Mục tiêu của nghiên cứu là tìm ra tỉ lệ pha loãng, nồng độ thẩm thấu và nồng độ các cation tối ưu cho hoạt lực tinh trùng hàu Thái Bình Dương Crassostrea gigas. Tinh trùng hàu Thái Bình Dương được pha loãng ở các tỉ lệ 1:50, 1:100, 1:150 và 1:200 (tinh dịch: nước biển nhân tạo) để xác định tỉ lệ pha loãng cho hoạt lực tinh trùng tốt nhất. Đồng thời bài viết góp phần đóng góp những thông tin hữu ích cho bảo quản lạnh tinh trùng và cải thiện môi trường thụ tinh nhân tạo loài này tốt hơn.
Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 2/2018 THÔNG BÁO KHOA HỌC ẢNH HƯỞNG CỦA TỈ LỆ PHA LOÃNG, NỒNG ĐỘ THẨM THẤU VÀ NỒNG ĐỘ CÁC CATION LÊN HOẠT LỰC TINH TRÙNG HÀU THÁI BÌNH DƯƠNG (Crassostrea gigas Thunberg, 1793) EFFECTS OF DILUTION RATIO, OSMOLALITY AND CONCENTRATIONS OF CATIONS ON SPERM MOTILITY IN PACIFIC OYSTER (Crassostrea gigas Thunberg, 1793) Nguyễn Thị Tý Trâm¹, Trương Thị Bích Hồng¹, Mai Như Thủy¹, Lê Minh Hồng¹ Ngày nhận bài: 4/4/2018; Ngày phản biện thông qua: 29/5/2018; Ngày duyệt đăng: 25/6/2018 TĨM TẮT Mục tiêu nghiên cứu tìm tỉ lệ pha loãng, nồng độ thẩm thấu nồng độ cation tối ưu cho hoạt lực tinh trùng hàu Thái Bình Dương Crassostrea gigas Tinh trùng hàu Thái Bình Dương pha lỗng tỉ lệ 1:50, 1:100, 1:150 1:200 (tinh dịch: nước biển nhân tạo) để xác định tỉ lệ pha loãng cho hoạt lực tinh trùng tốt Sau đó, tỉ lệ pha lỗng sử dụng cho thí nghiệm áp suất thẩm thấu (nồng độ 300, 400, 500, 600 mOsm/kg) cation Na+, Ca²+, K+, Mg²+ (nồng độ 0,2; 0,4; 0,6; 0,8M) Mỗi quan sát lặp lại lần Kết cho thấy, hoạt lực tinh trùng hàu Thái Bình Dương tốt pha lỗng tỉ lệ 1:200; áp suất thẩm thấu 500 mOsm/kg; nồng độ tối ưu cation Na+, K+,Ca²+lần lượt 0,4M, 0,4M 0,2M Khi có diện Mg²+ , tinh trùng hàu khơng có hoạt lực nồng độ thực nghiên cứu Tỉ lệ thụ tinh đạt cao thụ tinh môi trường nước biển nhân tạo, môi trường nước biển tự nhiên xử lý, sau dung dịch có áp suất thẩm thấu 500mOsm/kg thấp dung dịch cation Na+ 0,4M với kết 75,77±5,26%; 71,78±3,25%; 49,94±2,12%; 35,8±5,27% Từ khóa: Hàu Thái Bình Dương, tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu, cation, hoạt lực tinh trùng ABSTRACT The objective of the present study was to determine the optimal dilution rate, osmotic pressure and cation concentrations on sperm motility of Crassostrea gigas Semen was diluted in artificial seawater at different ratios (1:50, 1: 100, 1: 150 and 1: 200) to find the best dilution ratio for sperm motility Then, the best dilution rate from this experiment was applied for osmotic pressure tests (concentrations of 300, 400, 500, 600 mOsm/ kg) and effect of cations Na+, Ca²+, K+, Mg²+ (concentration 0, 2, 0.4, 0.6, 0.8M) Each observation was repeated times The results indicated that the best performance of Pacific oyster sperm were remarkable at the dilution rate 1: 200; osmolality 500 mOsm/kg and the cation concentrations of Na+ and K+0.4M, Ca²+ 0.2M In the presence of Mg²+, sperm of Pacific oyster were not active at any concentrations in the study The highest fertilization rates was observed when artificial inseminating in artificial seawater, followed by the treated natural sea water, than by a 500 mOsm/kg osmotic pressure solution and the lowest in Na+0.4M solution with respectively the result are 75.77 ± 5.26%; 71.78 ± 3.25%; 49.94 ± 2.12%; 35.8 ± 5.27% Key words: Pacific oysters, dilution ratio, osmolality, cation concentration, sperm motility I ĐẶT VẤN ĐỀ Hàu Thái Bình Dương (TBD) Crassostrea gigas lồi nhuyễn thể có giá trị kinh tế cao, thịt thơm ngon, giàu dinh dưỡng có tốc độ sinh trưởng nhanh, sau tháng ni hàu ¹ Viện Nuôi trồng Thủy sản, Trường Đại học Nha Trang 78 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG đạt kích thước thương phẩm [2] Đến nay, hàu TBD trở thành đối tượng ni lồi động vật thân mềm Tuy nhiên, Việt Nam, hàu đối tượng di nhập nên nguồn cung cấp giống cho người nuôi chủ yếu từ sản xuất giống nhân tạo Để sản Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản xuất giống nhân tạo chỗ, chủ động giống có chất lượng đáp ứng nhu cầu ni thương phẩm, ngồi chất lượng trứng chất lượng tinh trùng đưa vào sinh sản nhân tạo phải cao Hoạt lực tinh trùng thông số để đánh giá chất lượng khả thụ tinh tinh trùng hàu TBD Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng tinh trùng như: mùa vụ sinh sản, thời điểm thu mẫu, nhiệt độ, thức ăn [5] Hoạt lực tinh trùng bị ảnh hưởng vài yếu tố môi trường hoạt động chúng tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu nồng độ cation (Na+, Ca²+, K+, Mg²+) Những nghiên cứu tương tự thực nhiều đối tượng cá biển cá đù vàng (Larimichthys polyactis) [13], cá bơn Đại Tây Dương (Hippoglossus hippoglossus) [12], cá chẽm mõm nhọn (Psammoperca waigiensis) [6], cá mú cọp (Epinephelus fuscoguttatus) [4], cá dìa (Siganus guttatus) [3] … Tuy nhiên, báo cáo ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu cation lên hoạt lực tinh trùng động vật thân mềm hàu TBD cịn hạn chế Vì vậy, nghiên cứu “Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu cation lên hoạt lực tinh trùng hàu Thái Bình Dương” thực góp phần đóng góp thơng tin hữu ích cho bảo quản lạnh tinh trùng cải thiện mơi trường thụ tinh nhân tạo lồi tốt II VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thu mẫu tinh hàu TBD Hàu TBD lấy điểm thu mua hàu lựa chọn kĩ kích thước thành thục dao động từ – 10 cm, sau vận chuyển phịng thí nghiệm tiến hành kiểm tra giới tính 1µl sản phẩm sinh dục hòa với nước biển nhân tạo quan sát kính hiển vi Nếu mẫu trứng có hình lê hình trịn khơng chuyển động, tinh trùng chúng có kích thước nhỏ vận động, trứng có đường kính lớn tinh trùng gấp nhiều lần Sau xác định giới tính, đực giữ đá lạnh để tiến hành thí nghiệm Đánh giá sơ chất lượng tinh trùng Tinh trùng pha loãng với tỉ lệ 1:100 (1µl tinh dịch 100 µl nước biển nhân tạo), hỗn hợp đặt lên lam kính quan sát Số 2/2018 kính hiển vi có kết nối camera Những mẫu có 85% tinh trùng hoạt động đưa vào nghiên cứu Thí nghiệm ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng Để tiến hành thí nghiệm này, tinh trùng hàu pha loãng nước biển nhân tạo với tỉ lệ 1:50; 1:100; 1:150;1:200 (tinh dịch: nước biển nhân tạo) Nước biển nhân tạo dùng để pha loãng tinh trùng có thành phần gồm: 27g NaCl; 0,5g KCl; 1,2g CaCl2; 4,6g MgCl2và 0,5g NaHCO3 pha lít nước cất Quan sát hoạt lực tinh trùng kính hiển vi có kết nối camera xác định tỉ lệ pha loãng tối ưu, tỉ lệ pha loãng tốt lựa chọn để tiến hành cho thí nghiệm sau Thí nghiệm ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng Sử dụng dung dịch NaCl với mức nồng độ khác 300; 400; 500; 600 mOsm/kg để pha loãng tinh trùng với