3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ
4.2.1.Nghiên cứu ảnh hưởng của BA ñế n hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy
thích hợp nhất cho việc khử trùng là 0,15% trong thời gian 10 phút.
4.2 Giai ñoạn nhân nhanh
Giai ñoạn nhân nhanh chồi là giai ñoạn chuyển tiếp giữa giai ñoạn tái sinh chồi và giai ñoạn tạo cây hoàn chỉnh. ðây là giai ñoạn thể hiện gần như ñầy ñủ tính ưu việt của phương pháp nhân giống in vitro, thông thường người ta thường hay sử dụng nhóm chất ñiều hoà sinh trưởng cytokinin ñể tăng hệ số nhân chồi ñây là cơ sở ñể chúng tôi tiến hành các thí nghiệm.
4.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của BA ñến hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy khung trong nuôi cấy
Từ những năm 50 của thế kỷ XX, người ta ñã nhận thấy vai trò của nhóm cytokinin có ảnh hưởng rất rõ rệt và ñặc trưng lên sự phân hoá các cơ quan của thực vật ñặc biệt là sự phân hoá chồi vì vậy ñể tăng hệ số nhân chồi, người ta ñã bổ sung thêm một số chất có trong nhóm cytokinin trong môi trường nuôi cấy.
BA là một chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin ñược sử dụng thông dụng nên trong nghiên cứu chúng tôi chọn BA ñể khảo sát khả năng tạo cụm chồi in vitro của cây xuyên khung ở các loại nồng ñộ khác nhau: 0,5 mg/l; 0,75 mg/l; 1,0 mg/l; 1,5 mg/l. Kết quả nghiên cứu ñược trình bày ở bảng 4.2.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………42
Bảng 4.2: Ảnh hưởng của nồng ñộ BA tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy
Công thức thí nghiệm Hệ số nhân chồi (lần) Chiều cao cây (cm) Số lá/chồi (lá) Tình trạng chồi MS (ñối chứng) 1,5 9,5 4,0 +++ MS + 0,5mg/l BA 5,7 7,5 4,3 +++ MS + 0,75mg/l BA 7,3 8,2 4,0 +++ MS + 1,0mg/l BA 6,5 6,0 3,5 + MS + 1,5mg/l BA 4,5 4,1 2,7 + LSD0,05 0,27 CV% 2,9 Chú thích
+++: Tốt (chồi mập, lá to, xanh ñậm)
++: Trung bình (chồi nhỏ, lá nhỏ, màu xanh) +: Yếu (chồi nhỏ, lá nhỏ, màu xanh nhạt)
Qua bảng số liệu 4.2 chúng tôi nhận thấy: Khi bổ sung BA vào môi trường nuôi cấy khả năng phát sinh chồi của cây xuyên khung rất mạnh sau 20 ngày cấy, các mẫu thí nghiệm ñã có phản ứng, phần gốc mẫu cấy ñã sùi lên còn ở công thức ñối chứng thì không xuất hiện hiện tượng này mà các mẫu cấy mọc cao, xuất hiện một vài rễ mảnh. Tám tuần sau cấy, các công thức thí nghiệm ñã thể hiện rõ rệt sự khác nhau về khả năng phát sinh chồi
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………43 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Hệ số nhân chồi (lần) CT 1 CT 2 CT 3 CT 4 CT 5 Công thức Hình 4.4: Ảnh hưởng của nồng ñộ BA tới hệ số nhân chồi của mẫu xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy
Hình 4.5: Ảnh hưởng của nồng ñộ BA tới hệ số nhân chồi của cây xuyên khung sau 8 tuần nuôi cấy
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………44 Ở công thức ñối chứng không bổ sung BA thì không có sự phát sinh chồi, cây phát triển mạnh về chiều cao (9,5cm), số lá trung bình khoảng 4 lá/cây, cây màu ñậm. Các công thức bổ sung BA thể hiện sự khác biệt lớn so với công thức ñối chứng.
Theo nồng ñộ BA tăng dần số chồi hình thành trên mẫu cấy cũng tăng lên ở nồng ñộ 0,5mg/l là 5,7 lần, tăng nồng ñộ BA lên 0,75mg/l hệ số nhân chồi ñạt cao nhất là 7,3 lần và khi tăng nồng ñộ BA lên 1,0mg/l hệ số nhân chồi giảm xuống 6,5 lần, sau ñó số lượng chồi giảm xuống nhanh chỉ còn 4,5 lần khi tiếp tục tăng nồng ñộ BA lên 1,5mg/l.
ðối với chất lượng chồi trong thí nghiệm chúng tôi nhận thấy: công thức bổ sung BA nồng ñộ 0,5mg/l và công thức bổ sung BA nồng ñộ 0,75mg/l thì các chồi sinh trưởng khoẻ cụ thể là chiếu cao ñạt: 7,5cm và 4,2 lá/chồi (CT 2); 8,2cm và 4,5 lá/chồi (CT 3), tất cả các chồi trong 2 công thức ñều có màu xanh ñậm giống với màu của cây ngoài thực ñịa.Còn ở hai công thức bổ sung BA 1,0mg/l và 1,5 mg/l biểu hiện sinh trưởng của các chồi yếu chiều cao và số lá ñều giảm với hai công thức trên: chiều cao 6,0 cm; số lá trung bình/chồi là 3,5lá (CT4); chiều cao cây là 5,1cm; số lá/chồi là 2,7 lá; chồi có màu xanh nhạt rất yếu.
Tóm lại, khi bổ sung BA với nồng ñộ 0,75mg/l thì hệ số nhân chồi ñạt cao nhất, chất lượng chồi ñạt tốt nhất so với các công thức trong thí nghiệm
4.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BA và αNAA ñến hệ số nhân chồi của xuyên khung trong nuôi cấy