Tiểu luận CHẨN đoán BỆNH GIA súc GIA cầm CHẨN đoán VIRUS lở mồm LONG MÓNG (FMDV) BẰNG kỹ THUẬT GENE

Oct 30 Chn oỏn bnh l mm long múng (FMD) Trng i Hc Nụng Lõm thnh ph H Chớ Minh B mụn Cụng Ngh Sinh Hc Lp DH06SH P Tiu lun: CHN ON BNH GIA SC GIA CM CHN ON VIRUS L MM LONG MểNG (FMDV) BNG K THUT GENE Nguyn Thỳy Kiu | Oct 30 Chn oỏn bnh l mm long múng (FMD) T VN Bnh l mm long múng (Foot and Mouth Disease FMD) hin ang cũn gõy thit hi kinh t quan trng nhiu ni trờn th gii, mc dự nú ó c toỏn hoc khng ch thnh cụng ti nhiu nc Bnh gõy thnh dch nhiu loi ng vt múng guc chn, ch yu l trõu, bũ v ln Bnh l mm long múng c bit n nh nn i dch ca cỏc n bũ, cu v ln ti nhiu nc t th k XIX Bnh cú khp th gii Cui th k XIX, i dch ó honh hnh hu ht chõu u, kộo di hn 10 nm khụng tt, gõy bnh cho hng chc triu bũ, cu Na u nhng nm 50 ca th k XX, li cú mt v dch mi kộo di gõy thit hi ln cho n gia sỳc nhiu nc thuc chõu u chõu v chõu Phi, bnh cng xy trm trng nh chõu u, hu ht cỏc nc ó tng cú bnh iu lm au u cỏc nh dch t hc l ti nhiu nc v khu vc, sau nhiu nm liờn tc tiờm phũng vacxin cho n gia sỳc v ỏp dng cỏc bin phỏp kim soỏt bnh nghiờm ngt, bnh tng nh ó hon ton bin mt, bng nhiờn li bựng phỏt d di in hỡnh i Loan nm 1997 t ngun dch l vi ln mc bnh trờn mt chic thuyn buụn, vũng thỏng bnh nhanh chúng lan hng ngn tri chn nuụi ln, lm suy sp nn kinh t chn nuụi, thit hi khong t USD chn oỏn l mm long múng, u tiờn cn c vo du hiu lõm sng ca bnh Tuy nhiờn iu ny cú th b nhm ln nhng bnh cú triu chng tng t trõu, bũ bnh viờm ming mn nc (vesicular stomatitis, VS) rt ging bnh l mm long múng ln, bnh mn nc ln (swine vesicular disease, SVD) v bnh mn nc ban (vesicular exanthema ũ swine, VES) khỏc cn nguyờn nhng cú triu chng ging S phỏt hin sm giai on nhim bnh v xỏc nh ỳng bnh nu cú th trc xut hin cỏc du hiu lõm sng l yu t ch yu cho s khng ch bnh hiu qu, ngn chn bnh lõy lan iu ú ũi hi phi cú phng phỏp chn oỏn nhanh, c hiu, chớnh xỏc cú th cho kt qu vũng 24g Hn na, s xỏc nh kp thi typ c hiu ca virus thuc a v c Nguyn Thỳy Kiu | Oct 30 Chn oỏn bnh l mm long múng (FMD) tớnh phõn t ca nú l rt cn thit thc hin tiờm phũng khn cp vi khỏng nguyờn tng ng v ỏnh du ngun gc dch Vỡ th chn oỏn bng k thut gene l phng phỏp ang c nghiờn cu v ỏp dng phỏt hin kp thi a nhng gii phỏp x lý hiu qu I TNG QUAN 1.1 FMD (foot and mouth disease) L mm long múng (FMD) l bnh truyn nhim cp tớnh nguy him virus gõy õy l bnh c t chc dch t th gii (Office International des Epizooties _ OIE) xp vo hng u danh mc A gm 15 bnh truyn nhim nguy him cho cỏc loi múng guc chn: trõu, bũ, dờ, cu, heo (Cc thỳ y, 1993) Nm 2001, mt v dch khỏc xy sau hn 20 nm vng búng ti nc Anh, cng gõy thit hi cho ngnh chn nuụi v du lch khong t USD nc ta bnh u tiờn c phỏt hin Nha Trang (1898) sau ú lang c ba Nm 1995 cú 26 tnh, thnh cú bnh vi hng ngn dch (19.883 trõu, bũ v 10.293 heo bnh, cht 384 trõu bũ, 5208 heo _ cc thỳ y Vit Nam) ó gõy tỏc hi ln n nn kinh t cho cỏc tri chn nuụi (gim 25% sc sn xut) v nn kinh t nc ta Vit Nam l nc vựng Chõu c bỏo cỏo trờn bn dch t bnh l mm long múng th gii l vựng dch a phng (endemic) (Gleeson, 2002) Dch l mm long múng ó xy trờn trõu bũ liờn tc sut thi gian t 1975-2005, trờn ln 1992-2005 v gõy thit hi nng n nht vo cỏc nm 1993, 1995, 1999, 2000 Ngoi typ O lu hnh nhiu nm qua, typ A cng ó c phỏt hin nm 2004 trờn trõu bũ v Nguyn Thỳy Kiu | Oct 30 Chn oỏn bnh l mm long múng (FMD) typ Asia trờn ln nm 2005 Vit Nam FMD l mt