Nghiên cứu quy trình chuyeenrrrr gen vào cây hoa loa kèn “lilium longiflorum” bằng vi khuẩn agrobacterium tumefaciens

Luận văn

B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I LƯƠNG H NG H NH NGHIÊN C U XÂY D NG QUY TRÌNH CHUY N GEN VÀO CÂY HOA LOA KÈN “Lilium longiflorum” B NG VI KHU N Agrobacterium tumefaciens LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành: TR NG TR T Mã s : 60.62.01 Ngư i hư ng d n khoa h c: PGS.TS NGUY N TH LÝ ANH HÀ N I - 2009 L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan r ng s li u k t qu nghiên c u lu n văn hoàn toàn trung th c chưa ñư c s d ng ñ b o v m t h c v M i s giúp đ cho vi c hồn thành lu n văn ñ u ñã ñư c c m ơn Các thông tin, tài li u lu n văn ñã ñư c ghi rõ ngu n g c Tác gi Lương H ng H nh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………i L I C M ƠN Sau m t q trình th c hi n đ tài t t nghi p t i Vi n Sinh h c Nông nghi p, Trư ng ð i h c Nơng Nghi p Hà N i, đư c s giúp đ t n tình c a th y giáo, cán b c a Vi n v i s n l c c g ng c a b n thân, đ n tơi hồn thành xong ñ tài t t nghi p c a - Trư c tiên tơi xin g i l i c m ơn chân thành sâu s c t i PGS.TS Nguy n Th Lý Anh - Vi n trư ng Vi n Sinh h c Nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông Nghi p Hà N i, ngư i ñã tr c ti p hư ng d n giúp đ tơi r t nhi u su t th i gian th c hi n ñ tài t t nghi p, th i gian tơi hồn thành b n lu n văn - Tôi xin chân thành c m ơn th y cô giáo b môn CNSH Th c v t SHPT CN Vi sinh ñã đóng góp nhi u ý ki n giúp tơi th c hi n đ tài - Tơi xin chân thành c m ơn Ks Nguy n Th Thanh Phương, Ks H Th Thu Thanh toàn th cán b c a Vi n Sinh h c Nông nghi p – Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i ln giúp đ tơi tơi th c hi n ñ tài t i Vi n Nhân tơi xin trân tr ng c m ơn ban ch nhi m khoa Nông h c, Vi n ðào t o Sau ñ i h c t t c th y giáo, gia đình b n bè giúp tơi hồn thành đ tài Hà N i, tháng 09 năm 2009 Tác gi Lương H ng H nh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………ii M CL C L i cam ñoan i L i c m ơn ii M cl c iii Danh m c ch vi t t t ký hi u v Danh m c b ng vi Danh m c hình vii M ð U 1.1 ð tv nđ 1.2 M c đích u c u 1.3 Ý nghĩa khoa h c ý nghĩa th c ti n 2 T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Gi i thi u chung v hoa loa kèn 2.2 Chuy n gen 2.3 Cơ s khoa h c c a phương pháp chuy n gen vào th c v t nh vi th c v t khu n A tumefaciens 10 2.4 Phương pháp PCR 18 2.5 M t s thành t u xu hư ng phát tri n c a tr ng bi n ñ i gen 19 N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 31 3.1 ð i tư ng, v t li u, ñ a ñi m th i gian nghiên c u 31 3.2 N i dung phương pháp nghiên c u 32 K T QU VÀ TH O LU N 41 4.1 Thí nghi m 1: Nghiên c u nh hư ng c a ngu n m u c y ñ n kh chuy n gen c a vi khu n Agrobacterium tumefasciens 4.2 41 Thí nghi m 2: Nghiên c u nh hư ng c a th i gian ti n ni c y đ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ………………………iii 45 4.3 Thí nghi m 3: Nghiên c u nh hư ng c a phương pháp lây nhi m m u ñ n kh chuy n gen c a vi khu n 50 Agrobacterium tumefasciens 4.4 Thí nghi m 4: Nghiên c u nh hư ng c a th i gian ñ ng ni c y đ n kh chuy n gen c a vi khu n Agrobacterium 55 tumefasciens 4.5 Thí nghi m 5: ðánh giá tác đ ng t h p c a công th c t i ưu t i kh chuy n gen c a vi khu n Agrobacterium tumefasciens 60 4.6 Ki m tra s có m t c a gen chuy n vào b ng phương pháp PCR 62 4.7 So sánh th o lu n k t qu ñ tài v i k t qu nghiên c u chuy n gen hoa loa kèn đư c cơng b Vi t Nam 63 K T LU N VÀ ð NGH 66 5.1 K t lu n 67 5.2 ð ngh 67 TÀI LI U THAM KH O 69 PH L C 74 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………iv DANH M C CÁC CH VI T T T VÀ KÝ HI U CT Công th c 2,4 D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BA 6-Benzyllamino purine AS Acetosyringone TNC Ti n nuôi