Luận văn tốt nghiệp cô lập chất từ cao etyl acetat của cây rau má lá sen hydrocotyle bonariensis l , họ ngò (apiaceae)

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC  HUỲNH TRẦN MINH TUYỀN CƠ LẬP CHẤT TỪ CAO ETYL ACETAT CỦA CÂY RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L., HỌ NGÒ (APIACEAE) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: HÓA HỌC CẦN THƠ - 2011 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC  ḶN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CÔ LẬP CHẤT TỪ CAO ETYL ACETAT CỦA CÂY RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L., HỌ NGỊ (APIACEAE) Hướng dẫn khoa học: ThS Tơn Nƣ̃ Liên Hƣơng Sinh viên thực hiện: Huỳnh Trần Minh Tuyề n - 2072119 Chuyên ngành: HÓA HỌC – K33 CẦN THƠ - 2011 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 LỜI MỞ ĐẦU - - Ngày nay, việc nghiên cứu hợp chất thiên nhiên trở thành lĩnh vực quan trọng ngành Hóa Học Hữu Cơ ngồi nƣớc Phần lớn hợp chất đƣợc phân lập từ thực vật hay động vật có hoạt tính sinh học, có tác dụng lên số loại vi sinh vật có hại nên đƣợc dùng nông nghiệp, khoa học nhƣ chữa bệnh cho ngƣời,… Cây rau má sen (Hydrocotyle bonariensis L.), họ Ngò (Apiaceae) loài rau đƣợc định danh Việt Nam năm gần Trên thử nghiệm bƣớc đầu cho thấy, hợp chất rau má sen có số hoạt tính sinh học đáng ý Khảo sát thành phần hóa học loại hứa hẹn đem lại nhiều điều thú vị đóng góp hữu ích Trong đề tài này, tiến hành điều chế cao metanol tổng từ nguyên liệu bột phƣơng pháp ngâm dầm kết hợp kỹ thuật chiết rắn-lỏng để điều chế loại cao có mức độ phân cực khác sử dụng phƣơng pháp sắc ký cột kết hợp sắc ký lớp mỏng cao etyl acetat rau má sen để cô lập hợp chất, tinh chế hợp chất phƣơng pháp kết tinh lại Xác định cấu trúc hợp chất dựa liệu phổ NMR SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 MỤC LỤC CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT 1.1 Khái quát chi Hydrocotyle 1.2 Giới thiệu rau má sen Hydrocotyle bonariensis L .6 1.2.1 Danh pháp phân loại 1.2.1 Mô tả đặc điểm, xuất xứ phân bố 1.2.2 Thành phần hóa học 1.2.3 Công dụng CHƢƠNG 2: GIỚI THIỆU VỀ STEROID GLYCOSID 2.1 Sơ lƣợc steroid 2.2 Glycosid .11 2.2.1 Khái niệm glycosid 11 2.2.2 Phân loại glycosid 12 CHƢƠNG 3: CƠ SỞ LÝ THUYẾT MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 16 3.1 Các kỹ thuật chiết tách hợp chất khỏi 16 3.1.1 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng 16 3.1.2 Kỹ thuật chiết rắn-lỏng .17 3.2 Một số kỹ thuật sắc ký 20 3.2.1 Sắc ký cột 20 Nạp chất hấp thu vào cột 21 Nạp mẫu chất cần tách lên đầu cột sắc ký 22 Giải ly cột sắc ký 23 3.2.3 Sắc ký lớp mỏng 25 Giải ly mỏng 26 CHƢƠNG 4: PHƢƠNG PHÁP – PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 29 4.1 Phƣơng pháp 29 4.1.1 Tính chất nguyên liệu 29 4.1.2 Phƣơng pháp chiết tách .29 4.1.3 Phƣơng pháp phân lập tinh chế 31 4.1.4 Phƣơng pháp xác định cấu trúc 31 4.2 Phƣơng tiện 31 SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 4.2.1 Dụng cụ .31 4.2.2 Hóa chất 31 4.2.3 Thời gian, địa điểm 32 CHƢƠNG 5: THỰC NGHIỆM 33 5.1 Điều chế loại cao 33 5.1.1 Chuẩn bị nguyên liệu 33 5.1.3 Điều chế cao có độ phân cực tăng dần từ cao metanol tổng .34 5.2 Sắc ký cột cao Ea3 .37 5.2.1 Xử lý phân đoạn Ea3.2 40 5.2.2 Xử lý phân đoạn Ea3.3 43 CHƢƠNG 6: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 6.1 Kết luận 58 Qua thời