Tiểu luận (công nghệ sinh học) VACCINE PHÒNG BỆNH VIÊM não NHẬT bản

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ****** BÀI TIỂU LUẬN VACCINE PHÒNG BỆNH VIÊM NÃO NHẬT BẢN Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: MSSV: I ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm não Nhật Bản (Japanese encephalitis:JE) bệnh nhiễm Flavivius vật mang muỗi nguyên nhân gây bệnh viêm não trẻ em Châu Á Hàng năm, hàng ngàn trường hợp bệnh chết báo cáo Tuynhiên, nhiều khu vực bệnh không giám sát theo hệ thống khơng có báo cáo văn phòng đánh giá chắn số lượng thật trường hợp bệnh JE lan truyền khắp châu Á, vùng với tỉ người chiếm 60% dân số giới Do lây nhiễm JE có liên quan tới vùng nên lan rộng khắp giới Gánh nặng bệnh phần lớn nước phát triển châu Á Không phần quan trọng virus JE gây thiệt hại đáng kể cho nghành chăn nuôi chăn nuôi heo Virus JE xâm nhiễm heo, ngựa loại gia cầm động vật máy khuyếch đại nguồn lây nhiễm Do đó, khơng kiểm sốt JE heo chăn ni heo cơng nghiệp mà cịn có ý nghĩa lớn bảo vệ sức khỏe cho người Hiện nay, việc tiêm chủng cơng tác phịng nhiễm bệnh kiểm soát bệnh hiệu nhất, vaccine vaccine bất hoạt vaccine nhược độc có số hạn chế Chính JE trở thành vấn đề đáng lo ngại cho tổ chức y tế Việc kiểm sốt ngăn ngừa vaccine trở nên cấp thiết người thú Do đó, việc nghiên cứu sản xuất vaccine JE tất yếu để chủ động kiểm soát ngăn ngừa bệnh hiệu II TỔNG QUAN TÀI LIỆU II.1 Bệnh viêm não Nhật Bản ( Japanese encephalitis: JE) II.1.1 Lịch sử bệnh Sự bùng phát bệnh viêm não vào mùa hè thu ghi chép lại Nhật vào đầu 1871 Dịch lớn vào 1924 lên tới 6000 ca nhiễm, 60% số bị tử vong Năm 1934 Hayasi qua thực nghiêm chuyển bệnh vào khỉ Chẳng sau, phân lập JE virus viêm não St Louis có mối quan hệ với (St.Louis encephalitis:SLE ) xác nhận huyết học từ mô bệnh trường hợp từ 1934 đến 1935 Beịjing Đầu tiên virus gọi viêm não Nhật Bản B ( B bị thay đổi, kể từ nhiều người bị thiệt mạng không dùng đến) để phân biệt bệnh từ viêm não type A Von Economo, có khác đặc tính dịch tể học bệnh lý Phương thức muỗi mang truyền JE giải thích với phân lập virus JE từ muỗi Culex tritaeniorhunchus vào 1938 Sau nghiên cứu thiết lập vai trị lồi chim nước heo chu kì gây bệnh virus Các virus đươc phân lập từ bệnh nhân Nhật vào 1935 Beijing vào 1949 với dòng Nakayama, Beijing P3 Hầu hết dòng hoang dai đươc sử dụng sản xuất vaccine Hình: vịng xoắn bệnh lý virusJE II.1.2 Virus JE Virus JE 70 virus thuộc giống flavivirus, họ flaviviridae Vaccine sốt vàng da, điều trị tồn siêu virus flavivius Về mặt hình thái học, flavivirus mạch đơn RNA có hình cầu, đường kính khoảng 40-50 nm, với màng lipid bao quanh lõi nhân nucleocapsid có đường kính 30 nm Nhơ khỏi bề mặt màng gồm vỏ bao glycosylate E màng protein M, dạng trưởng thành protein trước màng prM RNA virus JE có chiều dài 10,976 base , mã hóa cho khung đọc mở liên tục (open reading frame: ORF), nằm bên sườn trước 95 585 base vùng không phiên mã đầu 5’ 3’ theo thứ thứ tự Thứ tự protein mã hóa ORF virus JE, với Flavivirus 5’-C-prM-E- NS1NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5-3′ Các Flavivirus chép loại tế bào nuôi cấy có nguồn gốc từ động vật có sương sống động vật chân đốt Sự tiếp nhận virus xảy nhờ thực bào qua thụ thể trung gian, với thơng tin khoang áo ngồi hòa hợp trực tiếp vào màng tế bào cuả virus màng nhân, RNA gen phóng thích vào tế bào chất Polyprotein dịch mã tiến trình sau lắp ráp lại thành phức hợp chuyên biệt virus Điểm cuối carboxyl hydrophobic protein E qui định neo nối với màng, mở rơng phạm vi bên ngồi ổn định nhờ cầu nối disulfua xoắn tạo cấu trúc bậc ba vùng kháng thể(I,II III) biến đổi có liên quan đến yếu tố định tương ứng với nhóm, phân nhóm epitope chuyên biệt virus chức sinh học Nối hạt virus JE với vài tế bào