Góp phần xây dựng tiêu chuẩn cơ sở kiểm nghiệm viên nang từ dược liệu hướng điều trị huyết khối, đau thắt ngực

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - TRẦN KHÁNH DUY GÓP PHẦN XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG TỪ DƯỢC LIỆU HƯỚNG ĐIỀU TRỊ HUYẾT KHỐI, ĐAU THẮT NGỰC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN KHÁNH DUY GÓP PHẦN XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG TỪ DƯỢC LIỆU HƯỚNG ĐIỀU TRỊ HUYẾT KHỐI, ĐAU THẮT NGỰC Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN THỊ MINH THUẬN PGS.TS VÕ THỊ BẠCH HUỆ Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Luận văn Thạc sĩ - Khóa: 2016 - 2018 Ngành: Kiểm nghiệm Thuốc & Độc chất - Mã số: 8720210 GÓP PHẦN XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG TỪ DƯỢC LIỆU HƯỚNG ĐIỀU TRỊ HUYẾT KHỐI, ĐAU THẮT NGỰC Trần Khánh Duy Thầy hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Minh Thuận, PGS.TS Võ Thị Bạch Huệ Mở đầu: Huyết phủ trục ứ (HPTƯ) thuốc tiếng y học cổ truyền Trung Hoa, sử dụng rộng rãi điều trị bệnh lý tim mạch huyết khối, đau thắt ngực, nhồi máu tim, đột qụy… Nhiều dạng thuốc đại thuốc đời viên nén, viên nang Để đáp ứng nhu cầu điều trị nay, số công ty dược phẩm Việt Nam tiến hành nghiên cứu sản xuất chế phẩm viên nang có thành phần gồm 11 dược liệu thuốc HPTƯ Bên cạnh việc nghiên cứu sản xuất cơng tác kiểm tra đánh giá chất lượng yếu tố thiếu Trước u cầu xuất phát từ thực tế đó, chúng tơi tiến hành đề tài “Góp phần xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm viên nang từ dược liệu hướng điều trị huyết khối, đau thắt ngực” Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu Đối tượng: Các TCCS kiểm nghiệm bột Xích thược, cao HPTƯ viên HPTƯ Phương pháp nghiên cứu: (1) Xây dựng quy trình định tính dược liệu cao viên HPTƯ SKLM (2) Xây dựng thẩm định QTĐL amygdalin cao viên HPTƯ phương pháp HPLC (3) Xây dựng thẩm định QTĐL paeoniflorin bột Xích thược viên HPTƯ phương pháp HPLC (4) Dự thảo TCCS kiểm nghiệm bán thành phẩm (bột Xích thược, cao HPTƯ) TCCS kiểm nghiệm thành phẩm (viên HPTƯ) Kết nghiên cứu: Đương quy, Xuyên khung chiết với n-hexan, dung môi khai triển n-hexan - ethyl acetat (9 : 1), phát UV 365 nm Chỉ xác, Hồng hoa chiết với ethyl acetat, dung môi khai triển cloroform - methanol - nước - acid acetic (13 : : : 1,5), phát hiện: Nhúng dung dịch AlCl3 1% quan sát UV 365 nm Xích thược chiết với aceton, Đào nhân chiết với methanol, Cam thảo, Cát cánh, Sài hồ, Ngưu tất, Sinh địa chiết với n-butanol, khai triển với hệ dung môi tương ứng phát thuốc thử VS Định lượng amygdalin với pha động methanol - nước (21,5 : 78,5), bước sóng phát 210 nm, tốc độ dịng ml/phút, thể tích tiêm mẫu 20 l Định lượng paeoniflorin với pha động acetonitril - KH2PO4 0,05M (18 : 82), bước sóng phát 230 nm, tốc độ dịng ml/phút, thể tích tiêm mẫu 20 l TCCS quy định hàm lượng paeoniflorin bột Xích thược khơng 2,0% Hàm lượng amygdalin cao không 1,0% Hàm lượng amygdalin viên không 3,0 mg hàm lượng paeoniflorin viên không 2,0 mg Bàn luận: Quy trình định tính dược liệu Đương quy, Xun khung, Chỉ xác, Sài hồ, Cam thảo định lượng paeoniflorin điểm cải tiến đề tài so với CP 2010 Quy trình định lượng amygdalin, định tính Xích thược, Đào nhân, Hồng hoa, Cát cánh, Ngưu tất, Sinh địa điểm đề tài so với CP 2010 Kết luận: Đề tài xây dựng quy trình định tính tất 11 dược liệu gồm Xích thược, Đào nhân, Đương quy, Xuyên khung, Hồng hoa, Sài hồ, Sinh địa, Chỉ xác, Cát cánh, Ngưu tất, Cam thảo có cao viên HPTƯ phương pháp SKLM Xây dựng quy trình định lượng amygdalin cao viên HPTƯ Xây dựng quy trình định lượng paeoniflorin bột Xích thược viên HPTƯ đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác độ Từ khóa: Đào nhân, Xích thược, amygdalin, paeoniflorin, sắc ký lỏng hiệu cao Master’s Thesis - Academic course: 2016 - 2018 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology - Code: 8720210 THE STANDARDIZATION OF THE CAPSULE PREPARATED FROM MEDICINAL PLANTS FOR TREATMENT THROMBOSIS, ANGINA PECTORIS Tran Khanh Duy Supervisor: PhD Nguyen Thi Minh Thuan, Assoc Prof PhD Vo Thi Bach Hue Introduction: Huyet phu truc u (HPTU) is a famous remedy of traditional Chinese medicine, widely used in the treatment of cardiovascular diseases