Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 23 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
23
Dung lượng
1,49 MB
Nội dung
1
Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh
Bộ môn Công nghệ sinh học
Lớp DH06SH
Bài tiểuluận:
CHẨN ĐOÁNVIRUSLỞMỒM
LONG MÓNGBẰNGKỸTHUẬT
NUÔI CẤYTẾBÀO
Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Ngọc Hải
Sinh viên thực hiện: Nguyễn Duy Lan
MSSV: 06126067
_Tháng 10/200
9
2
1. ĐẶT VẤN ĐỀ
Ngành chănnuôi được coi là một trong những ngành hàng quan trọng để chuyển đổi cơ cấu
và thúc đẩy tăng trưởng nông nghiệp. Tuy nhiên, điều quan trọng hàng đầu là trong quá
trình chọn giống và nuôi dưỡng chăm sóc, đàn gia súc phải luôn luôn khỏe mạnh, sức đề
kháng cao và thành phần các chất dinh dưỡng tích lũy vào thịt có chất lượng tốt và có giá
trị sinh học.
Bệnh lởmồmlongmóng (tiếng Anh: Foot-and-mouth disease, viết tắt FMD; tiếng Latin:
Aphtae epizooticae), là một loại bệnh rất nguy hiểm do virus gây ra trên động vật móng
guốc chẵn như heo, bò, trâu, hươu, dê Bệnh này rất nguy hiểm vì bệnh lây lan rất nhanh
trên diện rộng qua nhiều con đường khác nhau như tiếp xúc trực tiếp giữa động vật với
nhau, truyền qua không khí Mặc dù tỷ lệ gây chết chỉ cao trên heo con, bê nghé; còn trên
các gia súc lứa và trưởng thành nếu được điều trị tốt thú có thể phục hồi sau 1-2 tuần, song
thiệt hại về kinh tế rất lớn, do tính lây lan quá mạnh. (8)
Chính vì vậy mà Tổ chức Y tế Thế giới xếp bệnh lởmồmlongmóng đứng đầu các bệnh
truyền nhiễm của động vật trong danh mục kiểm dịch quốc tế.
Vì hiện nay những nước đã khống chế được bệnh rất hạn chế nhập khẩu gia súc, hoặc các
sản phẩm động vật từ các nước chưa khống chế được bệnh LMLM, đây chính là mối nguy
hại cho đầu ra của ngành chăn nuôi, cũng như sự phát triển của nó.
3
2. TỔNG QUAN
2.1 Bệnh lởmồmlongmóng
2.1.1 Lịch sử phát hiện bệnh
Mô tả đầu tiên bằng văn bản về dịch có lẽ vào năm 1514, khi Fracastorius mô tả một căn
bệnh tương tự trên gia súc tại Italy. Gần 400 năm sau, vào năm 1897 Friedrich Loeffler và
Frosch đã chứng minh được tác nhân gây nên bệnh lởmồmlongmóng có thể qua lọc.
Hình: Friedrich Loeffler
Đây là minh chứng đầu tiên cho thấy một bệnh trên động vật do tác nhân qua lọc gọi là
virus gây ra, mở ra một kỷ nguyên mới cho ngành virus học (Virology).
1929: Những trường hợp cuối cùng ở Mỹ
1953: Những trường hợp cuối cùng ở Canada và Mexico
1993: Italy
1997: Đài Loan (Taiwan)
2001: Anh (United Kingdom)
Vài đợt dịch khác trong những năm 1967-1968 and 1981. Dịch bệnh lởmồmlongmóng đã
xảy ra ở nhiều châu lục như châu Á, châu Phi, châu Âu và Nam Mỹ. (7)
Ở châu Âu, bệnh đã bùng phát tại Anh, Hà Lan và Pháp vào năm 2001. Hàng triệu gia súc
bị thiêu hủy gây tổn thất lớn cho ngành chănnuôi nói riêng và nền kinh tế các quốc gia này
nói chung.
Cùng năm đó, dịch cũng đã xảy ra tạ
i Hàn Quốc, Nhật Bản và Đài Loan.
4
Đến cuối năm 2003, dịch xảy ra ở vùng Đông Nam Á (Thái Lan, Lào, Campuchia,
Malaysia, Myanma, Philippines và Việt Nam. Một năm sau, dịch lan tới Trung Quốc, Nga,
Mông Cổ và tiếp tục ở Myanma.
Hình: Các đợt dịch FMD năm 2003
Trong 2 năm 2005 và 2006, dịch tràn tới Nam Mỹ ở các quốc gia như Brasil, Argentina và
Paraquay cũng như ở châu Phi (Nam Phi). (1)
Việt Nam
Năm 2006 là năm bệnh dịch lởmồmlongmóng xảy ra rất mạnh ở hầu hết các tỉnh thành
của Vi
ệt Nam với hàng chục nghìn gia sục bị nhiễm bệnh. Tuy nhiên, do điều kiện cũng
như ý thức của người dân, trình độ và sự thiếu trách nhiệm của cán bộ thú y và chính quyền
địa phương mà dịch bệnh không thể khống chế dễ dàng. Một số nơi, còn sử dụng các con
vật đã chết làm thức ăn.
2.1.2 Phân bố bệnh trên thế giới
Các type huyết thanh có sự phân bố khác nhau trên thế giới. Type huyết thanh O, A được
nhận biết ở nhiều vùng khác nhau trên thế giới. Trái lại các type huyết thanh SAT1, SAT2,
SAT3 được giới hạn ở một số nước thuộc châu Phi. Typ huyết thanh Asia 1 được tìm thấy
ở nhiều nước thuộc châu Á. Riêng type huyết thanh C chỉ còn tồn tại một vài nước như
Philippines.
5
Theo tài liệu của Cục Thú y, dòng virus gây bệnh LMLM trên gia súc ở Việt Nam thuộc
type O, gần đây có xuất hiện virus type A ở miền Trung và virus type Asia 1 ở các tỉnh
miền núi phía bắc. (5)
6
Hình: FMD type O virus từ phía Bắc Việt Nam
Tính tới ngày 1/11/2009:
Ở Tuyên Quang: Ngày 25/10/2009, dịch Lởmồm đã xảy ra trên địa bàn xã Công Đa của huyện
Yên Sơn làm 17 con trâu mắc bệnh. Kết quả xét nghiệm bệnh phẩm dương tính với chủng vi rút Lở
mồm longmóng type O. Hiện tại, địa phương đang tiến hành các biện pháp phòng, chống dịch theo
quy định.
Hiện nay, cả nước còn 10 tỉnh là: Quảng Nam, Đăk Lăk, Yên Bái, Sơn La, Hà Giang, Quảng Ninh,
Gia Lai, Hòa Bình, Lai Châu và Tuyên Quang có dịch LMLM chưa qua 21 ngày.
2.2 Giới thiệu về viruslởmồmlongmóng
2.2.1 Đặc điểm cấu trúc, hình thái
Virus lởmồmlongmóng ( Foot and Mouth Desease Virus) được phát hiện bao gồm một
sợi đơn RNA, kích thước khoảng 8500 base, được bao bọc bởi bốn protein cấu trúc (VP1,
VP2, VP3, VP4) tạo thành lớp vỏ capsid có 20 mặt (icosahedral). (1)
VP1, VP2, VP3 tạo nên một bề mặt của khối 20 mặt đối xứng (phân tử 12S) còn VP4 là
protein bên trong capside, kết dính ARN virus với mặt trong của capside.
7
Hình: Cấu trúc FMD Virus
FMD Virus thuộc họ Picorna Viridae có 7 type (O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 và Asia 1,
mỗi type còn có nhiều phụ type, thí dụ như các tiểu type O1, O2, O3 …, A1, A2, A3, C1,
C2, C3 … căn cứ vào sự khác biệt về gen và cấu trúc kháng nguyên). Các type virus phân
bố không đều nhau trên thế giới, type O là type phổ biến trên thế giới hơn cả. Các type khi
giám định huyết thanh đều không có miễn dịch chéo, và trong các ổ dịch, động vật có thể
mắc bệnh do một hoặc cùng một lúc nhiều type huyết thanh. Vì thế, nếu có sự biến đổi về
mặt di truyền dẩn đến biến đổi về mặt kháng nguyên virus ở các ổ dịch thì việc kiểm soát
bệnh bằng vaccine cũ sẽ không có hiệu quả.
Virus type A là nhóm có tính đa dạng kháng nguyên cao nhất. Type A có đến 32 type phụ.
Và hiện nay người ta vẫn chưa thống nhất được với nhau về số lượng kiểu di truyền của
virus type A khi giải trình tự gen VP1. Với virus type C việc giải trình tự gen VP1 cho
phép phân chúng thành 8 nhóm di truyền. Virus type Asia 1 có sự đa dạng di truyền ít nhất,
chỉ có 1 nhóm di truyền. Giải trình tự gen VP1, type SAT1 có 3 nhóm, SAT2 có 2 nhóm và
SAT3 có 3 nhóm di truyền phân bố theo khu vực địa lý rõ ràng.
Sự biến đổi của các type huyết thanh cũng khá phức tạp, đôi khi còn những điều chưa được
hiểu biết rõ. Do đó ngành thú y phải chọn vaccine đúng với type đang gây bệnh để tiêm
phòng.
8
(15)
Sức đề kháng của virus: Virus có sức đề kháng mạnh (8)
+ Ở 600C tồn tại 5-15 phút.
+ Ở 1000C virus chết ngay lập tức.
+ Từ 0-40C tồn tại 425 ngày.
+ Trong đất ẩm virus sống hàng năm, gặp điều kiện thuận lợi sẽ phát triển và gây bệnh.
+ Trong thịt ướp lạnh virus tồn tại khá lâu.
9
+ Trong phân ủ thành đống virus tồn tại 7 ngày.
+ Nước tiểuvirus tồn tại 39 ngày.
+ Virus FMDV không có vỏ bọc, nên chúng có sức đề kháng cao đối với các dung môi
hữu cơ ( cồn, ete…).
+ Mẫn cảm với ánh sáng mặt trời, acid, formol, …
+ Virus bền vững trong khoảng pH = 7 – 7,7. Nhanh chóng bị vô hoạt ở độ pH cao hoặc
thấp (pH <2 và pH>11). Ở pH = 6, virus mất khả năng gây nhiễm.
2.2.2 Yếu tố độc tính (1)
Function Viral factors Host factors
Adsorption and
penetration
Capsid proteins (VP1 to 3)
Integrins, other receptors (?),
entry factors (?)
Translation Lpro, IRES elements eIFs, PTBP, ITAF45
RNA replication
S region, poly(C), cre, 2B, 2C, 3A, 3B,
3Cpro, 3Dpol
Cellular membranes, PCBP,
PABP
Assembly and
maturation
Capsid proteins (VP0, VP1, and VP3),
3Cpro, 2A, viral RNA
Cellular membranes (?)
Bảng: Các yếu tố của virus và tếbào chủ có thể quyết định độc lực.
Các nghiên cứu cho thấy virus có trình tự RGD của VP1 G-H loop thì hoặc sẽ đột biến
hoặc không thể nhân lên trong nuôicấy hoặc không thể gây bệnh ở gia súc được. (11)
Các biến thể virus type O rất thích hợp với các thụ thể HS in vitro, cho thấy tầm quan trọng
của sự tương tác virus-intergrin in vivo (Integrin là họ các protein xuyên màng có trong
màng của tếbào động vật. Chức năng chính của nó là tạo liên kết với extracellular matrix
(ECM) và truyền tín hiệu giữa ECM với tế bào).
L
pro
được
cho thấy là một yếu tố quyết định độc lực virus, dựa trên cơ sở thí nghiệm trên
động vật với các kỹthuật di truyền, virus type A
12
được xoá bỏ L
pro
. Độc lực của virus yếu
hơn so với virus hoang dại (wild virus) vì thiếu L
pro
dẫn đến mất khả năng ngừng tổng hợp
protein tếbào (cellular protein).
Vai trò của protein 3A trong độc lực virus được chứng minh qua các nghiên cứu phân lập
virus FMDV đáp ứng với dịch ở Đài Loan năm 1997 (designated O/Taw/97). Đó là đợt
dịch chỉ có heo bị bệnh, gây nên tỷ lệ chết cao, ngoài ra các gia súc khác không bị ảnh
hưởng. Nghiên cứu ở mức độ phân tử đã phát hiện được virus chứa codon 10 delection (10-
codon deletion) ở nửa cuối
đầu C của protein 3A. Vị trí đó tương tự với codon 19-20
delection (19- to 20-codon deletion) tìm thấy trên FMDV chuyển trong phôi gà (FMDV
passaged
in chicken embryos). Virus này cũng làm giảm độc tính trên bò (12).
10
2.3 Đặc điểm dịch tễ học
2.3.1. Động vật cảm nhiễm (5)
Trong thiên nhiên: trâu bò mẫn cảm với bệnh nhất, rồi mới đến heo, dê, cừu, các loài dã
thú như hươu, nai, heo rừng…Loài ăn thịt và người ít nhạy cảm với bệnh, loài một móng
như ngựa, gia cầm, chim không mắc bệnh.
Ở người, theo tài liệu của Chung Văn Lẫm, 1997 Học viện kỹthuật quốc gia Bình Đông
Đài Loan, thì người ăn thịt bò mắc bệnh đã nấu chín, công nhân giết mổ gia súc mắc bệnh
lở mồmlongmóng đều không mắc bệnh. Tuy nhiên, theo tài liệu của BS Nguyễn Vĩnh
Phước, người chăm sóc gia súc bệnh lởmồmlongmóng có thể mắc bệnh do virus xâm
nhập qua vết thương ở da, đường tiêu hoá, hoặc hô hấp, thời gian nung bệnh khoảng 4-8
ngày, sau đó xuất hiện các triệu chứng: sốt, mụn nước mọc ở đầu ngón tay, bàn chân,
cánh tay và các nơi khác. Đặc biệt, mụn gây ngứa, gây triệu chứng gãi nhiều, đôi khi mụn
có thể mọc ở lợi răng, gây viêm miệng. Bệnh có thể kéo dài đến 10 ngày, sau đó sẽ hết
bệnh.
Chất chứa virus:
- Mụn nước là nơi tập trung nhiều virus nhất, đặc biệt là mụn nước sơ phát mới hình
thành.
- Trên cơ thể thú ngoài mụn nước, các chất bài tiết như nước bọt, nước tiểu, phân, sữa,
nước mắt, nước mũi cũng chưá nhiều virus. Số lượng virus trong chất thải này có thể thay
đổi tuỳ thuộc vào thời gian mắc bệnh, thường rất cao trong ngày đầu và giảm dần. Sau 2
tuần hầu như không còn thấy virus trong các chất bài tiết. Trung bình 1 con heo mắc bệnh
sẽ bài thải khoảng 4 tỉ virus mỗi ngày (gấp 3.000 lần trên bò).
- Trên thú chết hoặc bị giết mổ, virus tập trung nhiều trong máu, bắp cơ và ở các nội tạng.
Lượng virus trong bắp cơ cao hơn trong máu và có mặt đến ngày thứ 7 sau khi mắc bệnh.
2.3.2. Đường xâm nhập và cách truyền bệnh (5)
Đường xâm nhập chính là tiêu hoá, virus có thể vào cơ thể qua niêm mạc miệng, và niêm
mạc ống tiêu hoá. Ngoài ra, các vết trầy ở da, đầu vú cũng là nơi virus xâm nhập vào cơ
thể. Đường sinh dục và hô hấp được coi là đường xâm nhập phụ.
Quá trình lây lan bệnh diễn ra theo các cách thức sau:
+ Lây trực tiếp qua nước bọt hoặc các chất bài tiết do nhố
t chung hoặc chăn thả chung
gia súc bệnh với gia súc khoẻ mạnh.
[...]... 11 3.3.4 Triệu chứng bệnh 12 3.3.5 Bệnh tích 15 3.4 Chẩnđoánvirus lở mồmlongmóng .15 3.4.1 Chẩnđoánbằngkỹthuậtnuôicấytếbào 15 • Giới thiệu về kỹthuậtnuôicấytếbào 15 • Chẩnđoánvirus lở mồmlongmóng bằng kỹthuậtnuôicấytếbào 19 3.4.2 Các kỹthuậtchẩnđoán khác 20 4 KẾT LUẬN 20 5 TÀI LIỆU THAM KHẢO 21 Phần... non ruột già xuất huyết điểm, long móng, thối móng, rụng xương bàn chân Khi khỏi bệnh thì ở các vết loét sẽ để lại sẹo ở miệng 2.4 Chẩnđoánvirus lở mồmlongmóng 2.4.1 Chẩnđoánbằngkỹthuậtnuôicấytếbào a Giới thiệu về kỹthuậtnuôicấytếbàoNuôicấytếbào là là đơn vị nuôicấy nhỏ nhất, là kỹthuật duy trì và phát triển các tếbào ngoài cơ thể sống, các tếbào trong điều kiện phòng thí nghiệm... năng chuyên biệt của tếbàoNuôicấytếbàoKỹthuậtnuôicấytếbào được tiến hành lần đầu vào năm 1907 bởi Harrison với những tếbào thần kinh ếch Ngày nay, kỹthuậtnuôicấytếbào được ứng dụng rộng rãi trong các lĩnh vực thú y, nhân y, sinh học trong mục đích nghiên cứu tác động của các chất lên tếbào (dược học, độc tố học), chẩnđoán và điều trị ung thư (ung thư học), chẩnđoán các tác nhân gây... đều, hút vào lọnuôicấy đã có sẵn 4ml môi trường phát triển - Đưa lọ vào tủ ấm 37oC / 5% CO2 Thu hoạch tếbào - Dùng trypsin ở 37oC - Để bình nuôicấy vào tủ lạnh - Cho trypsin ở 37oC vào, tếbào co tròn, bong ra khỏi bề mặt nuôicấy b Chẩnđoánvirus lở mồmlongmóng bằng kỹthuậtnuôicấytếbào Chọn mẫu Lấy mẫu ở đường hô hấp, dịch họng, hay đường tiêu hoá, biểu mô nghi ngờ nhiễm virus Thời gian... không hạn định Những tếbào này sẽ được giữ lại làm những dòng tếbào giống phục vụ cho các nghiên cứu trên tếbào Các loại tếbàonuôicấy - Tếbào biểu mô (Epithelial cells) - Nguyên sợi bào (Firoblast cells) - Tếbào cơ (Muscle cells) - Tếbào thần kinh (Nerve cells) - Tếbào lympho bàoTếbào động vật có thể được bảo quản trong nitơ lỏng ở nhiệt độ -196oC, ở nhiệt độ này, tếbào có thể giữ được... xanh 2.4.2 Các kỹthuậtchẩnđoán khác - Chẩnđoánbằngkỹthuật gen - Chẩnđoánbằngkỹthuật Elisa - Phương pháp xét nghiệm miễn dịch - Phương pháp xét nghiệm trung hoà huyết thanh - Chẩnđoánbằngkỹthuật PCR, RT-PCR, … 3 KẾT LUẬN Bệnh lở mồmlongmóng là một bệnh truyền nhiễm rất nguy hiểm, lây lan nhanh trên gia súc thuộc bộ guốc chẵn Bệnh là mối nguy hại lớn đối với ngành chănnuôi gia súc trong... lại trên môi trường nuôicấytếbào khi được rã đông (3) Các loại tếbào khác nhau có khả năng phát triển khác nhau Dòng tếbào Nguồn gốc Loại tếbàonuôicấy BHK Thận chuột Hamster nhỏ Nguyên sợi bào MDCK Thận chó Tếbào biểu mô Vero Thận khỉ Nguyên sợi bào CHO Buồng trứng chuột Hamster Trung Quốc Tếbào biểu mô (Dòng tế bào: quần thể tếbào giống hệt nhau, bắt nguồn từ một tếbào ban đầu) Một số... học, virus học, vi khuẩn học), chẩnđoán biến đổi gen và sản xuất các sản phẩm sinh học như hormone, enzyme trị liệu (công nghệ gen, công nghệ sinh học) Việc nuôicấytếbào động vật đòi hỏi các điều kiện tiệt trùng nghiêm ngặt và môi trường nuôicấy phức tạp, giàu chất dinh dưỡng Các loại tếbàonuôicấy 15 Trong nuôicấytếbào động vật, người ta phân biệt hai trường hợp: tếbào bậc một hay tế bào. .. trường nuôicấytếbào Khi tếbào một lớp được tạo thành (phủ khoảng 70% là có thể nuôi cấy) , đưa mẫu bệnh phẩm vào từ từ, tránh làm bong lớp tếbào ra Thu hoạch tếbào Kết quả 19 • Để xác định virus có gây bệnh tích tếbào hay không, dùng phương pháp nhuộm tếbào (dùng kháng thể đơn dòng gắn huỳnh quang) thực hiện trực tiếp trên môi trường tếbào • Nếu có virus, khi quan sát trên kính hiển vi, do virus. .. phân biệt hai trường hợp: tếbào bậc một hay tếbào sơ cấp và tếbào bậc hai hay tếbào thứ cấp - Tếbào bậc một (Primary cells) là những tếbào thu được trực tiếp từ các cơ quan hay mô động vật - Khi nuôicấy chuyển tiếp các tếbào này trong điều kiện phòng thí nghiệm sẽ thu được tếbào bậc hai (Secondary cells), những tếbào này có thể được nuôi chuyển tiếp nhiều lần, một số trong đó có khả năng duy .
2.4.1 Chẩn đoán bằng kỹ thuật nuôi cấy tế bào
a. Giới thiệu về kỹ thuật nuôi cấy tế bào
Nuôi cấy tế bào là là đơn vị nuôi cấy nhỏ nhất, là kỹ thuật duy. trypsin ở 37
o
C vào, tế bào co tròn, bong ra khỏi bề mặt nuôi cấy.
b. Chẩn đoán virus lở mồm long móng bằng kỹ thuật nuôi cấy tế bào
Chọn mẫu
Lấy mẫu