hệ thần kinh trung ương (CNS: central nervous system) liên quan tới diện thụ thể truyền tín hiệu thần kinh chuyên biệt Virus gây bệnh sốt xuất huyết dựa heparin sulfate tế bào dịng glycosaminoglycan (GAG) thơng qua motif gắn GAG với protein phần cuối carboxyl bên vùng vào vùng I III Cơ chế tương tự áp dụng với JE flavivirus khác Virus chuyên biệt epitope trung hòa phản ứng chéo lập đồ vùng chuyên biệt glycoprotein E flavivirus Các nghiên cứu trung hịa chéo hồn chỉnh mối quan hệ kháng nguyên kháng thể mật thiết Virus JE với virus SLC, West Nile, Koutangu Usutu số flavivirus tìm thấy Australia(e.g., Murray Valley encephalitis Kunjin, Alfuy, Stratford Kokobera viruses) phân lớp chúng tạo thành phức hợp kháng thể, kháng ngun Khơng có tương tác chéo huyết với virus viêm gan C khảo sát Mối quan hệ hóa sinh, kháng nguyên di truyền virus JE phân lập từ vùng điạ lý khác thời điểm khác so sánh cách sử dụng kháng thể đơn dòng đa dòng, điện di hai chiều gel RNA hạt virus phân hủy nhờ ribonuclease trình tự gen Sự phát sinh lồi virus JE dựa trình tự nucleotide 240 base prM virus, phân chia JE phân lập thành genotyepe phân biệt, với phân kì tối đa 21% phân tách Kiểu gen lớn gồm có virus từ Nhật , Okinawa, Trung Quốc, Đài Loan, Vietnam, Philippines, Sri Lanka, Ấn Độ Nepal Kiểu gen lớn thứ hai phân lập từ miền bắc Thái Lan, Malaysia, Sarawak, Australia Indonesia Ở Indonesia phân lập năm loại, hai từ Java, hai từ Bali từ Flores tương tự với phân biệt phân lập khác Indonesia Không phải tất phương pháp phân chia virus thành dòng genotype giống Một phân tích kháng nguyên sử dụng năm kháng thể đơn dòng chuyên biệt cho virus phân lớp dòng thành bốn kiểu kháng nguyên, không phù hợp với genotype Virus JE phân lập từ vùng giống từ nhiều năm khác đưa đến mức độ tương đồng cao nucleotide 16 dòng Việt Nam , 23 dòng Okinawa JE phân lập 1964 1988 1968 1991 khác 3.2% 4% theo thứ tự Tuy nhiên, virus phân biệt theo thứ tự thời gian trước sau 1968 Okinawa trước sau 1975 Việt Nam Sai sót chép RNA tượng tạo cổ chai (ví dụ sống sót dịng suốt điều kiện sinh thái khắc nghiệt) xuất chế để virus JE tiếp tục tiến hóa, đưa vào virus chứng minh tài liệu, tiềm cho việc chuyển đổi kiểu genotype Tuy nhiên 92 gen với trình tự vỏ hồn chỉnh Genbank phân tích mức độ đa dạng hội nhập kiểu gen thấp khảo sát qua kiểu huyết virus gây bệnh tủy xám sốt vàng Phân tích kiểu gen chứng minh tranh cải tất virus JE biết phân lập có kiểu huyết Thơng tin quan trọng để xây dựng vaccine JE II.2 Vaccine phòng bệnh JE II.2.1 Vaccine JE cho người Trên giới, có ba loại vaccine JE sản xuất phổ biến sử dụng Tuy nhiên, có vaccine JE bất hoạt tạo não chuột dùng nước phát triển Vaccine SA 14-14-2 nhược độc, sản xuất Trung Quốc, dùng Hàn Quốc nước phía nam Châu Á lựa chọn Vaccin JE bất hoạt phát triển tế bào thận chuột sơ cấp (PHK) sản xuất phân phối Trung Quốc Hơn triệu liều vaccine PHK bất hoạt 50 triệu liều vaccine nhược độc sản xuất phân phối năm Trung Quốc ngược lại tất nhà sản xuất Nhật sản xuất khoảng 11 triệu liều vaccine tách từ não chuột cho sử dụng nước Nhật Biken nhà sản xuất hàng đầu Nhật sản xuất vaccine não chuột bất hoạt, phân phối khoảng triệu liều cho nước ngoài; nhiên, sản xuất vaccine bị gián đoạn vào tháng 12-2005 để phát triển vaccine hệ thứ hai Vaccine cấp giấy phép JE-VAX nước Mỹ , Canada, Israel vài nước châu Á, phân phối miễn thuế đặc biệt hầu Châu Âu II.2.1.1.accine JE thu từ não chuột bị bất hoạt Vaccine JE thu nhận từ não chuột bất hoạt sản xuất Nga Nhật vào 1930s trước tỏ hiệu chống lại viêm não mùa đông người Nga (tương tự JE ) Trong suốt chiến thứ II, dịch 10% không ly tâm não chuột bị nhiễm, bị bất hoạt với Fomalin, sản xuất Mỹ vaccine cho quân đội Vaccine gây miễn dịch hay thay đổi thử nghiệm phạm vi hiệu lực khơng