such as thrombosis, angina pectoris, myocardial infarction, stroke Many forms of this remedy had been developed such as tablets, capsules To meet today’s treatment needs, some pharmaceutical companies in Viet Nam have conducted research and production of capsules containing 11 medicinal plants as in HPTU remedy Besides the production research, quality inspection is an indispensable factor From that fact, we conducted research “The standardization of the capsule preparated from medicinal plants for treatment thrombosis, angina pectoris” Materials and methods: (1) Development the process to identify the presence of medicinal plants in HPTU extract and capsule by thin layer chromatography (TLC) (2) Development and validation the quantitative process of amygdalin in HPTU extract and capsule by HPLC (3) Development and validation the quantitative process of paeoniflorin in Radix Paeoniae powder and HPTU capsule by HPLC (4) Development the standardization for analyzing the Radix Paeoniae powder, HPTU extract and capsule Results: Radix Angelica sinensis, Rhizoma Ligustici wallichii was extracted with n-hexan, the solvent developed is n-hexan - ethyl acetate (9 : 1), detected by UV 365 nm Fructus Aurantii, Flos Carthami tinctorii was extracted with ethyl acetate, the solvent developed is chloroform - methanol - water - acetic acid (13 : : : 1,5), spray AlCl3 1% solution then observed under UV 365 nm Radix Paeoniae was extracted with acetone, Semen Pruni was extracted with methanol, Radix et Rhizoma Glycyrrhizae, Radix Bupleuri chinensis, Radix Platycodi grandiflori, Radix Achyranthis bidentatae, Radix Rhemanniae glutinosae was extracted with n-butanol, detected by VS reagent Quantitative amygdalin with mobile phase is methanol - water (21,5 : 78,5), the detective wavelength is 210 nm, flow rate is ml/min, injective volume is 20 l Quantitative paeoniflorin with mobile phase acetonitril - KH2PO4 (18 : 82), the detective wavelength is 230 nm, flow rate is ml/min, injective volume is 20 l The content of paeoniflorin in the Radix Paeoniae powder is not less than 2,0% The content of amygdalin in the HPTU extract is not less than 1,0% The content of amygdalin is not less than 3,0 mg, the content of paeoniflorin is not less than 2,0 mg calculated on the average weight of the capsule Discussion: The process to identify the presence of Radix Angelica sinensis, Rhizoma Ligustici wallichii, Fructus Aurantii, Radix et Rhizoma Glycyrrhizae, Radix Bupleuri chinensis, quantitative of paeoniflorin is the improvement of the research compared to CP 2010 The process to identify the presence of Radix Paeoniae, Semen Pruni, Flos Carthami tinctorii, Radix Platycodi grandiflori, Radix Achyranthis bidentatae, Radix Rhemanniae glutinosae and quantitative of amygdalin is freshness of the research compared to CP 2010 Conclusions: The research had developed the process to identify the presence of 11 medicinal plants in HPTU extract and capsule by TLC Hading developed the quantitative process of amygdalin in HPTU extract and capsule Hading developed the quantitative process of paeoniflorin in the Radix Paeoniae powder and HPTU capsule by HPLC to meet the requirements of system suitability, specificity, linearity, precision and accuracy Key words: Semen Pruni, Radix Paeoniae, amygdalin, paeoniflorin, HPLC i MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa ii Lời cam đoan iii Bản tóm tắt tồn văn luận văn Tiếng Việt iv Bản tóm tắt tồn văn luận văn Tiếng Anh v Mục lục vi Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt viii Danh mục bảng ix Danh mục hình xi MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC HUYẾT PHỦ TRỤC Ứ 1.1.1 Thành phần 1.1.2 Tác dụng dược lý, công dụng .3 1.1.3 Chuyên luận viên nang Huyết phủ trục ứ - CP 2010 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÁC DƯỢC LIỆU 1.3 ĐỊNH TÍNH CÁC DƯỢC LIỆU TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM .17 1.4 ĐỊNH LƯỢNG AMYGDALIN VÀ PAEONIFLORIN TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM TỪ DƯỢC LIỆU 21 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 22 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Xây dựng quy trình định tính dược liệu cao viên HPTƯ phương pháp SKLM 24 2.2.