Tiểu luận (công nghệ sinh học) chuẩn đoán virus viêm não nhật bản bằng kỹ thuật nuôi cấy tế bào

ĐẶT VẤN ĐỀ Chúng ta thấy nước ta, mùa hè mùa dễ phát sinh nhiều loại bệnh dịch tả, thương hàn, sốt xuất huyết,… đặc biệt bệnh nguy hiểm bệnh viêm não Nhật bản, hay gặp trẻ 15 tuổi nhóm có nguy cao trẻ từ – tuổi (chiếm 75% tổng số trẻ mắc bệnh) Theo thông báo Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương, năm có khoảng 3000 trẻ em mắc bệnh viêm não, có 30 – 40% bị bệnh viêm não Nhật Bệnh viêm não Nhật Bản muỗi truyền virus phát triển mạnh vào mùa nắng nóng nên thường gọi bệnh viêm não mùa hè hay bệnh viêm não B Hiện bệnh viêm não Nhật Bản chưa có thuốc đặc trị nên thường có tỷ lệ tử vong cao (10-20%) để lại di chứng nặng nề động kinh, giảm học lực, đần độn, liệt, thất ngôn Những di chứng thường chiếm 50% người mắc bệnh, thường gây tàn phế, khả lao động để lại gánh nặng cho gia đình, xã hội Ở chun đề này, tơi xin trình bày kỹ virus bệnh viêm não Nhật Bản, đặc biệt phương pháp chuẩn đoán virus kỹ thuật nuôi cấy tế bào TỔNG QUAN I- Bệnh viêm não Nhật Bản Khái niệm: Viêm não Nhật Bản (VNNB) bệnh truyền nhiễm trùng cấp tính gây loại siêu vi trùng thuộc nhóm Arbovirus có tính với tế bào thần kinh, có tên Japanese Encephalitis Virus (JE Virus) Virus lây truyền qua người nhờ trung gian muỗi Culex tritaeniorhynchus Culex vishnui Bệnh xảy rải rác hay thành dịch Bệnh không truyền từ người sang người khác.Bệnh dẫn đến tình trạng tổn thương não vĩnh viễn, tỷ lệ tử vong cao Bệnh viêm não mô tả từ năm 1871 đến nam 1935 phát phân lập từ bệnh nhân Tokyo nên gọi bệnh viêm não Nhật Bản Tùy theo mức độ vị trí tổn thương hệ thần kinh trung ương (HTKTW), lâm sàng có biểu triệu chứng nơi bị xâm phạm : viêm não, viêm màng não, viêm sừng trước tủy sống bệnh cảnh phối hợp: viêm não màng não, viêm não màng não tủy sống Dịch tễ học Khái quát lịch sử: VNNB bệnh dẫn đầu số bệnh viêm não virus Châu Á Nó lưu hành rộng rãi nước vùng Đông Á, Nam Á, Đơng Nam Á có Việt Nam Bệnh xuất phía Tây Thái Bình Dương Hằng năm vào khoảng 50000 trường hợp mắc giới với số tử vong ước chừng 10000(1988) Bệnh biết tới vào 1871 đến năm 1924 biết rõ lâm sàng qua trận dịch lớn với 6000 trường hợp, tỷ lệ tử vong vào khoảng 60% (ở Nhật Bản), bệnh gọi “ viêm não mùa hè” Năm 1935 người ta phân lập virus từ não bệnh nhân tử vong Tokyo, cung cấp chủng Nakayama nguyên mẫu Virus gọi virus VNNB B có liên quan đến viêm não mùa hè Nhật Bản Năm 1952, virus VNNB phân lập từ lính viễn chinh Pháp miền Bắc Việt Nam, năm 1953 có 98 trường hợp VNNB quân đội viễn chinh Pháp Trong thập kỉ 1960 có nhiều trận dịch viêm não siêu vi gọi hội chứng viêm não cấp tính gọi tắt hội chứng não cấp (HCNC), xảy hầu hết địa phương miền Bắc, miền trung du vùng đồng châu thổ sông Hồng, có nơi tỷ lệ mắc bệnh năm lên tới 6-10/100000 dân với tỷ lệ tử vong từ 5,7% - 28,5% siêu vi VNNB tác nhân gây 50% - 70% HCNC Tại miền Nam viêm não siêu vi xảy rải rác quanh năm, số mắc cao vào năm 1980 với tỷ lệ 4,95/100000 dân tỷ lệ tử vong 27,46% thường tập trung nhiều