thể hồn chỉnh Vaccine thu từ phôi gà bị bất hoạt ổn định hơn, phát triển quân đội Mỹ, có hiệu lực 80% trẻ em Nhật cho kết hợp vaccine thu nhận từ não chuột vaccine thu từ phơi gà Tuy nhiên, vaccine sau gây miễn dịch thấp người trưởng thành hiệu lực người lính khơng đánh giá Dù vậy, vaccine đưa vào tất người lính Mỹ có mặt Châu Á từ 1948 đến 1951 , sử dụng bị ngưng lại 1952 sau xem xét lại liệu có hiệu lực khơng đủ khả để đưa chứng thuyết phục gây miễn dịch hiệu lực Giống Nakayama virus JE, phân lập từ CSF bệnh nhân vào 1935 nuôi dưỡng tiếp tục nhờ chuyển qua não chuột, sử dụng làm giống chủ yếu sản xuất vaccine thu nhận từ não chuột khắp châu Á Giống Beijing -1 phát triển đạt hiệu giá cao vaccine tạo hiệu giá kháng thể khác loại cao chuột chủng ngừa vaccine giống Nakayama, vaccine Beijing1 đưa vào cơng thức với nửa thể tích Biken, nhà sản xuất vaccine JE hàng đầu Nhật Bản sử dụng giống Beijing từ 1989 sản xuất vaccine cho tiêu thụ nước, ngược lại giống Nakayama sử dụng vaccine phân phối quốc tế Y Sản xuất vaccine Vaccine thu nhận từ não chuột sản xuất Nhật số nơi Châu Á nhờ tiêm chủng vào não chuột tuần tuổi Khi chuột có dấu hiệu biểu bệnh não thu hoạch máu, dịch Vaccine làm sử dụng phối hợp tương tự li tâm, lọc, kết tủa protamin sulfate bất hoạt formalin điều kiện lạnh, tinh lọc qua máy lọc, kết tủa ammonium sulfate tiếp tục li tâm phân tách gradient mật độ sucrose Tiêu chuẩn quốc tế Nhật định rõ gây đáp ứng miễn dịch tối thiểu hiệu nghiêm chuột ( so sánh với vaccine chuẩn) protein tổng số lớn (80µg/ml) protein myelin (MBP) hàm lượng 2ng/ml, bao gồm định rõ khác Thành phần vaccine pha lỗng với 199 mơi trường đệm phosphate để đạt hiệu lực tiêu chuẩn Mặc dù số lượng protein E JE khơng kiểm sốt được, nghiên cứu, liều ước tính có chứa khoảng 50µg Vaccine ổn định với gelatin sodium glutamate bảo quản với thimerosal Y Kết hợp với vaccine phòng bệnh khác Ở Nhật, vaccine phân phối chủ yếu dạng lỏng,cho phân phối quốc tế, làm khô lạnh tái tạo lại với nước vô trùng Ở nghiên cứu trẻ 15 tháng tuổi, cấp đồng thời vaccine JE bị bất hoạt với vaccine bệnh sởi, quai bị rubella không làm miễn dịch giảm khơng có tác dụng phụ Y Liều đường cấp Ở hầu hết khu vực châu Á , sản xuất vaccine từ giống Nakayama đưa vào da liều 0.5 ml cách đến tuần( 1.0ml cho người >3 tuổi) thường bắt đầu 1236 tháng tuổi, với liều nhắc lại lúc năm thêm liều nhắc lại sau khoảng 1-3 năm Vaccine thu nhận từ giống Beijing-1 đưa vào công thức với nồng độ kháng nguyên cao liều khuyến cáo 0.5 ml (0.25ml cho trẻ em tuổi) Đợt cấp cho trẻ em tuổi với vaccine chủng ngừa bệnh bạch hầu, uống ván ho gà (diphtheria, tetanus toxoids and pertussis :DTP) Y Ổn định vaccine Vaccine Biken làm khô lạnh ổn định C tối thiểu năm giữ lại 0 90% hoạt lực sau 28 tuần 22 C Ở 37 C vaccine làm khơ lạnh giữ 95% hoạt lực gốc sau tuần Sau khôi phục lại, vaccine JE làm Ấn Độ 0 ổn định 22 C tối thiểu tuần, 37 C , hoạt lực giảm xuống 85% II.2.1.2 Vaccine JE từ tế bào thận chuột đồng sơ cấp bị bất hoạt Vaccine JE bất hoạt chuẩn bị từ dòng P3 tế bào thận chuột sơ cấp (primary hamster kidney: PHK) sản xuất dành riêng cho Trung Quốc vaccine JE chủ yếu đất nươc từ 1968 đến 2000 Sản xuất cao điểm khoảng 70 triệu liều phân phối hàng năm Các nổ lực để tạo vaccine JE thu nhận từ nuôi cấy tế bào thúc đẩy lo lắng khả nhiễm kháng nguyên trung hoà phản ứng dị ứng có liên quan với vaccine thơ mong muốn để cải thiện gây miễn dịch không bị ràng buộc sản xuất Trong số lượng lớn hệ thống nuôi cấy tế bào liên tục sơ cấp kiểm tra, tế bào PHK khám phá tạo thuận lợi cho xâm nhiễm cao Giống P3 virus JE khám phá vào 1949 từ não người bệnh thời gian bệnh dịch dòng P1(Beijing-1) Virus trải qua 70 lần não chuột trì học viện quốc gia để kiểm sốt sản phẩm sinh học dược liệu (the