Tiểu luận (công nghệ sinh học) VACCINE PHÒNG BỆNH AUJESZKY

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC Chun đề: VACCINE PHỊNG BỆNH AUJESZKY I.Đặt vấn đề Bệnh giả dại Bệnh giả dại có nguy lây nhiễm cao heo thú nuôi khác, gia súc, cừu, dê, Herpesvirus suis gây ( gọi “pseudorabies virus” hay “PRV”) Ở heo, bệnh gây tổn thương đường hơ hấp viêm não dẫn đến chết Các triệu chứng khác phổ biến heo sẩy thai, chết heo sơ sinh, giảm lứa đẻ, tăng tỉ lệ chậm phát triển Các đàn thú nuôi khác, hầu hết gia súc, nhiễm PRV luôn dẫn đến chứng viêm não Bệnh giả dại trở thành nguồn đe dọa nguên nhân gây thiệt hại kinh tế cho ngành ni heo tịan giới Sự lan rộng bệnh giả dại gia súc thú nuôi trang trại khác đáng báo động Trong 10 năm gần đây, thiệt hại kinh tế leo thang xuất nhiều chủng virus PRV ngày lan rộng Ngày nay, ước lượng có khoảng 8% 80 triệu heo Mỹ bị nhiễm bệnh này, thấp 0,8% so với cách thập kỷ Triệu chứng nhiễm bệnh hậu nhiễm bệnh PRV nhẹ ngăn chặn nhờ loại vaccine bao gồm bị giết hay chủng sống biến đổi chủng nhược độc PRV Tuy nhiên, hầu hết chủng vaccine tồn khó kiểm sốt lan rộng bệnh giả dại đặc tính sinh học PRV loại virus alpha herpes khác, virus herpes đơn type ( gọi “HSV-1” “HSV-2” theo thứ tự), vericella-zoster, virus lây bệnh rhinotracheitis trâu bị, virus herpes khỉ sóc, herpesvirus type ngựa Cụ thể hơn, virus herpes alpha có khả đặc biệt trạng thái im lìm mơ thần kinh Đó là, thú bình phục từ lần nhiễm đầu tiên, herpes alpha rút lui đến phần hệ thần kinh nơi chúng trở nên im lặng trơ với hàng rào miễn dịch thể Trạng thái bất hoạt này, tiềm tàng, phục hồi cách bất ngờ làm tái phát bệnh phương tiện truyền nhiễm bệnh, thú bị nhiễm khơng có triệu chứng bên ngồi truyền hay nhiễm virus alpha cách không liên tục, gây nên bệnh truyền nhiễm bộc phát thành dịch Sử dụng vaccine biện pháp phòng bệnh đặc biệt hiệu bệnh virus II Tổng quan Sơ lược herpes alpha Virus có đường kính khỏang 180nm, gen chủng PRV dạng đường thẳng, xoắn kép, phân tử DNA hốn vị khơng có đạng vịng, kích thước gen khỏang 146 kbp Bộ gen chủng PRV độc xếp vào loại phân tử DNA lớp D Giống virus herpes khác, vỏ capsid có 20 mặt cấu thành từ 20 capsomers bao quanh áo lipoprotein Lấy lớp áo virus loại bột khơng ion hóa, Triton X-100 hay Nonidet P40, cho phép phân tách lớp áo nucleocapsid độc, chứa toàn DNA khỏang nửa protein virus Nucleocapsid virus gồm có loại protein chính, khoảng 142000, 35000, 32000 daltons, loại protein khác khoảng 62000 daltons, 12 loại protein nhỏ có kích thước từ 10,000 tới 115,000 daltons Lớp vỏ bọc chứa protein cịn lại virus, bao gồm loại glycoprotein loại protein không glycosyl hóa Cũng alpha herpes virus khác, HSV-1, vỏ bọc protein, tiền thân chúng, có quy luật chung kích thích đáp ứng miễn dịch tế bào hay dịch thể; nhiệm vụ chúng xâm nhập vào tế bào bị nhiễm; chúng điều khiển dung hợp vi khuẩn virus Virus bị diệt 60 C 50 phút, acid Phenic 5% 10-20 phút, Formol 0,5% phút, NaOH 1% chết Trong xác thối rửa, virus sống 11 ngày, thịt ướp muối khỏang 20 ngày,…Dùng glycerin nguyên 50% bảo tồn nhiều năm tủ lạnh Hình Nguồn gốc chủng virus giả dại 2 Các loại vaccine phòng ngừa bệnh giả dại: 2.1 Vaccine vô hoạt Bất hoạt quang động (purdue university 1982, india) Virus PRV chứng minh nhạy cảm với ánh sáng Do đó, dùng thuốc nhuộm Methylene Blue (MB), ánh sáng dòng điện kết hợp với bất hoạt virus Tính kháng ngun virus bảo tồn, dùng kiểm tra tín hiệu miễn dịch hay điện di miễn dịch để đo lượng kháng thể đặc hiệu Phương pháp phù hợp với virus, rẻ tiền, dễ thực hiện, nhanh chóng Nồng độ MB thấp, chiếu sáng, dòng điện làm giảm có mặt virus herpes simplex xạ với ánh sáng nhìn thấy làm khả hình thành tế bào lớp mỏng  - Vật liệu Một hộp chứa methyl methacrylate gắn điện cực platinum dùng cho trình bất hoạt quang động Chỉ lượng nhỏ ( khỏang 10 ml) virus bị bất hoạt lần Kích thước hộp ( dài, cao ,rộng) 11,95, 2,98 , 2,98, Làm nhựa acrylic suốt, để ánh sáng xun qua, thể tích hộp khỏang 100ml Hình Hộp nhựa nguồn điện dùng để sản xuất vaccine - Nguồn sáng cung cấp đèn cao áp đặt hộp 20 cm - Nguồn điện xoay chiều 110V Các bước thực  - Thêm nhiều lượng thuốc nhuộm MB khác vào 100ml mẫu chứa virus - Hỗn hợp thuốc nhuộm virus đặt hộp acrylic - Cung cấp dòng điện 12 µA, bước sóng ánh sáng biến đổi Người ta thực nhiều thí nghiệm khơng cung cấp dòng điện, so sánh hiệu bất hoạt MB, ánh sáng MB, ánh sáng, dòng điện kết hợp với nhau, hay dùng dòng điện kết hợp với ánh sáng mà khơng có MB Trong suốt trình bất hoạt, mẫu virus lấy khỏang thời gian khác nhau, thẩm tách dung dịch đệm phosphate saline 48 tới 72 (pH=7,2) để lấy hết thuốc nhuộm MB Bảng Kết bất hoạt quang động PRV với nhiều nồng độ thuốc nhuộm khác dòng điện khác Kết Thí MB Dịng điện Thời gian nghiệm (M) (µA) 10-5 12 10-5 2x10 2x10 10-4 -5 -5 12 12 Lượng virus gốc Nồng độ (Min) (TCID)50 (TCID)50 4x10 a 8.0x10 % sống sót 0.010 12 0.010 16.5 0.001 4x10 1.0x10 0.125 12 1.3 x10 16.5 8.0 x10 0.010 1.4x10 0.131 12 1.2x10 0.112 16.5