Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hoá học trong một số dịch chiết hạt điều nhuộm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯƠNG THỊ VƯƠNG CANG NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT HẠT ĐIỀU NHUỘM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯƠNG THỊ VƯƠNG CANG NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT HẠT ĐIỀU NHUỘM Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ Mã ngành: 60 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Đào Hùng Cường Đà Nẵng - Năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Trương Thị Vương Cang MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục luận văn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐIỀU NHUỘM 1.1.1 Thực vật học điều nhuộm 1.1.2 Phẩm màu annatto 11 1.1.3 Tính chất hóa học phẩm màu annatto 11 1.1.4 Ứng dụng phẩm màu hạt điều nhuộm 13 1.1.5 Tình hình nghiên cứu 15 1.2 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT TÁCH HỢP CHẤT HỮU CƠ 17 1.2.1 Phương pháp hồ tan dung mơi hữu 17 1.2.2 Phương pháp chiết 18 1.3 PHÂN TÍCH TRỌNG LƯỢNG 21 1.4 PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ AAS 22 1.4.1 Giới thiệu phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử AAS 22 1.4.2 Nguyên tắc trang bị phép đo AAS 23 1.5 PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ UV-Vis 25 1.5.1 Giới thiệu phương pháp 25 1.5.2 Nguyên tắc trang thiết bị phép đo 25 1.6 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ GC-MS 26 1.6.1 Phương pháp sắc ký khí GC (Gas chromatoghraphy) 26 1.6.2 Phương pháp khối phổ MS (Mass Spectrometry) 29 1.6.3 Khối phổ kết hợp với sắc ký khí 30 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 32 2.1.1 Nguyên liệu 32 2.1.2 Hoá chất 32 2.1.3 Thiết bị - Dụng cụ 32 2.2 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ 33 2.2.1 Xác định độ ẩm hạt điều nhuộm 33 2.2.2 Xác định hàm lượng tro hạt điều nhuộm 33 2.2.3 Xác định hàm lượng kim loại hạt điều nhuộm 35 2.3 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN CHIẾT HẠT ĐIỀU NHUỘM BẰNG MỘT SỐ DUNG MÔI HỮU CƠ 35 2.3.1 Khảo sát thời gian chiết dung môi khác nhau……… 35 2.3.2 Đo mật độ quang phương pháp UV-Vis… 36 2.3.3 Xác định khối lượng riêng dịch chiết 36 2.3.4 Định lượng phẩm màu dung môi ethyl acetate .…….…37 2.4 XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT HẠT ĐIỀU NHUỘM 38 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ 41 3.1.1 Độ ẩm hạt điều nhuộm 41 3.1.2 Hàm lượng tro 42 3.1.3 Hàm lượng kim loại 42 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT THỜI GIAN CHIẾT BẰNG CÁC DUNG MÔI KHÁC NHAU 43 3.2.1 Bằng dung môi n-hexane 43 3.2.2 Bằng dung môi dichloromethane 46 3.2.3 Bằng dung môi ethyl acetate 48 3.2.4 Bằng dung môi methanol 51 3.2.5 Kết định lượng phẩm màu dung môi ethyl acetate 54 3.3 XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT HẠT ĐIỀU NHUỘM 55 3.3.1 Dịch chiết dung môi n-hexane 55 3.3.2 Dịch chiết dung môi dichloromethane 59 3.3.3 Dịch chiết dung môi ethyl acetate 63 3.3.4 Dịch chiết dung môi methanol 66 3.3.5 Tổng kết thành phần hóa học dịch chiết hạt điều nhuộm 70 3.3.6 Kiểm tra công thức cấu tạo Geranylgeraniol phương pháp phân mảnh phổ MS……….