National Institute for Control of Pharmaceutical and Biological Products: NICPBP) Beijing Vaccine nuôi cấy thu nhận từ tế bào PHK bị bất hoạt làm từ giống P3 gây miễn dịch nhiều gây đáp ứng kháng thể khác loại tốt ( so với virus Nakayama) tạo bảo hộ chéo chuột tốt vaccine dòng Nakayama thu nhận từ não chuột chế tao Biken Y Sản xuất vaccine Vaccine chuẩn bị nuôi cấy tế bào sơ cấp thu nhận từ thận chuột đồng Syrian có màu vàng Tế bào lớp rửa nhiễm với virus JE thu hoạch ngày sau Dịch lỏng nuôi cấy tế bào mặt lây nhiễm bị bất hoạt với formalin 0.05% , ổn định với albumin người 0.1% kiểm tra cho tính lây nhiễm dư hoạt lực Vaccine lỏng giữ hoạt lực năm 4-8 C Y Kết hợp với vaccine phòng bệnh khác Vaccine dạng lõng có đỏ - vàng thấy rõ với 2.0, 5.0 10.0ml lọ Sản phẩm kết hợp khơng có Y Liều đường cấp Vaccine cấp da liều 0.5ml, cách tuần, với trẻ em 12 tháng tuổi Ba liều nhắc lại đưa vào năm sau (0.5 ml) lúc tuổi lặp lại lúc 10 tuổi( 1.0 ml) Ở số tỉnh, liều nhắc lại tiêm hàng năm 10 tuổi Lịch cấp thường liều đưa vào lúc đến 2.5 tháng cho thấy tạo miễn dịch 94-100% trẻ em tuổi đến trường chủng ngừa Y Ổn định vaccine Vaccine ổn định cho tuần 37 C Vaccine nên cất trữ vận chuyển 2-8 C , bảo vệ khỏi ánh sáng sử dụng 24 tháng nghiên cứu kỳ hạn hiệu lực hồn tồn thành cơng II.2.1.3 Vaccine viêm não Nhật Bản nhược độc, sống Dịng virus JE làm yếu tìm kiếm thơng qua dịng hoang dại cấy truyền hệ thống nuôi cấy tế bào khác nhau, bao gồm PHK, phôi gà tế bào da phôi chuột Mất tính độc gây độc cho tế bào thần kinh chuột, chuột đồng heo phối hợp ba, đề xuất sử dụng an toàn cho người Việc làm yếu liên quan tới giảm gắn kết với thụ thể tế bào não chuột Ở Trung Quốc, giống bố mẹ vaccine SA14 phân lập năm 1954 từ ấu trùng Culex pipiens thu nhận Xian Sau phân lập cấy truyền 11 lần chuột bú, virus làm yếu qua 100 lần cấy truyền tế bào PHK 36-37 C Gây độc thần kinh khỉ bị mức cấy truyền Thêm chọn lọc điểm (vết tan vi rút gây ra) tạo dòng tế bào phôi gà cấy truyền chuột chuột đồng nhờ tiến hành nhiễm ngoại biên nhiễm miệng đem lại kết ổn định virus không gây độc thần kinh Kết dịng SA 14-5-3 khơng trở lại nguyên thể lâu gây độc thần kinh sau cấy chuyển vào não chuột bú hiệu lực trì nghiên cứu kích thích miễn dịch chuột Virus SA 14-5-3 khơng giết chết chuột tuần tuổi nhờ tiêm chủng trực tiếp não da Tiêm chủng trực tiếp virus vào xương sống vào đối thị khỉ , khỉ không chết chết mức độ tối thiểu chứng viêm CNS giới hạn xung quanh vị trí nhiễm Vaccine SA 14-5-3 đưa an toàn cho người kiểm tra thử nghiệm khu vực bệnh đưa tỉ lệ chuyển đổi huyết lớn 85% Tuy nhiên, tỉ lệ 61% thu đối tượng từ khu vực không bệnh Để gia tăng gây miễn dịch , virus SA 14-5-3 cấy truyền qua lần da chuột bú; sử dụng da, mô da hạch lympho ngoại vi cục nguyên liệu cho cấy truyền Sau lựa chọn vệt tạo dòng lần tế bào PHK, thu giống SA 14-14-2 Virus SA 14-14-2 làm yếu tương tự gây miễn dịch chuột, heo người, tạo tỉ lệ chuyển đổi huyết lớn 90% đối tượng không miễn dịch Những công nhân NICPBP Beijing chứng minh SA14-14-2 giống JE cấy chuyển nhờ PHK an toàn gây miễn dịch động vật người Hiệu lực vaccine chứng minh kiểm tra thử nghiệm vaccine cấp phép Trung Quốc vào 1988 Hiện tại, 50 triệu liều phân phối hàng năm tây nam tây Trung Quốc Trình tự nucleotide virus SA14 bố mẹ gây độc thần kinh không giống SA14-14-2 hai virus vaccine thu nhận từ SA14-14-2 bị làm yếu khác acid amin thay tìm thấy giống bị làm yếu protein vỏ (E138, E176, E315 E439 ) , NS protein 2B(NS2B63) , NS3 (NS3105) NS4B (NS4B106) Những đột biến biểu ổn định Sự thay đổi amino acid E-138 virus SA 14-14-2 biểu đầy đủ để làm yếu thần kinh chuột đưa vào dòng nhiễm cDNA JE tip hoang dại Trình tự nucleotide protein cấu trúc mà virus làm yếu biểu virus cha mẹ không giống đột biến amino acid