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng amygdalin cao viên HPTƯ phương pháp HPLC .26 2.2.3 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng paeoniflorin bột Xích thược viên HPTƯ phương pháp HPLC 29 2.2.4 Dự thảo TCCS kiểm nghiệm bột Xích thược, cao viên HPTƯ 31 i CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH CÁC DƯỢC LIỆU TRONG CAO VÀ VIÊN HPTƯ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SKLM 33 3.1.1 Định tính Xích thược bột Xích thược viên HPTƯ .33 3.1.2 Định tính Đào nhân cao viên HPTƯ 34 3.1.3 Định tính Đương quy, Xuyên khung cao viên HPTƯ .35 3.1.4 Định tính Chỉ xác cao viên HPTƯ .36 3.1.5 Định tính Hồng hoa cao viên HPTƯ 37 3.1.6 Định tính Cam thảo cao viên HPTƯ 38 3.1.7 Định tính Cát cánh cao viên HPTƯ 39 3.1.8 Định tính Sài hồ cao viên HPTƯ .40 3.1.9 Định tính Ngưu tất cao viên HPTƯ 41 3.1.10 Định tính Sinh địa cao viên HPTƯ 42 3.2 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QTĐL AMYGDALIN TRONG CAO VÀ VIÊN HPTƯ BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC .43 3.2.1 Khảo sát điều kiện HPLC để tách pic amygdalin .43 3.2.2 Thẩm định quy trình định lượng amygdalin 45 3.3 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QTĐL PAEONIFLORIN TRONG BỘT XÍCH THƯỢC VÀ VIÊN HPTƯ BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC .55 3.3.1 Khảo sát điều kiện HPLC để tách pic paeoniflorin 55 3.3.2 Thẩm định quy trình định lượng paeoniflorin 57 3.4 DỰ THẢO TCCS BỘT XÍCH THƯỢC, CAO VÀ VIÊN HPTƯ 67 3.4.1 Khảo sát số tiêu kiểm nghiệm bột Xích thược 67 3.4.2 Khảo sát số tiêu kiểm nghiệm cao HPTƯ 68 3.4.3 Khảo sát số tiêu kiểm nghiệm viên HPTƯ 69 3.4.4 TCCS kiểm nghiệm bột Xích thược, cao viên HPTƯ 71 CHƯƠNG BÀN LUẬN 86 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 88 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ nguyên Ý nghĩa Asymmetry Hệ số đối xứng Colony Forming Unit Số đơn vị khuẩn lạc CP Chinese Pharmacopoeia Dược điển Trung Quốc DĐVN V Dược điển Việt Nam V ELSD GC-MS H HPGPC HPLC 10 HPTƯ 11 PDA 12 QTĐL 13 RS Resolution Độ phân giải 14 Rf Retardation factor Hệ số lưu giữ 15 S Surface Diện tích pic 16 SKLM 17 RSD 18 TCCS 19 tR 20 VS AS CFU Evaporative Light Scattering Đầu dò tán xạ ánh sáng Detector Gas Chromatography - Mass Spectrometry bay Sắc ký khí ghép khối phổ Height Chiều cao pic High Performance Gel Sắc ký thẩm thấu gel hiệu Permeation Chromatography cao High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao Huyết phủ trục ứ Photo Diode Array Đầu dị dãy diod quang Quy trình định lượng Sắc ký lớp mỏng Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối Tiêu chuẩn sở Retention time Thời gian lưu Vanilin/acid sulfuric Vanilin acid sulfuric DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Định tính Xích thược số chế phẩm SKLM .17 Bảng 1.2 Định tính Đương quy, Xuyên khung chế phẩm SKLM 17 Bảng 1.3 Định tính Hồng hoa số chế phẩm SKLM .19 Bảng 1.4 Định tính Cam thảo số chế phẩm SKLM .19 Bảng 2.5 Chất đối chiếu sử dụng để nghiên cứu .22 Bảng 2.6 Hóa chất - dung mơi sử dụng để nghiên cứu 23 Bảng 2.7 Trang thiết bị sử dụng để nghiên cứu .23 Bảng 3.8 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống amygdalin 45 Bảng 3.9 Kết khảo sát tính đặc hiệu amygdalin 49 Bảng 3.10 Kết khảo sát tính tuyến tính amygdalin 50 Bảng 3.11 Kết khảo sát độ lặp lại amygdalin cao .51 Bảng 3.12 Kết khảo sát độ xác trung gian amygdalin cao 51 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ lặp lại amygdalin viên .52 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác trung gian amygdalin viên 52 Bảng 3.15 Kết khảo sát độ amygdalin cao 53 Bảng 3.16 Kết khảo sát độ amygdalin viên .54 Bảng 3.17 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống paeoniflorin 57 Bảng 3.18 Kết khảo sát tính đặc hiệu paeoniflorin 61 Bảng 3.19 Kết khảo sát tính tuyến paeoniflorin 62 Bảng 3.20 Kết khảo sát độ lặp lại paeoniflorin bột Xích thược 63 Bảng 3.21 Kết khảo sát độ xác trung gian bột Xích thược 63 Bảng 3.22 Kết khảo sát độ lặp lại paeoniflorin viên 64 Bảng 3.23 Kết khảo sát độ xác trung gian paeoniflorin viên 64 Bảng 3.24 Kết khảo sát độ paeoniflorin bột Xích thược 65 Bảng 3.25 Kết khảo sát độ paeoniflorin viên .66 Bảng 3.26 Kết khảo sát tỷ lệ khối lượng làm khô bột Xích thược 67 Bảng 3.27 Kết khảo sát độ mịn bột Xích thược 67 Bảng 3.28 Kết khảo sát hàm lượng paeoniflorin bột Xích thược 67 Bảng 3.29 Kết khảo sát tỷ lệ khối lượng làm khô cao 68 Bảng 3.30 Kết khảo sát tiêu kim loại nặng cao 68 Bảng 3.31 Kết khảo sát hàm lượng amygdalin cao 68 Bảng 3.32 Kết khảo sát độ đồng khối lượng viên .69 Bảng 3.33 Kết khảo sát độ rã viên .70 Bảng 3.34 Kết khảo sát hàm lượng amygdalin paeoniflorin viên 70 Bảng 4.35 So sánh tiêu chuẩn CP 2010 TCCS…………………………… 87 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 80 Sở Y tế TP HCM Công ty cổ phần TIÊU CHUẨN CƠ SỞ THÀNH PHẨM dược phẩm X Số tiêu chuẩn: Có hiệu lực từ: VIÊN NANG HUYẾT PHỦ TRỤC Ứ Ban hành theo Quyết định số … ngày … tháng … năm … CƠNG THỨC Cơng thức cho viên nang cứng: Bột Xích thược (Radix Paeoniae) 108,0 mg Cao Huyết phủ trục ứ 300 mg, tương ứng với Đào nhân (Semen Pruni) 216,0 mg Đương quy (Radix Angelicae Sinensis) 162,0 mg Xuyên khung (Rhizoma Ligustici wallichii) Hồng hoa (Flos Carthami tinctorii) Sài hồ (Radix Bupleuri chinensis) 80,0 mg 162,0 mg 54,0 mg Sinh địa (Radix Rhemanniae glutinosae) 162,0 mg Chỉ xác (Fructus Aurantii) 108,0 mg Cát cánh (Radix Platycodi grandiflori) Ngưu tất (Radix Achyranthis bidentatae) Cam thảo (Radix et Rhizoma Glycyrrhizae) Tá dược (cellulose, magnesium stearate, talc) 80,0 mg 162,0 mg 54,0 mg) vừa đủ viên TIÊU CHUẨN NGUYÊN LIỆU Bột Xích thược Radix Paeoniae Đạt tiêu chuẩn sở Cao Huyết phủ trục ứ Đạt tiêu chuẩn sở Cellulose Đạt tiêu chuẩn USP 38, trang 6600 Magnesium stearate Đạt tiêu chuẩn USP 38, trang 6737 Talc Đạt tiêu chuẩn USP 38, trang 5437 CHẤT LƯỢNG THÀNH PHẨM Tính chất Nang cứng, hai đầu màu tím, bột thuốc nang màu nâu, mùi đặc biệt, vị đắng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 81 Độ đồng khối lượng ± 7,5% so với khối lượng trung bình bột thuốc nang Độ rã Thời gian rã không 30 phút Định tính Thể phép thử định tính Xích thược, Đào nhân, Đương quy, Xuyên khung, Chỉ xác, Hồng hoa, Cam thảo, Cát cánh, Sài hồ, Ngưu tất, Sinh địa Định lượng amygdalin Hàm lượng amygdalin tính khối lượng trung bình bột thuốc nang: Khơng thấp 3,0 mg/viên Định lượng paeoniflorin Hàm lượng paeoniflorin tính khối lượng trung bình bột thuốc nang: Khơng thấp 2,0 mg/viên PHƯƠNG PHÁP THỬ Tính chất Đánh giá cảm quan Định tính Phương pháp sắc ký lớp mỏng Bản mỏng: Silica gel F254 Thuốc thử VS: Hỗn hợp đồng thể tích dung dịch vanilin 1% pha ethanol dung dịch acid sulfuric 10% ethanol Cách tiến hành: Chấm riêng biệt - 10 l dung dịch đối chiếu dung dịch thử lên mỏng Sau khai triển, để mỏng khô tự nhiên, phát vết theo phương pháp dành riêng cho dược liệu Đánh giá: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu sắc giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu A Định tính Xích thược Dung môi khai triển: Aceton - ethyl acetat - acid acetic (3 : : 0,5) Dung dịch thử: Lấy g bột thuốc, thêm 20 ml aceton, siêu âm 15 phút, lọc, dung dịch thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 82 Dung dịch đối chiếu: Lấy 0,5 g dược liệu đối chiếu, chiết dung dịch thử Phát hiện: Nhúng thuốc thử VS, sấy 105 oC đến rõ vết B Định tính Đào nhân Dung mơi khai triển: Toluen - ethyl acetat (5 : 5) Dung dịch thử: Lấy g cao, thêm 20 ml methanol, siêu âm 15 phút Lọc, dịch lọc để bay khoảng ml, dung dịch thử Dung dịch đối chiếu: Lấy g bột Đào nhân, tiến hành chiết dung dịch thử Phát hiện: Nhúng thuốc thử VS, sấy 105 oC đến rõ vết C Định tính đồng thời Đương quy Xun khung Dung mơi khai triển: n-Hexan - ethyl acetat (9 : 1), cho pha động vào bình sắc ký, lắc đều, cho mỏng vào khai triển Dung dịch thử: Lấy g cao, thêm 20 ml n-hexan, siêu âm 15 phút, lọc, dịch lọc để bay nhiệt độ phòng khoảng ml, dung dịch thử Dung dịch đối chiếu Đương quy: Lấy g bột Đương quy, chiết dung dịch thử Dung dịch đối chiếu Xuyên khung: Lấy g Xuyên khung, chiết dung dịch thử Phát hiện: Quan sát ánh sáng UV 365 nm D Định tính đồng thời Chỉ xác Hồng hoa Dung môi khai triển: Cloroform - methanol - nước - acid acetic (13 : : : 1,5) Dung dịch thử: Lấy g cao, khuấy kỹ với 20 ml nước, lọc Dịch lọc lắc phân bố với 20 ml ethyl acetat lần, gộp chung dịch chiết ethyl acetat, đến cắn, hịa tan cắn ml methanol, dung dịch thử Dung dịch đối chiếu: Lấy g bột Chỉ xác 1,5 g bột Hồng hoa, thêm 30 ml nước, cách thủy 80 ºC 30 phút, lọc Dịch lọc chiết dung dịch thử, dung dịch đối chiếu tương ứng Phát hiện: Nhúng thuốc thử AlCl3 1%, quan sát ánh sáng UV 365 nm E Định tính Cam thảo Dung mơi khai triển: Ethyl acetat - acid formic - acid acetic - nước (15 : : : 2) Dung dịch thử: Cao HPTƯ sau chiết với n-hexan để định tính Đương quy Xuyên khung thêm 30 ml nước, khuấy kỹ, lọc Dịch lọc lắc với 20 ml Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 83 ether lần, bỏ lớp ether Lớp nước lắc tiếp với 20 ml n-butanol bão hòa nước lần, gộp chung dịch chiết n-butanol, rửa với 40 ml với nước bão hòa n-butanol lần, bỏ lớp nước Dịch chiết n-butanol đến cắn, hịa tan ml methanol Dung dịch đối chiếu: Lấy 0,5 g bột Cam thảo, thêm 30 ml nước, cách thủy 80 ˚C 30 phút, lọc Dịch lọc chiết dung dịch thử Phát hiện: Nhúng thuốc thử VS, sấy 105 oC đến rõ vết F Định tính Cát cánh Sài hồ Hệ dung môi Cát cánh: Cloroform - methanol - acid acetic - nước (8 : 1,5 : 4: 1) Hệ dung môi Sài hồ: Cloroform - methanol - nước (13 : : 0,5) Dung dịch thử: Lấy g cao thêm 30 ml nước, khuấy kỹ, lọc Dịch lọc Lắc với 20 ml n-butanol bão hòa nước lần, gộp chung dịch chiết n-butanol, rửa với 40 ml amoni hydroxyd 10%, sau rửa lại với 40 ml nước bão hòa n-butanol lần, bỏ lớp nước Dịch chiết n-butanol đến cắn, hịa tan ml methanol Dung dịch đối chiếu: Lấy g bột Cát cánh 0,5 g bột Sài hồ, thêm 30 ml nước đem cách thủy 80 ˚C 30 phút, lọc Dịch lọc chiết dung dịch thử Phát hiện: Nhúng thuốc thử VS, sấy 105 oC đến rõ vết G Định tính Ngưu tất Sinh địa Hệ dung môi Ngưu tất: Cloroform - methanol - nước - acid formic (8 : : : 0,2) Hệ dung môi Sinh địa: Cloroform - methanol - acid acetic (10 : 1,5 : 0,1) Dung dịch thử: Lấy g cao thêm 30 ml nước, khuấy kỹ, lọc Lắc với 20 ml n-butanol lần, gộp chung dịch chiết n-butanol, cô đến cắn, hòa tan ml methanol Dung dịch đối chiếu: Lấy g bột Ngưu tất g Sinh địa thêm 30 ml nước đem cách thủy nhiệt độ 80 ˚C 30 phút, lọc Dịch lọc chiết dung dịch thử, dung dịch đối chiếu tương ứng Phát hiện: Nhúng thuốc thử VS, sấy 105 oC đến rõ vết Định lượng amygdalin Pha động: Methanol - nước (21,5 : 78,5) Dung dịch đối chiếu: Hòa tan amygdalin pha động để dung dịch đối chiếu có nồng độ xác khoảng 24 ppm, lọc qua màng lọc 0,45 µm Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 84 Dung dịch thử: Cân 20 viên nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc viên, nghiền trộn Cân xác lượng bột thuốc tương đương khối lượng trung bình viên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml methanol 50%, siêu âm 30 phút, điền đến vạch với dung môi, lắc Lọc, lấy xác 10 ml dịch lọc pha loãng thành 25 ml với pha động, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm Điều kiện sắc ký - Cột sắc ký pha đảo Eclipse XDB - C18 (250 x 4,6 mm; m), nhiệt độ cột 25 oC Số đĩa lý thuyết cột không 5000 tính theo pic amygdalin - Đầu dị PDA, bước sóng phát 210 nm - Tốc độ dòng ml/phút Thể tích tiêm mẫu 20 l Định lượng paeoniflorin Pha động: Acetonitril - dung dịch KH2PO4 0,05M pH4,5 (18 : 82) Dung dịch đối chiếu: Hòa tan paeoniflorin pha động để dung dịch đối chiếu có nồng độ xác khoảng 16 g/ml, lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch thử: Tiến hành phần định lượng amygdalin Điều kiện sắc ký: - Cột sắc ký pha đảo Eclipse XDB - C18 (250 x 4,6 mm; m), nhiệt độ cột 25 oC Số đĩa lý thuyết cột khơng 3000 tính theo pic paeoniflorin - Đầu dị PDA, bước sóng phát 230 nm - Tốc độ dịng ml/phút Thể tích tiêm mẫu 20 l Hàm lượng (mg) amygdalin paeoniflorin viên tính theo cơng thức: P (mg) = St × mc × Cc × Dt × mv Sc × Dc × mt St , S c : Diện tích pic amygdalin paeoniflorin mẫu thử mẫu đối chiếu mc : Khối lượng amygdalin paeoniflorin đối chiếu (mg) Cc : Hàm lượng amygdalin paeoniflorin đối chiếu (%) Dt , Dc : Độ pha loãng dung dịch thử dung dịch đối chiếu mv : Khối lượng trung bình viên (mg) mt : Khối lượng bột thuốc cân để định lượng (mg) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 85 ĐĨNG GÓI - GHI NHÃN - BẢO QUẢN - HẠN DÙNG Đóng gói: Chai 100 viên nang Ghi nhãn: Rõ ràng, quy chế Bảo quản: Nơi khô mát, nhiệt độ 30 °C Hạn dùng: 36 tháng kể từ ngày sản xuất Ngày … tháng … năm 2018 Thủ trưởng đơn vị (ký tên, đóng