Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cao khô sấy phun bài thuốc hỗ trợ điều trị thoái hóa cột sống của lương y nguyễn thiện chung

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM NGỌC THẠC NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM NGỌC THẠC NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN ĐỨC HẠNH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học TS Nguyễn Đức Hạnh Các số liệu kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khoa học Tác giả luận văn Phạm Ngọc Thạc TÓM TẮT Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ Dược học khóa 2019 – 2021 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG Phạm Ngọc Thạc Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Đức Hạnh Đặt vấn đề Thối hóa cột sống bệnh lý xương khớp thường gặp, xảy q trình lão hóa xương khớp Tại Việt Nam, tỷ lệ mắc bệnh Cơ-XươngKhớp gia tăng nhanh chóng năm gần đây, đặc biệt thối hóa cột sống Bài thuốc hỗ trợ điều trị thối hóa cột sống Lương y Nguyễn Thiện Chung gồm 13 dược liệu sử dụng hỗ trợ điều trị bệnh thối hóa cột sống khoảng 300 bệnh nhân tỉnh An Giang, cho hiệu tốt Năm 2020, PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi cộng chứng minh cao khơ sấy phun thuốc nói có tác dụng giảm đau, kháng viêm chuột Tuy nhiên, cao khô sấy phun thuốc chưa xây dựng tiêu chuẩn để kiểm tra chất lượng đánh giá độ ổn định Do đó, việc xây dựng tiêu chuẩn cao khô sấy phun nghiên cứu có tính cấp thiết Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu lô cao khô sấy phun thuốc (số lô 010719, 020719 030719) cung cấp nhóm nghiên cứu Khoa Dược – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Phương pháp nghiên cứu Lựa chọn chất điểm cho cao khơ thuốc dựa vai trị (qn, thần, tá, sứ) dược liệu thuốc chọn dược liệu để phân lập chất chất điểm Lựa chọn chất có hàm lượng cao, ưu tiên chất có hoạt tính sinh học cao chiết thuốc Xây dựng tiêu chuẩn sở cao khô thuốc với tiêu chí cảm quan, độ ẩm, giới hạn kim loại nặng, giới hạn vi sinh vật, dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, định tính định lượng Từ kết kiểm nghiệm, đề xuất tiêu chuẩn sở cao khô thuốc Kết Dựa vào vai trò dược liệu thuốc sắc ký lớp mỏng lựa chọn dược liệu Nhàu để phân lập chất điểm thuốc với hàm lượng cao Phân lập hợp chất NH (822 mg) với độ tinh khiết pic 97,41 % Hợp chất xác định cấu trúc acid asperulosidic Quy trình định lượng acid asperulosidic cao khô sấy phun thuốc phương pháp HPLC xây dựng thẩm định Vì vậy, quy trình định lượng đáng tin cậy Quy trình định tính sắc ký lớp mỏng đồng thời dược liệu Nhàu Đinh lăng xẻ, dược liệu Râu mèo, Mía dò xây dựng thẩm định Vì vậy, quy trình định tính đáng tin cậy Từ kết kiểm nghiệm lô cao khô sấy phun thuốc đề xuất mức chất lượng phụ hợp Kết luận Chất điểm cho cao khô sấy phun thuốc chọn acid asperulosidic Xây dựng tiêu chuẩn sở cao khô sấy phun thuốc với tiêu chí cảm quan, độ ẩm, giới hạn kim loại nặng, định tính, định lượng, giới hạn vi sinh vật dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Từ khóa Cao khơ sấy phun thuốc, chất điểm chỉ, tiêu chuẩn sở ABSTRACT Graduation thesis of Pharmacy Master’s degree – Academic year 2019-2021 STUDY ON ESTABLISHING THE QUALITY STANDARDS OF THE SPRAY-DRIED EXTRACTS FROM SPINAL DEGENERATION REMEDY OF PHYSICIAN NGUYEN THIEN CHUNG Pham Ngoc Thac Instructor: Ph.D Nguyen Duc Hanh Introduction The spinal degeneration remedy of physician Nguyen Thien Chung (BT) which comprises 13 medicinal herbs has been reported to be effective in more than 