Nghiên cứu kỉ thật nhân giống vô tính cây lô hội (aloe vera linne var sinensis berger) bằng phương pháp nuôi cấy in vitro và phương pháp giam hom thân

Luận văn

Bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiÖp i - Bùi Thị hồng quyên Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính Lô hội (Aloe vera Linne var Sinensis Berger) phơng pháp nuôi cấy in vitro phơng pháp giâm hom thân Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ng nh : trång trät M· sè : 60.62.01 Ng−êi h−íng dÉn khoa học: TS Nguyễn Thị Kim Thanh Hà nội - 2007 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan l công trình nghiên cứu riêng Các số liệu v kết trình b y luận văn l trung thực v cha đợc công bố công trình n o khác Tôi xin cam đoan r»ng mäi sù gióp ®ì cho viƯc thùc hiƯn ln văn n y đ đợc cám ơn v thông tin trích dẫn luận văn đ đợc rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Bùi Thị Hồng Quyªn Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nụng nghi p i Lời cảm ơn §Ĩ ho n th nh ®Ị t i tèt nghiƯp ngo i cố gắng thân đ nhận đợc nhiều quan tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy cô, bạn bè v ngời thân Trớc tiên xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy cô giáo Khoa Nông học ngời đ trực tiếp giảng dạy trang bị kiến thức bổ ích suốt thời gian học đại học nh học cao học Tôi xin đợc gửi lời chân th nh cảm ơn tới thầy cô giáo môn Sinh lý Thực vật, anh chị Trung tâm chuyển giao TBKH&CN Sở KHCN Vĩnh Phúc đ chân th nh đóng góp ý kiến giúp cho luận văn đợc ho n thiện Đặc biệt xin đợc b y tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo TS Nguyễn Thị Kim Thanh ngời đ tận tình hớng dẫn giúp đỡ v động viên trình thực đề t i v ho n th nh luận văn n y Bên cạnh xin gửi lời cảm ơn chân th nh tới tất ngời thân, bạn bè ngời bên cạnh động viên giúp đỡ trình học tập v thực đề t i H Nội, ng y 19 tháng 12 năm 2007 Tác giả luận văn Bùi Thị Hồng Quyên Tr ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nụng nghi p ii Mục lục Mở đầu i 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích, yêu cầu cđa ®Ị t i Tỉng quan t i liệu 2.1 Giới thiệu chung Lô hội 2.2 Tình hình sản xuất v sử dụng Lô hội v ngo i nớc 2.3 Cơ sở khoa học phơng pháp nhân giống vô tính kü thuËt gi©m c nh, gi©m hom 2.4 14 26 Kü thuËt nu«i cÊy m«, tÕ b o v øng dụng nhân giống vô tính trồng 27 Đối tợng, nội dung v phơng pháp nghiên cứu 32 3.1 Đối tợng 32 3.2 Nội dung nghiên cứu 32 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 38 3.4 Các tiêu theo dâi 40 3.5 Xư lý sè liƯu 42 3.6 Thời gian v địa điểm nghiên cứu 42 Kết nghiên cứu v thảo luận 43 4.1 Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống Lô hội phơng pháp nuôi cấy in vitro 43 4.1.1 Nghiên cứu kỹ thuật tạo vật liệu khởi đầu in vitro 43 4.1.2 Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi Lô hội in vitro 48 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hởng tổ hợp xytokinnin v auxin đến khả nhân nhanh chồi Lô hội in vitro 53 4.1.3 Nghiªn cøu kü tht rƠ tạo ho n chỉnh Lô hội in vitro 57 4.1.4 Nghiên cứu kỹ thuật ngo i v−ên −¬m (sau èng nghiƯm) 63 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p iii 4.2 Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính Lô hội phơng pháp giâm hom 67 4.2.1 Nghiên cứu ảnh hởng thời vụ hủy đỉnh sinh trởng đến khả phát sinh chồi nách tạo vật liệu giâm hom thân Lô hội 67 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hởng việc xử lý IBA đến khả rễ v nảy mầm đoạn hom thân Lô hội 68 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hởng việc phun chế phẩm dinh dỡng đến khả phát sinh chồi nách Lô hội 70 Kết luận v đề nghị 71 5.1 Kết luận 71 5.2 Đề nghị 71 T i liệu tham khảo 73 Phụ lục 77 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ………………………iv Danh mơc c¸c chữ viết tắt BAP : Benzyl Adenin Purin CT : Công thức CP : Chế phẩm Đ/C : Đối chứng §TST : §iÒu tiÕt sinh tr−ëng α-NAA : α- Naphtyl Axetic Axit IBA : β- Indol Butyric Axit IAA : - Indol Axit HĐST : Huỷ đỉnh sinh trởng KHCN : Khoa häc c«ng nghƯ KH&CN : Khoa häc v công nghệ Ki : Kinetin NXB : Nh xuất TB : Trung bình THT : Than hoạt tính Tr ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ………………………v Danh mơc b¶ng 4.1 ¶nh hởng phơng thức v thời lợng khử trùng đến tû lƯ sèng cđa mÉu cÊy 4.2 44 ¶nh h−ëng thời vụ lấy mẫu đến khả tái sinh chåi cđa mÉu cÊy 47 4.3 ¶nh h−ëng cđa BAP đến khả nhân nhanh chồi Lô hội 50 4.4 ảnh hởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Lô hội invitro (sau tuần) 4.5 ảnh hởng tổ hợp BAP v -NAA đến khả nhân nhanh chồi Lô hội in vitro (sau tuần nuôi cấy) 4.6 52 54 ảnh hởng tổ hợp BAP v IAA đến khả nhân nhanh chồi Lô hội in vitro (sau tuần nuôi cấy) 56 4.7 ảnh hởng -NAA tới khả rễ Lô hội in vitro 59 4.8 ¶nh h−ëng cđa IBA tíi kh¶ rễ Lô hội in vitro 60 4.9 ảnh hởng h m lợng Than hoạt tính (THT) tới khả rễ Lô hội in vitro (sau tuần nuôi cấy) 62 4.10 ảnh hởng thời vụ đến tỷ lệ sống giai đoạn vờn ơm (sau 60 ng y) 64 4.11 Nghiên cứu ảnh hởng giá thể sau èng nghiƯm (sau 30 ng y) 66 4.12 ¶nh hởng thời vụ hủy đỉnh sinh trởng đến khả phát sinh chồi nách Lô hội 4.13 ảnh hởng IBA tới kết giâm thân Lô héi 4.14 67 69 ¶nh h−ëng cđa viƯc phun chÕ phẩm dinh dỡng tới khả phát sinh chồi nách Lô hội Tr ng i h c Nụng nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………vi 70 Danh mục hình 2.1 Cây Lô hội 1năm tuổi vờn thí nghiệm 2.2 Chất gel Lô hội 4.1 ảnh hởng phơng thức v thời lợng khử trùng đến tỷ lệ sống mẫu cÊy 4.2 45 ¶nh h−ëng cđa thêi vơ lÊy mÉu đến khả tái sinh chồi mẫu cấy 48 4.3 ảnh hởng h m lợng BAP đến hệ số nhân chồi 50 4.4 Giai đoạn nhân nhanh chồi Lô hội in vitro 51 4.5 ảnh hởng h m lợng kinetin đến hệ số nhân chồi 53 4.6 ảnh hởng tổ hợp BAP v -NAA đến hệ số nhân chồi Lô hội in vitro 4.7 55 ảnh hởng tổ hợp BAP v IAA đến hệ số nhân chồi Lô hội in vitro 57 4.8 Giai đoạn rễ tạo ho n chỉnh 58 4.9 ảnh h−ëng cđa h m l−ỵng α-NAA tíi tû lƯ chåi rễ 59 4.10 ảnh hởng h m lợng IBA tới khả rễ chồi Lô hội in vitro 61 4.11 ảnh hởng h m lợng Than hoạt tính (THT) tới khả rễ Lô hội in vitro 62 4.12 ảnh hởng thời vụ đến tỷ lệ sống giai đoạn vờn ơm 65 4.13 ảnh hởng thời vụ hủy đỉnh sinh trởng đến hệ số nhân chồi L« héi Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………vii 68 Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề Cây Lô hội (Aloe Vera) thc hä H t©y (Liliaceae) [3],[19], c©y mäc nhiỊu vùng có khí hậu nóng v khô Đây l dợc liệu đợc dùng đông y v tây y Cây có vị đắng, tính h n, v o bốn kinh can, tì vị v đại trờng Những tính Lô hội đ đợc khắp nơi giới biết đến, từ thời văn minh cổ Ai Cập, Hy Lạp, ấn Độ, Châu Phi v đợc sử dụng cách 2000 năm [9] Một tính kỳ diệu lo i dợc thảo n y đ đợc nh khoa học Trờng Đại học Bang Texas (Mỹ) nghiên cứu l dịch chiết Lô hội có khả l m nhanh l nh vết thơng, dịch chiết chøa ho¹t chÊt cã tÝnh thÈm thÊu cao l m gi n nở mao mạch, l m tăng lợng máu cung cÊp cho vïng xung quanh vÕt th−¬ng, l m tăng tốc độ phân chia tế b o, kích thích hệ thống miễn dịch Trong Lô hội có chất đông dính (gel) có ích việc điều trị chứng rối loạn tiêu hoá v bệnh tiểu đờng Một số công trình nghiên cứu nớc ngo i đ ghi nhận v khuyến cáo uống dịch chiết Lô hội (2 - gram/ng y) có tác dụng l m chậm trình l o hoá, tăng cờng hƯ thèng miƠn nhiƠm v cã t¸c dơng tèt cho đờng tiêu hoá Trong năm gần chất gel chiết rút từ Lô hội đợc dùng nhiều ng nh công nghệ dợc phẩm, hoá mỹ phẩm nh−: kem thoa lªn da, thc viªn hay thc mì để trị bệnh với thơng hiệu thuốc Lô hội, mỹ phẩm Lô hội, v thực phẩm dới dạng nớc uống xirô Việt Nam, Lô hội có nhiều dòng khác nhau, Aloe Vera đợc ghi nhận l thuốc cổ truyền Việt Nam, phân bố nhiều vùng ven biển miền Trung Từ xa xa nhân dân