Virus làm yếu thu nhờ biến thể thoát khỏi trung hịa chọn lọc Sự làm yếu có liên quan tới thay đổi base mang đến kết thay đổi amino acid protein E liên kết với thay đổi tương tác tế bào-virus Sự gây độc thần kinh giảm giống SA 14-14-2 xác nhận chuột ba tuần tuổi khỉ So với giống SA 14 bố mẹ, mà giết chết chuột bú tiêm vào não da với liều trung bình gây chết (LD50) giới hạn 105.5 tới 108,3 LD50/ml, virus SA 14-14-2 không gây chết có dấu hiệu bệnh lý nhỏ vài động vật tiêm vào não Kết hợp tiêm vào xương sống vùng đồi thị khỉ nâu không gây dấu hiệu bệnh lý mà có phản ứng viêm nhỏ dây thần kinh tủy sống thuộc vùng cổ chất có màu đen Chuột nhạy cảm so với khỉ để nhiễm vào não, với số động vật biểu thương tổn thần kinh nhẹ vỏ não, vùng cá ngựa hạch So với thương tổn mô bệnh tạo virus SA 14 bố mẹ, phản ứng viêm virus SA14-14-2 lớn hoại tử tế bào thần kinh Bằng chứng xa giảm kích thích thần kinh dịng từ nghiên cứu thí nghiệm chuột trần tuyến ức Không chết bất thường mô bệnh khảo sát sau tiêm vào bụng tiêm vào da tăng tính nhạy cảm chuột với virus JE gây độc, ngăn cản miễn dịch với Cyclophosphamide không dẫn tới viêm não chuột tiêm chủng ngoại vi với virus SA 14-14-2 Chủng không giết chết chuột đồng bú tiêm vào não Đặc điểm giống vaccine (PHK8) vệt kích thước nhỏ, làm giảm gây độc thần kinh chuột đặc tính di truyền ổn định qua 10 lần cấy truyền tế bào PHK Virus huyết SA 14-14-2 không nghiên cứu vaccine nghiên cứu thực vaccine dùng vào cuối 2006 Nhân giống SA 1414-2 tế bào thận chó sơ cấp (PDK) phân lập từ máu rút từ vaccine, độ chuẩn xâm nhiễm ngưỡng nhiễm miệng thông thường muỗi Kết luận từ số nghiên cứu khả không đáng kể cho truyền muỗi virus JE bị làm yếu từ heo hay người chủng ngừa; nhiên, thí nghiệm cuối cần thiết Giống SA14-14-8 có liên quan mật thiết với SA14-14-2, nhân giống tốt muỗi Culex tritaeniorhynchus sau cấy vào ngực khơng thể chuyển Ở thí nghiệm xâm nhiễm miệng, có 11% muỗi Cx tritaeniorhynchus theo đường ăn uống chủng ngừa trở thành nhiễm so sánh với 100% với JE tip hoang dại Virus không trở lại phenotype gây độc thần kinh sau truyền qua muỗi Y Sản xuất vaccine Hạt virus chuẩn bị từ mức độ cấy truyền lần thứ virus SA 14-14-2, trì NICPBP Beijing Virus hạt làm khô lạnh (PHK5) cung cấp để viện sản xuất, nơi mà cấy truyền lần cho sản xuất hạt (PHK6) Tế bào BHK thu từ chuột Syrian vàng 10-12 ngày tuổi trì dạng colony viện Chengdu Wuhan Production Tế bào lớp tiêm chủng với virus pha loãng tế bào cung cấp dinh dưỡng với dung dịch thiết yếu nhỏ có chứa albumin người, gentamicin kanamycin Dịng tế bào ni cấy nhiễm với độ chuẩn (hiệu giá) nhiễm xấp xỉ 107,2 đơn vị tạo hình vệt (điểm) (PFU)/ml thu hoạch 78-96 lọc thô mang lại kết vaccine dịch lõng làm khô lạnh Gelatin (1%) sucrose (5%) thêm vào chất ổn đinh Vaccine làm khô lạnh tái tạo lại pha lỗng với nước vơ trùng cho thuốc tiêm Vaccine tái tạo nên dịch lõng cam-đỏ thấy rõ PFU vaccine không thấp 105,7 PFU vaccine tái tạo Y Kết hợp với vaccine phòng bệnh khác Cấp vaccine JE đồng thời với vaccine Bacille Calmette-Guérin (BCG), bệnh sởi DTP 6-10 tháng tuổi khơng làm tăng khả gây hại so với vaccine JE cấp Cấp vaccine JE không dẫn tới thay đổi đáng kể đáp ứng hiệu giá kháng thể DTP bệnh sởi phạm vi phản ứng BCG Ở Trung Quốc khơng có khác khả gây phản ứng liên hệ miễn dịch (reactogenicity) vaccine trẻ em nhận vaccine sởi, JE JE sởi kết hợp Y Liều dùng đường cấp Ở Trung Quốc, vaccine cấp phép cho liều 0.5 ml cấp da cho trẻ tháng tuổi liều lặp lại lần hai thích hợp lúc hai năm Ở vài khu vực, liều nhắc lại đưa vào khoảng năm Giông vaccine thu từ tế bào PHK bị bất hoạt , vaccine SA 14-14-2 phân phối vào chiến dịch mùa xuân hàng năm chương trình dựa tuổi Y Ổn định vaccine Hiệu giá nhiễm vaccine làm khô lạnh không thay đổi đáng kể sau