tỷ lệ tối ưu xác định Dựa vào thời gian hoạt lực tinh trùng phần trăm số tinh trùng hoạt lực để phân tích, xác định nồng độ ASTT tốt cho hoạt lực tinh trùng hàu TBD Thí nghiệm ảnh hưởng cation lên hoạt lực tinh trùng Để xác định ảnh hưởng nồng độ cation lên hoạt lực tinh trùng hàu , thí nghiệm sử dụng bốn loại cation nồng độ khác Cation Na+ dung dịch NaCl, cation K+ dung dịch KCl, cation Ca²+ dung dịch CaCl2, cation Mg² + dung dịch MgCl2 Mỗi cation thí nghiệm với bốn mức nồng độ 0,2; 0,4; 0,6 0,8M Nồng độ tốt cho loại cation lựa chọn dựa kết hoạt lực tinh trùng kiểm tra Hoạt lực tinh trùng kiểm tra kính hiển vi có độ phóng đại 400 lần Kính hiển vi kết nối với máy tính thơng qua camera để quan sát hoạt lực tinh trùng cách thuận lợi Hoạt lực tinh trùng đánh giá dựa vào phần trăm thời gian tinh trùng hoạt động Phần trăm tinh trùng hoạt động xác định phương pháp ước lượng chủ quan mắt thường [12] Thời gian hoạt lực TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 79 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 2/2018 tính từ lúc tinh trùng bắt đầu kích hoạt vận động ngừng vận động [15] Thử nghiệm cho thụ tinh nhân tạo hàu Thái Bình Dương Trứng, tinh trùng đực thành thục cho vào môi trường nước khác bao gồm nước biển nhân tạo, nước biển tự nhiên xử lý sạch, dung dịch có ASTT tối ưu dung dịch chứa cation tốt Sau – tiến hành kiểm tra tỉ lệ thụ tinh (ở thời điểm trứng thụ tinh tế bào có phân chia rõ ràng) Để xác định số trứng thụ tinh, trứng ml mẫu đếm kính hiển vi Tổng số trứng thụ thụ tinh trung bình số trứng đếm lần tỉ lệ thụ tinh xác định theo công thức: Tỉ lệ thụ tinh=(Số trứng thụ tinh)/(Số trứng mẫu lấy ngẫu nhiên cốc) ×100% Phân tích xử lý số liệu Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Số liệu xử lý phần mềm Microsoft Excel, SPSS 22.0 Kết tỉ lệ pha loãng, ASTT nồng độ cation xử lý theo phép phân tích phương sai yếu tố (one-way ANOVA) với mức ý nghĩa P < 0,05, dùng kiểm định Duncan so sánh sai khác nghiệm thức Kết trình bày dạng trung bình ± độ lệch chuẩn (SD) III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng Pha loãng tinh trùng yếu tố quan trọng giúp kích hoạt tồn tinh trùng lúc Pha loãng giúp giảm mật độ tinh trùng, mật độ cao ảnh hưởng đến khả bơi tinh trùng chúng phải cạnh tranh cao không gian hẹp dẫn đến nhanh chóng tiêu tốn lượng chết nhanh Nhưng mật độ thấp, quãng đường tinh trùng bơi để gặp trứng xa làm giảm khả thụ tinh Do đó, tỉ lệ pha lỗng tối ưu yếu tố quan trọng để giúp tinh trùng có hoạt lực tốt thụ tinh nhân tạo [9] Kết thí nghiệm cho thấy có sai khác phần trăm hoạt lực tinh trùng tỉ lệ pha loãng 1:200 với tỷ lệ 1:50, 1:100 1:150 Tinh trùng có phần trăm hoạt lực cao (90 ± 5%) với tỷ lệ pha loãng 1:200 thấp tỉ lệ 1:50 (68,66 ± 4,67%) Thời gian hoạt lực tinh trùng đạt cao với tỷ lệ pha loãng 1:200 (11.460 ± 1.350,99s) thấp với tỷ lệ 1:50 (8.380 ± 612,86s) (Hình 1) Hình 1: Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng lên hoạt lực tinh trùng hàu TBD Các chữ a, b khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê phần trăm thời gian hoạt lực tinh trùng hàu TBD (P < 0,05) Kết khác với nghiên cứu tinh trùng sò điệp (Pecten maximus) [10] tinh trùng cầu gai (Tripneustes gratila) [1], với tỉ lệ 80 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG pha loãng tốt