c y ðNC ð ng nuôi c y MS Murashige & Skoog, 1962 PPT DL - Phosphinotricine Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………v DANH M C B NG STT 4.1 Tên b ng Trang ðánh giá nh hư ng c a ngu n m u ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n c a gen Gus (sau tu n) 4.2 ðánh giá nh hư ng c a ngu n m u c y ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n c a gen Bar (sau tu n ) 4.3 41 44 ðánh giá nh hư ng c a th i gian ti n nuôi c y ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n gen Gus (sau tu n) 4.4 nh hư ng c a th i gian ti n ni c y đ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n c a gen Bar (sau tu n) 4.5 46 48 ðánh giá nh hư ng c a phương pháp lây nhi m m u ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n c a gen Gus (sau tu n) 4.6 51 ðánh giá nh hư ng c a phương pháp lây nhi m m u t i kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n c a gen Bar (sau tu n) 4.7 ðánh giá nh hư ng c a th i gian ðNC ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n gen Gus (sau tu n) 4.8 54 56 ðánh giá nh hư ng c a th i gian ðNC ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua bi u hi n c a gen Bar (sau tu n) 4.9 58 ðánh giá tác ñ ng c a t h p công th c t i ưu t i kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua s bi u hi n c a gen Gus (sau tu n) 60 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………vi DANH M C HÌNH STT Tên hình Trang 2.2 Chuy n gen tr ng 2.3 M t s kh i u vi khu n Agrobacterium tumefaciens t o thân hoa h ng (A) thân nho (B) 2.4 C u trúc Ti- Plasmid 12 2.5 Mơ hình chuy n gen nh Agrobacterium 13 3.1 Callus loa kèn in vitro 31 3.2 Lilium longiflorum thunb 31 3.3 Sơ ñ c u trúc plasmid ITB2c 31 4.1 nh hư ng c a ngu n m u ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens 4.2 42 nh hư ng c a ngu n m u ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens 4.3: S bi u hi n c a gen Gus 4.4 45 CT4 47 nh hư ng c a th i gian ti n ni c y đ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens 49 4.5 ðC MT ch n l c có 2.5mg/l PPT 50 4.6 M u s ng MT ch n l c có 2.5mg/l PPT 50 4.7 nh hư ng c a phương pháp lây nhi m m u ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens 4.8 nh hư ng c a PP lây nhi m m u t i kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens 4.9 54 nh hư ng c a th i gian đ ng ni c y ñ n kh chuy n gen c a vi khu n Agrobacterium tumefasciens 4.10 53 58 nh hư ng c a th i gian đ ng ni c y ñ n kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………vii 59 4.11 ðánh giá tác ñ ng c a t h p công th c t i ưu t i kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua s bi u hi n c a gen Bar (sau tu n) 4.10 61 ðánh giá tác ñ ng c a t h p công th c t i ưu t i kh chuy n gen c a vi khu n A.tumefaciens qua s bi u hi n c a gen Bar (sau tu n) 62 4.12 K t qu ñi n di s n ph m PCR c a dòng loa kèn chuy n gen 63 4.13 Sơ ñ th hi n quy trình chuy n gen cho hoa loa kèn L.longiflorum nh vi khu n A.tumefacens Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………viii 66 M 1.1 ð U ð tv nđ Nói đ n v đ p c a thiên nhiên khơng th khơng nói đ n lồi hoa M i loài hoa n ch a m t v ñ p, m t s c quy n rũ giá tr kinh t riêng V i màu tr ng pha thêm chút xanh, mùi hương thơm d u, hoa loa kèn tr ng (Lilium longiflorum) ñã r t ñư c ưa chu ng có giá tr kinh t cao th trư ng hoa th gi i Vi t Nam Tuy nhiên, hoa loa kèn tr ng có th i gian sinh trư ng dài nên ngư i tr ng ph i chi phí cao cho phòng tr c d i sâu b nh, ñ c bi t vào mùa Xuân m t, gây nh ng khó khăn cho ngư i s n xu t hoa loa kèn mi n B c nư c ta Vi c ch n t o gi ng hoa b ng t t c nh ng phương pháp ch n t o gi ng hi u qu mong mu n c a nhà ch n t o gi ng v i m c tiêu không ng ng nâng cao giá tr thu nh p m t ñơn v di n tích canh tác cho ngư i nơng dân Do