dấu) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 86 CHƯƠNG BÀN LUẬN Xây dựng quy trình định tính dược liệu cao viên HPTƯ phương pháp SKLM Huyết phủ trục ứ gồm dược liệu Đào nhân, Hồng hoa, Đương quy, Xuyên khung, Xích thược, Sài hồ, Chỉ xác, Cam thảo, Ngưu tất, Cát cánh, Sinh địa thuốc tiếng y học cổ truyền Trung Hoa, sử dụng rộng rãi điều trị bệnh lý tim mạch huyết khối, đau thắt ngực, nhồi máu tim Nhiều dạng thuốc đại thuốc đời viên nén, viên nang…Trong dạng bào chế viên nang đưa vào thành chuyên luận CP 2010 Đề tài xây dựng quy trình định tính đồng thời Đương quy Xuyên khung, định tính Chỉ xác, Cam thảo phương pháp SKLM yêu cầu CP2010 Tuy nhiên, kết định tính Đương quy Xuyên khung sắc ký lớp mỏng cần ý thêm để tăng phân biệt dược liệu cho vết giống CP 2010 chưa có phương pháp định tính dược liệu: Xích thược, Đào nhân, Hồng hoa, Sinh địa, Cát cánh, Ngưu tất viên HPTƯ Do đề tài xây dựng quy trình định tính dược liệu cao viên HPTƯ góp phần đánh giá chất lượng chế phẩm chặt chẽ Xây dựng thẩm định quy trình định lượng amygdalin cao viên HPTƯ phương pháp HPLC - PDA Amygdalin hoạt chất có tác dụng khắc phục tình trạng tăng đông máu, bảo vệ tế bào nội mạch ức chế trình kết tập tiểu cầu giúp ngăn ngừa huyết khối CP 2010 chưa có phương pháp định lượng amygdalin viên HPTƯ Khảo sát quy trình định tính amygdalin cao viên HPTƯ phương pháp HPLC theo CP 2010 với chương trình pha động, cho pic amygdalin tách tốt thời gian phân tích dài Từ đề tài khảo sát thay đổi tỷ lệ pha động rửa giải đẳng dòng giúp rút ngắn thời gian phân tích từ 65 phút xuống 22 phút cao 40 phút viên HPTƯ Đồng thời đề tài tiến hành thẩm định quy trình để định lượng amygdalin cao viên HPTƯ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 87 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng paeoniflorin bột Xích thược viên HPTƯ phương pháp HPLC - PDA Đề tài xây dựng thẩm định quy trình để định lượng paeoniflorin bột Xích thược viên HPTƯ, sử dụng pha động hỗn hợp acetonitril - dung dịch KH2PO4 0,05M pH 4,5 (18 : 82) Do hàm lượng hoạt chất dược liệu thường dao động nhiều nên đề tài xây dựng quy trình định lượng với khoảng xác định rộng từ 6,4 - 25,6 µg/ml (tương ứng 40 - 160% so với nồng độ định lượng) Theo CP 2010, định lượng paeoniflorin viên HPTƯ tiến hành với pha động acetonitril - acid acetic - nước (16 : : 84) TCCS kiểm nghiệm viên Huyết phủ trục ứ Bảng 4.35 So sánh tiêu chuẩn CP 2010 TCCS Chỉ tiêu Theo CP 2010 Định tính Đương quy, Xuyên Theo TCCS Định tính dược liệu Đương khung, Chỉ xác, Sài hồ, Cam thảo quy, Xuyên khung, Chỉ xác, Sài SKLM, định tính amygdalin hồ, Cam thảo SKLM theo Định tính HPLC yêu cầu CP 2010 Chưa có phương pháp định tính Bổ sung thêm định tính Xích Xích thược, Đào nhân, Hồng hoa, thược, Đào nhân, Hồng hoa, Cát Cát cánh, Ngưu tất, Sinh địa cánh, Ngưu tất, Sinh địa Định lượng Chưa có tiêu định lượng Định lượng amygdalin với pha amygdalin động methanol - nước (21,5 : 78,5) amygdalin Định lượng Pha động acetonitril - acid Pha động acetonitril - dung dịch paeoniflorin acetic - nước (16 : : 84) KH2PO4 0,05M pH 4,5 (18 : 82) Từ kết thực nghiệm TCCS đưa mức tiêu hàm lượng paeoniflorin viên là: Không thấp 2,0 mg Trong CP 2010 đưa mức tiêu hàm lượng paeoniflorin viên không thấp 1,0 mg Điều công thức bào chế viên sử dụng nghiên cứu có hàm lượng Xích thược 108,0 mg gấp đơi so với hàm lượng công thức viên CP 2010 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 88 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau thời gian nghiên cứu, với mục tiêu đề ra, đề tài đạt kết quả: - Xây dựng quy trình định tính tất 11 dược liệu gồm Xích thược, Đào nhân, Đương quy, Xuyên khung, Hồng hoa, Sài hồ, Sinh địa, Chỉ xác, Cát cánh, Ngưu tất, Cam thảo có cao viên HPTƯ phương pháp SKLM - Xây dựng quy trình định lượng amygdalin cao viên HPTƯ phương pháp HPLC - PDA đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính (phương trình hồi quy ŷ = 18,1040x, R = 1) , độ lặp lại (RSD = 1,8%), độ xác trung gian (RSD = 1,3% ) , độ (tỷ lệ hồi phục 98,1 - 101,1%) khoảng xác định từ 9,6 - 38,4 µg/ml - Xây dựng quy trình định lượng paeoniflorin bột Xích thược viên HPTƯ phương pháp HPLC - PDA đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính (phương trình