Nghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh HóaNghiên cứu quy trình phân lập và sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss. Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc tại Thanh Hóa
ĐẠI HỌC THÁI NGUN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM HỒNG VĂN NÂNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH PHÂN LẬP VÀ SẢN XUẤT SINH KHỐI SỢI NẤM LIM XANH (Ganoderma lucium (Leyss Ex Fr.) Karst) CÓ NGUỒN GỐC TẠI THANH HÓA LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái nguyên, năm 2018 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HỒNG VĂN NÂNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH PHÂN LẬP VÀ SẢN XUẤT SINH KHỐI SỢI NẤM LIM XANH (Ganoderma lucium (Leyss Ex Fr.) Karst) CÓ NGUỒN GỐC TẠI THANH HÓA Nghành: Công nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hướng dẫn: GS.TS Ngơ Xn Bình Thái ngun, năm 2018 i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới GS.TS Ngơ Xn Bình Ths Nguyễn Thị Tình, Giáo viên hướng dẫn thực luận văn Đồng thời, tác giả xin chân thành cảm ơn Khoa Công nghệ Sinh học, Khoa Sau Đại học, trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho tác giả trình học tập nghiên cứu Cảm ơn thầy cô đồng nghiệp trao đổi tác giả kiến thức kinh nghiệm quý báu để giúp cho luận văn hồn thiện Bên cạnh đó, quan tâm gia đình, bạn bè nguồn động viên khơng thể thiếu để giúp tác giả hồn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn Thái Nguyên, ngày tháng năm 2018 Học viên Hoàng Văn Nâng ii MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1.1 Mục tiêu nghiên cứu: 1.1.1 Mục tiêu chung 1.1.2 Mục tiêu cụ thể Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Phân loại 1.2 Nguồn gốc 1.3 Tác dụng nấm Linh chi 1.4 Đặc điểm hình thái, phân loại nấm Lim xanh 14 1.4.1 Nguồn gốc phân loại nấm Lim xanh 14 1.4.2 Đặc điểm thực vật phân bố naams Lim xanh .14 1.5 Tổng quan phân lập 15 1.6 Nuôi cấy sinh khối nấm Linh chi môi trường lỏng 16 1.6.1 Nuôi cấy hệ sợi nấm Linh chi môi trường lỏng .16 1.6.2 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy lỏng tới phát triển hệ sợi nấm Linh chi .18 1.7 Tình hình nghiên cứu nấm Linh chi nước 19 1.7.1 Tình hình nghiên cứu nấm Linh chi ngồi nước .19 1.7.2 Tình hình nghiên cứu nấm Linh chi nước .19 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 22 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 22 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 iii 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Phân lập giống nấm Lim xanh Thanh Hóa trường Đại học Nơng Lâm Thái Nguyên 23 2.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu sản xuất sinh khối nấm Lim xanh môi trường lỏng 28 2.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu sản xuất sinh khối nấm Lim xanh giá thể rắn 30 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Phân lập giống nấm Lim xanh Thanh Hóa trường Đại học Nơng Lâm Thái Ngun 32 3.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả phân lập giống từ mơ thịt nấm Lim xanh Thanh Hóa 32 3.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng độ pH đến khả sinh trưởng hệ sợi nấm từ thể nấm Lim xanh 34 3.1.3 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng cao nấm men đến khả sinh trưởng hệ sợi từ thể nấm Lim xanh .36 3.1.4 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng Pepton đến khả phát triển hệ sợi từ nấm từ thể 38 3.1.5 Nghiên cứu ảnh hưởng loại đường đến khả phát triển hệ sợi từ nấm Lim xanh .40 3.1.6 Kết kiểm tra giống, đánh giá chất lượng giống nấm Lim xanh phân lập .41 3.2 Kết nghiên cứu sản xuất sinh khối nấm Lim xanh môi trường lỏng 44 3.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường lỏng đến khả sản xuất sinh khối nấm Lim xanh 44 3.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân sinh khối hệ sợi nấm Lim xanh 46 3.3 Kết nghiên cứu thành phần giá thể nhân tạo đến suất chất lượng nấm Lim xanh 49 iv 3.