đó, vi c t o gi ng hoa loa kèn m i ch ng ch u ñi u ki n b t l i c a th i ti t, ch ng ch u sâu b nh, kháng thu c tr c nhu c u c a th c ti n s n xu t mong mu n c a nhà ch n t o gi ng Ngày v i s phát tri n c a cơng ngh gen cho phép nhà ch n t o gi ng ñưa ñư c nh ng tính tr ng mong mu n vào tr ng ch th i gian ng n (ch sau m t th h ), t o ñư c nhi u gi ng m i có nhi u đ c tính m i V i phương pháp này, ngư i ta có th đưa đư c nh ng gen quy đ nh nh ng tính tr ng m i, k c nh ng tính tr ng c a nh ng lồi có quan h r t xa, có th t vi sinh v t, đ ng v t… ñi u mà phương pháp truy n th ng khơng th th c hi n đư c Trong k thu t chuy n gen, phương pháp chuy n gen thông qua Agrobacterium tumefaciens t có nhi u ưu m phương pháp khác ñư c s d ng ph bi n nh t Chính v y Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………1 Ornamentals, Ed J Hammond Acta Hort 568: 209-214 27 Mercuri A c ng s (2003), Agrobacterium-Mediated transformation with rol genes of Lilium longiflorum Thunb, ISHS Acta Hoticluturae 612, XXI International Eucarpia Symposium on Classical versus Molecular Breeding of Ornamentals - Part I 28 Sakae Suzuki and Masaru Nakano, (2002), Agrobacterium-Mediated transformation in Liliaceous ornamental plants, JARQ 36(3), 119127(2002) 29 Stimart, Ascher (1978), Tissue culture of bulb scale section for axexual propagation of Lilium longiflorum Thunb, Hortic Science, 103, 182-184 30 Watad A.A c ng s (1998), “Microprojejcttile Bombardment – mediate transfomation of Lilium longiflorum”, Plant cell report, 262-267 C Trang ñi n t 31 http://www.agbiotech.com.vn/ Báo cáo tóm t t s 37-2007 c a ISAAA, Hi n tr ng tr ng CNSH/cây tr ng chuy n gen toàn c u năm 2007 32 http://www.agbiotech.com.vn/ Báo cáo tóm t t s 39-2008 c a ISAAA, Hi n tr ng c a tr ng CNSH/cây tr ng chuy n gen toàn c u năm 2008 33 http://www.agbiotech.com.vn/vn/?key=123&mnu=preview Cây tr ng bi n ñ i gen - Pocket 34 http://www.bannhanong.com/home.php?cat_id=22&id=2378&kh= 35 http://www2.hcmuaf.edu.vn/contents.php?ids=2265&ur=dothiloi Cây tr ng bi n ñ i gen, 13 năm th gi i nhìn l i (Báo NNVN - S ngày Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………72 18/2/2009) 36 http://www.nguoidaibieu.com.vn/Trangchu/VN/tabid/66/CatID/9/Content ID/59798/Default.aspx Bao gi chuy n gen ñư c tr ng nư c ta? 37 http://www.rauhoaquavietnam.vn/default.aspx?tabID=5&ID=47&LangID =1&NewsID=1310 Chuyên ñ hoa loa kèn 38 http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php?name=News&file=artic le&sid=682 Cây chuy n gene th h m i v i gene kháng Dicamba 39 http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php?file=article&name=Ne ws&sid=852 Cây chuy n gen - m t th p k thua th ng 40 http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php?name=News&file=artic le&sid=1059 TP.HCM: Tr ng th nghi m chuy n gien 41 http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php?name=News&file=artic le&sid=1154 Năm 2015, Vi t Nam s có tr ng bi n ñ i gen 42 http://tintuc.xalo.vn/072036461121/phat_trien_cay_trong_chuyen_gene_o_viet_nam_can_co _quy_chuan_cu_the.html 43 http://www.vfej.vn/vn/chi_tiet/9016/chuyen_gene tang_nang_suat_bon_ loai_cay_trong_viet_nam Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………73 PH L C Thành ph n môi trư ng MS (Murashige Skoog, 1962) Thành ph n N ng đ (mg/l) Khống ña lư ng N ng ñ dung d ch m (mg/l) 20X NH4NO3 1650 33000 KNO3 1900 38000 CaCl2.2H2O(pha riêng) 440 8800 MgSO4.7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400 Fe-EDTA 100X FeSO4.7H2O 27,85 2780 Na2-EDTA.2H2O 37,25 3725 Khoáng vi lư ng 100X MnSO4.4H2O 22,300 2230,0 ZnSO4.7H2O 8,600 860,0 H3PO4 6,200 620,0 KI 0,830 83,0 Na2MoO4.2H2O 0,250 25,0 CuSO4.7H2O 0,025 2,5 CoCl2.6 H2O 0,025 2,5 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………74 