Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây lô hội có (aloe vera linne) có nguồn gốc từ mỹ và thái lan

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY LƠ HỘI CĨ (ALOE VERA LINNE) CĨ NGUỒN GỐC TỪ MỸ VÀ THÁI LAN Sinh viên thực : NGUYỄN THỊ ÁNH NGUYỆT Lớp : K62 - CNSHC Khóa : 62 Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN XUÂN TRƯỜNG TS NGUYỄN THỊ THÚY HẠNH HÀ NỘI – 2021   LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan số liệu, hình ảnh, kết trình bày luận văn trung thực, không chép tài liệu, công trình nghiên cứu người khác mà khơng rõ nguồn tham khảo, Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước Hội đồng Nhà trường Hà Nội, ngày 03 tháng 10 năm 2021 Sinh viên thực tập Nguyệt Nguyễn Thị Ánh Nguyệt i   LỜI CẢM ƠN Sau năm học tập Học viện Nơng Nghiệp Việt Nam, q trình thực tập tốt nghiệp Viện Sinh học Nông nghiệp, nhờ giúp đỡ tận tình Thầy anh chị Viện, với nỗ lực, học tập thân em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc Học viện Nông nghiệp, Ban chủ nghiệm khoa Công nghệ Sinh học Thầy cô giáo truyền đạt cho em kiến thức, quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam Lời em xin bày tỏ lòng bết ơn chân thành tới TS Nguyễn Xuân Trường viện trưởng Viện sinh học Nông nghiệp- Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện tốt để em hồn thành tốt khóa luận Em xin cảm ơn TS Nguyễn Thị Thúy Hạnh – Phó trưởng khoa, Giảng viên mơn Sinh học, bảo giúp đỡ cho ý kiến giúp em hồn thành khóa luận Bên cạnh em cảm ơn bạn bè giúp em cho em ý kiến để xây dựng khóa luận hoàn chỉnh Cuối cảm ơn bố mẹ tạo điều kiện thời gian tốt cho em, ln động viên em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 10 năm 2021 Sinh viên thực Nguyệt Nguyễn Thị Ánh Nguyệt ii   MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix TÓM TẮT x PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Kĩ thuật nuôi cấy mô 2.1.1 Khái niệm nuôi cấy mô thực vật 2.1.2 Cơ sở khoa học chung nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.3 Lợi ích nhân giống ni cấy mô tế bào thực vật 2.1.4 Các giai đoạn nhân giống in vitro 2.2 Giới thiệu chung Lô hội 2.2.1 Lịch sử phát triển Lô hội 2.2.2 Đặc điểm Lô hội 2.2.3 Đặc điểm sinh học Lô hội 2.2.4 Phân bố địa lý Lô hội 2.2.5 Thành phần hóa học Lơ hội 10 2.3 Các nghiên cứu nhân giống Lô hội 13 2.3.1 Nhân giống trực tiếp 13 2.3.2 Nhân giống gián tiếp 13 iii   2.4 Khai thác chế biến Lô hội 14 PHẦN III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Đối tượng, vật liệu phạm vi nghiên cứu 15 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 15 3.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 3.2 Nội dung phương pháp thí nghiệm 16 3.2.1 Nội dung nghiên cứu 16 3.2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Nghiên cứu chế độ khử trùng mẫu Lô hội Mỹ Thái 23 4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả sống mẫu cấy Lô hội Mỹ Thái 23 4.2 Nghiên cứu khả tái sinh chồi Lô hội Mỹ Thái 25 4.2.1 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ Thái Lan 26 4.2.2 Ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi mẫu cấy 28 4.3 Nghiên cứu khả nhân nhanh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ Thái Lan 32 4.3.1 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi 32 4.3.2 Ảnh hưởng tổ hợp Kinetin α-NAA đến khả nhân nhanh chồi 35 4.4 Nghiên cứu khả tạo hồn chỉnh mẫu cấy Lơ hội Mỹ Thái 38 4.4.1 Ảnh hưởng nồng độ α-NAA đến khả rễ chồi 38 4.4.2 Ảnh hưởng số Auxin đến khả rễ mẫu cấy 41 iv   4.5 Nghiên cứu khả thích ứng ngồi vườn ươm Lơ hội có nguồn nguồn gốc từ Mỹ Thái Lan 42 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 45 5.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC 47 v   DANH MỤC BẢNG   Bảng 4.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả sống mẫu cấy Lô hội Mỹ Thái (sau 14 ngày) 23 Bảng 4.2 Ảnh hưởng khử trùng Nano Bạc đến khả sống mẫu cấy Lô hội Mỹ Thái (sau 14 ngày) 24 Bảng 4.3 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ (sau tháng ni cấy) 26 Bảng 4.4 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Thái Lan (sau tháng nuôi cấy) 27 Bảng 4.5 Ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ (sau tháng ni cấy) 29 Bảng 4.6 Ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Thái Lan (sau tháng nuôi cấy) 30 Bảng 4.7 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh củachồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ (sau tháng ni cấy) 32 