……………… …… ……….76 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (Bản sao) DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT UV-Vis : Utraviolet-Visible AAS : Atomic Absorption Spectrophotometric GC : Gas Chromatoghraphy MS : Mass Spectrometry STT : Số thứ tự TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam CTCT : Công thức cấu tạo DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Các thành phần hóa học có hạt điều nhuộm 3.1 Độ ẩm hạt điều nhuộm 41 3.2 Hàm lượng tro hạt điều nhuộm 42 3.3 Hàm lượng số kim loại hạt điều nhuộm 43 3.4 Mật độ quang dịch chiết n-hexane 44 3.5 Kết khảo sát thời gian chiết dung môi n-hexane 45 3.6 Mật độ quang dịch chiết dichloromethane 46 3.7 Kết khảo sát thời gian chiết dung môi dichloromethane 48 3.8 Mật độ quang dịch chiết ethyl acetate 49 3.9 Kết khảo sát thời gian chiết dung môi ethyl acetate 50 3.10 Mật độ quang dịch chiết methanol 52 3.11 Kết khảo sát thời gian chiết dung môi methanol 53 3.12 Thành phần định danh dịch chiết n-hexane hạt điều nhuộm 56 3.13 Thành phần định danh dịch chiết dichloromethane hạt điều nhuộm 60 3.14 Thành phần định danh dịch chiết ethyl acetate hạt điều nhuộm 64 3.15 Thành phần định danh dịch chiết methanol hạt điều nhuộm 67 3.16 Tổng hợp kết định danh thành phần hóa học dịch chiết từ hạt điều nhuộm 70 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình hình vẽ Trang 1.1 Cây điều nhuộm 1.2 Hoa điều nhuộm 1.3 Quả điều nhuộm non 1.4 Quả điều nhuộm già 1.5 Phẩm màu annatto 11 1.6 CTCT cis - Bixin 12 1.7 CTCT trans - Bixin 12 1.8 CTCT cis - Norbixin 13 1.9 CTCT trans - Norbixin 13 1.10 Annatto magarin 14 1.11 Annatto đồ uống 14 1.12 Sơ đồ thiết bị đo quang phổ hấp thụ nguyên tử 24 1.13 Sơ đồ máy quang phổ hấp thụ phân tử UV-Vis 26 1.14 Sơ đồ máy sắc ký khí GC 27 2.1 Hạt điều nhuộm khơ 32 3.1 Dịch chiết n-hexane 43 3.2 Phổ hấp thụ phân tử dịch chiết n-hexane 44 3.3 Dịch chiết dichloromethane 46 3.4 Phổ hấp thụ phân tử dịch chiết dichloromethane 47 3.5 Dịch chiết ethyl acetate 49 3.6 Phổ hấp thụ phân tử dịch chiết ethyl acetate 49 3.7 Dịch chiết methanol 51 69 29.675 0.66 10 34.826 0.39 11 36.222 63.51 n-Hexadecanoic acid (C16H32O2) Linoleic acid (C18H32O2) Geranylgeraniol (C20H34O) (2Z,6E,10E)3,7,11,15tetramethyl- 12 37.589 0.93 2,6,10,14hexadecatetraen1-ol (C20H34O) 2-methyl-3-(3methyl-but-2-enyl)-2- 13 39.178 0.20 (4-methyl-pent-3enyl)-oxetane (C15H26O) 14 45.438 0.22 γ-Sitosterol (C29H50O) Nhận xét: Kết GC-MS cho thấy định danh 14 cấu tử dịch chiết methanol từ hạt điều nhuộm, chiếm 69.71% tổng số cấu tử chiết Các cấu tử chủ yếu hợp chất có độ phân cực vừa hợp chất chứa nhóm ancol, axit, este có gốc hidrocacbon thơm Điều giải thích methanol dung mơi phân cực mạnh có khả hịa tan 70 tốt chất phân cực trung bình yếu đến mạnh Do có cấu trúc tương tự nên cấu tử dễ dàng phân bố vào pha dung môi methanol Trong 14 cấu tử định danh, cấu tử chiếm hàm lượng cao Geranylgeraniol (63.51%) Ngoài ra, dịch chiết chứa số chất khác có hàm lượng như: Spathulenol (1.03%), Methyl m-toluate (0.80%), (2Z,6E,10E)-3,7,11,15tetramethyl-2,6,10,14-hexadecatetraen-1-ol (0.93%); cấu tử cịn lại có hàm lượng thấp 0.19 – 0.66% Một số chất có hoạt tính sinh học mạnh tìm thấy dịch chiết Geranylgeraniol, Spathulenol 3.3.5 Tổng kết thành phần hóa học dịch chiết hạt điều nhuộm Bảng 3.16 Tổng hợp kết định danh thành phần hóa học dịch chiết từ hạt điều nhuộm STT Tên chất 1R-.alpha.