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn nguyên liệu mùn cưa gỗ lim đến suất chất lượng nấm Lim xanh 49 3.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn phụ gia đến suất chất lượng nấm Lim xanh 50 3.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng đạm đến suất chất lượng nấm Lim xanh sau 90 ngày nuôi cấy 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 4.1 Kết luận 53 4.2 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng sợi nấm phân lập từ thể 32 Bảng 2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng độ pH đến sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh 34 Bảng 3.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng cao nấm men đến khả sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh 37 Bảng 3.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng Pepton đến sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh 39 Bảng 3.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng loại đường đến sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh 41 Bảng 3.6: Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường lỏng đến khả sản xuất sinh khối nấm Lim xanh 44 Bảng 3.7: Kết nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân sinh khối hệ sợi nấm Lim xanh 47 Bảng 3.8: Kết nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ phối trộn gỗ lim đến suất chất lượng nấm Lim xanh 49 Bảng 3.9: Kết nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ phối trộn cám ngô đến suất chất lượng nấm Lim xanh sau 90 ngày nuôi cấy 50 Bảng 3.10: Kết nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ phối trộn 10% cám ngô hàm lượng đạm đến suất chất lượng nấm Lim xanh sau 90 ngày nuôi cấy 51 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình thái thể nấm Lim xanh thu nhận từ Thanh Hóa ni trồng trường Đại học Nơng Lâm Thái Nguyên 15 Hình 2.1 : Quy trình phân lập giống nấm Lim xanh 24 Hình 3.1: Biểu đồ thể sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh phân lập từ thể nấm loại môi trường khác 33 Hình 3.2: Nấm lim xanh phát triển số môi trường 13 ngày 33 Hình 3.3: Biểu đồ thể sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh điều kiện pH khác 35 Hình 3.4 Sự sinh trưởng nấm Lim xanh mơi trường có pH 4; 6,5; 12 ngày 36 Hình 3.5: Biểu đồ thể sinh trưởng hệ sợi nấm Lim xanh mơi trường có bổ sung cao nấm men với tỉ lệ khác 37 Hình 3.6: Sinh trưởng hệ sợi nấm môi trường A1: g nấm men: A2: g nâm men; A3 g nấm men (thí nghiệm quan sát sau6 ngàynuôi cấy) 38 Hình 3.7: Biểu đồ kết nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng pepton đến sinh trưởng hệ sợi nấm 39 Hình 3.8 Sinh trưởng hệ sợi nấm môi trường: A1: 2g pepton/lít mơ trường, A2: 4g pepton/lít mơi trường, A3: 6g pepton/lít mơi trường 40 Hình 3.9 Sự sinh trưởng hệ sợi nấm mơi trường có bổ sung loại đường khác 41 Hình 3.10: Sơ đồ quy trình kiểm tra giống nấm Lim xanh phân lập 42 vii Hình 3.11: Kết kiểm tra hình thái thể nấm Lim xanh thu thập từ Thanh Hóa nấm Lim xanh nuôi trồng trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên 43 Hình 3.12: Kết nghiên cứu ảnh hưởng mơi trường lỏng đến khả sản xuất sinh khối nấm Lim xanh 45 Hình 3.13 Sự sinh trưởng sinh khối nấm Lim xanh môi trường CD PD ngày 46 Hình 3.14: Kết nghiên cứu ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả nhân sinh khối hệ sợi nấm Lim xanh 48 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT PDA Potato Detrose Agar CDA Corn Detrose Agar PD Potato Detrose CD Corn Detrose MỞ ĐẦU Việt Nam 16 quốc gia đánh giá có đa dạng tài nguyên sinh học đứng đầu giới Theo kết điều tra, Việt Nam có 12.000 lồi thực vật, hàng ngàn loài động vật nấm lớn Trong ghi nhận 5000 lồi thực vật nấm lớn, 52 loài tảo biển, 408 loài động vật 75 loại khống vật có cơng dụng làm thuốc Nấm phân bố toàn