PH L C 2: K T QU X LÝ S LI U BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE VLLN9 20/ 6/** 1:43 PAGE Thi nghiem 1: Ty le mau song sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 125585 418616E-01 ****** 0.000 * RESIDUAL 129337E-03 161671E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 125714 114286E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE VLLN9 20/ 6/** 1:43 PAGE Thi nghiem 1: Ty le mau song sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 KQ 0.000000 0.147000 0.237667 0.260333 SE(N= 3) 0.232143E-02 5%LSD 8DF 0.756995E-02 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE VLLN9 20/ 6/** 1:43 PAGE Thi nghiem 1: Ty le mau song sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 0.16125 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.10690 0.40208E-02 2.5 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………73 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE VLLN11 20/ 6/** 2: PAGE Thi nghiem 1: Ty le mau tai sinh sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.20069 400229 ****** 0.000 * RESIDUAL 113745E-02 142182E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.20182 109257 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE VLLN11 20/ 6/** 2: PAGE Thi nghiem 1: Ty le mau tai sinh sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 KQ 0.000000 0.446667 0.735000 0.803667 SE(N= 3) 0.688433E-02 5%LSD 8DF 0.224491E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE VLLN11 20/ 6/** 2: PAGE Thi nghiem 1: Ty le mau tai sinh sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 0.49633 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.33054 0.11924E-01 2.4 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………74 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE PPLN4 20/ 6/** 16:50 PAGE Thi nghiem 2: Ty le mau song sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 103467 206934E-01 840.78 0.000 * RESIDUAL 12 295346E-03 246122E-04 * TOTAL (CORRECTED) 17 103763 610368E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PPLN4 20/ 6/** 16:50 PAGE Thi nghiem 2: Ty le mau song sau chon loc CT$ NOS 3 3 3 DF KQ 0.000000 0.245000 0.191333 0.184000 0.171000 0.157667 SE(N= 3) 0.286427E-02 5%LSD 12DF 0.882580E-02 - MEANS FOR EFFECT CT$ -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PPLN4 20/ 6/** 16:50 PAGE Thi nghiem 2: Ty le mau song sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 0.15817 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.78126E-010.49611E-02 3.1 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………75 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE PPLN3 20/ 7/** 17:14 PAGE Thi nghiem 2: Ty le mau tai sinh sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 869085 173817 586.00 0.000 * RESIDUAL 12 355939E-02 296616E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 872644 513320E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PPLN3 20/ 6/** 17:14 PAGE Thi nghiem 2: Ty le mau tai sinh sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 KQ 0.000000 0.721000 0.560000 0.480000 0.441667 0.403667 SE(N= 3) 0.994344E-02 5%LSD 12DF 0.306391E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PPLN3 20/ 6/** 17:14 PAGE Thi nghiem 2: Ty le mau tai sinh sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 0.43439 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.22657 0.17223E-01 4.0 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………76 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE TNC2 20/ 6/** 20:42 PAGE Thi nghiem 3: Ty le mau song sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 981565E-01 196313E-01 623.22 0.000 * RESIDUAL 12 378000E-03 315000E-04 * TOTAL (CORRECTED) 17 985345E-01 