bnh a phng v cỏc type huyt ph bin l O, Asia v A Cỏc typ huyt cú s phõn b khỏc trờn th gii Typ huyt O, A c nhn bit nhiu vựng khỏc trờn th gii Trỏi li cỏc type huyt SAT1, SAT2, SAT3 c gii hn mt s nc thuc chõu Phi Typ huyt Asia c tỡm thy nhiu nc thuc chõu Riờng typ huyt C ch cũn tn ti mt vi nc nh Philippine Trong cỏc dch, ng vt cú th mc bnh mt hoc cựng mt lỳc nhiu typ huyt S bin i ca cỏc typ huyt cng khỏ phc tp, ụi cũn nhng iu cha c hiu bit rừ Cỏc chng virus l mm long múng bin i rt nhiu v s phõn b rng rói, phc ca chỳng nờn thng gp rt nhiu khú khn vic xỏc nh ngun gc lõy lan ca chỳng Ch riờng typ O ngi ta ó cỏc nh c nhúm vi kiu di truyn sai khỏc t 15% tr lờn so sỏnh trỡnh t gene VP1 Virus l mm long múng typ A l nhúm cú tớnh a dng khỏng nguyờn cao nht, typ A cú n 32 subtype V hin ngi ta cng cha thng nht c vi v s lng kiu di truyn ca virus typ A gii trỡnh t gene VP1 Vi virus typ C vic gii trỡnh t gene VP1 cho phộp phõn chỳng thnh nhúm di truyn Typ virus Asia cú s a dng di truyn ớt nht, chỳng ch cú nhúm di truyn Theo kt qu gii trỡnh t gene VP1 cỏc typ SAT1 cú nhúm, SAT2 cú nhúm, SAT3 cú nhúm di truyn v phõn b theo khu vc a lý rừ rng Vit Nam ó xỏc nh cú typ O, A, v Asia trõu, bũ v typ A, O heo Triu chng bnh tớch Triu chng 1.2 trõu bũ v ln hoc cỏc loi vt khỏc, bnh cú chung c im l st t ngt 2-3 ngy, viờm dng mn nc ri l loột ming, vỳ, vựng múng chõn, nc bt chy nhiu nh Nguyn Thỳy Kiu | Oct 30 Chn oỏn bnh l mm long múng (FMD) bt bia Niờm mc ming, mụi, li, chõn rng ng, khụ, núng Mn nc bt u mc bờn mỏ, mộp, chõn rng, mụi, li, v b mt li Kớch thc mn bng ht go, ht ngụ hoc to hn Mn nc phng lờn, cú mng bc mng, bờn cha nc trong, sau c dn Sau 1-2 ngy, mn nc b v, lp niờm mc trúc l mt di , chm nh vo d chy mỏu Mn nc thng khụng cú m Do viờm vựng ming, vt cú chu, luụn lỳc lc u, nhai túp tộp, nc bt sựi y mừm ming, chy lũng thũng thnh si di Do cú viờm mn nc vựng vnh múng, k múng chõn lm vt khú chu, t au n, bn chn, luụn nhc chõn lờn D thy nht l hin tng quố, khụng i cy kộo c khong 1-2 tun Cú trng hp múng chõn b long hn ra, ph bin nht l ln Triu chng quố c n trõu bũ gõy nh hng xu i vi vựng da vo sc kộo ca chỳng, lm l thi v gieo trng, cú ni nng sut lỳa b gim 20% vt cỏi ang nuụi con, triu chng v bnh tớch bu vỳ, nỳm vỳ cng tng t nh ming v chõn lm vt gim tit sa, sa b gim phm cht Con m thng khụng cho bỳ vỡ au, lm non thiu sa Hn na chớnh non cng b viờm l mm nh m nờn khụng bỳ c Hu qu cú ti 50-80% gia sỳc non b cht vt trng thnh, t l mc bnh n cú serotyp u gõy bnh ging Sỳc vt cỏi mang thai nhim virus l mm long múng s sy thai Bin chng: Viờn c tim sỳc vt non v viờm rut (bờ non, ln [...]... serotype virus O, A, C trong bệnh phẩm Phản ứng nhanh chỉ trong 12 giờ, đơn giản giúp khẳng định hoặc loại trừ nghi ngờ bệnh lở mồm long móng (FMD) Phản ứng này cũng đã được hoàn thiện và nếu sử dụng thành thục sẽ là một phương pháp hữu hiệu để chẩn đoán phân biệt giữa virus lở mồm long móng và các virus gây viêm mụn nước khác ™ Trung hòa virus: phát hiện qua xét nghiệm mẫu bằng phản ứng trung hòa virus. .. Kiều | Oct 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) diệt virus sau 10 phút, Formol 2% - 6 giờ Virus trong không khí còn sống tốt nhất ở ẩm độ tương đối RH > 60% 2.2 Các phương pháp chẩn đoán Các kỹ thuật phân tích khác nhau đã được sử dụng để phát hiện acid nucleic của virus, kháng nguyên và sự đáp ứng miễn dịch của vật chủ gồm: kết hợp bổ thể (complement fixation