gian thực đề tài “Phân lập chất từ cao etyl acetate rau má sen Hydrocotyle bonariensis L.” chúng tơi có kết luận sau: 58 6.2 Kiến nghị 58 PHẦN PHỤ LỤC 61 Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chất TUYEN_Hydbon 61 Phụ lục 2: Phổ 1H-NMR hợp chất Ea8 .64 Phụ lục 3: Phổ 13C-NMR hợp chất Ea8 69 Phụ lục 4: Phổ DEPT hợp chất Ea8 72 SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 Phần TỔNG QUAN SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT 1.1 Khái quát chi Hydrocotyle[5] Trên giới, chi Hydrocotyle tập hợp 30 lồi, có đặc điểm chung thảo, sống nhiều năm, vùng phân bố rộng Những loài thuộc chi Hydrocotyle dễ sống vùng đất ẩm, có bóng râm, khí hậu mát mẻ, sống mơi trƣờng nƣớc đặc biệt có lồi sống đƣợc mơi trƣờng đất cằn, nƣớc mặn chúng có khả sinh sống phát triển Theo tác giả Đỗ Tất Lợi, Việt Nam có 10 lồi thƣờng gọi rau má, gồm: Hydrocotyle asiatica, Hydrocotyle chevalieri (Chern) Tard, Hydrocotyle chinensis (Dunn) Craib, Hydrocotyle nepalensis Hook, Hydrocotyle petelotii Tard, Hydrocotyle pseudosanicula De Boiss, Hydrocotyle siamica Craib, Hydrocotyle sibthorpioides Lamk, Hydrocotyle tonkinensis Tard, Hydrocotyle wilfordii Maxim Trong đó, Hydrocotyle asiatica L Hydrocotyle sibthorpioides (rau má nhỏ) hai loài thƣờng gặp quen thuộc với ngƣời dân Việt Nam Hiện nay, thực tế, nhà khoa học phát thêm vài loài rau má Năm 2005, dƣợc sĩ Phan Đức Bình định danh hai lồi rau má có hình dạng khác biệt so với rau má thƣờng là: Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L Hai loài phát triển khu vực đồng sông Cửu Long, có đặc điểm chung thân dài, giống với sen nên đƣợc gọi rau má sen Tuy nhiên chúng đƣợc phân biệt nhờ so sánh đặc điểm hoa, Hydrocotyle bonariensis L có hoa gồm nhiều tua tụ tạo thành vòng tròn, Hydrocotyle vulgaris L có hoa mọc thành tầng Đề tài chủ yếu khảo sát rau má sen Hydrocotyle bonariensis L, loại đƣợc phát Việt Nam năm gần SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 Hình 1: Cây hoa Hydrocotyle bonariensis L Hình 2: Cây hoa Hydrocotyle vulgaris L 1.2 Giới thiệu rau má sen Hydrocotyle bonariensis L 1.2.1 Danh pháp phân loại Tên khoa học: Hydrocotyle bonariensis L Tên nƣớc ngoài: Penywort, large leaf penywort paraguita,… Tên thƣờng gọi: Rau má sen SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 Phân loại: Giới: Thực vật Ngành: Magnoliophyta Lớp: Magnoliopsida Bộ: Apiales Họ: Apiaceae Chi: Hydrocotyle Lồi: Bonariensis L 1.2.1 Mơ tả đặc điểm, xuất xứ phân bố Đặc điểm: - Cây sống dễ nƣớc, nơi ẩm ƣớt, đất cát, nhƣ nơi có mơi trƣờng khơ - Là loại cỏ lƣu niên, nhẵn, dạng thân rễ mọc bị, đốt có nhiều rễ cho 1–2 vƣơn thẳng lên, cọng dài 15–20 cm - Lá mỏng, hình lọng, phiến trịn, rộng 3–12 cm, có thùy cạn, mép khía tai bèo, cuống mọc - Hoa nhỏ, năm cánh, có màu trắng vàng kem, tán hoa đƣờng kính 1–6 cm gồm nhiều tua tụ tạo thành vòng tròn, hoa từ mùa xuân đến đầu mùa thu - Quả hình bầu dục, dày 0,5–2 mm, rộng 2,5–3 mm, đáy đỉnh có khía sống lƣng phần bên gân rõ Hình 3: Lá hoa Hydrocotyle bonariensis L SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp đại học Cử nhân Hóa Học K33 Xuất xứ: có nguồn gốc từ Nam Mỹ Phân bố: Nam Mỹ, gần phát mọc hoang Việt Nam 1.2.2 Thành phần hóa học Trong q trình nghiên cứu đặc điểm sinh thái Hydrocotyle bonariensis L tập trung khả hấp thụ muối NaCl vùng đất mặn có ảnh hƣởng