300 patients and demonstrated to possess the analgesic and anti - inflamatory activities in mice This study was conducted to establish the quality standards of the spraydried extracts from this remedy for testing quality and stability assessment Materials and methods Materials: batches of spray-dried extracts (lot numbers 010719, 020719 and 030719) were provided by the research team of faculty of pharmacy – University of medicine and Pharmacy in Ho Chi Minh city Methods: Select markers with high content, biological activities in the extract Contribute quality standards for the extract’s criteria such as description, loss on drying, heavy metals, pesticide residues, microbiological limit, quantitation and qualitation From the test results, recommend the quality level of each criteria Results Based on the role of medicinal herbs in the remedy and thin layer chromatography, it is possible to select Callus Morindae to isolate the marker with high concentration Isolation of 822 mg NH Chemical structure of this compound was identified as acid asperulosidic, using MS, NMR spectrum Built and validated the quantitative evaluation method for acid asperulosidic in the spray-dried extract by HPLC Built and validated the quanlitative evaluation method for Callus Morindae, Herba Orthosiphonis, Rhizoma Costus speciosus, Caulis et Folium Polysciatis in the spray-dried extract by thin layer chromatography From the test results of batches, recommend the suitable criteria Conclusion The marker selected for the spray-dried extract was acid asperulosidic Contribute base standards for the extract’s criteria such as description, loss on drying, heavy metals, pesticide residues, microbiological limit, quantitation and qualitation Key words: The spray-dried extract, base standards, marker MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT .ii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG 1.2 KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG BÀI THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN 1.3 TỔNG QUAN VỀ TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 35 3.1 LỰA CHỌN VÀ PHÂN LẬP CHẤT ĐIỂM CHỈ CHO CAO KHÔ BT 35 3.2 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ BT .51 3.3 BÀN LUẬN .80 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 82 4.1 KẾT LUẬN 82 4.2 ĐỀ NGHỊ 83 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 PHỤ LỤC 88 i DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ nguyên AO 3-O--D-glucopyranosyl-(14)--D glucuronopyranosyl-oleanolic acid 28O--D-glucopyranosyl ester BT Bài thuốc hỗ trợ điều trị thoái hóa cột sống Lương y Nguyễn Thiện Chung BVTV Bảo vệ thực vật BuOH n-Butanol CK Cao khô phun sấy CL Cao lỏng DAD Diode Array Detector DĐVN Dược điển Việt Nam ĐL Đinh lăng EtOAc Ethyl acetat E.A Phân đoạn ethyl acetat EtOH Ethanol HPLC High performance liquid chromatography MD Mía dị MeOH Methanol N Nhàu PĐ Phân đoạn RM Râu mèo SKLM Sắc ký lớp mỏng SPE Solid-phase extraction TCCS Tiêu chuẩn sở TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử YHCT Y học cổ truyền WHO World Health Organization Ý nghĩa tiếng Việt Đầu dò dãy diod quang Sắc ký lỏng hiệu cao Chiết pha rắn Tổ chức Y tế giới i DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các dược liệu BT Bảng 1.2 Chương trình pha động định tính amygdalin viên nang cứng thuốc Huyết phủ trục ứ 12 Bảng 1.3 Chương trình pha động định tính dấu vân tay viên nang QFGJS 13 Bảng 1.4 Các pic đặc trưng định tính dấu vân tay viên nang