Nghiên cứu quy trình nhân giống cây xuyên khung (ligusticum wallichii frach) từ nuôi cấy mô

Luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ----------      ---------- CAO THỊ THUỶ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY XUYÊN KHUNG (Ligusticum wallichii Frach) TỪ NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: TRỒNG TRỌT Mã số: 60.62.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. VŨ QUANG SÁNG HÀ NỘI - 2009 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN - Tôi xin cam ñoan số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ cho bất kỳ một học vị nào. - Tôi xin cam ñoan rằng, mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Cao Thị Thuỷ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành bản luận văn này ngoài sự cố gắng của bản thân tôi còn nhận ñược sự giúp ñỡ tận tình của nhiều cá nhân và tập thể. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến PGS.TS Vũ Quang Sáng, người ñã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn tôi thực hiện và hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn tới TS. Nguyễn Văn Thuận – Giám ñốc trung tâm,Thạc sĩ Tạ Như Thục Anh, Thạc sĩ Trần Thị Liên – Trung tâm nghiên cứu cây thuốc, Viện Dược liệu - Bộ Y Tế ñã tạo mọi ñiều kiện thuận lợi giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực tập. Xin cảm ơn gia ñình, ban bè và ñồng nghiệp ñã giúp ñỡ, ñộng viên tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp. Hà Nội, ngày 09 tháng 09 năm 2009 Tác giả Cao Thị Thuỷ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi 1. MỞ ðẦU 1 1.1 ðặt vấn ñề 1 1.2 Mục ñích, yêu cầu của ñề tài 2 1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 3 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 2.1 Giới thiệu chung về cây xuyên khung 4 2.2 Cơ sở khoa học của ñề tài 7 2.3 Tình hình nghiên cứu và sản xuất xuyên khung 24 3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Vật liệu nghiên cứu 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 27 3.3 Phương pháp nghiên cứu 32 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Giai ñoạn tạo nguồn vật liệu khởi ñầu 37 4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng ñộ HgCl 2 và thời gian khử trùng tới hiệu quả khử trùng mẫu xuyên khung ñưa vào nuôi cấy 37 4.2 Giai ñoạn nhân nhanh 41 4.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của BA ñến hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy 41 4.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BA và αNAA ñến hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy 44 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 4.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng ñộ kinetin tới hệ số nhân chồi của xuyên khung trong môi trường nuôi cấy 48 4.2.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp kinetin và αNAA tới hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy 50 4.2.5. Nghiên cứu ảnh hưởng của nước dừa tới hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy 53 4.3 Giai ñoạn tạo cây hoàn chỉnh 55 4.3.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của αNAA tới sự tạo rễ của xuyên khung trong nuôi cấy 56 4.3.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp αNAA và than hoạt tính tới sự tại rễ của xuyên khung trong nuôi cấy 59 4.3.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA tới sự ra rễ của xuyên khung trong môi trường nuôi cấy 63 4.3.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp IBA + than hoạt tính tới sự tạo rễ của xuyên khung trong nuôi cấy 66 4.4 Giai ñoạn ngoài vườn ươm 69 4.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của giá thể trồng tới sinh trưởng phát triển của cây xuyên khung 69 4.4.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của thời vụ ra cây tới tỷ lệ sống và sự sinh trưởng, phát triển của cây xuyên khung trong vườn ươm 73 4.4.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của chế ñộ chăm sóc cây xuyên khung in vitro ngoài vườn ươm 75 5 . KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 78 5.1. Kết luận 78 5.2 ðề nghị 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 1. BA : Benzin adenin 2. IBA : Axit β – indol butyric 3.