ta đ biết Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nụng nghi p đến tác dụng Lô hội v sử dụng b i thuốc Đông y Ng y để tăng cờng sử dụng hoá mỹ phẩm có nguồn gốc từ thảo dợc trồng đợc quan tâm phát triển l Lô hội Tuy nhiên vấn đề giống cho vùng nguyên liệu gặp khó khăn tự nhiên Lô hội khó nhân giống hạt Vì ngời dân thờng nhân giống vô tính Lô hội phơng pháp truyền thống l phơng pháp tách chồi thụ động có hệ số nhân giống không cao, sinh có sức sống thấp sản xuất đợc số lợng lớn giống theo quy mô công nghiệp Trong năm gần đây, nhằm tạo giống trồng chất lợng tốt, không phụ thuộc v o mùa vụ, nhiều địa phơng nớc đ ứng dụng phơng pháp giâm hom v o công tác nhân giống.Tuy nhiên phơng pháp n y cho kết không cao nhiều đối tợng trồng v cha đáp ứng đợc số lợng lớn giống [21] Công nghệ nhân giống vô tính kỹ thuật nuôi cấy mô tế b o l phơng thức nhân giống vô tính có nhiều u điểm tréi l : cho hƯ sè nh©n gièng rÊt cao, sản xuất quanh năm không phụ thuộc v o mùa vụ, cần diện tích sản xuất v vật liệu nhân giống ban đầu, giống sản xuất ho n to n bệnh, đồng mặt di truyền [14], việc vận chuyển giống xa thuận tiện, tổn thất ít, chất lợng đợc đảm bảo ho n to n đáp ứng đợc yêu cầu sản xuất giống với số lợng lớn mang tính công nghiệp Phơng pháp n y đ áp dụng th nh công nhiều loại trồng nh loại nông nghiệp: khoai tây, chuối, mía, dứacác loại hoa: phong lan, cẩm chớng, cúc, đồng tiềncác loại lâm nghiệp: keo lai, bạch đ n, tếch, gió trầm [17]các loại dợc liệu: địa ho ng, h thủ ô, trinh nữ ho ng cungVì việc ứng dụng công nghệ nuôi cấy mô tế b o để nhân nhanh số lợng giống đủ cung cấp cho vùng trồng nguyên liƯu l rÊt cÇn thiÕt Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………2 FILENAME : bang 4.4 TITLE : Anh hương cua kinetin ñen kha nang nhan nhanh A N A L Y S I S O F V A R I A N C E RANDOMIZED COMPLETE BLOCK DESIGN REPLICATION (R) TREATMENT C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 : = = = = = = = = CT (C) = c1 c2 c3 c4 c5 C6 C7 Chieu cao choi (cm) r1 2.7 2.8 2.9 2.9 2.8 2.5 2.2 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 REP TOTALS REP MEANS 19.1 2.7 r2 2.5 2.6 2.6 2.7 2.5 2.7 2.4 r3 2.9 3.0 3.2 3.1 3.1 2.6 2.3 18.0 2.6 20.2 2.9 ANALYSIS OF VARIANCE FOR chieu cao choi =============================================================================== SV DF SS MS F =============================================================================== LAP (R) 0.57600000 0.28800000 96.00 ** CT6 (C) 0.08400000 0.02100000 7.00 * ERROR 0.02400000 0.00300000 TOTAL 14 0.68400000 =============================================================================== cv = 3.0% ** = significant at 1% level; * = significant at 5% level TABLE OF CT6 (C) MEANS FOR chieu cao choi (cm) (AVE OVER REPS) -CT6 MEANS DIFFERENCE -C1 (CONTROL) 2.70 C2 2.80 0.10 ns C3 2.90 0.20 ** C4 2.90 0.20 ** C5 2.80 0.10 ns C6 2.50 C7 2.20 -MEAN 2.62 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………86 ** = significant at 1% level ns = not significant Comparison 2-C means S.E.D 0.04 LSD(5%) 0.10 LSD(1%) 0.15 TABLE OF CT (C) MEANS FOR chieu cao choi (cm) (AVE OVER REPS) -CT RANKS MEANS -c1 2.70 b c2 2.80 bc c3 2.90 c c4 2.90 c c5 2.80 bc C6 2.50 ab C7 2.20 a -MEAN 1.82 -Means followed by a common letter are not significantly different at the 5% level by DMRT Comparison 2-C means S.E.D 0.04 LSD(5%) 0.10 LSD(1%) 0.15 r1 r2 r3 1.0 2.6 2.7 2.9 2.6 2.3 2.1 1.0 2.7 2.8 2.8 2.5 2.4 2.0 1.0 2.5 2.6 3.0 2.7 2.2 2.2 he so nhan (lan) C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 REP TOTALS REP MEANS 16.2 2.3 16.2 2.3 16.2 2.3 ANALYSIS OF VARIANCE FOR he so nhan =============================================================================== SV DF SS MS F =============================================================================== LAP (R) 0.00000000 0.00000000