-Pinene Diện tích pic dịch chiết (%) nDichloro Ethyl Methanol hexane methane acetate 0.07 0.47 - 2-(3-Isopropyl-42 methyl-pent-3-en-1ynyl)-2-methyl- 0.08 - - - cyclobutanone Caryophyllene 0.08 0.08 - α-Himachalene 1.01 1.24 - - β-Cadinene 0.38 0.38 0.55 - δ-Cadinene 0.08 0.08 0.11 0.87 0.84 - 0.30 0.57 0.64 0.56 0.64 Trimethyl hydroquinone Selina-6-en-4-ol 71 Spathulenol 0.76 - 0.77 1.03 0.87 - - 0.93 (2Z,6E,10E)10 3,7,11,15-tetramethyl -2,6,10,14-hexadeca tetraen-1-ol 11 n-Hexadecanoic acid 0.11 - 0.25 0.66 12 Geranylgeraniol 56.04 48.50 45.67 63.51 0.47 - 7.61 - (2E,6E,10E)-3,7,11,15 13 -tetramethyl-2,6,10, 14-hexadecatetraenyl acetate 14 β-Springene 0.76 1.54 1.80 - 15 (all-E)- Squalene 0.11 0.13 - - 16 Stigmasterol 0.26 0.17 - - 0.45 0.43 0.35 - 0.32 0.21 0.24 - 17 4,22-Stigmastadiene3-one 18 Testosterone 19 p-Xylene - 9.20 - - 20 beta.-Pinene - 0.21 - - 21 Methyl m-toluate - 0.29 0.21 0.80 22 α-Selinene - 0.20 - - - 0.58 - - (3E,6E,10E)-3,7,11,15 23 -tetramethyl-1,3,6,10, 14-hexadecapentaene 24 (E,E)-Farnesol - 0.75 - - 25 Aristolene - - 0.20 - 72 26 27 28 29 30 31 Valencene Calarene (β-Gurjunene) (22E)-Chola-5,22dien-3-ol 2-hydroxy cyclopent-2-en-1-one Methyl levulinate Methyl 4-oxo-2pentenoate - - 0.13 - - 0.15 - - - 0.31 - - - - 0.21 - - - 0.19 - - - 0.39 32 p-Acetyltoluene - - - 0.24 33 Linoleic acid - - - 0.39 - - - 0.20 - - - 0.22 2-methyl-3-(3-methyl34 but-2-enyl)-2-(4methyl-pent-3-enyl)oxetane 35 γ-Sitosterol Nhận xét chung: Từ bảng 3.16 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 35 cấu tử dịch chiết; đó, dịch chiết n-hexane 18 cấu tử (63.29%), dịch chiết dichloromethane 19 cấu tử (65.94%), dịch chiết ethyl acetate 15 cấu tử (58.91%), dịch chiết methanol 14 cấu tử (69.71%) Dựa vào phần trăm diện tích pic, chúng tơi nhận thấy hàm lượng phần trăm cấu tử định danh dịch chiết methanol lớn nhất, đến dịch chiết dichloromethane, dịch chiết n-hexane, nhỏ dịch chiết ethyl acetate Điều chứng tỏ methanol dichloromethane có khả 73 hòa tan tốt chiết nhiều cấu tử phân cực không phân cực với hàm lượng lớn từ hạt điều nhuộm Cả dịch chiết có mặt cấu tử Geranylgeraniol Selina-6-en-4ol cấu tử có khả hịa tan dung môi Riêng Geranylgeraniol phát dung môi với hàm lượng lớn nhất: n-hexane: 56.04%, dichloromethane: 48.50%, ethyl acetate: 45.67%, methanol: 63.51% Có thể khẳng định Geranylgeraniol thành phần hạt điều nhuộm, kết phù hợp với phát cơng trình cơng bố [17], [18], [24] Trong cấu tử định danh, có nhiều hợp chất có hoạt tính sinh hoạt cao ứng dụng nhiều y học như: - Geranylgeraniol Trong dịch chiết từ hạt điều nhuộm, Geranylgeraniol có hàm lượng cao dịch chiết methanol (63.51%) Như vậy, sử dụng methanol làm dung mơi thích hợp để chiết tách Geranylgeraniol từ hạt điều nhuộm Ngoài ra, với hàm lượng phần trăm phát lớn thế, xem hạt điều nhuộm nguồn cung cấp Geranylgeraniol đáng kể Geranylgeraniol ancol diterpene (có đơn vị isoprene) có vai trị quan trọng q trình sinh học Nó chất trung gian việc tổng hợp terpene khác vitamin E, K [32] Ngoài ra, dẫn xuất quan trọng Geranylgeraniol Geranylgeranyl pyrophosphate, tổng hợp HMG-CoA reductase mã hóa gen Columbus [21] Trong thực vật, tiền thân carotenoids, giberelin, tocopherols chlorophyll Cả Geranylgeraniol Geranylgeranyl pyrophosphate sử dụng trình dịch mã để tổng hợp geranylgeranylated protein, dạng prenylated protein tế bào người, có vai trị quan trọng gắn kết màng tế bào đến chức trung tâm sinh học tế bào bệnh lý (Hình 3.14 74 [33]) Quá trình tổng hợp gọi Geranylgeranyl hóa Sự tổng hợp prenylated protein cạnh tranh với tổng hợp Cholesterol mơ tế bào, có lợi việc giảm lượng Cholesterol máu, hạn chế bệnh tim mạch, xơ vữa động mạch, bệnh gan… Hình 3.14 Con đường chuyển hóa HMG-CoA reductase Geranylgeraniol pheromone cho ong vò vẽ nhiều loại trùng khác Pheromone giữ vai trị nhiều hoạt động đời sống trùng Nó chất báo động, chất giúp cho trùng biết nhận nhau, chất hấp dẫn sinh dục, chất định cho việc tụ tập lại thành đàn côn trùng, chất định cho lồi hình cá thể trùng sống thành tập thể [32] Ngoài ra, Geranylgeraniol chất ức chế 75 mạnh Mycobacterium tuberculosis (vi khuẩn lao) phịng thí nghiệm [16], [27] - (E,E)-Farnesol Từ kết GC-MS dịch chiết cho thấy, (E,E)-Farnesol tìm thấy dịch chiết dichloromethane (0.75%) (E,E)-Farnesol sesquiterpene (3 đơn vị isoprene) Tương tự Geranylgeraniol, (E,E)-Farnesol sản phẩm trung gian trình sinh tổng hợp terpenoid có hoạt tính sinh học cao (Hình 3.14) Dẫn xuất phosphate Farnesol đóng vai trị quan trọng q trình Các hợp chất nhân đôi để tạo thành squalene 30-carbon, tiền chất steroid thực vật, động vật nấm Như vậy, (E,E)Farnesol dẫn xuất hợp chất khởi đầu quan trọng cho tổng hợp hữu tự nhiên nhân tạo [28] (E,E)-Farnesol hợp chất chứng minh có đặc tính chống khối u chống vi khuẩn, sử dụng nhiều sản phẩm mỹ phẩm để khử mùi tạo mùi hương Tuy nhiên, (E,E)-Farnesol gây kích ứng da, người bị dị ứng với nước hoa khơng nên dùng sản phẩm có hóa chất [28] - Spathulenol Trong dịch chiết từ hạt điều nhuộm, Spathulenol có hàm lượng cao dịch chiết methanol (1.03%) Spathulenol ancol sesquiterpene vịng, có khung tương tự azulene Spathulenol chất có hoạt tính sinh học mạnh, có tác dụng ức chế miễn dịch, hỗ trợ việc điều trị ung thư hóa trị [30] Ngoài ra, dịch chiết từ hạt điều nhuộm cịn tìm thấy số chất có hoạt tính sinh học cao với hàm lượng nhỏ : Stigmasterol, (all-E)Squalene, γ-Sitosterol… 76 Stigmasterol hữu ích việc ngăn ngừa số bệnh ung thư, bao gồm ung thư buồng trứng, tuyến tiền liệt, ung thư vú ung thư ruột kết Sigmasterol chứng minh ức chế suy thối viêm xương khớp thối hóa sụn [29] Một số nghiên cứu khác chứng minh Stigmasterol chống viêm, ức chế phát huy khối u, ngăn vi rút HIV chép ngược (all-E)-Squalene triterpene phần quan trọng tổng hợp tất sterol thực vật động vật, bao gồm cholesterol, hormon steroid vitamin D thể người (all-E)-Squalene có nhiều gan cá mập, hạt rau dền, cám gạo, mầm lúa