α NAA : α – Naphtyl axetic axit 4. MS : Murashige Skoog 5. CT : Công thức 6. NXB : Nhà xuất bản Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1: Ảnh hưởng của nồng ñộ HgCl2 và thời gian khử trùng khác nhau tới hiệu quả khử trùng mẫu xuyên khung ñưa vào nuôi cấy 38 4.2: Ảnh hưởng của nồng ñộ BA tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy 42 4.3: Ảnh hưởng của BA và αNAA ñến hệ số nhân chồi của mẫu xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 45 4.4: Ảnh hưởng của nồng ñộ kinetin tới hệ số nhân chồi của xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy 48 4.5: Ảnh hưởng của tổ hợp kinetin + αNAA tới hệ số nhân chồi của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 51 4.6: Ảnh hưởng của nước dừa tới hệ số nhân chồi của xuyên khung sau 4 tuần nuôi cấy 53 4.7: Ảnh hưởng của αNAA tới sự ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 56 4.8: Ảnh hưởng của αNAA và than hoạt tính ñến sự ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 60 4.9: Ảnh hưởng của nồng ñộ IBA tới khả năng ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 63 4.10: Ảnh hưởng của tổ hợp IBA + than hoạt tính ñến sự tạo rễ của mẫu sau 6 tuần nuôi cấy 66 4.12: Ảnh hưởng của giá thể ra cây tới tỷ lệ sống và tình hình sinh trưởng của xuyên khung ngoài vườn ươm 45 ngày sau trồng 70 4.13: Ảnh hưởng của thời vụ ra cây tới tỷ lệ sống và sự sinh trưởng của cây xuyên khung sau 45 ngày trồng 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii 4.14: Ảnh hưởng của chế ñộ chăm sóc cây xuyên khung in vitro ngoài vườn ươm 30 ngày sau trồng 76 DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1. Một số hình ảnh về cây xuyên khung ngoài thực ñịa 4 4.1. Ảnh hưởng của HgCl 2 0,07% tới hiệu quả khử trùng mẫu cấy trong thời gian 5, 10, 15, 20 phút 39 4.2. Ảnh hưởng của nồng ñộ HgCl 2 0,1% tới hiệu quả khử trùng mẫu trong thời gian 5, 10, 15, 20 phút 39 4.3. Ảnh hưởng của nồng ñộ HgCl 2 0,15% tới hiệu quả khử trùng mẫu trong thời gian 5, 10, 15, 20 phút 40 4.4. Ảnh hưởng của nồng ñộ BA tới hệ số nhân chồi của mẫu xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy 43 4.5. Ảnh hưởng của nồng ñộ BA tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy 43 4.6. Ảnh hưởng của BA và αNAA ñến hệ số nhân chồi sau 6 tuần nuôi cấy 46 4.7. Ảnh hưởng của nồng ñộ BA+ αNAA tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 4 tuần nuôi cấy 46 4.8. Ảnh hưởng của nồng ñộ kinetin tới hệ số nhân chồi của mẫu xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy 49 4.9. Ảnh hưởng của kinetin tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy 49 4.10. Ảnh hưởng của tổ hợp kinetin + αNAA hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 52 4.11. Ảnh hưởng của tổ hợp kinetin + αNAA tới khả năng nhân chồi của cây xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 52 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii 4.12. Ảnh hưởng của nước dừa tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 4 tuần nuôi cấy 54 4.13. Ảnh hưởng nước dừa tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 4 tuần nuôi cấy 54 4.14. Ảnh hưởng của αNAA tới tỷ lệ ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 57 4.15. Ảnh hưởng của αNAA tới kích thước và số lượng rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 57 4.16. Ảnh hưởng của NAA tới sự ra rễ của mẫu sau 6 tuần nuôi cấy 58 4.17. Ảnh hưởng của αNAA + than hoạt tính tới tỷ lệ ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 61 4.18. Ảnh hưởng của αNAA + than hoạt tính tới số lượng rễ và kích thước rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 62 4.19. Ảnh hưởng của αNAA và than hoạt tính ñến sự ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 62 4.20. Ảnh hưởng của IBA tới tỷ lệ ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 65 4.21. Ảnh hưởng của IBA tới số lượng và chiều kích thước rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 65 4.22. Ảnh hưởng của IBA + than hoạt tính tới tỷ lệ ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 67 4.23. Ảnh hưởng của IBA + than hoạt tính tới số lượng và kích thước rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 67 4.24. Ảnh hưởng của IBA+ than hoạt tính ñến sự ra rễ của xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 68 4.25. Ảnh hưởng của giá thể ra cây tới tỷ lệ sống xuyên khung ngoài vườn ươm 45 ngày sau trồng 72 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix 4.26. Ảnh hưởng của giá thể ra cây tới sự sinh trưởng, phát triển của xuyên khung ngoài vườn ươm 45 ngày sau trồng 72 4.27. Ảnh hưởng của thời vụ ra cây tới tỷ lệ sống của cây xuyên khung sau 45 ngày trồng 74 4.28. Ảnh hưởng của thời vụ ra cây tới sự sinh trưởng của xuyên khung sau 45 ngày trồng 74 4.29. Ảnh hưởng của chế ñộ phun dinh dưỡng tới sinh trưởng cây xuyên khung ngoài vườn ươm sau 30 ngày trồng 77 4.30. Ảnh hưởng của chế ñộ phun dinh dưỡng tới sinh trưởng cây xuyên khung ngoài vườn ươm 77 .  ---------- CAO THỊ THUỶ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY XUYÊN KHUNG (Ligusticum wallichii Frach) TỪ NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP. số nhân chồi của cây xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy 52 4.11. Ảnh hưởng của tổ hợp kinetin + αNAA tới khả năng nhân chồi của cây xuyên khung sau 6 tuần nuôi