phép đo AAS 14 1.3.4 Đối tƣợng phạm vi ứng dụng phép đo AAS 14 1.4 Phƣơng pháp chiết rắn – lỏng 16 1.4.1 Kỹ thuật chiết soxlet 16 1.4.2 Kỹ thuật chƣng ninh 18 1.5 Phƣơng pháp sắc ký ghép khối phổ (GC-MS) 19 1.5.1 Phƣơng pháp sắc ký khí (GC) 19 1.5.1.1 Sơ lƣợc sắc ký khí 19 1.5.1.2 Nguyên lý hoạt động 19 1.5.1.3 Cấu tạo sắc ký khí 19 1.5.2 Phƣơng pháp khối phổ MS 22 1.5.3 Khối phổ kết hợp với sắc ký khí 23 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ hóa chất 24 2.1.1 Thu gom nguyên liệu xử lí nguyên liệu 24 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 25 2.2 Sơ đồ nghiên cứu 26 2.3 Xác định tiêu hóa lý 27 2.3.1 Xác định độ ẩm 27 2.3.2 Xác định hàm lƣợng tro 28 2.3.3 Hàm lƣợng kim loại 29 2.4 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết thân, Cam thảo dây 29 2.5 Khảo sát điều kiện chƣng ninh tối ƣu 30 2.5.1 Khảo sát thời gian chiết 30 2.5.2 Khảo sát nhiệt độ 31 2.5.3 Khảo sát tỉ lệ rắn / lỏng 31 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Kết xác định thông số hóa lý 32 3.1.1 Độ ẩm 32 3.1.2 Hàm lƣợng tro 32 3.1.3 Hàm lƣợng kim loại 33 3.2 Kết khối lƣợng cao chiết soxhlet đo phổ GC-MS xác định thành phần hóa học dịch chiết thân, Cam thảo dây 34 3.2.1 Khối lƣợng cao thu đƣợc phƣơng pháp chiết soxhlet 36 3.2.2 Kết đo GC-MS xác định thành phần hóa học dịch chiết thân, Cam thảo dây 36 3.2.2.1 Dịch chiết n-hexan 36 3.2.2.2 Dịch chiết clorofom 38 3.2.2.3 Dịch chiết etylaxetat 40 3.2.2.4 Dịch chiết metanol 42 3.3 Kết khảo sát điều kiện chƣng ninh tối ƣu với dung môi clorofom 52 3.3.1 Khảo sát thời gian chiết tối ƣu 52 3.3.1 Khảo sát nhiệt độ chiết tối ƣu 53 3.3.1 Khảo sát tỉ lệ rắn/ lỏng 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 Kết luận 56 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 60 MỤC LỤC HÌNH Số hiệu hình Tên hình Trang 1.1 Cây Cam thảo dây 1.2 Thân Cam thảo dây 1.3 Hoa Cam thảo dây 1.4 Quả Cam thảo dây 1.5 Glycyrrhizin 1.6 Hệ thống hấp thụ nguyên tử AAS 13 1.7 Bộ chiết soxhlet 16 1.8 Sơ đồ cấu tạo sắc ký khí 21 2.1 Cam thảo dây 24 2.2 Lò nung 25 2.3 Tủ sấy 25 2.4 Máy GC-MS (Agilent 7890A) 25 2.5 Máy AAS (ZEEnit 700) 25 3.1 Dịch chiết soxhlet với dung môi 34 3.2 Cao chiết sau cô cạn dung môi 34 3.3 Đồ thị biểu diễn khối lƣợng cao thu đƣợc chiết soxhlet 35 3.4 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết n-hexan 36 3.5 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết clorofom 38 3.6 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết etylaxetat 40 3.7 Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết metanol 42 3.8 Một số rau giàu LA 47 3.9 Axit Stearic 48 3.10 Sản phẩm thuốc phytol 49 3.11 Stigmasterol 50 3.12 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc khối lƣợng cao vào thời gian 52 3.13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc khối lƣợng cao vào nhiệt độ 53 3.14 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc khối lƣợng cao vào tỉ lệ rắn-lỏng 54 3.15 Đồ thị biểu diễn thay đổi khối lƣợng cao số lần chƣng ninh 55 MỤC LỤC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng Trang 3.1 Kết khảo sát độ ẩm 32 3.2 Kết khảo sát hàm lƣợng tro 32 3.3 Kết xác định hàm lƣợng kim loại nặng 33 3.4 Khối lƣợng cao chiết thu đƣợc phƣơng pháp chiết soxlet 35 3.5 