đồng sơng Cửu Long, nơi có thói quen ni heo gần nhà Chưa tiến hành nghiên cứu có hệ thống đây, qua kết báo cáo sơ bệnh viện lớn TP.HCM, từ 64% - 69% hội chứng não cấp nhập viện có tác nhân gây bệnh virus VNNB, với tỷ lệ tử vong vào khoảng 16% Về mặt dịch tễ học bệnh VNNB có đặc điểm: a Nguồn lây Các lồi chim hoang dã cò, diệc, cò quặm, liếu điếu… loài chim khác sống gần vùng đầm lầy vật chủ quan trọng mang mầm bệnh virus VNNB Các nhà khoa học xác định phân lập virus VNNB từ nội tạng chim hoang dã Mặc dù mang virus máu kéo dài lồi chim khơng biểu bệnh, nguồn lây nhiễm cho loài muỗi thiên nhiên Các lồi chim di cư lây truyền mầm bệnh virus từ vùng qua vùng khác Qua điều tra giám sát huyết thanh, hầu hết gia súc trâu bị, dê, cừu, chó, nhiễm virus VNNB, có heo, ngựa có biểu bệnh như: viêm não ngựa, virus qua nhau, nhiễm bào thai heo nái gây chết thai, xảy thai Tuy nhiên có heo nguồn nhiễm virus huyết quan trọng truyền cho muỗi lý sau: - Heo đẻ nhiều lứa, tạo số lượng quần thể heo cảm nhiễm virus - Luân chuyển thường xuyên 6-8 tháng - Chỉ số heo nhiễm virus tự nhiên cao tất gia súc khác - Nhiễm virus máu heo thường cao nên dễ truyền virus qua muỗi b Trung gian truyền bệnh Đối với virus VNNB muỗi vật trung gian truyền bệnh quan trọng Hiện người ta phát có 30 lồi muỗi khác thuộc họ Culex, Anopheles, Aedes, Mansoni Amergeres trung gian truyền bệnh VNNB virus, có loại C.tritae, C.vishui vật chủ trung gian có khả truyền bệnh cao Nhiều nghiên cứu khẳng định muỗi Culex Tritaeniorhynchus vật chủ trung gian lan truyền virus VNNB Việt Nam C.Tritae có nhiều vùng nơng thơn nơi mương máng, đồng ruộng ngập nước Về đêm muỗi ưa hút máu động vật có xương sống gia súc, chim, người, sau bay phát tán xa Muỗi hút máu động vật heo, chim, thời kỳ nhiễm virus huyết, virus nhân lên muỗi với hiệu cao, sau có khả truyền bệnh suốt đời truyền virus sang hệ sau qua trứng Muỗi truyền mầm bệnh virus từ chim sang lợn người đốt, muỗi truyền mầm bệnh virus từ lợn sang người c Chu trình lây truyền virus VNNB Virus VNNB bảo tồn thiên nhiên truyền sinh học từ động vật có xương sống sang động vật có xương sống khác qua trung gian côn trùng hút máu muỗi Tuy chim động vật chủ trình việc trì virus VNNB tự nhiên chưa có nghiên cứu rõ vai trị quan trọng chim việc truyền virus VNNB qua muỗi đến người Heo vật chủ quan trọng có khả làm lan rộng virus VNNB, chu trình tồn quanh năm Người sống gần chu trình sinh thái tự nhiên mắc bệnh bị muỗi đốt Người coi vật chủ cuối virus VNNB có vai trị quan trọng dịch tễ học bệnh Virus VNNB máu người tồn thời gian ngắn với nồng độ thấp, nên lây bệnh từ người sang người khác qua muỗi đốt d Phân bố bệnh Phân bố theo mùa: Y Virus VNNB lan truyền theo mùa hầu hết vùng Châu Á Y Khí hậu với yếu tố nhiệt độ mưa có ảnh hưởng đến tình hình bệnh Ở vùng ơn hòa, virus Japansese encephalitis lan truyền vào mùa hè đầu mùa thu(vào khoảng từ tháng 5-9) Ở vùng cận nhiệt nhiệt đới, lan truyền virus theo mùa có liên quan đến thừa thải trung gian truyền bệnh muỗi vật chủ lan truyền có xương sống.Vào