trữ 0 37 C để 7-10 ngày, nhiệt độ phòng tháng 2-8 C để 1.5 năm Sau khôi phục lại với nước chưng cất nước muối vô trùng trữ 23 C, hiệu giá nhiễm vaccine ổn định 2-4 h 2h Vaccine nên dự trữ vận chuyển C, tránh ánh sáng mặt trời sử dụng vòng 18 tháng sau kiểm tra hiệu lực hoàn chỉnh II.2.1.4 Một số vaccine cải tiến Một số vaccine JE phát triển, bao gồm virus bị bất hoạt, vaccine DNA vaccine kỹ thuật di truyền Các ứng cử viên mà đưa hứa hẹn xa phát triển đơn giản vaccine bất hoạt với nhà sản xuất thử nghiệm giai đọan ba vaccine Chimeric sửa đổi giai đoạn a Vaccine bất hoạt Một số nhóm làm thí nghiệm với vaccine hạt virus bất hoạt từ nuôi cấy tế bào Vero bị nhiễm Dịch nuôi cấy tế bào với độ chuẩn nhiễm virus cao, liên tục thu hoạch từ giá thể nuôi cấy, bất hoạt với formalin cô đặc, mang lại vaccine ứng cử viên với tiêu chuẩn hiệu lực bảo hộ chuột đưa vào vaccine não chuột bất hoạt Vaccine IC52 phát triển Intercell, cơng ty kỹ thuật bố trí Viema, Austria, dựa dòng virus vaccine SA 14-14-2 Nó tinh sach, bất hoạt đưa vào công thức với phèn Một phần phase mở rộng tế bào, quy trình sử dụng huyết dê bào thai Chỉ dẫn cho người trưởng thành, nghiên cứu phase I phase II hướng dẫn Investigational New Drug (IND) Mỹ thông qua Walter Reed Army Institute of Research (WRAIR) Dữ liệu chứng minh gia tăng tỉ lệ chuyển đổi huyết với liều bậc thang vaccine Nghiên cứu phase I, liều 0.4 -2 µg đưa với 2-3 liều uống Các nghiên cứu phase II, liều 6-12 µg cho kết tỉ lệ chuyển đổi huyết cao tháng với bền vững kháng thể trung hòa dòng tương đồng khoảng năm 85% đối tượng Sử dụng cho người trưởng thành chứng minh không thấp dựa tỉ lệ chuyển đổi huyết độ chuẩn kháng thể Công ty xin cấp sớm Mỹ Châu Âu Thêm vào đó, cộng tác Biological E dẫn tới điều kiện thuận lợi cho sản xuất Ấn Độ nghiên cứu phase II III em bé trẻ em tuổi địa phương bệnh Cơ sở nghiên cứu bệnh vi sinh vât trường đại học Tokyo, Biken sản xuất vaccine Biken BK-VJE dựa tế bào vero làm thành cơng thức có phèn sử dụng dịng Beijing -1 JE 2001 nghiên cứu phase I hai liều uống đưa vaccine để dự trữ tốt, tăng nhẹ chức gan gây miễn dịch, với chuyển đổi huyết kháng thể trung hòa quan sát đối tượng huyết âm tính Thử nghiệm liều phase III 110 đứa trẻ nhạy cảm với flavivirus tạo kháng thể trung hịa 100% đối tượng khơng có điều kiện bất lợi Lần thứ hai phase III mở rộng thử nghiệm đánh dấu kết mức độ cao kháng thể trung hòa tất đứa trẻ chủng ngừa trước với vaccine não chuột đưa vào liều BK-VJE Kakestunken, nhà sản xuất vaccine JE thu từ não chuột người Nhật sản xuất vaccine từ tế bào Vero khơng có tá dược tinh làm thành cơng thức khơng có gelatin thimersol Nồng độ DNA protein Vero vài picogram liều sản phẩm cuối Ở phase I , 30 người trưởng thành nhạy cảm bệnh đưa vào iều vaccine 0.4 tuần tháng khảo sát khơng có trường hợp chống lại nghiêm trọng tất đối tượng phát triển kháng thể trung hòa JE Nghiên cứu phase II bao gồm 200 đứa trẻ từ 6-90 tháng tuổi nhận liều với 100% huyết chuyển đổi Các trường hợp chống lại nhẹ ghi 45% sau lần cấp Tương tự, vaccine bất hoạt tế bào Vero sản xuất Trung Quốc viện sản phẩm sinh học Beijing b Vaccine Chimeric Rất xa định hướng di truyền hứa hẹn xây dựng chimeric flavivirus gene YF 17D đóng góp gene NS SA 14-14-2 đóng góp gene prM E (ChimeriVax-JE; Acambis, Cambridge, MA, USA) Chimera xây dựng từ cDNA, phiên mã ngược từ RNA dùng điện trường nhiễm vào tế bào Vero Kết dịng nhiễm có thành phần trung hòa độc tố SA 14-14-2, phát triển tế bào Vero đặc trưng 17D Sự làm yếu virus chimeric thực dựa mơ bất định protein E JE có tối thiểu 3-6 acid amin bị thay đổi Chimera YF/JE chứng minh gây miễn dịch cao khỉ rhesus bảo vệ chống lại nguy nhiễm vào não mũi sử dụng dòng virus hoang dại Chimera truyền vật truyền muỗi virus JE YF Hyderabad, Ấn