hồi quy ŷ = 26,8272x, R = 0,9999) , độ lặp lại (RSD = 1,2%), độ xác trung gian (RSD = 0,9%) , độ (tỷ lệ hồi phục 98,2 - 100,2%) khoảng xác định từ 6,4 - 25,6 µg/ml - Dự thảo TCCS kiểm nghiệm bán thành phẩm (bột Xích thược, cao HPTƯ) TCCS kiểm nghiệm thành phẩm (viên HPTƯ) dựa kết từ thực nghiệm thu tài liệu tham khảo DĐVN V CP 2010 KIẾN NGHỊ Nếu đề tài tiếp tục, số kiến nghị đề xuất sau: - Nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng đồng thời paeoniflorin amygdalin viên phương pháp HPLC - PDA - Vận dụng TCCS xây dựng để kiểm soát chất lượng nguyên liệu bán thành phẩm thành phẩm viên HPTƯ - Với kết đạt được, xin thay tên đề tài thành: “Góp phần xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm viên nang từ dược liệu hướng điều trị huyết khối, đau thắt ngực” Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ Y tế (2010), Phương pháp chế biến bảo đảm chất lượng 85 vị thuốc đông y (ban hành kèm theo định số 3759/QĐ-BYT ngày 08 tháng 10 năm 2010), Hà Nội, pp 33 - 34 Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Tập 2, NXB Y học, Hà Nội Võ Thị Bạch Huệ, Vĩnh Định (2008), Hóa phân tích, Tập 2, NXB Y Học, Hà Nội, pp 187 - 198 Trần Hùng, Ngô Vân Thu (2011), Dược liệu học, Tập 1, NXB Y học, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Hà Nội, Hà Nội Trương Hữu Nhàn, Trần Thị Bạch Tuyết, Phan Quan Chí Hiếu, Nguyễn Phương Dung, Bùi Mỹ Linh, Phạm Thị Mỹ Nhung , Trần Phúc Vinh (2012), "Tiêu chuẩn hóa cao chiết viên nang bổ dương hoàn ngũ thang", Y Học TP Hồ Chí Minh, 16 (1), pp 207 - 212 Lâm Bích Thảo, Dương Thị Mộng Ngọc , Nguyễn Phương Dung (2012), "Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nang bổ khí hoạt huyết", Y Học TP Hồ Chí Minh, 16 (1), pp 224 - 228 Tài liệu Tiếng Anh Chinese Pharmacopoeia Commission (2005), Pharmacopoeia of the people's republic of China, Vol 1, People's Medical Publishing House, China Chinese Pharmacopoeia Commission (2010), Pharmacopoeia of the people's republic of China, Vol 1, People's Medical Publishing House, China, pp.1425 10 Hildebert Wagner (2011), Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines, Thin-layer and High Performance Liquid Chromatography of Chinese Drugs, Vol 1, Verlag New York 11 Hildebert Wagner (2011), Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines, Thin-layer and High Performance Liquid Chromatography of Chinese Drugs, Vol 2, Verlag New York Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 12 Hildebert Wagner (2011), Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines, Thin-layer and High Performance Liquid Chromatography of Chinese Drugs, Vol 3, Verlag New York 13 Hong Kong's Department of Health (2005), Hong Kong Chinese Materia Medica Standards, Vol 1, Hong Kong, pp 42 - 51 14 Hong Kong's Department of Health (2005), Hong Kong Chinese Materia Medica Standards, Vol 2, Hong Kong, pp 247 - 256 15 Hong Kong's Department of Health (2005), Hong Kong Chinese Materia Medica Standards, Vol 5, Hong Kong, pp 292 - 304 16 Japanese Pharmacopoeia Expert Commtee (2011), Japanese Pharmacopoeia 16th Edition, pp 1734 - 1737 17 Jun Xu, Hu-Biao Chen, Jing Liu, Ka-Yan Kwok, Rui-Qi Yue, Tao Yi, HingMan Ho, Zhong-Zheng Zhao , Quan-Bin Han (2013), "Why are Angelicae Sinensis radix and Chuanxiong Rhizoma different? An explanation from a chemical perspective", Food Research International, 54, pp 439 - 447 18 Lei Zhang, Lin Zhu, Yuefei Wang, Zhenzuo Jiang, Xin Chai, Yan Zhu, Xiumei Gao , Aidi Qi (2012), "Characterization and quantification of major constituents of Xue Fu Zhu Yu by UPLC-DAD–MS/MS", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 62, pp 203-209 19 Lei Zhang, Zhenzuo Jiang, Jing Yang, Yuanyuan Li, Yuefei Wang , Xin Chai (2015), "Chemical material basis study of Xuefu Zhuyu decoction by ultraperformance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry", Journal of Food and Drug Analysis, 248, pp 1-10 20 Li Liu, Jin-ao Duan, Yuping Tang, Nianyun Yang, Hongyue Ma , Xuqin Shi (2012), "Taoren–Honghua herb pair and its main components promoting blood circulation through influencing on hemorheology, plasma coagulation and platelet aggregation", Journal of Ethnopharmacology, 139, pp 381 - 387 21 Liu Yang, Shunjun Xu, Hepin Liu, Runtao