giới phát triển nhiều dạng môi trường sống khác nhau, đa phần sống cạn, số loài lại tìm thấy mơi trường nước Dựa theo tỷ lệ số loài nấm với số loài thực vật mơi trường, người ta ước tính giới nấm có khoảng 1,5 triệu lồi Hiện có khoảng 80.000 loài nấm nhà phân loại học phát định danh Giới nấm ngày có ý nghĩa to lớn kinh tế quốc dân, khoa học vịng tuần hồn vật chất Nấm sử dụng dân gian từ hàng ngàn năm số có ý nghĩa quan trọng đời sống người Thanh Hóa tỉnh có diện tích rừng lớn, có khu bảo tồn Pù Hu, Quan Hóa, Mường Lát, Thanh Hóa, Khu bảo tồn thiên nhiên Xuân Liên, Khu bảo tồn thiên nhiên rừng sến, tỉnh đánh giá có tính đa dạng sinh học cao, có chứa đựng nguồn lợi lớn giá trị kinh tế giá trị nghiên cứu khoa học từ lồi động thực vật Trong có nguồn lợi lớn nấm sử dụng chúng làm nguyên liệu tốt cho ngành công nghiệp thực phẩm, dược phẩm Từ xưa loài người biết sử dụng nấm lớn để làm thuốc đặc biệt Linh chi Giá trị dược liệu Linh chi ghi chép thư tịch cổ Trung Quốc cách 4.000 năm Từ kinh nghiệm lưu truyền nhân gian, loài người biết sử dụng Linh chi với nhiều cách khác Đến khoa học phát triển loài người chứng minh tác dụng hữu ích 57 19 Chihara G Hamuro J Meada Y Arai Y Fukuoka F (1970) Fractionation and purification of the polysacharide with marked antitumor activity, especially Lentinan, from Lentinus edodes (Berk.) Sing (an edible mushroom) In: Cancer Res, 30(11), 2776-81 20 Downes F P and Ito K., (Eds.), 2001, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 4th Ed., APHA, Washington, D.C 21 Fan DD, Wang W, Zhong JJ (2012) Enhancement of cordycepin production in submerged cultures of Cordyceps militaris by addition of ferrous sulfate Biochem Eng J 60:30–35 22 Fang QH, Zhong JJ (2002) Effect of initial pH on production of ganoderic acid and polysaccharides by submerged fermentation of Ganoderma lucidum Process Biochem 37:769–774 23 Hsieh C, Tseng MH, Liu CJ (2006) Production of polysaccharides from Ganoderma lucidum (CCRC 36041) under limitations of nutrients Enzym Microb Technol 38:109–117 24 Jonh Wiley & Sons, Inc (2007) Colorimetric Quantification of Cacbohydrates.Current protocols in Food Analytical Chemistry, E1.1.1E1.1.8 25 Morigiwa A, Kitabatake, Y Fujimoto, N Ikekawa Angiotensin converting enzyme-inhibiting triterpenes from Ganoderma lucidum 1986 26 Nguyen Thu Huong, Dang Ngoc Han, Duong Nguyen Duy Tuyen (2011), Immunostimulating effect of Ganoderma colossum on cyclophosamide – induced 27 Paterson RR (2006) Ganoderma – a therapeutic fungal biofactory Phytochemistry 67 (18): 1985 - 2001 58 28 Shao P.Li, Kui J.Zhao, Zhao N.Ji, Zong H.Song H.Song, Tina T.X.Dong, Chun K.Lo, Jerry K.H Cheung, Shang Q Zhu, Karl W.K Tsim (2003), “A Polysaccharited isolated from Cordyceps sinensis, a traditional Chinese medicine, protects PC12 cell against hydrogen peroxide-induced injury”, Life Siences 73, 2503-2513 29 Ukai S; Kiho T; Hara C; Kuruma I; Tanaka Y (1983) Polysaccharides in fungi XIV Antiinflammatory effect of the polysaccharides from the fruit bodies of several fungi JPharmacobiodyn, (12), 90-983 30 Yan Chang wei, Chen he, Qin jun – zhe, Chen yi –ding (2003) Studies on liquid inoculum filtration and cultivated condition of Flammulina velutipes Edible Funfi of China College of Life Science & Engineering, Shaanxi University of Science & Technology, Xiangyang, 71208 59 PHỤ LỤC 1 Các môi trường sử dụng tiến hành đề tài (quy định lít mơi trường) a Mơi trường PDA Thành phần nguyên liệu: Khoai tây 200g/l Đường glucose 20g/l Agar 17g/l Pepton 4g/l b Môi trường PDA + 10% nước dừa già Thành phần nguyên liệu: Khoai tây 200g/l Đường glucose 20g/l Agar 17g/l Pepton 4g/l Nước dừa già 100ml/l c Môi trường CDA Thành phần nguyên liệu: Ngô non hạt 200g/l Đường 20g/l Agar 17g/l Pepton 4g/l d Môi trường PD Thành phần nguyên liệu: Khoai tây 200g/l Đường glucose 20g/l Pepton 4g/l