đến hàm lƣợng chlorophyl làm thay đổi hàm lƣợng protein So với Foeniculum vulgare L Hydrocotyle bonariensis L nhận NaCl nhiều Hydrocotyle bonariensis L loại rau má đƣợc định danh nên thành tựu nghiên cứu hạn chế Tại Việt Nam, nhóm nghiên cứu Thạc sĩ Tôn Nữ Liên Hƣơng khảo sát thành phần hóa học nhƣ hoạt tính sinh học năm gần 1.2.3 Cơng dụng Rau má loại rau thông dụng y học dân gian nhƣ sống ngày thƣờng ngƣời dân Việt Nam Cây có tác dụng nhiệt, giải độc gan, trị bệnh cao huyết áp, làm chậm lão hóa da, ăn quen thuộc loại thức uống bổ dƣỡng cho sức khỏe ngƣời Riêng tinh dầu rau má sen kháng đƣợc hai chủng vi khuẩn Gram âm: Escherichia coli, Psendomonas aeruginosa; vi khuẩn Gram dƣơng: Staphylococcus aureus chủng nấm mốc: Fusarium oxysporum; có độc tính chọn lọc số dịng tế bào ung thƣ biểu mô (KB), gan (Hep-G2) vú (MCF-7)[5] SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Luận văn tốt nghiệp [11] Cử nhân Hóa Học K33 Patrick J.D Bouic, PhD and Johan H.Lamprecht, MD Plant sterols and sterolins: A review of their immune-modulating properties, Departments of Medical microbiology and pharmacology, Medical Faculty, University of Stellenbosch, 1999 [12] Sarker, Natural products isolation, Humana Press Totowa, New Jersey, 2006 [13] http://australian-insects.com/lepidoptera/plants/apia/apiaceae.html SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 60 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Hóa Học K33 PHẦN PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chất TUYEN_Hydbon SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 61 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 62 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 63 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Hóa Học K33 Phụ lục 2: Phổ 1H-NMR hợp chất Ea8 SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 64 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 65 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 66 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 67 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 68 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Hóa Học K33 Phụ lục 3: Phổ 13C-NMR hợp chất Ea8 SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 69 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 70 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 71 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Hóa Học K33 Phụ lục 4: Phổ DEPT hợp chất Ea8 SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 72 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 73 Luận văn tốt nghiệp SVTH Huỳnh Trần Minh Tuyền – MSSV 2072119 Cử nhân Hóa Học K33 74 ...TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC  L? ?N VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CÔ L? ??P CHẤT TỪ CAO ETYL ACETAT CỦA CÂY RAU MÁ L? ? SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L. , HỌ NGÒ (APIACEAE). .. sterol động vật (zoosterol): cholesterol, cholestan-3β-ol, desosterol, coprostanol, cerebrosterol, lathosterol, - Nhóm sterol động vật biển không xƣơng sống: spongesteol, clionasterol, 24-methylencholesterol,... “Phân l? ??p chất từ cao etyl acetat rau má sen Hydrocotyle bonariensis L. , họ ngò (Apiaceae)? ?? đƣợc thực phịng thí nghiệm Hóa hữu phịng thí nghiệm L? ?-Sinh, Khoa Khoa Học Tự Nhiên, trƣờng Đại Học Cần