mì, liu (all-E)-Squalene cịn chất béo tự nhiên tế bào da người tạo ra, sử dụng mỹ phẩm, làm kem dưỡng da chất hỗ trợ miễn dịch vắc xin [31] γ-Sitosterol có tác dụng giảm mỡ máu, điều hịa chuyển hóa cholesterol máu, chống bệnh tiểu đường, chống ung thư, kháng khuẩn, chống viêm, trị tiêu chảy kháng virus Kết hợp kết xác định hợp chất chiết nước dầu bảng 1.1 với kết định danh GC-MS hợp chất chiết dung môi hữu (n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, methanol) từ hạt điều nhuộm đề tài này, nhận thấy tổng cộng có 134 cấu tử định danh, có cấu tử bị trùng lặp α-Pinene, Caryophyllene, δ-Cadinene, Spathulenol, p-Xylene, β-Pinene, Aristolene, Valencene 3.3.6 Kiểm tra công thức cấu tạo Geranylgeraniol phương pháp phân mảnh phổ MS Dựa kết phân tích phổ đồ GC-MS, nhận thấy bốn dung môi chiết xuất hạt điều nhuộm chứa hợp chất Geranylgeraniol; đó, dịch chiết dung mơi methanol chứa hàm lượng hợp chất cao 77 (63.51%) Do đó, xem Geranylgeraniol thành phần hóa học hạt điều nhuộm, có vai trị quan trọng q trình chuyển hóa sinh học thể người động vật, làm giảm huyết áp, giảm Cholesterol máu, chữa ho lao, chống ung thư chất chống tia cực tím, chống oxi hố giúp bảo vệ gan… Từ kết phân tích phổ đồ GC-MS, chúng tơi tiến hành phân tích phổ khối MS hợp chất Geranylgeraniol hình 3.15 Hình 3.15 Phổ khối Geranylgeraniol dịch chiết methanol Phân tích phổ khối Geranylgeraniol hình 3.15 cho thấy, pic 290.3 hợp chất Geranylgeraniol (C20H34O) CH3 H3C CH3 CH3 CH3 OH Theo kết phân tích phổ khối MS Geranylgeraniol, kết hợp với phần mềm phân mảnh Chemsketch 12.0, xác định hướng phân mảnh hợp chất Geranylgeraniol xảy hình 3.16 78 H3C H3C 13 CH3 CH3 CH3 (2) 12 C15H25O 221.1905 Da C5H9 69.0704 Da H3C (1) (1) OH H H3C C4H7O 71.0497 Da Formula Weight +.= CH3 C10H17 137.133 Da Formula Weight Molecular Formula = C20H34O C6H11 83.0861 Da CH3 CH3 = 220.39352 + [M 1] 290.48336 [M] C9H14 122.1096 Da (2) H3C CH2 14.0157 Da CH3 + CH2 + H2C HO 17.0027 Da Formula Weight CH3 CH3 CH3 H3C + CH2 H3C C14H21 189.1643 Da CH2 14.0157 Da Formula Weight [M 1] 2+ + OH H2C = 136.2329428 [M1 2] H H 1.0078 Da = 221.3578514 + Formula Weight = 69.1244114 [M 2]+ H3C CH2 14.0157 Da CH3 2+ + CH H2C Formula Weight 3+ CH3 CH3 CH3 = 121.1978742 [M 3] C6H9 81.0704 Da C8H12 108.0939 Da C8H11 107.0861 Da + + C + C Formula Weight CH2 = 189.3148942 [M ] 3+ H3C CH3 + C4H5 C 53.0391 Da C4H6 54.047 Da 2+ CH Formula Weight = 107.1712942 [M 4] 3+ CH3 + + H2C + C CH2 CH3 Formula Weight = 81.1340142 [M 4] 3+ 2+ + CH H2C Formula Weight = 55.0967342 [M1 5] 3+ Hình 3.16 Sơ đồ phân mảnh Geranylgeraniol Dựa trình phân mảnh hình 3.16, chúng tơi nhận thấy hướng mà hợp chất Geranylgeraniol thể là: - Hướng 1: [M]+• (290.483) → [M1.5]3+ (55.096) - Hướng 2: [M]+• (290.483) → [M2.2]+ (69.124) [M2.4]3+ (81.134) Như vậy, từ kết nhận phổ khối hình 3.15 chế phân mảnh hình 3.16, chúng tơi kiểm tra cơng thức cấu tạo hợp chất Geranylgeraniol là: 79 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong trình triển khai nghiên cứu, đề tài đạt kết sau: Đã xác định số thơng số hóa lý ngun liệu: - Độ ẩm trung bình: 11.707% - Hàm lượng tro trung