Mục tiêu: Nghiên cứu này tiến hành nhằm xây dựng tiêu chuẩn cơ sở của “cồn mộc miết tử”. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: “Cồn mộc miết tử” do Khoa Dược- Trường Đại học y dược Đại học Thái Nguyên sản xuất.
ISSN: 1859-2171 e-ISSN: 2615-9562 TNU Journal of Science and Technology 207(14): 107 - 111 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CỦA “CỒN MỘC MIẾT TỬ” Nguyễn Thu Quỳnh*, Nguyễn Duy Thư, Bùi Thị Luyến, Nguyễn Thị Lan Hương, Nguyễn Thị Mỹ Ninh Trường Đại học Y Dược – ĐH Thái Nguyên TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu tiến hành nhằm xây dựng tiêu chuẩn sở “cồn mộc miết tử” Đối tượng phương pháp nghiên cứu: “Cồn mộc miết tử” Khoa Dược- Trường Đại học y dượcĐại học Thái Nguyên sản xuất Xây dựng tiêu chuẩn sở chế phẩm theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV Kết quả: Chế phẩm dung dịch màu vàng, mùi đặc trưng, đạt yêu cầu độ đồng thể tích, định tính mộc miết tử (phương pháp sắc ký lớp mỏng phản ứng tạo bọt), tỷ trọng dung dịch 0,89 ± 0,019; cắn khô 8,12 ± 0,68 (g/L); hàm lượng ethanol 68,2± 1,48 (%); hàm lượng saponin tổng 11,25±1,39 (mg/mL) Kết luận: Đã xây dựng tiêu chuẩn sở “cồn mộc miết tử” bao gồm tiêu: hình thức cảm quan, độ đồng thể tích, định tính, hàm lượng saponin tổng, tỷ trọng, hàm lượng ethanol, cắn khơ Từ khóa: Cồn mộc miết tử, tiêu chuẩn sở, hàm lượng ethanol, saponin tổng, định tính Ngày nhận bài: 06/8/2019; Ngày hoàn thiện: 16/9/2019; Ngày đăng: 04/10/2019 STUDY OF STANDARDIZATION OF “CON MOC MIET TU” Nguyen Thu Quynh*, Nguyen Duy Thu, Bui Thi Luyen, Nguyen Thi Lan Hương, Nguyen Thi My Ninh University of Medicine and Pharmacy - TNU ABSTRACT Objectives: To establish institutional standard of “Con moc miet tu” Subjects and method: “Con moc miet tu” produced by Pharmarceutical Department, the University of Medicine and Pharmacy- Thai Nguyen university Establishing the institutional standard for “Con moc miet tu” under the regulations of Vietnamese Phamacopoeia IV Results: The composition has the yellow solution, characteristic odor, met the standards of volume uniformity, qualitative of Momordica cochinchinensis seeds (TLC or foamy reaction), density 0.89 ± 0.019 (g/mL); the dry biting 8.12 ± 0.68 (g/L); ethanol content 68.2 ± 1.48 (%); total saponin content 11.25 ± 1.39 (mg/mL) Conclusion: Institutional standard of “Con moc miet tu” has been established including appearance, volume uniformity, quantitative of total saponin, qualitative, density, ethanol content and dry bite Key word: Con moc miet tu, Institutional standard, ethanol content, total saponin, qualitative Received: 06/8/2019; Revised: 16/9/2019; Published: 04/10/2019 * Corresponding author Email: quynhhdytn@gmail.com http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 107 Nguyễn Thu Quỳnh Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 207(14): 107 - 111 Giới thiệu * Tính chất: Kiểm tra cảm quan Cồn mộc miết tử sản phẩm có nguồn gốc thuốc dân gian sử dụng nhằm làm giảm đau, chống viêm trường hợp bị sưng đau chấn thương trường hợp viêm khớp mạn tính cấp tính Sản phẩm tiến hành thử tác dụng giảm đau, chống viêm động vật thí nghiệm cho kết tốt Xuất phát từ nhu cầu điều trị tận dụng nguồn nguyên liệu sẵn có địa phương tiến hành đề tài nghiên cứu nhằm bào chế sản phẩm “cồn mộc miết tử” với mong muốn cung cấp sản phẩm nguồn gốc thiên nhiên an tồn, lành tính đáp ứng u cầu