Độ hoàn chỉnh vaccine đầy đủ hoàn thiện Good Manufacturing Practices (GMP) Các thử nghiệm bệnh lý bệnh nhi dự định Ấn Độ ước định an toàn khả tồn trữ ChimeriVax-JE trẻ em tăng lên từ nhóm tuổi lớn tới nhóm tuổi nhỏ Những nghiên cứu cấp phát đồng thời vaccine sởi với ChimeriVax-JE dự định c.Vaccine DNA Một định hướng khác thăm dò tiêm vào trong da plasmid DNA trần mã hóa cho protein M E kiểm soát promoter cạnh virus cự bào Sử dụng plasmid JE chuột miễn dịch bảo vệ chống lại thách thức chủng virus hoang dại Ở heo con, hai liều tiêm vào tạo hiệu giá kháng thể cao đáp ứng kí ức bệnh cao để kích thích vaccine nhược độc sống Vaccine khác phát triển bao gồm tạo trình tự tín hiệu kích thích tiết chất hoạt hóa plasminogen từ mô nối với phần gen protein vỏ JEV gen có chiều dài đầy đủ Các tế bào chuyển sau xây dựng tạo protein E gây bảo hộ tốt chống lại kích thích não chuột d.Vaccine nhược độc sống Tiềm tàn tác nhân ngẫu nhiên chất tế bào PHK vaccine nhược độc SA14-14-2 yêu cầu mở rộng kiểm tra thăm dị phóng thích Kết quả, kích thích cố gắng để lắp virus vào hệ thống tế bào Dòng virus lắp vào tế bào PDK sau chuyển virus gây độc thần kinh vào khỉ làm kiểm tra an toàn khác, tạo GMP chuyển qua tế bào PDK 19 nhờ WRAIR vaccine ứng cử Vaccine IND có chứa độ chuẩn nhiễm 105.5 PFU/ml, đưa vào an toàn cho người trưởng thành trẻ em thử nghiệm phase I người, đáp ứng kháng thể trung hòa với liều phát 14 45 (31%), với hiệu giá kháng thể trung bình nhân (GMTs) thay đổi từ tới 40 (YX Yu, personal communication, 1997) Thấy bên đáp ứng miễn dịch kém, dòng chuyển PDK xem xét qua suy yếu phát triển không tiếp tục Sau đó, virus kết hợp với tế bào Vero tiềm tàng virus sống bất hoạt hạt virion khảo sát e.Vaccine vector đậu mùa Virus đậu mùa thiếu khả chép (Replication-deficient canary pox :ALVAC) virus đậu mùa nhược độc cao (highly attenuated vaccinia viruses: NYVAC) sử dụng vector mang gene prM-E prM-E-NS1 Các ứng cử viên vaccine tái tổ hợp xây dựng nhờ chèn gene prM, E, NS1 NS2 vào virus vaccine đậu mùa NYVAC hoăc virus đậu mùa hoàng yến ALVAC đánh giá rộng rãi Cả hai thể tái tổ hợp biểu mã hóa sản phẩm gene NS gene cấu trúc JE kích thích kháng thể bảo hộ JE chuột; hai liều trước bảo vệ khỉ rhesus chống lại thách thức virus gây chết Trong thử nghiệm phase I người, vaccine gây phản ứng vaccine não chuột an tồn Hai liều vaccine tái tổ hợp NYVAC-JE gần gây miễn dịch ba liều vaccine não chuột bất hoạt, người tình nguyện chưa bị đậu mùa Mặc dù virus tái tổ hợp NYVAC-JE chứng minh an tồn có hiệu lực với đối tượng không miễn dịch đậu mùa, thất bại bố mẹ để chép đối tượng miễn dịch đậu mùa đặt vài giới hạn có lợi II.2.2 Một số nghiên cứu phát triển vaccine JE cho động vât a Phát triển triển giống nhược độc để làm vaccine virus JE sống cho heo Phát triển triển giống nhược độc làm vaccine virus JE sống để ngăn ngừa heo chết sinh, nổ lực để tạo virus nhược độc Ni cấy tế bào thận bị sơ cấp để tiến hành cấy truyền giống 30 C thời gian dài Trong trình cấy truyền tạo dòng lặp lại với đặc tính khả tái sinh nhiệt độ đưa vào (rct) kích thước vệt marker Kết quả, giống S nhược độc tạo thành cơng Nó rct/37 rct/40 ( rct: nhiệt độ cịn khả sinh sản) hình thành điểm nhỏ Ở giống làm yếu đánh dấu thấy gây nhiễm ngoại vi chuột bú gây nhiễm bên chuột trưởng thành Khi tiêm với giống heo sinh không biểu dấu hiệu bệnh lý bất thường thay đổi bệnh lý mô não Một thời gian ngắn số virus tìm thấy nốt bạch huyết máu Một virus cịn phát quan khác Khơng có virus huyết phát từ heo heo tháng tuổi tiêm với virus phục hồi Không có nhiễm bào thai phát heo nái mang thai tiêm với virus hồi phục Heo nái tiêm sinh heo bình thường Từ kết này, nói giống S có đủ an tồn để sử dụng virus vaccine sống cho heo b Ứng cử viên vaccine DNA JE biểu gen vỏ gen