QFGJS 13 Bảng 1.5 Chương trình pha động định lượng đồng thời paeoniflorin geniposid cốm Tiêu dao tán 15 Bảng 1.6 Chương trình pha động định lượng đồng thời hợp chất cao đặc thuốc Testin 15 Bảng 1.7 Chương trình pha động định lượng đồng thời hợp chất thuốc Danggui Buxue 17 Bảng 2.8 Khảo sát điều kiện sắc ký để định lượng chất điểm BT 24 Bảng 2.9 Nồng độ acid asperulosidic đối chiếu khảo sát tính tuyến tính 26 Bảng 2.10 Nồng độ acid asperulosidic đối chiếu pha loãng 26 Bảng 2.11 Độ lặp lại độ hồi phục chấp nhận nồng độ khác 27 Bảng 3.12 Kết sắc ký cột pha thuận phân đoạn E.A cao Nhàu 43 Bảng 3.13 Kết sắc ký cột đảo C18 phân đoạn 44 Bảng 3.14 Chương trình sắc ký HPLC xác định độ tinh khiết hợp chất NH 48 Bảng 3.15 So sánh phổ NMR hợp chất NH acid asperulosidic theo tài liệu tham khảo 50 Bảng 3.16 Lượng acid asperulosidic chiết với tỉ lệ khối lượng cao khô BT : thể tích methanol khảo sát 54 Bảng 3.17 Chương trình pha động định lượng acid asperulosidic cao khô BT 55 Bảng 3.18 Tính tương thích hệ thống quy trình định lượng acid asperulosidic cao khơ BT 56 Bảng 3.19 Tính tuyến tính quy trình định lượng acid asperulosidic cao khơ BT 58 Bảng 3.20 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng acid asperulosidic cao khơ BT 58 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.13 Phụ lục 17 Tiêu chuẩn sở cao khô thuốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Qui trình số : TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GÒN (SAPHARCEN) Ấn số: Bản số: TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN TỪ BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG Số trang: 1/5 Hiệu lực: ………… YÊU CẦU CHẤT LƯỢNG Cảm quan: Cao dạng bột mịn, đồng nhất, màu nâu, mùi dược liệu, dễ hút ẩm Độ ẩm: Không % (kl/kl) Giới hạn kim loại nặng: Không 20 ppm Định tính: Trên sắc ký đồ SKLM mẫu thử phải có vết có màu giá trị Rf với vết sắc ký đồ chất đối chiếu acid asperulosidic, sinensetin, 3-O--Dglucopyranosyl-(14)--D glucuronopyranosyl-oleanolic acid 28-O--Dglucopyranosyl ester dược liệu đối chiếu Mía dị Định lượng: Hàm lượng acid asperulosidic không thấp 0,20 % Giới hạn vi sinh vật: - Tổng số vi sinh vật hiếu khí (CFU/g): khơng q 104 - Tổng số nấm (CFU/g): Không 102 - Tổng số vi khuẩn gram âm dung nạp mật (CFU/g): Không 102 - Khơng có Salmonella 10 g - Khơng có Escherichia coli g Dư lượng thuốc bảo vệ thực vật: Không phát dư lượng thuốc bảo vệ thực vật QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Cảm quan: Kiểm tra cảm quan (thể chất, màu sắc, mùi ), cao khô sấy phun phải đạt yêu cầu nêu Độ ẩm: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.6 Kim loại nặng: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.4.8, phương pháp Giới hạn vi sinh vật: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 13.6 Dư lượng thuốc bảo vệ thực vật: Tiến hành theo phương pháp BS EN 15662:2017 mod.(GC-MS), thực Eurofins Sắc Ký Hải Đăng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Qui trình số : TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GÒN (SAPHARCEN) Ấn số: Bản số: TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN TỪ BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG Số trang: 2/5 Hiệu lực: ………… Định tính Phương pháp SKLM  Dược liệu Nhàu Đinh lăng xẻ Bản mỏng: Silica gel F254 Dung môi khai triển: n-Butanol – nước – acid acetic (4:5:1, lớp trên) Dung dịch thử: Cân 200 mg cao khơ phun sấy thuốc vào bình định mức 10 ml Thêm ml n-butanol, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung nbutanol đến vạch Lọc dịch chiết cho vào chén sứ, cô đến cắn Thêm ml methanol vào chén sứ để hịa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Dung dịch đối chiếu: Hòa tan chất đối chiếu acid asperulosidic 3-O--Dglucopyranosyl-(14)--D glucuronopyranosyl-oleanolic acid 28-O--D glucopyranosyl ester methanol (TT) để dung dịch có nồng độ khoảng 0,1 mg/ml Mẫu dược liệu Nhàu: Cân 500 mg bột dược liệu Nhàu vào bình định mức 25 ml Thêm 23 ml n-butanol, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung nbutanol đến vạch Lọc dịch chiết cho vào chén sứ, cô đến cắn Thêm ml methanol vào chén sứ để hòa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Mẫu dược liệu Đinh lăng xẻ: Cân 500 mg bột dược liệu Đinh lăng vào bình định mức 25 ml Thêm 23 ml n-butanol, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung n-butanol đến vạch Lọc dịch chiết cho vào chén sứ, cô đến cắn Thêm ml methanol vào chén sứ để hòa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch Tiến hành triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 10 cm Lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phịng Sau phun dung dịch acid sulfuric 10 % ethanol (TT), sấy khô 105 oC rõ vết Yêu cầu: Trên sắc ký đồ, dung dịch thử phải có vết màu sắc giá trị Rf với vết chất đối chiếu acid asperulosidic, 3-O--D-glucopyranosyl-(14)--D glucuronopyranosyl-oleanolic acid 28-O--D-glucopyranosyl ester, dược liệu Nhàu dược liệu Đinh lăng xẻ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Qui trình số : TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GÒN (SAPHARCEN) Ấn số: Bản số: TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN TỪ BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG Số trang: 3/5 Hiệu lực: …………  Dược liệu Râu mèo Bản mỏng: Silica gel F254 Dung môi khai triển: n-Hexan – ethyl acetat – acid formic (5:4:1) Dung dịch thử: Cân g cao khô phun sấy thuốc vào bình định mức 10 ml Thêm ml cloroform, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung cloroform đến vạch Lọc dịch chiết cho vào chén sứ, cô đến cắn Thêm ml methanol vào chén sứ để hòa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Dung dịch đối chiếu: Hịa tan chất đối chiếu sinensetin methanol (TT) để dung dịch có nồng độ khoảng 0,1 mg/ml Mẫu dược liệu Râu mèo: Cân 200 mg bột dược liệu Râu mèo vào bình định mức 10 ml Thêm ml cloroform, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung cloroform đến vạch Lọc dịch chiết cho vào chén sứ, cô đến cắn Thêm ml methanol vào chén sứ để hòa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch Tiến hành triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 10 cm Lấy mỏng ra, để khơ nhiệt độ phịng Quan sát mỏng ánh sáng tử ngoại bước sóng 365 nm Yêu cầu: Trên sắc ký đồ, dung dịch thử phải có vết màu sắc giá trị Rf với vết chất đối chiếu sinensetin dược liệu Râu mèo Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Qui trình số : TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GÒN (SAPHARCEN) Ấn số: Bản số: TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN TỪ BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG Số trang: 4/5 Hiệu lực: …………  Dược liệu Mía dị Bản mỏng: Silica gel F254 Dung mơi khai triển: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Dung dịch thử: Cân 30 mg cao khô BT phân tán ml H2O (siêu âm phút) làm dung dịch mẫu nạp lên cột SPE C18 Lần lượt cho qua cột 30 ml dung môi H2O, MeOH 50 % MeOH 60 %, gom dịch rửa giải 60 % cô đến cắn Thêm ml MeOH vào chén sứ để