bình: 8.714% - Hàm lượng số kim loại có hạt điều nhuộm Cu, Zn, Pb, As, Hg hàm lượng cho phép sử dụng an toàn theo tiêu chuẩn Việt Nam Đã xác định thời gian thích hợp để chiết chất màu cao từ hạt điều nhuộm là: - Dung môi n-hexane: 6h - Dung môi dichloromethan: 8h - Dung môi ethyl acetate: 6h - Dung môi methanol: 6h Đã định lượng hàm lượng tổng phầm màu 10.385% (tính theo bixin), đạt yêu cầu kỹ thuật định lượng màu annatto QCVN 4-10: 2010/BYT Đã định danh thành phần hóa học số dịch chiết từ hạt điều nhuộm: dịch chiết n-hexan 18 cấu tử; dịch chiết ethyl acetate 15 cấu tử; dịch chiết dichloromethane 19 cấu tử; dịch chiết methanol 14 cấu tử Tổng cộng định danh 35 cấu tử dịch chiết từ hạt điều nhuộm - Cấu tử chiếm hàm lượng cao nhất, có mặt dịch chiết Geranylgeraniol (n-hexane: 56.04%, dichloromethane: 48.50%, ethyl acetate: 45.67%, methanol: 63.51%) 80 - Trong số thành phần định danh có hợp chất có hoạt tính sinh học cao như: Geranylgeraniol, (E,E)-Farnesol, Spathulenol, Stigmasterol, γ-Sitosterol, (all-E)-Squalene… Kiểm tra, xác định công thức cấu tạo Geranylgeraniol phương pháp phân mảnh phổ MS là: KIẾN NGHỊ Mở rộng phạm vi nghiên cứu đề tài theo hướng: Tiếp tục nghiên cứu theo hướng sâu hơn: chạy sắc kí mỏng để phân lập cấu tử tinh khiết từ dịch chiết hạt điều nhuộm Làm giàu cấu tử chính, thử hoạt tính sinh học nghiên cứu phản ứng chuyển hóa chúng Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hoá học dịch chiết hạt điều nhuộm dung môi khác TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam, tập I, Nhà xuất Y học [2] Bộ Y tế (2010), Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia phụ gia thực phẩm phẩm màu, Hà Nội, tr 65-66 [3] Hoàng Minh Châu, Từ văn Mạc, Từ Vọng Nghi (2007), Cơ sở hóa học phân tích, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [4] Trịnh Đình Chính, Nguyễn Thị Bích Tuyết (2003), Giáo trình hợp chất tự nhiên, Trường Đại học sư phạm, Đại học Huế [5] Đào Hùng Cường (2009), Hợp chất hữu hidrocacbon, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội [6] Đào Hùng Cường, Phan Thảo Thơ (2008), Nghiên cứu thành phần phản ứng chuyển hóa hợp chất hóa học hạt điều nhuộm miền Trung, Tây Nguyên, Đề tài cấp Nhà nước [7] Nguyễn Hữu Đĩnh, Trần Thị Đà (1999), Ứng dụng số phương pháp phổ nghiên cứu cấu trúc phân tử, Nhà xuất giáo dục [8] Trần Tứ Hiếu (2002), Hóa học phân tích, Nhà xuất Đại học quốc gia, Hà Nội [9] Lê Văn Nhân, Phan Bảo An (1995), “Cây điều nhuộm”, Khoa học phổ thông, (199), tr 10-13 [10] Hồ Viết Q (2000), Phân tích hóa lý, Nhà xuất giáo dục [11] Trần Văn Sung (2010), Phân tích cấu trúc hợp chất hữu cơ, Giáo trình cao học, Viện cơng nghệ Hóa học - Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam [12] Ngô Thị Thuận (2001), Thực tập hóa học hữu cơ, Nhà xuất Đại học quốc gia, Hà Nội [13] Phạm Hùng Việt (2006), Sắc ký khí, sở lý thuyết khả ứng dụng, Nhà xuất Đại học quốc gia Hà Nội, Hà Nội [14] Bùi Xn Vững (2010), Phân tích cơng cụ hóa hữu cơ, Giáo trình cao học, Trường Đại học sư phạm Đà Nẵng Tiếng Anh [15] Alan Mortensen (2006), “Carotenoids and other pigments as natural colorants”, Pure Appl Chem, 78(8), pp 1477-1491 [16] Amel Dudakovic, Andrew J Wiemer, et al (2008), “Inhibition of geranylgeranyl diphosphate synthase induces apoptosis through multiple mechanisms and displays synergy with inhibition of other isoprenoid biosynthetic enzymes”, J Pharmacol Exp Ther, 324(3), 1028-36 [17] Chao, R.R., et al (1991), “Supercritical CO2 Extraction of Annatto (Bixa orellana) Pigments and Some Characteristics of the Color Extracts”, Journal of Food Science, 56(1), pp 80-83 [18] Craveiro, A A., et al (1989), “The Presence of Geranylgeraniol in Bixa Orelana Linn.”, Quimica Nova, 12(3), pp 297-298 [19] Francisco Delgado Vargas, Octavio Paredes- López (2003), Natural colorants for food and nutraceutical uses, CRC Press [20] Hyman, E L., et al (1990), “Reorienting Export Production to Benefit Rural Producers: Annatto Processing in Peru”, Journal of Rural Studies, 6(1) pp 85-101 [21] Jiang Yu, et al (1995), “BTS1 Encodes a Geranylgeranyl Diphosphate Synthase in Saccharomyces cerevisiae”, The Journal of Biological Chemistry, 270, pp 21793-21799 [22] Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (2006), Combined compendium of food additive specifications, Food and agriculture organization of the united nations, Rome, Vol.3 [23] Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (2006), Combined compendium of food additive specifications, Food and agriculture organization of the united nations, Rome, Vol.4 [24] Jondiko, I J O and Pattenden, G (1989), “Terpenoids and an Apocarotenoid from Seeds of Bixa Orellana”, Phytochemistry, 28(11), pp 3159-3162 [25] Preston, H.D and Rickard, M.D (1980), “Extraction and Chemistry of annatto”, Food Chemistry, 40, pp 56-59 [26] Reith, J.F and Gielen, J.W (1971), “Properties of Bixin and Norbixin and the composition of annatto extracts”, J Food Sci., 36, pp 861864 [27] Vik, A James, A Gundersen, LL (2007), “Screening of terpenes and derivatives for antimycobacterial activity; identification of geranylgeraniol and geranylgeranyl acetate as potent inhibitors of Mycobacterium tuberculosis in vitro”, Planta medica, 73(13), pp 1410-2 Internet [28] http://en.wikipedia.org/wiki/Farnesol (11/02/2015) [29] http://en.wikipedia.org/wiki/Stigmasterol (27/03/2015) [30] http://de.wikipedia.org/wiki/Spathulenol (12/04/2015) [31] http://en.wikipedia.org/wiki/Squalene#Role_in_steroid_synthesis (19/04/2015) [32] http://en.wikipedia.org/wiki/Geranylgeraniol (01/05/2015) [33] https://vi.wikipedia.org/wiki/Cholesterol (07/05/2015) ... điều nhuộm, định chọn đề tài ? ?Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hoá học số dịch chiết hạt điều nhuộm? ?? nhằm cung cấp thơng tin hồn thiện thành phần hoá học loại này, góp phần vào việc khai... lý Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu quy trình chiết tách hợp chất có dịch chiết hạt điều nhuộm - Xác định thành phần hoá học, công thức cấu tạo số hợp chất có dịch chiết hạt điều nhuộm Đối tượng... gian chiết dung môi methanol 53 3.12 Thành phần định danh dịch chiết n-hexane hạt điều nhuộm 56 3.13 Thành phần định danh dịch chiết dichloromethane hạt điều nhuộm 60 3.14 Thành phần định danh dịch