trị bệnh người dân Sản phẩm góp phần chăm sóc sức khỏe cộng đồng giải pháp đơn giản, tiết kiệm, phát triển kinh tế địa phương đồng thời giúp bảo tồn phát huy giá trị thuốc Việt * Độ độ đồng nhất: Kiểm tra cảm quan Do vậy, để đánh giá chất lượng, góp phần nâng cao độ ổn định hiệu điều trị sản phẩm, tiến hành nghiên cứu phương pháp kiểm nghiệm để xây dựng tiêu chuẩn sở cồn mộc miết tử Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên vật liệu, hóa chất thiết bị Sản phẩm cồn mộc miết tử Khoa dượcTrường Đại học y dược- Đại học Thái Nguyên sản xuất gồm thành phần mộc miết tử ethanol Hóa chất nghiên cứu đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích Thiết bị sử dụng nghiên cứu gồm cân phân tích (độ xác 0,0001 g) cân kỹ thuật (độ xác 0,01 g) Satorrius, máy siêu âm LC 60H (Mỹ), tủ sấy tĩnh Memmert (Đức), máy cất quay chân không Etrolab (Đức) dụng cụ thí nghiệm khác 2.2 Phương pháp nghiên cứu Tiến hành khảo sát tiêu chất lượng cồn thuốc mộc miết tử theo tiêu chuẩn chất lượng cồn thuốc Dược Điển Việt Nam IV [1], tham khảo tài liệu số [2], [3], [4] bao gồm: 108 * Độ đồng thể tích: Thử theo phụ lục 11.1 Dược điển Việt nam IV, cụ thể: Lấy ngẫu nhiên đơn vị chế phẩm Xác định thể tích đơn vị bơm tiêm chuẩn ống đong chuẩn sạch, khơ, có độ xác phù hợp Thể tích đơn vị phải nằm khoảng từ thể tích ghi nhãn đến giới hạn cho phép Nếu có đơn vị khơng đạt phải tiến hành kiểm tra lần thứ hai giống lần đầu Chế phẩm đạt yêu cầu lần thử khơng có đơn vị tích nằm ngồi giới hạn cho phép * Định tính: Bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng phản ứng tạo bọt: A Phương pháp sắc ký lớp mỏng: Bản mỏng: Silica gel 60 F254 (Merck) Dung môi khai triển cyclohexan: ethyl acetat (4 : 1) Dung dịch thử: Lấy 10 mL chế phẩm cho vào cốc có mỏ 100 mL, đến cắn Hòa tan cắn 10 mL nước chuyển vào bình chiết, chiết với 20 mL ether dầu hỏa (30 - 600), để lắng, chiết lấy dịch ether dầu hỏa Cơ dịch chiết đến cạn khoảng mL, dùng làm dung dịch chấm sắc ký Dung dịch đối chiếu: Cân khoảng 3,0 g bột thô hạt gấc vào cốc có mỏ 100 mL, thêm 20 mL ethanol 70%, lắc siêu âm 15 phút, lọc, cô dịch lọc đến cắn Hòa tan cắn 10 mL nước, chuyển vào bình chiết, lắc với 20 mL ether dầu hỏa (30 – 600), để lắng, chiết lấy dịch ether dầu hỏa Cơ dịch chiết đến cạn khoảng mL, dùng làm dung dịch chấm sắc ký Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng khoảng 20 μl dung dịch thử dung dịch đối chiếu Triển khai sắc ký đến dung môi 10 – 12 cm, lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phòng, soi đèn tử ngoại bước sóng 254 nm Yêu cầu: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải xuất vết phát quang có màu http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thu Quỳnh Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN sắc giá trị Rf với vết sắc kí đồ dung dịch đối chiếu B Phản ứng tạo bọt: Lấy khối lượng bột thuốc tương đương với g bột dược liệu thô, thêm 10 mL ethanol 70% đun cách thủy 30 phút, lọc Lấy mL dịch lọc cô cách thủy tới cắn sền sệt Thêm vào cắn 20 mL nước nóng khuấy để nguội, lọc Lấy 10 mL dịch lọc cho vào ống nghiệm, lắc mạnh theo chiều dọc ống nghiệm 15 phút Để yên 15 phút thấy có cột bọt bền phút * Tỷ trọng: Thử theo phụ lục 6.5 Dược điển Việt nam IV, phương pháp dùng tỷ trọng kế: Lau tỷ trọng kế ethanol ether Dùng đũa thuỷ tinh trộn chất lỏng cần xác định tỷ trọng Đặt nhẹ nhàng tỷ trọng kế vào chất lỏng cho tỷ trọng kế khơng