hòa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Mẫu dược liệu Mía dị: Cân 500 mg bột dược liệu Mía dị vào bình định mức 25 ml Thêm 23 ml MeOH, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch Lọc dịch chiết cho vào chén sứ, cô đến cắn Cân 30 mg cao Mía dị phân tán ml H2O (siêu âm phút) làm dung dịch mẫu nạp lên cột SPE C18 Lần lượt cho qua cột 30 ml dung môi H2O, MeOH 50 % MeOH 60 %, gom dịch rửa giải 60 % cô đến cắn Thêm ml MeOH vào chén sứ để hịa tan cắn, lọc qua màng lọc 0,22 µm Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch Tiến hành triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 10 cm Lấy mỏng ra, để khơ nhiệt độ phịng Sau phun dung dịch acid sulfuric 10 % ethanol (TT), sấy khô 105 oC rõ vết Yêu cầu: Các vết có Rf tương ứng với dược liệu đối chiếu Mía dị tách riêng biệt với vết khác mẫu thử Định lượng Tiến hành phương pháp HPLC Điều kiện sắc ký: Cột: C18 (250 mm ì4,6 mm, àm) Bc súng phỏt hin: 236 nm Tốc độ dịng: ml/phút Thể tích tiêm: 10 µl Pha động: Acetonitril (10 %) – dung dịch acid H3PO4 0,1 % nước (90 %) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Qui trình số : TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GÒN (SAPHARCEN) Ấn số: Bản số: TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO KHÔ SẤY PHUN TỪ BÀI THUỐC HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA CỘT SỐNG CỦA LƯƠNG Y NGUYỄN THIỆN CHUNG Số trang: 5/5 Hiệu lực: ………… Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng mg acid asperulosidic chuẩn vào bình định mức 10 ml, thêm ml methanol, siêu âm 15 phút, để nguội, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 500 mg cao khơ sấy phun thuốc cho vào bình định mức 25 ml Thêm 20 ml methanol, siêu âm 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm Cách tiến hành: Tiêm riêng biệt dung dịch chuẩn, dung dịch thử Dựa vào diện tích pic thu dung dịch thử, dung dịch chuẩn nồng độ acid asperulosidic dung dịch chuẩn, tính hàm lượng (%) acid asperulosidic cao khô sấy phun thuốc theo công thức: 𝑋 (%) = 𝑆𝑡 × 𝐶 × 25 × a × 100 𝑆𝑐 × 𝑚𝑡 × 1000 St, Sc : Diện tích pic acid asperulosidic mẫu thử mẫu chuẩn C : Nồng độ dung dịch acid asperulosidic chuẩn (µg/ml) mt : Khối lượng cân mẫu thử (đã trừ độ ẩm) (mg) a : Hàm lượng acid asperulosidic chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản ,\{iLt quyềntlitng tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh clA clong tito cLtoi c1tryAn ludn t'cin thac.si n6p t,i Phing Stur Dtti hpc tsM.202 r /DTSD H/ThS KLHDDGLV/o6.0 CQNG HOA X,4, HQI CHt NGHiA VIET NAM EOc l+p -TW - H?nh phtic BQYTE DAI HOC Y DTIOC THANH PHO HO CHI MINH fp Hi Chi Minh, ngdv 06 thdng I2 ndm 2021 t^ KET LUAN a HQI DONG EANH GIA [,UAN VAN TH4.C Si cdn cir quyct dinh s6 3786/QD-EHYD-SDH ngdylOl09l20l9 cia HiQu tru&ng Eai hgc Y Dugc TP HO Chi Minh vA viQc c6ng nh4n hqc vi6n trinh thac sT dQ khoa 2019-2021; Can cu quy5t dinh s6 3SZ}IQD-EHYD ngity 2911112021 cria HiQu tru&ng Dai hoc Y Dugc TP HO Chi Minh vd vi6c thdnh lAp HQi d6ng d6nh gi6 luQn vin thac si cho hgc vi6n Phpm NgQ Th?c Ngdy 06112121021 tai D4i hqc Y Duoc TP H6 Chi Minh, Hgi d6ng dd hqp chinh thuc d6 hgc vi6n bao vQ lupn van truoc H6i d6ng D0 tdi: Nghi6n cuu x6y dgng ti6u chuAn ccv s& cao kh6 s6y phun bdi thu6c h6 tro di0u trf tho6i h6a c6t s6ng cira Lucrng Y NguySn Thi6n Chung Chuy0n ngdnh: Dugc 1i6u - Ducvc hoc c6 truy6n Md s6: 8720206 Sau hoc viOn trinh bdy ludn vdn vd trd lcvi cAu h6i cua c6c phin biOn, c6c thdnh vi6n HQi d6ng; HQi d6ng dd hgp vd th6ng nhAt c6c n6i dung sau: Nhirng t