579615E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNC2 20/ 6/** 20:42 PAGE Thi nghiem 3: Ty le mau song sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 KQ 0.000000 0.123000 0.135000 0.224000 0.212000 0.165000 SE(N= 3) 0.324037E-02 5%LSD 12DF 0.998468E-02 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNC2 20/ 6/** 20:42 PAGE Thi nghiem 3: Ty le mau song sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 0.14317 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.76132E-010.56125E-02 3.9 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………77 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE TNC4 20/ 6/** 21: PAGE Thi nghiem 3: Ty le mau tai sinh sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.17392 234784 535.14 0.000 * RESIDUAL 12 526484E-02 438737E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.17919 693640E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNC4 20/ 6/** 21: PAGE Thi nghiem 3: Ty le mau tai sinh sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 KQ 0.000000 0.610333 0.626667 0.806667 0.651000 0.606667 SE(N= 3) 0.120932E-01 5%LSD 12DF 0.372633E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNC4 20/ 6/** 21: PAGE Thi nghiem 3: Ty le mau tai sinh sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 0.55022 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.26337 0.20946E-01 3.8 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………78 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE DNC1 20/ 6/** 18:16 PAGE Thi nghiem 4: Ty le mau song sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 195565 488911E-01 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 487365E-03 487365E-04 * TOTAL (CORRECTED) 14 196052 140037E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DNC1 20/ 6/** 18:16 PAGE Thi nghiem 4: Ty le mau song sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 KQ 0.000000 0.131667 0.311700 0.279333 0.244333 SE(N= 3) 0.403057E-02 5%LSD 10DF 0.127005E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DNC1 20/ 6/** 18:16 PAGE Thi nghiem 4: Ty le mau song sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 0.19341 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.11834 0.69812E-02 3.6 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………79 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE DNC3 20/ 6/** 9: PAGE Thi nghiem 4: Ty le mau tai sinh sau chon loc VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.33833 334583 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 219996E-02 219996E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.34053 957524E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DNC3 20/ 6/** 9: PAGE Thi nghiem 4: Ty le mau tai sinh sau chon loc MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 KQ 0.000000 0.723333 0.860000 0.686667 0.563333 SE(N= 3) 0.856341E-02 5%LSD 10DF 0.269836E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DNC3 20/ 6/** 9: PAGE Thi nghiem 4: Ty le mau tai sinh sau chon loc F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 0.56667 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.30944 0.14832E-01 2.6 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………80 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE CCC2 24/ 6/** 1:15 PAGE Thi nghiem 1: Chieu cao trung binh cua choi (cm) VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.65050 1.21683 ****** 0.000 * RESIDUAL 159976E-02 199970E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 3.65210 332009 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CCC2 24/ 6/** 1:15 PAGE Thi nghiem 1: Chieu cao trung binh cua choi (cm) MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 KQ 0.000000 0.926667 1.40667 1.28667 SE(N= 3) 0.816436E-02 5%LSD 8DF 0.266232E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CCC2 24/ 6/** 1:15 PAGE Thi nghiem 1: Chieu cao trung binh cua choi (cm) F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 0.90500 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.57620 0.14141E-01 1.6 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………81 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE PPLN5 24/ 6/** 10:19 PAGE Thi nghiem 2: Chieu cao trung binh cua choi VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.68478 536957 840.41 0.000 * RESIDUAL 12 766707E-02 638923E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.69245 158379 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PPLN5 24/ 6/** 10:19 PAGE Thi nghiem 2: Chieu cao trung binh cua choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 KQ 0.000000 1.25333 0.966667 0.913333 0.880000 0.856667 SE(N= 3) 0.145936E-01 5%LSD 12DF 0.449679E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PPLN5 24/ 6/** 10:19 PAGE Thi nghiem 2: Chieu cao trung binh cua choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 0.81167 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.39797 0.25277E-01 3.1 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………82 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE TNC5 24/ 6/** 11:10 PAGE Thi nghiem 3: Chieu cao trung binh cua choi VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.55509 711019 695.54 0.000 * RESIDUAL 12 122671E-01 102226E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 3.56736 209845 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNC5 24/ 6/** 11:10 PAGE Thi nghiem 3: Chieu cao trung binh cua choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 KQ 0.000000 0.986667 1.05333 1.35667 1.22667 1.12000 SE(N= 3) 0.184595E-01 5%LSD 12DF 0.568800E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNC5 24/ 6/** 11:10 PAGE Thi nghiem 3: Chieu cao trung binh cua choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 0.95722 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.45809 0.31973E-01 3.3 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………83 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KQ FILE DNC4 24/ 6/** 13:45 PAGE Thi nghiem 4: Chieu cao trung binh cua choi (cm) VARIATE V003 KQ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.42869 857173 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 606690E-02 606690E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.43476 245340 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DNC4 24/ 6/** 13:45 PAGE Thi nghiem 4: Chieu cao trung binh cua choi (cm) MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 KQ 0.000000 1.18667 1.35333 1.10667 0.973333 SE(N= 3) 0.142208E-01 5%LSD 10DF 0.448101E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DNC4 24/ 6/** 13:45 PAGE Thi nghiem 4: Chieu cao trung binh cua choi (cm) F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KQ GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 0.92400 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.49532 0.24631E-01 2.7 0.0000 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………84 ... trình chuy n gen vào hoa loa kèn “Lilium longiflorum” b ng vi khu n Agrobacterium tumefaciens? ??góp ph n xây d ng đư c quy trình chuy n gen vào hoa loa kèn, làm s cho vi c ti p t c chuy n gen mong... Các nghiên c u v hoa loa kèn L Longiflorum Vi t Nam Vi t Nam, có nh ng nghiên c u v hoa loa kèn ñ t ñư c nh ng thành cơng nh t đ nh nhân nhanh, tái sinh bư c ñ u nghiên c u chuy n gen cho hoa loa. .. c s khoa h c Nơng nghi p ………………………29 (1999) xây d ng quy trình nhân gi ng hoa loa kèn b ng k thu t t o c ng nghi m [14] 2.5.5.2 Các nghiên c u v chuy n gen Nghiên c u chuy n gen cho hoa loa kèn