Khảo sát hiệu quả liệu pháp huy động tế bào gốc nội sinh trong điều trị tổn thương gan trên mô hình chuột thắt ống dẫn mật

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA LÊ THỊ NGỌC MỸ KHẢO SÁT HIỆU QUẢ LIỆU PHÁP HUY ĐỘNG TẾ BÀO GỐC NỘI SINH TRONG ĐIỀU TRỊ TỔN THƯƠNG GAN TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THẮT ỐNG DẪN MẬT Chun ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số: 60420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ Tp Hồ Chí Minh, tháng 01 năm 2021 Cơng trình hồn thành tại: Viện Tế Bào Gốc Phịng Thí Nghiệm Nghiên Cứu & Ứng Dụng Tế bào Gốc Trường Khoa học Tự Nhiên– Đại học Quốc Gia Tp HCM Cán hướng dẫn khoa học 1: PGS TS Trương Hải Nhung Cán hướng dẫn khoa học 2: PGS TS Nguyễn Thuý Hương Cán chấm nhận xét : PGS.TS Trần Lê Bảo Hà Cán chấm nhận xét : TS Hoàng Mỹ Dung Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM Ngày 26 tháng 01 năm 2021 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: PGS TS Nguyễn Tiến Thắng (chủ tịch) PGS TS Lê Thị Thủy Tiên (ủy viên thư ký) PGS TS Trần Lê Bảo Hà (phản biện 1) TS Hoàng Mỹ Dung (phản biện 2) TS Phan Thị Huyền (ủy viên) Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá luận văn Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Lê Thị Ngọc Mỹ MSHV:1670717 Ngày, tháng, năm sinh: 01/01/1990 Nơi sinh: Quảng Nam Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số : 60420201 I TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT HIỆU QUẢ LIỆU PHÁP HUY ĐỘNG TẾ BÀO GỐC NỘI SINH TRONG ĐIỀU TRỊ TỔN THƯƠNG GAN TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THẮT ỐNG DẪN MẬT II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Nội dung 1: Tạo mơ hình chuột tổn thương gan phẫu thuật BDL - Nội dung 2: Đánh giá hiệu điều trị GCSF liều 30 µg/kg/ngày/5 ngày liều 60 µg/kg/ngày/5 ngày mơ hình chuột BDL thời điểm 19 ngày 26 ngày từ phẫu thuật thắt ống dẫn mật - Nội dung 3: Đánh giá tác dụng GCSF việc huy động tế bào gốc nội sinh chuột tổn thương gan phẫu thuật BDL II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 10/02/2020 III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 17/01/2021 IV.CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn 1: PGS TS Trương Hải Nhung Cán hướng dẫn 2: PGS TS Nguyễn Thúy Hương Tp HCM, ngày 26 tháng 01 năm 2021 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TRƯỞNG KHOA i CHỦ NHIỆM BỘ MÔN LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng ngưỡng mộ chân thành biết ơn đến PGS.TS Trương Hải Nhung Người thầy ln tận tình quan tâm, động viên, giúp đỡ tạo nhiều hội để em thực hoàn thành nghiên cứu Em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn đến PGS.TS Nguyễn Thúy Hương Người thầy yêu thương, giúp đỡ, tạo nhiều thuận lợi để em hoàn thành báo cáo luận văn Khóa luận thực Viện Tế Bào Gốc Phịng Thí Nghiệm Nghiên Cứu & Ứng Dụng Tế bào Gốc Trường Khoa học Tự Nhiên– Đại học Quốc Gia thành phố Hồ Chí Minh Em xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo cán Viện Phịng thí nghiệm ln tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực đề tài Em xin cảm ơn tất thành viên khác nhóm Y học Tái tạo gan: Bạn Nguyễn Hải Nam, Lê Văn Trình, Đỗ Quang Huy, Đặng Minh Thành, Lê Phạm Tiến Triều, Trần Văn Luân, Huỳnh Thị Mỹ Xuân, Huỳnh Thị Ngọc Sương, Trần Tấn Thông, Phan Thị Hồng Thủy đồng hành hỗ trợ em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin biết ơn Quỹ NAFOSTED với số đề tài 108.05-2017.30 Chương trình Vườn ươm Khoa học – Công nghệ, Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ trẻ, Thành đồn TP Hồ Chí Minh tài trợ cho nghiên cứu TP Hồ Chí Minh, ngày 26 tháng 01 năm 2021 Lê Thị Ngọc Mỹ ii TĨM TẮT Tổng quan mục đích: Bệnh hẹp đường mật gây xơ hóa gan, khơng điều trị bệnh nhi tử vong vòng năm Đến nay, ghép gan phương pháp điều trị hiệu có nhiều khó khăn khan nguồn nội tạng, hậu phẫu chi phí y tế Sử dụng nhân tố kích thích bạch cầu hạt (GCSF) huy động tế bào gốc tạo máu nội sinh chứng minh có hiệu điều trị bệnh nhân xơ gan cồn virus Chúng đưa giả thuyết GCSF có tác động điều trị tổn thương gan bệnh hẹp đường mật Phương pháp: Mơ hình chuột tổn thương gan ứ mật tạo phương pháp phẫu thuật thắt ống dẫn mật (BDL), đánh giá mơ hình dựa trên: hình thái bên ngồi, sinh hóa (ALT, AST, ALB), mơ học (HE, sirius red), tỷ lệ sống Từ ngày sau BDL, chuột mơ hình chia thành bốn nhóm: Đối chứng + giả dược (Glucose 5%), BDL+giả dược, BDL+GCSF 30µg/kg/ngày BDL+GCSF 60µg/kg/ngày Hiệu điều trị đánh giá vào ngày 19 26 dựa trên: hình thái bên ngồi, sinh hóa (ALT, AST, ALB), mô học (HE, sirius red), tỷ lệ sống Đánh giá tác dụng GCSF vào ngày 19 26 dựa trên: biểu mRNA gen tiền xơ (tgf-β1, α-sma, col1α1) (RT-PCR), mức độ dương tính Ck7 α-SMA (nhuộm hóa mơ miễn dịch), Tỷ lệ tế bào gốc tạo máu gan (đếm dòng chảy tế bào vào ngày 12 sau BDL) Kết quả: So với nhóm đối chứng, sau ngày phẩu thuật BDL, chuột mô hình có biểu vàng da nước tiểu vàng ứ mật, bạch cầu tổng tăng lần (2125 so với 323, P