Bảng 4.8 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Thái Lan (sau tháng nuôi cấy) 33 Bảng 4.9 Ảnh hưởng tổ hợp Kinetin α-NAA đến khả nhân nhanh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ (sau tháng nuôi cấy) 35 Bảng 4.10 Ảnh hưởng tổ hợp Kinetin α-NAA đến khả nhân nhanh chồi mẫu cấy có nguồn gốc từ Thái Lan (sau tháng nuôi cấy) 36 Bảng 4.11 Ảnh hưởng nồng độ α-NAA đến khả rễ chồi có nguồn gốc từ Thái Lan (sau tháng nuôi cấy) 38 Bảng 4.12 Ảnh hưởng nồng độ α-NAA đến khả rễ chồi có nguồn gốc từ Mỹ (sau tháng nuôi cấy) 39 Bảng 4.13 Ảnh hưởng số Auxin đến khả rễ mẫu cấy có nguồn gốc từ Mỹ (sau tháng nuôi cấy) 41 vi   Bảng 4.14 Ảnh hưởng số Auxin đến khả rễ mẫu cấy có nguồn gốc từ Thái Lan (sau tháng nuôi cấy) 41 Bảng 4.15 Ảnh hưởng loại giá thể khác đến sống Lô hội (sau tháng) …………………………………………………………….47   vii   DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Cây Lơ hội (Aloe Vera Linne) 15 Hình 4.1 Các mẫu Lơ hội bị nhiễm vi sinh vật 25 Hình 4.2 Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Lô hội Mỹ (sau tháng) 27 Hình 4.3 Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả 28 Hình 4.4 Ảnh hưởng Kinetin đến khả 30 Hình 4.5 Ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi mẫu Lô hội Thái (sau tháng nuôi cấy) 31 Hình 4.6 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lô hội Mỹ (sau tháng nuôi cấy) 33 Hình 4.7 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh 34 Hình 4.8 Ảnh hưởng tổ hợp Kinetin α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Lô hội Mỹ (sau tháng nuôi cấy) 36 Hình 4.9 Ảnh hưởng tổ hợp Kinetin α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Lô hội Thái (sau tháng nuôi cấy) 37 Hình 4.10 Ảnh hưởng nồng độ α-NAA đến khả rễ chồi Lô hội Mỹ (sau tháng nuôi cấy) 40 Hình 4.11 Ảnh hưởng nồng độ α-NAA đến khả rễ chồi Lô hội Thái (sau tháng nuôi cấy) 40 Hình 4.12 Ảnh hưởng số Auxin đến khả rễ mẫu cấy (sau tháng nuôi cấy) 42 Hình 4.13 Ảnh hưởng loại giá thể khác đến sống Lô hội Mỹ Thái 43 viii   DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BA Benzyl adenine CT Công thức CV Coeff Var ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole-3-butyric acid LSD0,05 Least Significant Difference MS Murashige Skoog UV Ultraviolet VSV Vi simh vật α-NAA α-naphtyl axetic acid ix   Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.000327 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.034 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A 1.44000 B 1.22667 C 1.16000 D 1.27000 3 E 02:57 Friday, August 21, 2021 1.13000 CHIEU CAO THAI LAN 10 The ANOVA Procedure Class Level Information Class 02:57 Friday, August 21, 2021 Levels Values K 3 T 5 Number of Observations Read Number of Observations Used CHIEU CAO THAI LAN 11 15 15 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y DF Sum of Squares Mean Square F Value Source Pr > F Model 0.0012 0.12878667 0.02146444 12.22 Error 0.01405333 0.00175667 14 0.14284000 Corrected Total 57   R-Square Coeff Var Root MSE 0.901615 3.347652 0.041913 Y Mean 1.252000 F Value 0.76 17.95 Source Pr > F DF Anova SS Mean Square 0.00268000 0.00134000 0.12610667 0.03152667 K 0.4975 T 0.0005 CHIEU CAO THAI LAN 02:57 Friday, August 21, 2021 12 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.001757 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.0789 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A A A 1.37000 1.35000 B B B B B 1.22333 1.16667 3 1.15000 58   HE SO NHAN MY 11:20 Thursday, August 21, 2021 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values K 3 T 6 Number of Observations Read Number of Observations Used HE SO NHAN MY 11:20 Thursday, August 21, 2021 18 18 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y DF Sum of Squares Mean Square F Value Source Pr > F Model F DF Anova SS Mean Square K 0.8895 T 1399.99 F DF 60 Sum of Squares Mean Square   Model F DF Anova SS Mean Square 0.00443333 0.00221667 2.90278333 0.58055667 K 0.1457 T F Model F DF Anova SS Mean Square K 0.1270 T 2046.65 F DF 63 Sum of Squares Mean Square   Model F DF Anova SS Mean Square 0.00103333 0.00051667 2.06600000 0.41320000 K 0.4609 T F Model F DF Anova SS Mean Square K 0.8087 T 1542.26 F DF 66 Sum of Squares Mean Square   11775.1 Model F DF Anova SS Mean Square K 0.0062 T F Model F DF Anova SS Mean Square K 0.8087 T 1542.26 F DF 69 Sum of Squares Mean Square   11775.1 Model F DF Anova SS Mean Square K 0.0062 T