e Môi trường CD Thành phần nguyên liệu: Ngô non hạt 200g/l Đường glucose 20g/l Pepton 4g/l 60 Phụ lục 2: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU BALANCED ANOVA FOR VARIATE PH4 FILE PH 23/10/18 11: :PAGE VARIATE V003 PH4 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1963.68 490.921 ****** 0.000 R 111720 558601E-01 1.50 0.279 * RESIDUAL 297173 371466E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1964.09 140.292 BALANCED ANOVA FOR VARIATE PH6,5 FILE PH 23/10/18 11: :PAGE VARIATE V004 PH6,5 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1936.79 484.197 ****** 0.000 R 132398E-01 661988E-02 4.81 0.042 * RESIDUAL 110070E-01 137588E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1936.81 138.344 BALANCED ANOVA FOR VARIATE PH8 FILE PH 23/10/18 11: :PAGE VARIATE V005 PH8 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 487.978 121.994 ****** 0.000 R 512402E-01 256201E-01 3.84 0.067 * RESIDUAL 533965E-01 667456E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 488.083 34.8630 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PH 23/10/18 11: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS PH4 PH6,5 PH8 12.2600 10.1200 8.52000 19.2200 17.7100 9.94000 3 30.8800 28.7200 15.2300 38.4500 35.4100 20.5500 42.6500 41.1900 23.0800 SE(N= 3) 0.111275 0.214155E-01 0.471683E-01 5%LSD 8DF 0.362857 0.698339E-01 0.153811 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 PH4 28.6600 28.8100 28.6060 PH6,5 26.5880 26.6520 26.6500 PH8 15.3820 15.4960 15.5140 SE(N= 5) 0.861935E-01 0.165884E-01 0.365364E-01 5%LSD 8DF 0.281068 0.540931E-01 0.119142 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PH 23/10/18 11: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | |R | | | 61 PH4 PH6,5 PH8 NO OBS 15 28.692 15 26.630 15 15.464 BASED ON TOTAL SS 11.845 11.762 5.9045 BASED ON % | RESID SS | 0.19273 0.7 0.0000 0.37093E-01 0.1 0.0000 0.81698E-01 0.5 0.0000 | | 0.2791 0.0423 0.0673 | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE PO2 FILE PO 23/10/18 11:10 :PAGE VARIATE V003 PO2 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 64.8032 16.2008 ****** 0.000 R 796006E-02 398003E-02 22.21 0.001 * RESIDUAL 143367E-02 179209E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 64.8126 4.62947 BALANCED ANOVA FOR VARIATE PO6 FILE PO 23/10/18 11:10 :PAGE VARIATE V004 PO6 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1298.41 324.603 ****** 0.000 R 224440 112220 0.89 0.452 * RESIDUAL 1.01336 126670 * TOTAL (CORRECTED) 14 1299.65 92.8321 BALANCED ANOVA FOR VARIATE PO4 FILE PO 23/10/18 11:10 :PAGE VARIATE V005 PO4 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1549.73 387.432 ****** 0.000 R 465602E-01 232801E-01 2.48 0.144 * RESIDUAL 751339E-01 939174E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1549.85 110.704 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PO 23/10/18 11:10 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS PO2 PO6 PO4 6.05000 9.35000 10.2000 7.34000 13.2800 15.0900 3 8.76000 21.6200 22.9200 10.2600 27.1100 29.3200 11.9300 35.1500 38.8300 SE(N= 3) 0.772892E-02 0.205483 0.559516E-01 5%LSD 8DF 0.252032E-01 0.670060 0.182452 -MEANS FOR EFFECT R R NOS PO2 PO6 PO4 8.84200 21.2840 23.2160 8.86400 21.4600 23.2520 8.89800 21.1620 23.3480 SE(N= 5) 0.598680E-02 0.159167 0.433399E-01 5%LSD 8DF 0.195223E-01 0.519026 0.141327 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PO 23/10/18 11:10 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 62 VARIATE PO2 PO6 PO4 GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 8.8680 15 21.302 15 23.272 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.1516 0.13387E-01 0.2 0.0000 9.6349 0.35591 1.7 0.0000 10.522 0.96911E-01 0.4 0.0000 |R | | | 0.0007 0.4517 0.1444 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE PT2 FILE PT 23/10/18 11:12 :PAGE VARIATE V003 PT2 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1154.71 288.676 ****** 0.000 R 436801E-01 218401E-01 9.22 0.009 * RESIDUAL 189570E-01 236962E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1154.77 82.4834 BALANCED ANOVA FOR VARIATE PT4 FILE PT 23/10/18 11:12 :PAGE VARIATE V004 PT4 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1767.17 441.792 ****** 0.000 R 150281 751403E-01 3.04 0.103 * RESIDUAL 197800 247250E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1767.52 126.251 BALANCED ANOVA FOR VARIATE PT6 FILE PT 23/10/18 11:12 :PAGE VARIATE V005 PT6 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1274.12 318.531 ****** 0.000 R 676006E-02 338003E-02 2.91 0.112 * RESIDUAL 930378E-02 116297E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1274.14 91.0099 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PT 23/10/18 11:12 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS PT2 PT4 PT6 9.27000 11.8500 10.7300 13.5800 16.2200 14.8100 3 20.9200 24.7100 21.7600 26.8200 31.3300 28.0300 33.5900 42.3000 36.5000 SE(N= 3) 0.281047E-01 0.907837E-01 0.196890E-01 5%LSD 8DF 0.916466E-01 0.296036 0.642039E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS PT2 PT4 PT6 20.7720 25.1800 22.3360 20.8320 25.2480 22.3820 20.9040 25.4180 22.3800 SE(N= 5) 0.217698E-01 0.703207E-01 0.152511E-01 5%LSD 8DF 0.709892E-01 0.229309 0.497321E-01 - 63 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PT 23/10/18 11:12 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE PT2 PT4 PT6 GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 20.836 15 25.282 15 22.366 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.0820 0.48679E-01 0.2 0.0000 11.236 0.15724 0.6 0.0000 9.5399 0.34102E-01 0.2 0.0000 |R | | | 0.0086 0.1035 0.1117 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE GLUCO FILE DG 23/10/18 11:15 :PAGE VARIATE V003 GLUCO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2416.39 604.098 ****** 0.000 R 413199E-01 206600E-01 2.34 0.158 * RESIDUAL 706696E-01 883370E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2416.50 172.607 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LACTO FILE DG 23/10/18 11:15 :PAGE VARIATE V004 LACTO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 491.754 122.939 713.85 0.000 R 750397E-01 375198E-01 0.22 0.810 * RESIDUAL 1.37774 172218 * TOTAL (CORRECTED) 14 493.207 35.2291 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SACCHA FILE DG 23/10/18 11:15 :PAGE VARIATE V005 SACCHA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1454.74 363.684 ****** 0.000 R 847602E-01 423801E-01 2.88 0.114 * RESIDUAL 117779 147224E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1454.94 103.924 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DG 23/10/18 11:15 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS GLUCO LACTO SACCHA 11.2800 8.10000 10.9300 18.8500 11.5200 16.2400 3 27.9300 16.3200 24.9200 35.5600 20.2400 30.0900 47.6300 23.9600 38.7000 SE(N= 3) 0.542639E-01 0.239596 0.700533E-01 5%LSD 8DF 0.176949 0.781297 0.228437 MEANS FOR EFFECT R R NOS GLUCO LACTO SACCHA 28.2080 16.1280 24.0860 28.2180 15.9800 24.1720 28.3240 15.9760 24.2700 SE(N= 5) 0.420326E-01 0.185590 0.542631E-01 64 5%LSD 8DF 0.137064 0.605190 0.176946 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DG 23/10/18 11:15 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GLUCO LACTO SACCHA GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 28.250 15 16.028 15 24.176 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 13.138 0.93988E-01 0.3 0.0000 5.9354 0.41499 2.6 0.0000 10.194 0.12134 0.5 0.0000 |R | | | 0.1577 0.8100 0.1135 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE PD FILE MT 23/10/18 11:18 :PAGE VARIATE V003 PD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 48.7601 