xác định 1:40 1:50 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng Kết cho thấy, có sai khác phần trăm hoạt lực tinh trùng nồng độ thẩm thấu khác Ở nồng độ thẩm thấu 500 mOsm/kg, tinh trùng hàu TBD có hoạt lực tốt phần trăm thời gian hoạt lực, lần Số 2/2018 lượt 82,33 ± 4,51% 8.580 ± 519,61s Hoạt lực tinh tùng thấp nồng độ thẩm thấu 300 mOsm/kg, với phần trăm hoạt lực 15,67 ± 14,15% thời gian hoạt lực 4.360 ± 3.258,47s Nghiên cứu cầu gai (Tripneustes gratila) cho thấy, 500 mOsm/kg nồng độ thẩm thấu tối ưu cho hoạt lực tinh trùng [1] Hình 2: Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng hàu TBD Các chữ a, b, c, d khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê phần trăm thời gian hoạt lực tinh trùng hàu TBD (P < 0,05) Ảnh hưởng cation lên hoạt lực tinh trùng hàu TBD Hầu hết lồi động vật thủy sản có năm ion chiếm ưu huyết tương tinh dịch, bao gồm cation Natri, Kali, Canxi, Magie anion Clorua Tùy theo lồi mà cation có nồng độ thích hợp khác nhau, tạo điều kiện tốt cho tinh trùng hoạt động [8] Cũng giống loài cá biển, tinh trùng hàu TBD bất hoạt buồng sẹ dịch tương, phóng thích vào nước biển, tinh trùng bắt đầu hoạt động Sự trao đổi Na+/H+ qua màng tế bào dẫn đến thay đổi pH tế bào sinh phản ứng lượng, kích thích tinh trùng vận động [11] Cation Na+ biết có vai trị thứ yếu việc kích hoạt điều tiết khả vận động tinh trùng cá động vật không xương sống khác [8] Hình 3: Ảnh hưởng cation Na+ lên hoạt lực tinh trùng Hàu TBD Các chữ a, b khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê phần trăm thời gian hoạt lực tinh trùng hàu TBD (P < 0,05) Đối với cation Na+, tinh trùng hàu TBD có phần trăm hoạt lực cao 52,67 ± 11,02% nồng độ 0,4M có sai khác với nồng độ lại Với nồng độ 0,6M 0,8M phần trăm hoạt lực tinh trùng thấp, 11,67 ± 7,64% 16,33 ± 11,93% Về thời gian hoạt lực, nồng độ 0,4M, 0,2M 0,6M, tinh trùng có thời gian hoạt lực 8.400 ± 216,33s, 8.260 ± 832,11s 7.580 ± 434,05s Thời gian hoạt lực thấp 7.140 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 81 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản ± 468,61s nồng độ 0,8M Kết nghiên cứu cầu gai (Tripneustes gratila) cho thấy, với nồng độ Na+ = 0,2M, tinh trùng có hoạt lực cao [1] Đối với Ca²+ K+ hai cation diện huyết tương tinh dịch coi cation chìa khóa để kích hoạt vận động tinh trùng [9] Số 2/2018 Kết nghiên cứu hàu TBD cho thấy, tinh trùng có hoạt lực tốt nồng độ Ca+0,2M, nhiên hoạt lực yếu: có ± 6,56% phần trăm tinh trùng hoạt động thời gian hoạt lực 5.820 ± 216,33s Hoạt lực tinh trùng thấp nồng độ 0,4M với phần trăm thời gian hoạt lực ± 5,29%, 4.140 ± 3.586,47s Còn nồng độ 0,6M 0,8M tinh trùng bị bất hoạt Hình 4: Ảnh hưởng cation Ca2+ lên hoạt lực tinh trùng Hàu TBD Các chữ a, b khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê phần trăm thời gian hoạt lực tinh trùng hàu TBD (P < 0,05) Nghiên cứu cầu gai (Tripneustes gratila) cho kết tương tự nghiên cứu [1] Theo Alavi ctv (2014), nồng độ Ca²+ tốt cho hoạt lực tinh trùng hàu TBD (Crassostrea gigas) sò điệp Nhật Bản (Patinopecten yessoensis) 0,001M [7] Mỗi loài khác nhau, vùng địa lý khác nồng độ cation Ca+ tốt cho hoạt lực tinh trùng khác Ảnh hưởng cation K+ lên hoạt lực tinh trùng hàu TBD thể Hình Ở thí nghiệm này, nồng độ 0,2M 0,8M tinh trùng bị bất hoạt Tuy nhiên, nồng độ 0,4M tinh trùng có hoạt lực cao nhất, với phần trăm hoạt lực 46,33 ± 21,36%, thời gian hoạt lực 8.080 ± 1.437,92s có sai khác hoạt lực tinh trùng với nồng độ 0,6M (6,33 ± 3,51% 6.620 ± 242,49s) Kết tương tự với nghiên cứu cầu gai (Tripneustes gratila) [1], khác so với nghiên cứu sò điệp Nhật Bản (Patinopecten yessoensis) Tinh trùng sò điệp Hình 5: Ảnh hưởng cation K+ lên hoạt lực tinh trùng Hàu TBD Các chữ a, b khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê phần trăm thời gian hoạt lực tinh trùng hàu TBD (P < 0,05) 82 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Nhật Bản có hoạt lực tốt nồng độ K+ = 0,01M (pH=7) [7] Riêng cation Mg²+, tinh trùng hàu TBD bị bất hoạt tất nồng độ (0,2M, 0,4M, 0,6M 0,8M Kết nghiên cứu tinh trùng cầu gai (Tripneustes gratila) [1] hoạt lực tốt 0,2M Mg²+ với phần trăm hoạt lực 13 ± 2,08% thời gian hoạt lực đạt 2.720 ± 121,66s Thử nghiệm cho thụ tinh nhân tạo hàu Thái Bình Dương: Kết thụ tinh nhân tạo hàu TBD môi trường khác cho thấy có sai khác (P < 0,05) tỉ lệ thụ tinh môi trường nước biển (nhân tạo/ tự nhiên) với môi trường dung dịch có nồng độ thẩm thấu 500 mOsm/ kg dung dịch Na+ 0,4M Tuy nhiên, kết sai khác (P > 0,05) mơi trường nước biển nhân tạo môi trường nước biển tự nhiên Tỉ lệ thụ tinh cao môi trường nước biển nhân tạo (75,77 ± 5,26%), môi trường nước biển tự nhiên (71,78 ± 3,25%) thấp dung dịch chứa cation Na+ 0,4M (35,8 ± 5,27%) (Hình 6) Số 2/2018 IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Tinh trùng hàu TBD pha loãng tỉ lệ 1:200 (tinh dịch: nước biển nhân tạo) cho kết tốt phần trăm hoạt lực (90 ± 5%) thời gian hoạt lực (11.460 ± 1.350,99s) Nồng độ thẩm thấu tối ưu cho hoạt lực tinh trùng hàu TBD 500 mOsm/kg với phần trăm thời gian hoạt lực 82,33 ± 4,51%, 8.580 ± 519,61s Tinh trùng hàu TBD hoạt lực tối ưu nồng độ Na+ = 0,4M (với thời gian hoạt lực 8.400 ± 216,33s có 52,67 ± 11,02% tinh trùng hoạt lực); K+ = 0,4M (8.080 ± 1.437,92s 46,33 ± 21,36%) Trong nồng độ Ca²+ thí nghiệm, nồng độ 0,2M tinh trùng có hoạt cao có ± 6,56% phần trăm tinh trùng hoạt động thời gian hoạt lực 5.820 ± 216,33s Tinh trùng hàu TBD bị bất hoạt tất nồng độ Mg²+ thí nghiệm Thụ tinh nhân tạo hàu TBD đạt kết tốt thực nước biển nhân tạo, với tỉ lệ thụ tinh đạt 75,77 ± 5,26% Hình 6: Ảnh hưởng mơi trường thụ tinh đến tỉ lệ thụ tinh nhân tạo Hàu TBD Kiến nghị Tiến hành thêm thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ, pH để đánh giá đầy đủ yếu tố ảnh hưởng lên hoạt lực tinh trùng hàu TBD Theo dõi tỉ lệ nở trình phát triển ấu trùng nhằm đánh giá chất lượng tinh trùng đầy đủ Thực thêm thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ cation Mg²+ khoảng thời gian rộng với nồng độ khác để có kết luận xác TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 83 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 2/2018 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Hoàng Hà Giang, Lê Minh Hoàng, Huỳnh Minh Sang, 2014, Nghiên cứu đặc điểm sinh lý sinh sản thử nghiệm sinh sản nhân tạo cầu gai Tripneustes gratila (Linnaeus, 1758) Luận văn Thạc sĩ Trường Đại học Nha Trang Nguyễn Trường Giang, 2011, Nghiên cứu cơng nghệ sản xuất giống thương phẩm hàu Thái bình Dương (Crassostrea gigas) phục vụ xuất Đề tài khoa học cấp nhà nước KC.06/06-10, Báo cáo khoa học Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản I Võ Thị Ngọc Giàu, Phạm Quốc Hùng, 2014, Đánh giá chất lượng tinh trùng cá dìa Siganus guttatus (Bloch, 1787) Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Nha Trang Hoàng Thị Hiền, Lê Minh Hồng, 2014, Một số đặc tính tinh trùng lý, hóa học tinh trùng cá mú cọp Epinephelus fuscoguttatus (Forsskal, 1775) Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Nha Trang Phạm Quốc Hùng, Nguyễn Tường Anh, Nguyễn Đình Mão, 2014, Hormone điều khiển sinh sản cá Nhà xuất Nông Nghiệp, Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Hồng Nhung, 2013, Nghiên cứu đánh giá chất lượng tinh trùng ảnh hưởng số yếu tố lên hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waiginesis (Cuvier Valencienes, 1828) Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Nha Trang Tài liệu tiếng Anh Alavi S.M.H., Matsumura N., Shiba K., Itoh N., Takahashi K.G., Inaba K., et al., 2014, Roles of extracellular ions and pH in 5-HT-induced spermmotility in marine bivalve, Reproduction, 147,331-345 Cabrita E., Robles V., Herraez P., 2009, Methodsin Reproductive Aquaculture Marine anh Freshwater Species, CRC Press Taylor &Francis Group, 93-149 Cosson J., Groison L.A., Suquet M., Fauvel C., Dreanno C., Billard R., 2008, Marine fish spermatozoa: racing ephemeral swimmers, Reproduction, 136,(3),277-294 10 Faure C., Devauchelle N., Girard J P., 1994, Ionic factors affecting motility, respiration and fertilization rate of the sperm of the bivalve Pecten maximus (L.), Journal of Comparative Physiology B, 164,(6),444-450 11 Ferdi A., Van DORSTEN., Markus WYSS., Theo WALLIMANN., Klaas NICOLAY., 1997, Activation of sea-urchin sperm motility is accompanied by an increatine kinase exchange flux, Biochem J, 325,411-416 12 Fauvel C., Suquet M., Cosson J., 2010, Evaluation of fish sperm quality Journal of Applied Ichthyology, 26 (5): 636 - 643 13 Harald B.T., Benfey J.T., Martin-Robichaud D.J., Power J., 2001, The relationship between sperm density, spermatocrit, sperm motility and fertilization success in Atlantic halibut, Hippoglossus hippoglossus, Aquaculture, 194,(3),277-294 14 Le M.H., Lim H.K., Min B.H., Park M.S., Son M.H., Lee J.U., et al., 2011, Effects of varying dilutions, pH, temperature and cations on spermatozoa motility in fish Larimichthys polyactis, Environmental Biogoly, 32,271-276 15 Persov G.M., 1941,"An account of sturgeon culture work with reference to the use of the method of pituitary injections", in Gerbil’skii, NL., Editor, The method of pituitary injections and its role in reproduction of fish resources, LGU Press, Leningrad 42 - 50 84 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG ... tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu cation lên hoạt lực tinh trùng động vật thân mềm hàu TBD hạn chế Vì vậy, nghiên cứu ? ?Ảnh hưởng tỉ lệ pha loãng, áp suất thẩm thấu cation lên hoạt lực tinh trùng. .. cho hoạt lực tinh trùng hàu TBD Thí nghiệm ảnh hưởng cation lên hoạt lực tinh trùng Để xác định ảnh hưởng nồng độ cation lên hoạt lực tinh trùng hàu , thí nghiệm sử dụng bốn loại cation nồng độ. .. sản Ảnh hưởng áp suất thẩm thấu lên hoạt lực tinh trùng Kết cho thấy, có sai khác phần trăm hoạt lực tinh trùng nồng độ thẩm thấu khác Ở nồng độ thẩm thấu 500 mOsm/kg, tinh trùng hàu TBD có hoạt