Cô Lập Sterol Trong Các Cây Rau Má Lá Sen Hydrocotyle Bonariensis L. Và Hydrocotyle Vulgaris L.,

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CÔ LẬP STEROL TRONG CÁC CÂY RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L VÀ HYDROCOTYLE VULGARIS L., HỌ NGÒ CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Ths Tôn Nữ Liên Hương Nguyễn Ngọc Khang MSSV: 2063966 Ngành: Cơng Nghệ Hóa Học-Khóa 32 Cần Thơ, tháng 11 năm 2010 Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Cơng nghệ Bộ Mơn: Cơng nghệ Hóa học Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh Phúc PHIẾU ĐỀ NGHỊ ĐỀ TÀI TỐT NGHIỆP CHO SINH VIÊN NĂM HỌC: 2010 – 2011 Họ tên cán hướng dẫn: Ths Tôn Nữ Liên Hương Tên đề tài: Cô lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ Ngò Địa điểm thực hiện: Phịng thí nghiệm hóa hữu - khoa Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Cần Thơ Số lượng sinh viên thực hiện: 01 sinh viên Họ tên sinh viên: Nguyễn Ngọc Khang MSSV: 2063966 Lớp: Cơng Nghệ Hóa Học Khóa: 32 Mục đích đề tài Cơ lập định danh sterol có cao eter dầu hỏa rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L Các nội dung giới hạn đề tài - Tìm hiểu lồi rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L - Cô lập sterol loài rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L Các yêu cầu hỗ trợ cho việc thực đề tài: hóa chất để thực đề tài Kinh phí dự trù cho việc thực đề tài: 400.000 đồng DUYỆT CỦA CB TẠI CƠ SỞ DUYỆT CỦA CBHD Ths Tôn Nữ Liên Hương DUYỆT CỦA BỘ MÔN DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG THI & XÉT TỐT NGHIỆP Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Cơng nghệ Bộ Mơn: Cơng nghệ Hóa học Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh Phúc NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn: Ths Tôn Nữ Liên Hương Đề tài: Cô lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ Ngò Sinh viên thực hiện: Nguyễn Ngọc Khang MSSV: 2063966 Lớp Công nghệ Hóa học – Khóa 32 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN:  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2010 Cán hướng dẫn Tôn Nữ Liên Hương Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Công nghệ Bộ Môn: Công nghệ Hóa học Cộng Hịa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh Phúc NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ CHẤM PHẢN BIỆN Cán chấm phản biện: Đề tài: Cô lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ Ngò Sinh viên thực hiện: Nguyễn Ngọc Khang MSSV: 2063966 Lớp Cơng nghệ Hóa học – Khóa 32 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2010 Cán chấm phản biện LỜI CẢM ƠN  Để đạt thành ngày hôm nay, em chân thành cám ơn quý thầy cô trường Đại học Cần thơ, đặc biệt thầy mơn Cơng nghệ Hóa học Khoa Cơng nghệ, mơn Hóa – Khoa Khoa học Tự nhiên tận tình giảng dạy cho em kiến thức quý báu, không để phục vụ thời gian làm luận văn mà hành trang vô giá giúp em vững bước vào đời Để hồn thành luận văn này, em khơng có ngồi lịng biết ơn sâu sắc đến Th.s Tơn Nữ Liên Hương Cơ dìu dắt em bước suốt thời gian qua Có nhiều điều em chưa biết, cô giảng dạy cho em hiểu, lúc em gặp khó khăn động viên, cổ vũ tinh thần cho em cô tạo điều kiện thuận lợi để em làm tốt công việc Em chân thành cám ơn Em xin cám ơn anh, chị học viên cao học giúp đỡ, bảo nhiều kinh nghiệm, kiến thức cho em q trình làm luận văn Tơi may mắn có người bạn tốt giúp đỡ tơi nhiệt tình suốt thời gian qua Tơi xin cám ơn bạn Cuối lời cám ơn đặc biệt đến gia đình Ba mẹ nguồn động viên lớn con, giúp vượt qua khó khăn lo lắng cho nhiều Con vững bước nơi có ba mẹ bên cạnh Một lần em xin gửi lời cám ơn chân thành đến gia đình, thầy cô tất bạn Kết em đạt ngày hôm cố gắng em với giúp đỡ người Em hứa tiếp tục cố gắng tương lai để khơng phụ lịng gia đình, thầy bạn Xin chân thành cám ơn! Nguyễn Ngọc Khang SVTH Nguyễn Ngọc Khang i TÓM TẮT Phân lập hợp chất có hoạt tính sinh học từ cỏ, thảo dược lĩnh vực nhiều nhà khoa học ý Cây rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ Ngò