9.75201 ****** 0.000 R 303335E-02 151667E-02 8.59 0.007 * RESIDUAL 10 176578E-02 176578E-03 * TOTAL (CORRECTED) 17 48.7649 2.86852 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE MT 23/10/18 11:18 :PAGE VARIATE V004 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 23.8236 4.76472 ****** 0.000 R 143333E-02 716666E-03 12.62 0.002 * RESIDUAL 10 567656E-03 567656E-04 * TOTAL (CORRECTED) 17 23.8256 1.40151 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 23/10/18 11:18 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS PD CD 1.17000 0.920000 1.92000 1.21000 3 3.41000 2.53000 4.84000 3.64000 5.63000 3.72000 4.96000 3.52000 SE(N= 3) 0.767198E-02 0.434993E-02 5%LSD 10DF 0.241747E-01 0.137068E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS PD CD 3.63833 2.57833 3.65667 2.59167 3.67000 2.60000 SE(N= 6) 0.542491E-02 0.307586E-02 5%LSD 10DF 0.170941E-01 0.969216E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 23/10/18 11:18 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 18) NO OBS STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | |R | | | | | | | 65 PD CD 18 18 3.6550 2.5900 1.6937 1.1839 0.13288E-01 0.75343E-02 0.4 0.0000 0.3 0.0000 0.0069 0.0020 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 50V/P FILE VP 23/10/18 11:21 :PAGE VARIATE V003 50V/P LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 12.6052 2.52104 ****** 0.000 R 523333E-02 261667E-02 1.70 0.230 * RESIDUAL 10 153664E-01 153664E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 12.6258 742694 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 100V/P FILE VP 23/10/18 11:21 :PAGE VARIATE V004 100V/P LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 53.1717 10.6343 48.45 0.000 R 433411 216706 0.99 0.408 * RESIDUAL 10 2.19472 219472 * TOTAL (CORRECTED) 17 55.7998 3.28234 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 150V/P FILE VP 23/10/18 11:21 :PAGE VARIATE V005 150V/P LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 47.9050 9.58100 ****** 0.000 R 433334E-03 216667E-03 2.82 0.106 * RESIDUAL 10 769036E-03 769036E-04 * TOTAL (CORRECTED) 17 47.9062 2.81801 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE VP 23/10/18 11:21 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 50V/P 100V/P 150V/P 0.850000 1.16000 1.20000 1.09000 2.21000 2.44000 3 1.98000 2.01667 3.55000 2.85000 4.82000 4.98000 2.93000 5.44667 5.67000 2.70000 5.19000 5.36000 SE(N= 3) 0.226321E-01 0.270476 0.506305E-02 5%LSD 10DF 0.713146E-01 0.852280 0.159539E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 50V/P 100V/P 150V/P 2.04500 3.69333 3.86000 2.06833 3.36500 3.87167 2.08667 3.36333 3.86833 SE(N= 6) 0.160033E-01 0.191255 0.358012E-02 5%LSD 10DF 0.504270E-01 0.602653 0.112811E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE VP 23/10/18 11:21 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 66 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | (N= 18) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | 50V/P 18 2.0667 0.86180 0.39200E-01 1.9 0.0000 0.2304 100V/P 18 3.4739 1.8117 0.46848 13.5 0.0000 0.4081 150V/P 18 3.8667 1.6787 0.87695E-02 0.2 0.0000 0.1060 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KL FILE HL 23/10/18 11:24 :PAGE VARIATE V003 KL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 264300 881001E-01 0.00 1.000 R 799998E-03 399999E-03 0.00 1.000 * RESIDUAL *********** *********** * TOTAL (CORRECTED) 11 265100 241000E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL FILE HL 23/10/18 11:24 :PAGE VARIATE V004 HL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 129900 433001E-01 577.33 0.000 R 349999E-03 175000E-03 2.33 0.177 * RESIDUAL 450004E-03 750006E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 130700 118818E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HL 23/10/18 11:24 