test_CFT), trung hòa virus (virus neutralization),... móng chân Kỹ thuật RTPCR cho phép phát hiện bệnh ngay trong giai đoạn đầu tiên" Nguyễn Thúy Kiều | Oct 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Sở dĩ RT- PCR nhận biết được bệnh nhanh như vậy vì nhờ việc kết hợp PCR với cặp mồi 1F/1R khả năng xác định các type O, A, C và ASIA- 1 gây bệnh của virus lở mồm long móng diễn ra rất nhanh Theo TS Tô Long Thành, khi tiến hành dùng RT- PCR nhất thiết phải làm... ELISA (kỹ thuật này độ nhạy còn kém và chi phí khá cao) Áp dụng kỹ thuật RT- PCR vào chẩn đoán thời gian đã được rút ngắn xuống còn 4-5 giờ với độ chính xác cao, an toàn TS Tô Long Thành cho biết: "Bình thường để biết con vật có mắc bệnh hay không, chúng ta phải đợi đến khi chúng phát bệnh ra ngoài với các hiện tượng chảy nước bọt ở mồm, mũi hay nứt toác móng chân Kỹ thuật RTPCR cho phép phát hiện bệnh. .. dùng kỹ thuật PCR để xác định chính xác sự hiện diện của FMDV Dùng kỹ thuật PCR không cần phân lập virus trong môi trường nuôi cấy tế bào Vì thế PCR sẽ tốn ít thời gian để phát hiện hơn so với phương pháp nuôi cấy tế bào PCR còn được coi là phương pháp có độ nhạy và độ đặc hiệu cao Thông thường thời gian chẩn đoán bệnh phải mất trên 10 giờ đồng hồ đối với kỹ thuật soi bằng mắt, 5- 6 giờ đối với kỹ thuật. .. 0 giây, và sau cùng ủ ở 72 C trong 7 phút Nguyễn Thúy Kiều | Oct 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Hình: Sản phẩm PCR từ sự khuếch đại của FMDV từ những động vật được lây nhiễm khi sử dụng cặp mồi A/B Lane M: DNA size maker Nguyễn Thúy Kiều | Oct 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) Hình: Giới hạn phát hiện RNA của FMDV bằng RT-PCR với primer A/B 2 –3 (A) Dãy pha loãng của RNA được li trích... serotype của virus, thay thế phương pháp kết hợp bổ thể Có thể đây là 1 kỹ thuật huyết thanh học nhạy nhất với mục đích chẩn đoán và xác định typ Cả hai phương pháp trung hòa virus và ELISA cạnh tranh trong pha lỏng đều phát hiện kháng thể kháng protein cấu trúc, protein vỏ của virus nhưng không phân biệt được đó là kháng thể của động vật đã tiêm vacxin hay do nhiễm virus Virus lở mồm long móng (FMDV) khi... kết luận con vật bị nhiễm virus lở mồm long móng (FMDV) chứ không phải do vacxin Một số protein không cấu trúc của virus gây đáp ứng miễn dịch: 3D, 3A/3AB/3ABC, 2C, pro 2B, 3C và L Trong thời gian gần đây một số protein không cấu trúc 2C, 3B, 3AB, 3ABC đã được nghiên cứu và nhiều phương pháp có độ nhạy cao đã được phát triển ™ RT_PCR: để xác định gia súc nhiễm bệnh đồng thời xác định typ virus gây bệnh. .. kháng nguyên và kháng thể virus trong vòng 3-4 giờ, không phụ thuộc môi trường mô, đặc hiệu nhanh, ít (+) tính giả Hiện bộ kit chẩn đoán đang được sử dụng tại Việt Nam gồm bộ kháng thể chuẩn để phát hiện 4 Nguyễn Thúy Kiều | Oct 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) serotyp kháng nguyên O, A, C, Asia 1, và bộ kháng nguyên chuẩn để chẩn đoán 3 serotyp O, A, C Phương pháp này chẩn đoán nhanh, đặc hiệu... mại Nguyễn Thúy Kiều | Oct 30 Chẩn đoán bệnh lở mồm long móng (FMD) BI KẾT LUẬN Chẩn đoán FMD sớm và chính xác là công cụ cần thiết để kiểm soát dịch bệnh Chiến lược mớ i dự a vào RT-PCR đang đượ c áp dụng để phát triển phương pháp kiểm tra nhanh và nh ạy cho FMDV Thử thách chính của phương pháp này là phải thiết kế các primer thích hợp cho chẩn đoán đa dạng di truy ền của virus Vì thế đòi hỏi phải sử