chạm vào thành đáy dụng cụ đựng chất thử Chỉnh nhiệt độ tới 20oC tỷ trọng kế ổn định, đọc kết theo vòng khum mức chất lỏng Đối với chất lỏng không suốt, đọc theo vòng khum * Hàm lượng ethanol: Thử theo phụ lục 12.10 Dược điển Việt nam IV, phương pháp 3: Hút xác 25 mL chế phẩm vào bình chiết 250 mL, lắc với 25 mL dung dịch bão hòa NaCl 25 mL ether dầu hòa phút, chiết lấy lớp nước- ethanol vào bình chiết khác Thêm 13 mL ether dầu hỏa, chiết lớp nước- ethanol Gộp lớp ether dầu hỏa lần chiết trên, thêm 25 mL dung dịch bão hòa NaCl, chiết lớp nước – ethanol Gộp toàn lớp nước- ethanol hai lần chiết vào bình cất, thêm đá bọt lắc * Hàm lượng saponin tổng: Tiến hành theo phương pháp quang phổ UV-Vis [2], [3], [4] Dung dịch thử: Hút mL mẫu thử, cô quay chân không thu 1- mL dịch chiết, thêm mL nước cất, chuyển tồn dịch chiết vào bình gạn Chiết lần với n-butanol bão hòa nước, lần 10 mL Thu dịch chiết n-butanol, cô quay chân không thu hồi dung môi tới cắn, thêm 0,4 mL dung dịch vanilin 5% acid acetic băng 2,4 mL http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 207(14): 107 - 111 acid pecloric 70%, đun cách thủy 80oC vòng 20 phút Làm lạnh nước đá Chuyển dung dịch vào bình định mức 10 mL, thêm ethyl acetat vừa đủ, lắc Dung dịch chuẩn: Pha chuẩn Gypenoside XVII metanol để thu dung dịch có nồng độ 0,1 mg/mL Hút mL dung dịch cô quay đến cắn, thêm 0,4 mL dung dịch vanilin 5% acid acetic băng 2,4 mL acid pecloric 70%, đun cách thủy 800C vòng 20 phút Làm lạnh nước đá Chuyển dung dịch vào bình định mức 10 mL, thêm ethyl acetat vừa đủ, lắc Mẫu trắng: Cô quay mL metanol tới cắn, thêm 30 mL n-butanol, cô quay tới cắn, thêm 0,4 mL dung dịch vanilin 5% acid acetic băng 2,4 mL acid pecloric 70%, đun cách thủy 80oC vòng 20 phút Làm lạnh nước đá Chuyển dung dịch vào bình định mức 10 mL, thêm ethyl acetat vừa đủ, lắc Quét phổ dung dịch thử dung dịch chuẩn dải sóng từ 400 – 700 nm, đo độ hấp thụ bước sóng cực đại Tính tốn kết theo cơng thức sau: Trong đó: mc: Lượng cân chuẩn tính g Fc: Hệ số pha lỗng chuẩn tính đến nồng độ 0,1mg/mL Dc: Mật độ quang dung dịch chuẩn Dt: Mật độ quang dung dịch thử C(%): Hàm lượng chất chuẩn * Cắn sau bay hơi: Thử theo chuyên luận cồn thuốc Dược điển Việt nam IV Lấy xác 5,0 mL cồn thuốc cho vào cốc có đường kính cm đến cm cao cm đến cm cân bì trước (m1), làm bay đến khơ cách thủy sấy khô 1000C giờ, để nguội bình hút ẩm cân (m2) Tính % khối lượng hay số gam cắn lít chế phẩm Số gam cắn lít chế phẩm: m = (m2 – m1) * 200 (g) 109 Nguyễn Thu Quỳnh Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN Kết nghiên cứu 3.1 Kết đánh giá tính chất, độ độ đồng Theo dõi tính chất cho thấy, chế phẩm dung dịch suốt, màu vàng nâu, mùi đặc trưng, khơng có vật thể lạ quan sát mắt thường 3.2 Kết đánh giá tỷ trọng Xác định tỷ trọng cồn mộc miết tử theo phương pháp dùng tỷ trọng kế Kết trình bày bảng Bảng Kết khảo sát tỷ trọng cồn mộc miết tử STT Kết tỷ trọng (g/cm3) TB±SD (g/cm3) 0,89 0,92 0,89 ±0,019 0,87 0,89 0,88 Tỷ trọng mẫu khảo sát trung bình 0,89 ± 0,019 (g/cm3) 3.3 Tỷ lệ cắn khô Đánh giá lượng cắn sau bay thu kết trình bày bảng Bảng Kết khảo sát lượng cắn khô cồn mộc miết tử STT Khối lượng cắn (g/L) TB± SD (g/L) 7,31 8,12 ± 0,68 7,47 8,56 8,47 8,8 Nhận xét: Khối lượng cắn khơ trung bình 8,12 g/L với SD nhỏ 3.4 Hàm lượng ethanol Hàm lượng ethanol cồn mộc miết tử đánh giá theo phương pháp (phụ lục 10.12) Kết trình bày bảng Bảng