mùa mưa ruộng lúa đầy nước tạo điều kiện tốt cho muỗi sinh sản phát triển mạnh thiên nhiên, trùng hợp với thời điểm bệnh xảy nhiều 0 Y Vào mùa hè thời tiết nóng, nhiệt độ từ 27 C - 30 C virus thường phát triển tốt thể muỗi Nếu 20 C phát triển virus dừng lại Y Mơ hình dịch tễ học lại khác vùng miền, cụ thể miền Nam Bắc Việt Nam Tại miền Bắc bệnh giảm nhiều vào tháng lạnh, tăng vào tháng hè đỉnh cao vào tháng 5-6-7 Tại miền Nam, thời tiết nóng bệnh rải rác quanh năm Phân bố theo tuổi giới tính : Y Tất lứa tuổi chưa có miễn dịch mắc bệnh Ở vùng có bệnh VNNB lưu hành, trẻ em sớm tiếp xúc với tác nhân gây bệnh nên tỷ lệ mắc bệnh trẻ cao thường từ 2-10 tuổi, phần đông thể không triệu chứng lâm sàng, số lượng trẻ có kháng thể đặc hiệu tăng theo tuổi nên tỷ lệ mắc bệnh giảm trẻ lớn người lớn Những người chưa có miễn dịch đặc hiệu mắc đến vùng có VNNB lưu hành Bệnh khơng liên quan tới giới tính nhiên thực tế số bệnh nam thường nhiều nữ Tuy chu trình sinh thái virus VNNB thiên nhiên khơng thay đổi, tình hình dịch tễ có biến đổi trước tác động người, thay đổi lề lối canh tác chăn nuôi, đô thị hóa, điều kiện kinh tế xã hội nâng cao, sử dụng thuốc diệt trừ côn trùng canh nông, cuối vaccine chủng ngừa VNNB sử dụng 3 Cách sinh bệnh Khi bị muỗi đốt, virus từ nước bọt muỗi qua da Giai đoạn đầu virus nhân lên chỗ hạch lympho vùng, nguồn dẫn đến virus huyết Từ máu virus đến tổ chức nội tạng khác tổ chức lympho, mô liên kết, vân, tim, tuyến nội ngoại tiết Virus tiếp tục nhân lên tổ chức thần kinh đưa đến virus huyết lần kéo dài 3-5 ngày, thường với nồng độ thấp người Nếu kháng thể trung hịa tăng kịp xảy tượng virus huyết ngưng Chưa biết rõ chế xâm nhập hệ thần kinh trung ương virus Tuy nhiên, não bị nhiễm lan tỏa chứng tỏ virus xâm nhập qua đường mạch máu Mặt khác hàng rào mạch máu não bị tổn thương giai đoạn tiềm ẩn dễ tạo hội cho virus xâm nhập thần kinh, mắc bệnh VNNB trường hợp có sẵn bệnh cysticercosis não, sau chấn thương sọ não Những biến đổi bệnh lý trình phát triển virus hệ thần kinh trung ương sau : Y Virus nhân lên tế bào thần kinh với nồng độ não gấp triệu lần so với vị trí khác ngồi thần kinh Trong giai đoạn cấp tính, nói chung màng não bình thường thống mờ, não bị xung huyết , phù nề, xuất điểm xuất huyết chảy máu chất xám, hoại tử đồi thị, nhân xám sọ, não giữa, tiểu não, nhân xám thân não, chất xám võ não, không thấy tổn thương chất trắng Sừng trước tủy sống bị tổn thương giống sốt bại liệt Y Về mặt vi thể, tượng tế bào thần kinh đệm thực bào thần kinh chết tạo nốt điển hình sản tế bào thần kinh đệm, bệnh kéo dài tế bào viêm bao quanh huyết quản tạo thành hình ảnh vỏ ngoại quản, cuối xuất ổ hoại tử khan tế bào tế bào thần kinh bị thối hóa, tiêu hủy tạo ra, đơi có chất vơi ứ đọng bên 4 Đặc trưng bệnh VNNB có thời kì ủ bệnh từ 5-15 ngày Bệnh nhân có triệu chứng giống cảm cúm Sốt lạnh run, sổ mũi dấu hiệu ban đầu bệnh Sau số triệu chứng nhức đầu, khó chịu, nơn mửa ,có thể rối loạn tâm lý Trẻ em thường ăn Trong trường hợp nặng có o thể suy nhược, liệt nhẹ, co giật, sốt cao 