Tian , Peishan Xie (2009), "A Simple Thin-Layer Chromatographic Fingerprint Method for Distinguishing Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Between Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba", Journal of Liquid Chromatography and Related Technologies, 32, pp 2893-2905 22 Muhammad Qadir , Kiran Fatima (2017), "Review on Pharmacological Activity of Amygdalin", Archives in Cancer Research, (4), pp 1-3 23 Songshan Ye, Bingyu Mao, Lei Yang , Junran Hou (2016), "Thrombosis recanalization by paeoniflrin through the upregulation of urokinase‑type plasminogen activator via the MAPK signaling pathway", Molecular Medicine Reports, 13, pp 4593 - 4598 24 Stevenson Xutian, Shusheng Tai , Chun-Su Yuan (2015), Handbook of Traditional Chinese Medicine, Vol 2, World Scientific, Singapore, pp 634 25 Wen-Long Wei, Rui Zeng, Cai-Mei Gu, Yan Qu , Lin-Fang Huang (2016), "Review Angelica sinensis in China-A review of botanical profile, ethnopharmacology, phytochemistry and chemical analysis", Journal of Ethnopharmacology, 190, pp 116–141 26 WHO (1999), Monographs on selected medicinal plants, Vol 1, Geneva 27 Xia Ran, Li Ma, Cheng Peng, Hong Zhang , Lu-Ping Qin (2011), "Ligusticum chuanxiong Hort: A review of chemistry and pharmacology", Pharmaceutical Biology, 49 (11), pp 1180 – 1189 28 Xu Xiao-Na, Jiang Jun-Hui, Liang Yi-Zeng, Li Xiao-Ru, Yi Lun-Zhao , Jin-Le Cheng (2011), "Chromatographic fingerprint analysis of Fructus Aurantii Immaturus by HPLC-DAD and chemometric methods", Journal of Central South University of Technology, 18, pp 353 - 360 29 Ying Gao, Wenyuan Gao, Xuan Dong (2010), "LC-ELSD analysis for simultaneous determination of five components in the Xue-Fu-Zhu-Yu capsules", Frontiers of Chemical Engineering in China, (1), pp 96 - 101 30 Zhanwen Liu , Liang Liu (2009), Essentials of Chinese Medicine, Vol 2, Springer - Verlag, Lon Don, pp 424 - 425 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: KHẢO SÁT ĐỊNH TÍNH ĐƯƠNG QUY, XUYÊN KHUNG TRONG CAO VÀ VIÊN BẰNG SKLM ĐQ: Dung dịch đối chiếu Đương quy XK: Dung dịch đối chiếu Xuyên khung T1: Dung dịch thử cao HPTƯ T2 : Dung dịch thử viên HPTƯ UV 254 nm UV 365 nm VS, sấy 105 oC XK ĐQ T1 XK ĐQ T1 T2 XK ĐQ T1 T2 P P P Hệ dung môi 1: n-Hexan - ethyl acetat (9 : 1) XK ĐQ T1 P XK ĐQ T1 XK ĐQ T1 T2 P P Hệ dung môi 2: n-Hexan - ethyl acetat (3 : 1) T2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn T2 T2 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - XK ĐQ T1 T2 XK ĐQ T1 T2 XK ĐQ T1 P P - ethyl acetat - acid acetic P (90 : 10 : 1) Hệ dung môi 4: Toluen T2 XK ĐQ T1 XK ĐQ T1 T2 XK ĐQ T1 T2 P Hệ dung môiP 5: Cloroform - ethyl acetatP (9 : 1) T2 XK ĐQ T1 T2 XK ĐQ T1 T2 XK ĐQ T1 T2 P Hệ dung môi 1: n-HexanP- ethyl acetat (9 : 1), khơng Pbão hịa dung mơi Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - PHỤ LỤC 2: KHẢO SÁT ĐỊNH TÍNH ĐƯƠNG QUY, XUYÊN KHUNG TRONG CAO VÀ VIÊN BẰNG HPLC Dung dịch đối chiếu Đương quy: Cân g bột Đương quy thêm 10 ml ethanol, siêu âm 30 phút, lọc qua màng lọc 0,45 m Dung dịch đối chiếu Xuyên khung: Cân g bột Xuyên khung chiết Đương quy Thời gian (phút) Acetonitril (% tt/tt) Nước (% tt/tt) Ghi 0-5 35 65 - 10 35 → 55 65 → 45 Gradient tuyến tính 10 - 25 55 → 60 45 → 40 Gradient tuyến tính 25 - 30 60 → 72 40 → 28 Gradient tuyến tính 30 - 40 72 28 Đẳng dòng Đẳng dòng - Cột Eclipse XDB - C18 (250 x 4,6 mm, m) - Bước sóng phát 254 nm Đương quy Xuyên khung Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn - Tốc độ dịng ml/phút - Thể tích tiêm mẫu 10 l ... ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN KHÁNH DUY GÓP PHẦN XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ KIỂM NGHIỆM VIÊN NANG TỪ DƯỢC LIỆU HƯỚNG ĐIỀU TRỊ HUYẾT KHỐI, ĐAU THẮT NGỰC Ngành: Kiểm nghiệm thuốc... phát từ thực tế đó, chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Góp phần xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm viên nang từ dược liệu hướng điều trị huyết khối, đau thắt ngực? ?? với mục tiêu cụ thể sau: Xây dựng. .. hành đề tài ? ?Góp phần xây dựng tiêu chuẩn sở kiểm nghiệm viên nang từ dược liệu hướng điều trị huyết khối, đau thắt ngực? ?? Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu Đối tượng: Các TCCS kiểm nghiệm bột