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS KL HL 15.0800 3.64000 15.1200 3.52000 3 15.3500 3.35000 15.4300 3.47000 SE(N= 3) 0.000000 0.500002E-02 5%LSD 6DF 0.000000 0.172959E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS KL HL 15.2350 3.48750 15.2450 3.49750 15.2550 3.50000 SE(N= 4) 0.000000 0.433014E-02 5%LSD 6DF 0.000000 0.149787E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HL 23/10/18 11:24 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KL HL GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 15.245 12 3.4950 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.15524 0.00000 0.0 1.0000 0.10900 0.86603E-02 0.2 0.0000 |R | | | 1.0000 0.1775 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KL FILE KL 23/10/18 11:26 :PAGE VARIATE V003 KL LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 48.4752 16.1584 ****** 0.000 67 R 616660E-03 308330E-03 36.94 0.001 * RESIDUAL 500757E-04 834595E-05 * TOTAL (CORRECTED) 11 48.4759 4.40690 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL FILE KL 23/10/18 11:26 :PAGE VARIATE V004 HL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 186001E-01 620002E-02 20.67 0.002 R 200000E-03 999998E-04 0.33 0.731 * RESIDUAL 180000E-02 299999E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 206000E-01 187273E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KL 23/10/18 11:26 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 DF KL 20.1200 19.3467 19.5600 15.0800 HL 3.55000 3.59000 3.60000 3.66000 SE(N= 3) 0.166793E-02 0.999999E-02 5%LSD 6DF 0.576963E-02 0.345916E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 4 KL 18.5175 18.5275 18.5350 HL 3.60500 3.59500 3.60000 SE(N= 4) 0.144447E-02 0.866025E-02 5%LSD 6DF 0.499665E-02 0.299572E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KL 23/10/18 11:26 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KL HL GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 18.527 12 3.6000 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.0993 0.28889E-02 0.0 0.0000 0.43275E-010.17320E-01 0.5 0.0019 |R | | | 0.0007 0.7314 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KL FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE VARIATE V003 KL LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 105.678 35.2261 ****** 0.000 R 800033E-03 400017E-03 ****** 0.000 * RESIDUAL 558178E-07 930296E-08 * TOTAL (CORRECTED) 11 105.679 9.60719 - 68 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE VARIATE V004 HL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 225000E-03 749999E-04 0.82 0.531 R 499999E-04 250000E-04 0.27 0.772 * RESIDUAL 549999E-03 916665E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 824998E-03 749999E-04 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 DF KL 26.3200 26.3500 26.5600 19.5600 HL 3.61000 3.61000 3.61000 3.60000 SE(N= 3) 0.556865E-04 0.552770E-02 5%LSD 6DF 0.192629E-03 0.191212E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 4 KL 24.6875 24.6975 24.7075 HL 3.60500 3.60750 3.61000 SE(N= 4) 0.482259E-04 0.478713E-02 5%LSD 6DF 0.166821E-03 0.165594E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KL HL GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 24.697 12 3.6075 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.0995 0.96452E-04 0.0 0.0000 0.86603E-020.95743E-02 0.3 0.5309 |R | | | 0.0000 0.7719 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KL FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE VARIATE V003 KL LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF | | | | SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 105.678 35.2261 ****** 0.000 R 800033E-03 400017E-03 ****** 0.000 * RESIDUAL 558178E-07 930296E-08 * TOTAL (CORRECTED) 11 105.679 9.60719 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HL FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE VARIATE V004 HL SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER 69 SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 225000E-03 749999E-04 0.82 0.531 R 499999E-04 250000E-04 0.27 0.772 * RESIDUAL 549999E-03 916665E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 824998E-03 749999E-04 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 KL 26.3200 26.3500 26.5600 19.5600 HL 3.61000 3.61000 3.61000 3.60000 SE(N= 3) 0.556865E-04 0.552770E-02 5%LSD 6DF 0.192629E-03 0.191212E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 4 KL 24.6875 24.6975 24.7075 HL 3.60500 3.60750 3.61000 SE(N= 4) 0.482259E-04 0.478713E-02 5%LSD 6DF 0.166821E-03 0.165594E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KLL 23/10/18 11:28 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE KL HL GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 24.697 12 3.6075 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.0995 0.96452E-04 0.0 0.0000 0.86603E-020.95743E-02 0.3 0.5309 |R | | | 0.0000 0.7719 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGÀY FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem VARIATE V003 NGÀY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 5.24535 5.24535 24.60 0.009 * RESIDUAL 853000 213250 * TOTAL (CORRECTED) 6.09835 1.21967 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGÀY FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem VARIATE V004 NGÀY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER 70 SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4.48935 4.48935 16.90 0.016 * RESIDUAL 1.06240 265600 * TOTAL (CORRECTED) 5.55175 1.11035 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NGÀY FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem VARIATE V005 NGÀY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 16.2362 16.2362 35.22 0.005 * RESIDUAL 1.84400 461001 * TOTAL (CORRECTED) 18.0802 3.61603 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 12 NGÀY FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem VARIATE V006 12 NGÀY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 11.8441 11.8441 33.89 0.006 * RESIDUAL 1.39780 349450 * TOTAL (CORRECTED) 13.2419 2.64839 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 15 NGÀY FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem VARIATE V007 15 NGÀY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 68.9526 68.9526 225.71 0.000 * RESIDUAL 1.22199 305499 * TOTAL (CORRECTED) 70.1746 14.0349 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 SE(N= 5%LSD 3) 4DF CT NOS NGÀY 10.2200 12.0900 NGÀY 20.8200 22.5500 NGÀY 30.3600 33.6500 12 NGÀY 37.5500 40.3600 0.266614 1.04507 0.297545 1.16631 0.392004 1.53657 0.341297 1.33781 15 NGÀY 71 3 43.6700 50.4500 SE(N= 3) 0.319113 5%LSD 4DF 1.25085 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SYS 12/10/** 21:36 PAGE Phân tích kêt qua thi nghiem F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE 12 15 NGÀY NGÀY NGÀY NGÀY NGÀY GRAND MEAN (N= 6) NO OBS 11.155 21.685 32.005 38.955 47.060 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1044 0.46179 4.1 0.0090 1.0537 0.51536 2.4 0.0159 1.9016 0.67897 2.1 0.0052 1.6274 0.59114 1.5 0.0055 3.7463 0.55272 1.2 0.0005 | | | | ... Nghiên cứu quy trình phân lập sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc Thanh Hóa 4 1.1.2 Mục tiêu cụ thể - Phân lập thành cơng giống nấm Lim xanh. .. tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu quy trình phân lập sản xuất sinh khối sợi nấm Lim xanh (Ganoderma lucium (Leyss Ex Fr.) Karst) có nguồn gốc Thanh Hóa” 1.1 Mục tiêu nghiên cứu: 1.1.1... NƠNG LÂM HỒNG VĂN NÂNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH PHÂN LẬP VÀ SẢN XUẤT SINH KHỐI SỢI NẤM LIM XANH (Ganoderma lucium (Leyss Ex Fr.) Karst) CÓ NGUỒN GỐC TẠI THANH HÓA Nghành: Công nghệ sinh học Mã số: