3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ
4.2.2.Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BA và αNAA ñế n hệ số nhân chồi c ủa xuyên khung trong nuôi cấy
Trong việc tạo chồi, auxin cũng có tác dụng tích cực khi phối hợp với cytokinin ở nồng ñộ thích hợp. Nhiều thí nghiệm ñã chứng minh việc tạo chồi
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………45 sẽ tỏ ra hiệu quả hơn khi phối hợp hai nhóm auxin và cytokinin hơn là chỉ sử dụng nhóm cytokinin ñơn lẻ. Theo Murashige (1980) [42], quá trình phân hoá chồi phụ thuộc vào tỷ lệ auxin và cytokinin trong môi trường nuôi cấy. Nếu tỷ lệ cytokinin/auxin cao kích thích sự hình thành chồi và ngược lại sẽ kích thích sự hình thành rễ. ðể tìm ra tỷ lệ phối hợp tối ưu cho môi trường nhân nhanh, chúng tôi tiến hành cấy mẫu trên môi trường MS có bổ sung BA nồng ñộ 0,75mg/l (công thức cho hệ số nhân chồi cao và chất lượng chồi tốt ñã ñược khẳng ñịnh ở thí nghiệm 2) phối hợp với αNAA các mức nồng ñộ 0,1mg/l; 0.2mg/l; 0,3mg/l; kết quả ñược ghi lại ở bảng 4.3 dưới ñây:
Bảng 4.3: Ảnh hưởng của BA và αNAA ñến hệ số nhân chồi của mẫu xuyên khung sau 6 tuần nuôi cấy
Công thức Hệ số nhân chồi (lần) Chiều cao chồi (cm) Số lá /chồi (lá) Chất lượng chồi MS + 0,75mg/l BA(ñ/c) 6,2 6,0 4,0 ++ MS + 0,75mg/l BA+ 0,1mg/l αNAA 8,1 7,0 4,5 +++ MS + 0,75mg/l BA + 0,2mg/l αNAA 5,0 6,5 4,2 + MS+ 0,75mg/lBA + 0,3mg/l αNAA 3,0 8,2 3,0 - LSD0,05 0,18 CV% 1,7
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………46 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Hệ số nhân chồi (lần) CT 1 CT 2 CT 3 CT 4 công thức
Hình 4.6: Ảnh hưởng của BA và αNAA ñến hệ số nhân chồi sau 6 tuần nuôi cấy
Hình 4.7: Ảnh hưởng của nồng ñộ BA+ αNAA tới hệ số nhân chồi của xuyên khung sau 4 tuần nuôi cấy
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………47 Nhận xét:
Khi bổ sung αNAA với nồng ñộ khác nhau vào môi trường cho hệ số nhân chồi tối ưu (MS + 0,75mg/l BA) ở thí nghiệm 2, chúng tôi thấy:
Ở công thức không bổ sung α NAA (CT ñ/c), hệ số nhân chồi ñạt 6,2 lần, chiều cao và số lá trung bình của các chồi trong công thức này cũng ñạt ñược là 6,0cm; 4,0 lá. Khi bổ sung αNAA, hệ số nhân chồi ñạt cao nhất (8,1 lần) ở công thức 3 khi phối hợp 0,75mg/l BA và 0,1mg/l αNAA, sự phát triển của chồi cũng tỏ ra vượt trội hơn hẳn so với các công thức khác trong thí nghiệm: chồi khoẻ có màu xanh ñậm, chiều cao, số lá/chồi cũng cao hơn so với ñối chứng ñạt 7,0cm; 4,5 lá/chồi.
Khi tăng nồng ñộ αNAA lên 0,2mg/l hệ số nhân chồi cũng như sự sinh trưởng của cây ñều giảm: hệ số nhân chồi chỉ còn 5,0 lần; chiều cao chồi còn 6,5cm sự ra lá cũng giảm nhẹ còn 4,2 lá/chồi ñồng thời cũng phát hiện thấy gốc của mẫu cấy sùi lên.
Tiếp tục tăng nồng ñộ αNAA lên 0,3mg/l hệ số nhân chồi giảm mạnh chỉ còn 3 lần, số lá/ chồi cũng giảm (3 lá/chồi), tuy nhiên chiều cao chồi lại tăng vọt ñạt 8,2cm bên cạnh ñó cũng phát hiện thấy ở gốc của mẫu cấy hình thành mô sẹo với kích thước lớn hơn so với công thức bổ sung 2,0mg/l αNAA, chồi có màu xanh nhạt và rất yếu. ðiều này có thể giải thích: khi nồng ñộ αNAA ñã vượt ngưỡng tối thích sẽ có tác dụng ngược lại, chúng ức chế sự phát sinh hình thành chồi ñồng thời hoạt hoá các tế bào gốc mẫu cấy ñể hình thành callus.
Từ kết quả ở bảng 4.3; hình 4.7 và phân tích trên chúng tôi thấy môi trường bổ sung thêm αNAA ñều có tác dụng tích cực tới sự phát sinh cụm chồi, song thích hợp nhất cho việc tăng hệ số nhân chồi là môi trường bổ sung 0,75mg/l BA + 0,1mg/l αNAA (CT2).
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………48
4.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng ñộ kinetin tới hệ số nhân chồi của xuyên khung trong môi trường nuôi cấy