loài rau phát Việt Nam Trong đề tài này, tiến hành điều chế cao alcol tổng từ nguyên liệu bột kỹ thuật chiết rắn – lỏng, sử dụng kỹ thuật chiết lỏng-lỏng để điều chế loại cao có mức độ phân cực khác Chúng tiến hành sắc ký cột cao eter dầu hỏa, cao diclorometan, cao etyl acetat rau má sen để cô lập hợp chất sterol, xác định cấu trúc hợp chất thu Kết cô lập β-sistosterol, stigmasterol, spinasterol SVTH Nguyễn Ngọc Khang ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC HÌNH vii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU VÀ SƠ ĐỒ ix DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT x DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC xi LỜI NÓI ĐẦU xii CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT 1.1 Giới thiệu chung thuộc chi Hydrocotyle 1.2 Giới thiệu rau má sen Hydrocotyle bonariensis 1.2.1 Danh pháp phân loại 1.2.2 Đặc điểm thực vật 1.2.3 Sinh thái phân bố 1.2.4 Những nghiên cứu hóa học 1.2.5 Hoạt tính 1.3 Giới thiệu rau má sen Hydrocotyle vulgaris 1.3.1 Danh pháp phân loại 1.3.2 Đặc điểm thực vật 1.3.3 Sinh thái phân bố 1.3.4 Những nghiên cứu hóa học 1.3.5 Hoạt tính 1.4 So sánh hình thái hai lồi rau má sen Hydrocotyle bonariensis Hydrocotyle vulgaris CHƯƠNG SƠ LƯỢC VỀ STEROL 2.1 Sterol 2.2 Cholesterol SVTH Nguyễn Ngọc Khang iii 2.3 β-sistosterol 2.4 Stigmasterol .10 2.5 Spinasterol 10 2.6 Phương pháp chiết xuất phân lập sterol 11 CHƯƠNG CƠ SỞ LÍ THUYẾT MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 13 3.1 Phương pháp tách chiết chất khỏi .13 3.1.1 Các kỹ thuật chiết tách hợp chất khỏi .13 3.1.1.1 Kỹ thuật chiết rắn-lỏng .13 3.1.1.2 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng .16 3.1.2 Dung môi 17 3.1.2.1 Dung môi để chiết tách hợp chất khỏi mẫu .17 3.1.2.2 Lựa chọn dung môi để chiết tách 18 3.1.2.3 Một số điều cần biết sử dụng dung môi để chiết tách hợp chất 18 3.2 Sắc ký cột 19 3.2.1 Nguyên tắc 19 3.2.2 Kỹ thuật triển khai 20 3.2.2.1 Chuẩn bị cột 20 3.2.2.2 Đưa mẫu chất cần phân tách vào cột 21 3.2.2.3 Giải ly cột 22 3.3 Sắc ký lớp mỏng 23 3.3.1 Nguyên tắc 23 3.3.2 Chất hấp phụ dùng sắc ký lớp mỏng 24 3.3.3 Dung môi triển khai 25 3.3.4 Các kỹ thuật SKLM 25 3.3.4.1 Kỹ thuật SKLM chiều 25 3.3.4.2 Kỹ thuật SKLM hai chiều 25 3.3.4.3 Kỹ thuật SKLM điều chế 26 SVTH Nguyễn Ngọc Khang iv 3.3.5 Ứng dụng SKLM 26 CHƯƠNG ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 4.1 Địa điểm 27 4.2 Thời gian .27 4.3 Phương tiện 27 4.3.1 Dụng cụ .27 4.3.2 Hóa chất .27 4.4 Phương pháp nghiên cứu .28 4.4.1 Phương pháp chiết tách 28 4.4.2 Phân lập hợp chất hữu .28 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM .29 5.1 Nguyên liệu 29 5.2 Điều chế loại cao 29 5.2.1 Điều chế cao etanol tổng .29 5.2.2 Điều chế cao ete dầu hỏa .30 5.2.3 Điều chế cao diclorometan 30 5.2.4 Điều chế cao etyl acetat .30 5.2.5 Điều chế cao n-butanol 30 5.2.6 Điều chế cao nước .30 5.2.7 Tổng quát trình điều chế loại cao 31 5.2.7.1 Sơ đồ điều chế loại cao khối lượng loại cao .31 5.2.7.2 Thu suất loại cao 33 5.3 Định tính sterol rau má sen .34 5.4 Phân lập sterol .35 5.4.1 Phân lập sterol rau má sen Hydrocotyle vulgaris 35 5.4.2 Phân lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis 39 5.4.2.1 Khảo sát cao eter dầu hỏa 39 SVTH Nguyễn Ngọc Khang v 5.4.2.2 Khảo sát cao diclorometan 43 5.4.2.3 Khảo sát cao etyl acetat .46 5.5 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất thu 49 5.5.1 Hợp chất HUONG-PE4.Hv 49 5.5.1.1 Các đặc tính vật lý hợp chất HUONG-PE4.Hv .49 5.5.1.2 Xác định cấu trúc hợp chất HUONG-PE4.Hv .49 5.5.2 Hợp chất HUONG-PE.H.Bon .51 5.5.2.1 Các đặc tính vật lý hợp chất HUONG-PE.H.Bon 51 5.5.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất HUONG-PE.H.Bon 51 5.5.3 Hợp chất HUONG-Ea1.4 53 5.5.3.1 Các đặc tính vật lý hợp chất HUONG-Ea1.4 53 5.5.3.2 Xác định cấu trúc hợp chất HUONG-Ea1.4 53 5.5.4 Hợp chất HUONG-C2.1Hb 55 5.5.4.1 Các đặc tính vật lý hợp chất HUONG-C2.1Hb 55 5.5.4.2 Xác định cấu trúc hợp chất HUONG-C2.1Hb .55 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 6.1 Kết luận .57 6.2 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC .61 SVTH Nguyễn Ngọc Khang vi PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 74 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chât HUONG-Ea1.4 SVTH Nguyễn Ngọc Khang 75 PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 76 PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 77 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất HUONG-Ea1.4 SVTH Nguyễn Ngọc Khang 78 PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 79 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ DEPT-NMR hợp chất HUONG-Ea1.4 SVTH Nguyễn Ngọc Khang 80 PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 81 PHỤ LỤC Phụ lục 10 Phổ 1H-NMR hợp chât HUONG-C2.1Hb SVTH Nguyễn Ngọc Khang 82 PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 83 PHỤ LỤC SVTH Nguyễn Ngọc Khang 84 PHỤ LỤC Phụ lục 11 Phổ 1H-NMR hợp chât stigmasterol chuẩn SVTH Nguyễn Ngọc Khang 85 Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh Phúc Khoa Công nghệ Bộ Mơn: Cơng nghệ Hóa học Cần thơ, ngày 19 tháng 08 năm 2010 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Năm học: 2010 - 2011 Tên đề tài thực hiện: Cô lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ ngò Họ tên sinh viên thực Họ tên: Nguyễn Ngọc Khang Mã số sinh viên: 2063966 Họ tên cán hướng dẫn Họ tên: Tôn Nữ Liên Hương Học vị : Thạc Sĩ Đặt vần đề Việt Nam kho thuốc nam phong phú, với nhiều loại dược thảo có tác dụng nhiệt, giải độc, nhuận gan, lợi tiểu, làm chậm lão hóa, chữa nhiều chứng bệnh da… Rau má dân gian sử dụng thuốc hạ huyết áp, trị nóng… Rau má sen loài rau má xuất nhiều Việt Nam, thành phần hóa học hợp chất loài rau má sen chưa nghiên cứu sâu Do đó, đề tài “Cơ lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ ngò” em chọn để thực Với mong muốn đóng góp phần vào cơng trình nghiên cứu lồi rau má sen Mục đích u cầu: Cơ lập định danh sterol có cao eter dầu hỏa Tìm hiểu hướng ứng dụng chúng Địa điểm, thời gian thực hiện: Địa điểm: Phịng thí nghiệm hóa hữu - khoa Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Cần thơ Thời gian thực hiện: 09/8/2010 – 14/11/2010 Giới thiệu thực trạng có liên quan tới vấn đề đề tài Trên giới, rau má nghiên cứu nhiều, loài rau má sen chưa nghiên cứu Ở Việt Nam, cơng trình nghiên cứu rau má sen Hydrocotyle vulgaris Hydrocotyle bonraniensis số tỉnh Đồng sông Cửu Long Thạc sĩ Tôn Nữ Liên Hương vừa nghiệm thu đề tài cấp Các nội dung Phần Tổng quan 1.1 Tổng quan thực vật 1.2 Sơ lược sterol 1.3 Cơ sở lý thuyết số phương pháp thực nghiệm Phần Thực nghiệm kết 2.1 Dụng cụ, hóa chất phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu 2.2 Điều chế loại cao 2.3 Định tính sterol rau má sen 2.4 Phân lập sterol 2.5 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất thu Phần Kết luận kiến nghị 3.1 Kết luận 3.2 Kiến nghị Phương pháp thực đề tài: Cô lập chất từ cao phương pháp sắc ký cột hở Tinh chế chất Xác định cấu trúc (chạy phổ) Kế hoạch thực (ghi rõ tiến độ thực hiện): Từ ngày 09/08/2010 đến 17/10/2010 tiến hành sắc ký cột hở sắc ký lớp mỏng để phân lập tinh chế hợp chất Gửi Hà Nội đo phổ NMR chất tinh khiết thu Từ ngày 18/10/2010 viết sửa để hoàn thành luận văn SINH VIÊN THỰC HIỆN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Nguyễn Ngọc Khang Tôn Nữ Liên Hương DUYỆT CỦA BỘ MÔN DUYỆT CỦA HĐ LV&TLTN ... 5.3 Định tính sterol rau má sen .34 5.4 Phân lập sterol .35 5.4.1 Phân lập sterol rau má sen Hydrocotyle vulgaris 35 5.4.2 Phân lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis. .. tài Cơ lập định danh sterol có cao eter dầu hỏa rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L Các nội dung giới hạn đề tài - Tìm hiểu loài rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle. .. sterol nên việc nghiên cứu hai loài rau má sen cần thiết Đây lý mà em chọn đề tài ? ?Cô lập sterol rau má sen Hydrocotyle bonariensis L Hydrocotyle vulgaris L., họ Ngò” SVTH Nguyễn Ngọc Khang xii