39-41 C, dẫn đến mê tử vong Ở trẻ có tình trạng rối loạn ý thức, nơn mửa, cứng gáy, sảng, ảo giác, co giật, động kinh lâm vào tình trạng rối loạn nhịp thở, mê Nếu có dấu hiệu nghi ngờ nhiễm bệnh, bệnh nhân cần đến bệnh viện sớm tốt để tiến hành xét nghiệm chẩn đoán bệnh ( xét nghiệm máu, dịch não tủy, huyết học, điện não đồ Điều trị Cho đến chưa có phương pháp điều trị đặc hiệu cho bệnh Chủ yếu điều trị triệu chứng, nâng đỡ bệnh nhân đơn vị hồi sức cấp cứu (chống sốt, chống co giật, chống phù não, trợ tim mạch, hô hấp, chống rối loạn thần kinh thực vật, chăm sóc tích cực, dinh dưỡng tốt ) Trong giai đoạn phục hồi, người bệnh cần huấn luyện phục hồi di chứng II Virus viêm não Nhật Bản phương pháp chuẩn đốn virus kỹ thuật nuôi cấy tế bào 1.Virus viêm não Nhật Bản a) Giới thiệu chung Virus viêm não Nhật Bản thuộc họ Flaviridae Nó có quan hệ gần gũi với West Nile virus ST.Louis encephalitis virus Virus viêm não Nhật Bản hình cầu, nhân chứa RNA mạch đơn, kích thước 45-50nm, bao quanh cấu trúc hình khối gọi capsid, phần vỏ giàu chất lipid Virus viêm não Nhật Bản dễ hoạt lực nhiệt độ o 56 C nửa formalin 0,2%, ether, natrideoxycholate bị bất hoạt nhanh tia tử ngoại Virus ni cấy tế bào thận heo, thận chuột Hamster, não chuột bạch sơ sinh, chuột bạch trưởng thành hay tế bào tổ chức côn trùng muỗi Virus viêm não Nhật Bản có loại protein kháng nguyên: protein màng M, protein lõi C, protein vỏ E kháng ngun vỏ E đóng vai trị quan trọng bước phản ứng với tế bào kí chủ tạo kích thích miễn dịch bảo vệ thể b) Bộ gen virus VNNB Bộ máy di truyền virus viêm não Nhật Bản RNA mạch đơn Chuẩn đoán virus VNNB kỹ thuật Shell vial culture (SVC) Shell vial culture (SVC) biến đổi công nghệ nuôi cấy tế bào thông thường cho phát nhanh virus ống nghiệm Kỹ thuật gồm có tiêm nhiễm mẫu lâm sàng vào tế bào lớp phát triển kính đậy (lamen) ống ni cấy SVC, sau đem ly tâm tốc độ chậm ủ Hệ thống làm việc nguyên lý ly tâm tốc độ chậm làm tăng tính nhiễm virus vào tế bào nhạy cảm Người ta nghĩ chấn thương nhỏ bề mặt tế bào đưa đến kết việc ly tâm tốc độ chậm làm gia tăng lực cho virus vào tế bào, việc làm giảm tổng thời gian mà virus xâm nhiễm vào tế bào Trước tiên SVC mô tả cho cytomegalovirus chuột Sau đó, nguyên lý dùng lĩnh vực dược phẩm vi sinh cho phân lập Chlamydia trachomatis từ vùng sinh dục người Phát nhanh cytomagelovirus mẫu nước tiểu người nhiễm sử dụng biểu tế bào nguyên bào sợi lưỡng bội người (MRC-5), có ích chuẩn đốn virus Sự nhanh kỹ thuật mà không giảm tính nhạy làm SVC trở nên phổ biến trường hợp bệnh lâm sàng virus SVC dùng để chuẩn đoán nhanh nhiều loại virus khác cytomegalovirus, Herpes Zoster, Mumps (quai bị), Measles (bệnh sởi) virus hợp bào hệ hô hấp Trong tất nghiên cứu, kỹ thuật SVC biểu gia tăng tốc độ phân lập virus mà không làm giảm độ nhạy Kỹ thuật SVC làm giảm thời gian so với kỹ thuật nuôi cấy tế bào thông thường Kỹ thuật SVC tốn khoảng 36 kỹ thuật nuôi cấy thơng thường cần đến 3-7 ngày cho chuẩn đốn mẫu quan trọng Trong 50 mẫu lấy từ 50 bệnh nhân, SVC chuẩn đốn tất 24 trường hợp dương tính chuẩn đốn phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp Ngồi ra, SVC cịn chuẩn đốn thêm trường hợp mà phương phâp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp khơng chuẩn đốn Ngun liệu phương pháp Y Mẫu: - 14 - Dịch não-tủy lấy từ việc tiêm chích vào thắt lưng 50 bệnh nhân, bao gồm 46 bệnh nhân khoa nhi từ 18 tháng tuổi đến 12 tuổi người trưởng thành từ 13 đến 40 tuổi Tất bệnh nhân đến từ Pondicherry quận lân cận Tamil Nadu State Y Dòng tế bào: Tế bào thận lợn (PS-Porcine Kidney) lấy từ trung tâm quốc tế khoa học tế bào sử dụng nghiên cứu Tế bào phát triển bình ni cấy mơ o plastic bình Roux 37 C Y Dung mơi: Eagle’s modified MEM, NEAA, phenol red khơng có l-glutamine, NaHCO3 kháng sinh sử dụng L-glutamine (3%), NaHCO3, vitamine, glucose (10%), huyết bào thai bò (10%) hỗn hợp kháng sinh (Penicillin 100U/ml, Gentamicin mg/ml, Streptomycin 100µg/ml, Ciprofloxacin 2mg/ml Amphoterincin-B5 mg/ml) thêm vào sau Eagle’s modified MEM hấp Y Shell vials Shell vials hình trụ phần đáy dát mỏng tiệt trùng (4.5 cm x 1.5 cm), với lamen đường kính 13mm lấy từ Flow Laboratories, Scotland Mouse Ascitic Fluid (MAF) Rabbit IgG FITC kết hợp dùng cho việc nhuộm đốm CSF tế bào lớp shell vial Y Controls (Sự thử lại): Virus VNNB gây nhiễm vào tế bào não chuột lấy từ Viện sức khỏe tâm thần khoa học thần kinh quốc tế (Nation Institute of Mental Health and Neurosciences), Bangalore, gây nhiễm vào não chuột sơ sinh Rồi sau giống làm thích ứng với dịng tế bào thận lợn phịng thí nghiệm Tế bào thận lợn nhiễm virus VNNB nhuộm màu kỹ thuật huỳnh quang miễn dịch trực tiếp phù hợp với thử lại dương tính với thí nghiệm huỳnh quang miễn dịch trực tiếp mẫu bệnh lâm sàng Y Sự tiêu chuẩn hóa Shell vial culture Sau nhiễm virus VNNB vào tế bào thận lợn, giống sử dụng tiêu chuẩn hóa SVC Tế bào thận lợn lớp phát triển lamen shell vial Sau ly tâm 1000 rpm 45 phút, shell vials ủ thời điểm khác 12h, 24h, 36h 48h nhiệt độ phòng Tế bào lớp cố định lại với acetone lạnh nhuộm màu kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp Người ta thấy kết sớm sau 36h ủ Y Phương thức thử nghiệm Shell vial 1ml tế bào thận (4 x 10 tế bào/ml) dung môi phát triển thêm vào shell o vial ủ 37 C tế bào lớp hợp dịng tạo thành Dung mơi phát triển virus lấy 300 µl mẫu xét nghiệm tiêm nhiễm vào shell vial nhuộm màu kỹ thuật miễm dịch huỳnh Shell vial culture positive quang trực tiếp Shell vial đem ly tâm 1000 rpm 45 phút nhiệt độ phòng sau thêm ml dung o mơi bảo quản vào shell vial đem ủ 37 C vòng 36h Dung môi bảo quản lấy cẩn thận khỏi shell vial loại bỏ Tế bào lớp rửa với PBS (pH 7.2) – lần sấy khô cố định acetone 30 phút Lamen nhuộm phương pháp miễn dịch huỳnh quang trục tiếp Vết trải bàn kính quan sát kính hiển vi quang học, có cho huỳnh quang tế bào chất màu xanh (apple green fluorescence) Kết luận Hiện nhà khoa học khắp giới nghiên cứu chủng virus viêm não Nhật Bản hy vọng tìm thuốc đặc trị bị nhiễm cho dù có vaccine bệnh Đối với phương pháp chuẩn đoán virus Viêm não Nhật Bản kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thường dùng phương pháp Shell vial culture Đây phương pháp chuyên dùng để chuẩn đoán virus thuộc nhóm Flavivirus Japanese Encephalitis Virus (JEV), West Nile Virus, Dengue-2 viral encephalitis virus,… Đây phương pháp chuẩn đốn nhanh nhạy Nó có ưu điểm vượt trội so với chuẩn đoán phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp phương pháp nuôi cấy tế bào thơng thường (như trình bày trên) Tuy nhiên, Việt Nam phương pháp chuẩn đoán Shell vial culture chưa thật phổ biến kỹ thuật khác kỹ thuật ELISA, kỹ thuật gen, kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp,… Hy vọng tương lai tới, phương pháp ứng dụng rộng rãi nước ta để chuẩn đoán nhanh xác virus viêm não Nhật Bản phục vụ cho công tác điều trị bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Anh: (tài liệu cho phần Shell vial culture) 1.Umenai T, Kruzysko R, Bektimirov TA, Assaad FA: Japanese encephalitis-Current world status Cinque P, Bossolasco S, Lundkvist A: Molecular analysis of cerebrospinal fluid in viral diseases of the central nervous system 3.Forbes BA, Sahm DF, Weissfeld AS: Indirect Immunofluorescence Engler HD, Preuss J: Laboratory diagnosis of respiratory virus infections in 24 hours by utilising shell vial cultures 5.Kedarnath N, Prasad SR, Dandavathe CN, Koshy AA, George S, Ghosh SN: Isolation of Japanese encephalitis and West Nile viruses from peripheral blood of encephalitis patients Tài liệu tiếng Việt: (tài liệu cho phần giới thiệu virus bệnh VNNB) Trần Văn Hưng: Giáo trình Vi sinh vật Y học NXB Y học Web: (tài liệu, hình ảnh cho giới thiệu virus bệnh VNNB) http://google.com.vn http://www.virologyj.com http://www.dhpe.org/infect/Arbovirus.html&sa=X&oi=translate&resnum= 5&ct=result&prev=/search%3Fq%3DArbovirus%26hl%3Dvi%26sa%3DG http://vietsciences.free/ http://www.patient.co.uk/showdoc/40025351/ http://cat.inist.fr/?aModele=afficheN&cpsidt=15752627 http://biomedcentral.inist.fr/ http://www.wikipedia.org/ MỤC LỤC Đặt vấn đề…………………………………………………………… Tổng quan I/ Bệnh Viêm não Nhật Bản 1.Khái niệm 2.Dịch tễ học a/Nguồn lây .5 b/Trung gian truyền bệnh c/Chu trình lây truyền virus viêm não Nhật Bản d/Phân bố bệnh 3.Cách sinh bệnh 11 4.Đặc trưng bệnh 12 5.Điều trị 12 II/ Virus viêm não Nhật Bản-Gen phương pháp chuẩn đoán 12 Virus Viêm não Nhật Bản 12 a/ Giới thiệu chung 12 b/Bộ gen virus viêm não Nhật Bản 14 2.Phương pháp chuẩn đoán Shell vial culture (SVC) 14 ... Nhật Bản phương pháp chuẩn đoán virus kỹ thuật ni cấy tế bào 1 .Virus viêm não Nhật Bản a) Giới thiệu chung Virus viêm não Nhật Bản thuộc họ Flaviridae Nó có quan hệ gần gũi với West Nile virus. .. lập virus mà không làm giảm độ nhạy Kỹ thuật SVC làm giảm thời gian so với kỹ thuật nuôi cấy tế bào thông thường Kỹ thuật SVC tốn khoảng 36 kỹ thuật nuôi cấy thông thường cần đến 3-7 ngày cho chuẩn. .. phương pháp chuẩn đốn virus Viêm não Nhật Bản kỹ thuật nuôi cấy mơ tế bào thường dùng phương pháp Shell vial culture Đây phương pháp chuyên dùng để chuẩn đoán virus thuộc nhóm Flavivirus Japanese