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan 36 3.6 Thành phần hóa học dịch chiết clorofom 38 3.7 Thành phần hóa học dịch chiết etylaxetat 40 3.8 Thành phần hóa học dịch chiết metanol 42 3.9 Tổng kết thành phần hóa học dịch chiết 45 3.10 Kết khảo sát thời gian chiết tối ƣu 52 3.11 Kết khảo sát nhiệt độ chiết tối ƣu 53 3.12 Kết khảo sát tỉ lệ rắn/ lỏng 54 3.13 Khối lƣợng cao sau lần chƣng ninh 55 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Nƣớc ta nằm vùng khí hậu nhiệt đới nên nguồn tài nguyên thiên nhiên phong phú đa dạng, có nhiều lồi có hoạt tính làm thuốc Bởi vậy, từ xƣa nhân dân ta biết sử dụng loài cỏ xung quanh làm nguồn dƣợc liệu để chữa bệnh có hiệu Ngày nay, bên cạnh loại thuốc tân dƣợc loại dƣợc liệu có nguồn gốc từ thiên nhiên ngày đƣợc ƣa chuộng Trong nhiều năm qua, có nhiều cơng trình nghiên cứu khoa học việc chiết tách hoạt chất cỏ phục vụ cho việc chữa bệnh Cũng nhƣ loại dƣợc thảo khác, loài Cam thảo dây đƣợc biết đến từ lâu Nó có thuốc dân gian Việt Nam với khả điều trị hữu hiệu số bệnh nhƣ viêm răng, táo bón, bệnh lậu, thấp khớp…Tên khoa học Abrus precatorius L thuộc họ Đậu (Fabaceae) Lồi lại có khả sinh trƣởng phát triển dễ dàng miền Trung nƣớc ta Tuy cơng trình nghiên cứu Cam thảo dây nƣớc ta hạn chế, nên ta chƣa khai thác hết tiềm tác dụng hữu ích lồi Vì tơi chọn đề tài khóa luận :”Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học số dịch chiết từ Cam thảo dây” với hy vọng góp thêm phần nhằm khai thác tác dụng hữu ích từ lồi Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu qui trình chiết hợp chất hóa học từ Cam thảo dây - Xác định thành phần hóa học dịch chiết từ Cam thảo dây - Tìm điều kiện tối ƣu chƣng ninh Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu Thân Cam thảo dây 3.2 Phạm vi nghiên cứu - Nghiên cứu số vật lý, thành phần hữu có Cam thảo dây - Nghiên cứu điều kiện chƣng ninh 58 [15] Varaprasad Bobbarala and Varahalarao Vadlapudi, (2009), “Abrus Precatorius L seed extracts antimicrobial properties against clinically important bacteria.”, International Journal of PharmTech Research Vol.1, No.4, pp 1115-1118 [16] Xiao, Zhi-Hui; Wang, Fa-Zuo; Sun, Ai-Jun; Li, Chuan-Rong; Huang, Cai-Guo; Zhang, Si (2012), “ A New Triterpenoid Saponin from Abrus precatorius Linn.”, Molecules, 17, pp 295-302 [17] Rashmi Arora, Naresh Singh Gill, Sukhwinder Kaur and Ajay Deep Jain, (2011), “ Phytopharmacological Evaluation of Etanoic Extract of the Seed of Abrus precatorius Linn.”, Journal of Pharmacology and Toxicology, 6, pp 580-588 [18] Mir Z Gul, Farhan Ahmad, Anand K Kondapi, Insaf A Qureshi and Irfan A Ghazil, (2013), “Antioxidant and antiproliferative activities of Abrus precatorius leaf extracts.”, BMC Complementary and Alternative Medicine, pp.13-15 [19] Abhilasha Shourie and Kuntal Kalra, (2013), “ Analysis of phytochemical constituents and pharmacological properties of Abrus precatorius L”, Int J Pharm Bio Sci, 4(1), pp 91-101 [20]http://yduochoaviet.com/thuoc-bo-nguon-goc-thao-moc/860-cam-thaoday.html Bùi Xn Vững, Giáo trình hóa phân tích cơng cụ, Tài liệu chun ngành hóa, ĐH Đà Nẵng [21] http://123doc.org/document/1855028-cay-thuoc-vi-thuoc-dong-y-cam-thaoday-pps.htm [22] http://en.wikipedia.org/wiki/Paeonol [23] http://en.wikipedia.org/wiki/Linoleic_acid [24] http://www.xnkhoachat.com/2012/06/acid-stearic-cong-dung-acid-stearic.html [25] http://mji.ui.ac.id/journal/index.php/mji/article/view/1085 [26] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21658378 [27] http://en.wikipedia.org/wiki/Phytol [28] http://encyclopedia2.thefreedictionary.com/Phytol [29] http://www.naturalwellbeing.com/learning-center/Phytol 59 [30]http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/smb00174?lang=en®io n=VN [31] http://en.wikipedia.org/wiki/Stigmasterol [32] http://en.wikipedia.org/wiki/Hydroxymethylfurfural [33] http://en.wikipedia.org/wiki/Geranylgeraniol [34] http://www.scbt.com/datasheet-200858-geranylgeraniol.html [35] Cell Biochem Funct 2007 sep – Oct; 25(5); 591 – [36] M O Villareal, J Han, M Matsuyama, Y Sekii, A Smaoui, H Shigemori, H Isoda, Planta Med., 2013, 79(3-4), 236-243 [37] http://en.wikipedia.org/wiki/Furfural [38] http://en.wikipedia.org/wiki/Palmitic_acid [39] http://www.thaythuoccuaban.com/vithuoc/camthaoday.htm 60 PHỤ LỤC Sắc kí đồ GC-MS dịch chiết n-hexan khoảng thời gian lƣu từ 54 phút đến 67 phút Phổ GC-MS cụ thể dịch chiết clorofom khoảng thời gian lƣu từ 55 phút đến 69 phút 61 Phổ GC-MS cụ thể dịch chiết etylaxetat khoảng thời gian lƣu từ 53 phút đến 69 phút Phổ GC-MS cụ thể dịch chiết metanol khoảng thời gian lƣu từ phút đến 20 phút từ 54 phút đến 69 phút 62 Phổ khối số chất 5.1 Phổ khối 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)- phổ đối chứng 63 5.2 Phổ khối 2-Furancarboxaldehyde, 5-methyl- phổ đối chứng 5.3 Phổ khối 2-Furanmethanol phổ đối chứng 64 5.4 Phổ khối 2-Methoxy-4-vinylphenol phổ đối chứng 5.5 Phổ khối 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- phổ đối chứng 65 5.6 Phổ khối 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)- phổ đối chứng 5.7 Phổ khối cis-13-Octadecenoic acid phổ đối chứng 66 5.8 Phổ khối dl-Malic acid, dimethyl ester phổ đối chứng 5.9 Phổ khối Ethanone, 1-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)- phổ đối chứng 67 5.10 Phổ khối Furfural phổ đối chứng 5.10 Phổ khối gamma.-Sitosterol phổ đối chứng 68 5.11 Phổ khối Geranylgeraniol phổ đối chứng 5.12 Phổ khối Lup-20(29)-en-3-one phổ đối chứng 69 5.13 Phổ khối n-Hexadecanoic acid phổ đối chứng 5.14 Phổ khối Octadecanoic acid phổ đối chứng 70 5.15 Phổ khối Phytol phổ đối chứng 5.16 Phổ khối Stigmasterol phổ đối chứng 71 5.17 Phổ khối Ethanone, 1-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)- phổ đối chứng 5.18 Phổ khối 4H-1-Benzopyran-4-one, 5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-6,7dimethoxy- phổ đối chứng 72 5.19 Phổ khối 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono(2-ethylhexyl) ester phổ đối chứng ...ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TỪ CAM THẢO DÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN... Kết đo GC-MS xác định thành phần hóa học dịch chiết thân, Cam thảo dây 3.2.2.1 Dịch chiết n-hexan Sắc kí đồ GC-MS kết định danh thành phần hóa học dịch chiết n- hexan thân, Cam thảo dây đƣợc thể... thảo dây? ?? với hy vọng góp thêm phần nhằm khai thác tác dụng hữu ích từ lồi Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu qui trình chiết hợp chất hóa học từ Cam thảo dây - Xác định thành phần hóa học dịch chiết