Kết khảo sát hàm lượng ethanol cồn mộc miết tử STT 110 Kết hàm lượng ethanol (%) 68 66 70 69 68 TB ± SD (%) 68,2 ± 1,48 207(14): 107 - 111 Tất mẫu khảo sát có hàm lượng ethanol nằm khoảng 66- 70 (%) 3.5 Hàm lượng saponin tổng Xác định hàm lượng saponin cồn mộc miết tử theo phương pháp quang phổ UV-Vis Kết thu hàm lượng saponin tổng trung bình 11,25 mg/mL Bảng Kết khảo sát hàm lượng saponin tổng cồn mộc miết tử Hàm lượng saponin TB ± SD STT tổng (mg/mL) (mg/mL) 10,33 11,25± 1,39 11,56 13,42 11,18 9,78 3.6 Định tính Kết định tính mộc miết tử cồn mộc miết tử trình bày hình Hình Hình ảnh định tính cồn mộc miết tử 3.7 Độ đồng thể tích Tất mẫu khảo sát cho giới hạn thể tích nằm khoảng 0-8,5% so thể tích ghi nhãn Từ kết nghiên cứu, xây dựng tiêu chuẩn sở cồn mộc miết tử gồm tiêu sau: Tính chất: Chế phẩm dung dịch suốt, có màu vàng, mùi đặc trưng, khơng có vật thể lạ quan sát mắt thường Độ đồng thể tích: phép sai số +10,0% so thể tích ghi nhãn Tỷ trọng: Tỷ trọng chế phẩm nằm khoảng 0,87-0,98 (g/cm3) http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thu Quỳnh Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN Hàm lượng ethanol: Phải nằm khoảng 65,0-75,0% Định tính: Chế phẩm có phản ứng đặc trưng mộc miết tử Cắn khô: Không 10 g/L Hàm lượng saponin tổng: không nhỏ mg/mL Bản tiêu chuẩn sở Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm, mỹ phẩm, thực phẩm chức tỉnh Bắc Kạn thẩm định Tiến hành kiểm nghiệm mẫu “cồn mộc miết tử” theo tiêu chuẩn sở đề xuất Kết mẫu đạt tiêu chất lượng theo tiêu chuẩn sở (phiếu kiểm nghiệm số: 2019GT-087 ngày 14-05-2019) Kết luận Đã xây dựng tiêu chuẩn sở cồn mộc miết tử với tiêu tính chất, tỷ trọng, độ đồng thể tích, hàm lượng ethanol, định tính, cắn khơ, hàm lượng saponin tổng Tiêu http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 207(14): 107 - 111 chuẩn sở dùng để kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm cồn mộc miết tử Khoa Dược- Đại học Y Dược- Đại học Thái Nguyên sản xuất lưu hành TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bộ Y tế, Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, 2009 [2] Nguyễn Thu Quỳnh, Nguyễn Thị Lan Anh, Bùi Thị Luyến, Nguyễn Duy Thư, “Xây dựng phương pháp định lượng saponin dịch chiết nhân hạt gấc quang phổ UV-Vis”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ - Đại học Thái Nguyên, T 188, S 12/1, tr 39-45, 2018 [3] Han Benyong, Chen Ying, Ren Ying, “Content determination of total saponins from Opuntia”, Bio Technology An Indian Journal, Vol 10, No 18, pp.10400-10404, 2014 [4] Yoko Uematsu, Keiko Hirata, Kazuo Saito, “Spectrophotometric Determination of Saponin in Yucca Extract Used as Food Additive”, Journal Of Aoac International, Vol 83, No 6, pp.14511454, 2000 111 112 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn ... mẫu “cồn mộc miết tử” theo tiêu chuẩn sở đề xuất Kết mẫu đạt tiêu chất lượng theo tiêu chuẩn sở (phiếu kiểm nghiệm số: 2019GT-087 ngày 14-05-2019) Kết luận Đã xây dựng tiêu chuẩn sở cồn mộc miết. .. cứu phương pháp kiểm nghiệm để xây dựng tiêu chuẩn sở cồn mộc miết tử Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên vật liệu, hóa chất thiết bị Sản phẩm cồn mộc miết tử Khoa dượcTrường Đại học... giới hạn thể tích nằm khoảng 0-8,5% so thể tích ghi nhãn Từ kết nghiên cứu, xây dựng tiêu chuẩn sở cồn mộc miết tử gồm tiêu sau: Tính chất: Chế phẩm dung dịch suốt, có màu vàng, mùi đặc trưng,