tiền màng tạo thành tế bào B nhớ chuyên biệt virus tạo kháng thể bền vững heo Heo máy khuyếch đại virus JE môi trường vật nuôi Ở nghiên cứu này, hai ứng cử viên vaccine DNA đánh giá gây miễn dịch cho heo Cả hai plasmid vaccine mã hóa ca xét gồm có tín hiệu vùng mã hóa cho protein tiền màng prM protein vỏ E virus JE Một plasmid thiểt kế pcJEME dựa vector thương mại pcDNA3 plasmid khác thiết kế pNJEME dựa vector pNBVL4a Khơng có khác phát việc gây miễn dịch plasmid chuột heo Heo miễn dịch với vaccine DNA với liều 100-400 μg khoảng tuần phát triển hiệu giá kháng thể trung hòa hiệu giá kháng thể HAI (hemagglutination-inhibitory) 1:40 1:160 tuần sau tiêm chủng lần hai Tuy nhiên, heo cấp hai liều vaccine JE thương mại ( chuẩn bị virus bị bất hoạt formalin; JEVAX-A) tăng thấp 1:10 đáp ứng kháng thể khả phát sau tiêm nhắc lại chúng Thú vị hiệu giá kháng thể huyết gây nhờ vaccine DNA heo cao phát chuột Sau ngày tiêm nhắc lại với kháng nguyên virus (JEVAXA) để phát đáp ứng kí ức bệnh, heo chủng ngừa hai lần với vaccine DNA biểu hiên tăng gấp >100 lần độ chuẩn HAI, khả nhớ mạnh mẻ đáp ứng kháng thể Heo trì mức phát kháng thể HAI tối thiểu 245 ngày sau lần chủng ngừa với vaccine DNA Các kết vaccine DNA làm tăng tế bào B nhớ chuyên biệt cho virus tạo kháng thể bền vững thời gian dài heo, mức độ bảo hộ cao so với vaccine JE bất hoạt formalin thương mại III KẾT LUẬN Như nói nổ lực khơng ngừng nhà khoa học bệnh viêm não Nhật Bản người động vật chủ động kiểm soát vaccine Hiện nay, thị trường có nhiều loại vaccine chủng ngừa viêm não Nhật Bản để người động vật tiêm chủng có hiệu bảo hộ cao Dưới phát triển không ngừng khoa học kỹ thuật vaccine viêm não Nhật Bản ngày hoàn thiện Kết hợp với kỹ thuật di truyền, kỹ thuật sản xuất vaccine DNA, vaccine tái tổ hợp… mở hướng để sản xuất vaccine phòng bệnh viêm não Nhật Bản hiệu cao với liều Tuy vậy, trình nghiên cứu xây dựng loại vaccine công nghệ mang đến số rủi ro làm thay đổi serotype virus JE làm chúng trở nên nguy hiểm Bên cạnh đó, nước phát triển Châu Á chưa chủ động sản xuất vaccine JE đủ đáp ứng cho nhu cầu nước mà phải nhập từ nước ngồi Vì giá thành cao gây ảnh hưởng lớn đến hiệu ngành chăn nuôi sức khỏe người Tài liệu tham khảo ©The Medical Journal of Australia 2004 www.mja.com.au Journal of clinical microbiology, Jan 1975, p 96-101 www.thelancet.com http://www.lunwentianxia.com/product.sf.3138068.1/ http://www.jimmunol.org http://jcm.asm.org/cgi/reprint/1/1/96.pdf http://jcm.asm.org http://www.sciencedirect.com http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC111940/ http://idsc.nih.go.jp/yosoku/index-E.html http://www.path.org/projects/JE_in_depth.php http://www.ozonetherapycentre.com MỤC LỤC I ĐẶT VẤN ĐỀ II TỔNG QUAN TÀI LIỆU II.1 Bệnh viêm não Nhật Bản ( Japanese encephalitis: JE) II.1.1 Lịch sử bệnh II.1.2 Virus JE II.2 Vaccine phòng bệnh JE II.2.1 Vaccine JE cho người II.2.1.1 Vaccine JE thu từ não chuột bị bất hoạt II.2.1.2 Vaccine JE từ tế bào thận chuột đồng sơ cấp bị bất hoạt .9 II.2.1.3 Vaccine viêm não Nhật Bản nhược độc, sống 10 II.2.1.4 Một số vaccine cải tiến 15 II.2.2 Một số nghiên cứu phát triển vaccine JE cho động vât 18 III KẾT LUẬN 20 ... thuật vaccine viêm não Nhật Bản ngày hoàn thiện Kết hợp với kỹ thuật di truyền, kỹ thuật sản xuất vaccine DNA, vaccine tái tổ hợp… mở hướng để sản xuất vaccine phòng bệnh viêm não Nhật Bản hiệu... III KẾT LUẬN Như nói nổ lực khơng ngừng nhà khoa học bệnh viêm não Nhật Bản người động vật chủ động kiểm soát vaccine Hiện nay, thị trường có nhiều loại vaccine chủng ngừa viêm não Nhật Bản để... xuất vaccine JE tất yếu để chủ động kiểm soát ngăn ngừa bệnh hiệu II TỔNG QUAN TÀI LIỆU II.1 Bệnh viêm não Nhật Bản ( Japanese encephalitis: JE) II.1.1 Lịch sử bệnh Sự bùng phát bệnh viêm não