TIỂU LUẬN CÔNG NGHỆ SINH HỌC:TEST KIT

TEST KIT NHẬP MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC Đề tài: TEST KIT TEST KIT MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU BÀI BÁO CÁO LỊCH SỬ HÌNH THÀNH “TEST KIT” KHÁI NIỆM VÀ PHÂN LOẠI “TEST KIT” 4.1 Khái niệm 4.2 Phân loại 4.2.1 Test kit y tế 4.2.2 Test kit sinh học 4.2.3 Test kit môi trường .9 PHƯƠNG PHÁP 10 5.1 Chẩn đoán phân tử (Molecular diagnostics) 10 5.1.1 Thu thập mẫu 10 5.1.2 Tách DNA 10 5.1.3 Nhân DNA đặc hiệu 10 5.1.4 Điện di 11 5.1.5 Phân tích kết 11 5.2 Chẩn đoán miễn dịch (Immunodiagnostics – immunoassays) 12 5.2.1 Miễn dịch phóng xạ (radio immunoassays) 13 5.2.2 Miễn dịch huỳnh quang (immunofluorescence assays) 13 5.2.3 Miễn dịch enzyme (immunoenzyme assays) 14 ỨNG DỤNG SẮC KÝ MIỄN DỊCH TRONG CHẾ TẠO KIT HIV 1/2 23 6.1 Mục đích sử dụng 23 6.2 Tổng quan Kit HIV ½ 23 6.3 Nguyên lý hoạt động 24 6.4 Thành phần, vật tư kèm, đặc tính 25 6.5 Hướng dẫn sử dụng Kit HIV ½ 27 6.6 Hạn sử dụng cách bảo quản kit HIV ½ 28 6.7 Hạn chế sử dụng kit HIV ½ 29 TỔNG KẾT 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO ………………………………………………………………… ………32 TEST KIT ĐẶT VẤN ĐỀ Theo báo cáo c hiệp hội EDMA thống kê thị trường IVD năm 2011 0,8 tỷ Euro, trước bối cảnh kinh tế thị trường IVD cho thấy tiềm tích cực trước thị trường cạnh tranh khác giới TEST KIT Trước trỗi dậy suy thoái kinh tế, số phương pháp đưa để mang lại nhiều lợi ích kinh tế lẫn sức khỏe Các phương pháp góp phần tích cực đến việc rút ngắn giai đoạn kiểm tra đồng thời tăng độ xác, từ lý nhóm chọn đề tài “Test Kit” làm đề tài báo cáo MỤC TIÊU BÀI BÁO CÁO Tìm hiểu lịch sử trình hình thành “Test Kit”, loại Kit thử thị trường chế, nguyên lý hoạt động Cuối nhóm muốn giới thiệu Kit thử HIV vừa Mỹ chế tạo thành công tung thị trường vào ngày 3-7-2012 vừa qua TEST KIT LỊCH SỬ HÌNH THÀNH “TEST KIT” Chúng xin giới thiệu thử thai, loại “Test Kit” đời sớm phục vụ cho vấn đề sức khỏe: Năm 1350: Một văn thử nghiệm thai mẫu thử nước tiểu tìm thấy tài liệu Ai Cập cổ đại Trong cuộn giấy cói tìm thấy mô tả lại thử nghiệm, cho thấy nhận biết người phụ nữ có mang thai hay không cách cho người phụ nữ tiểu lên hạt giống lúa mì lúa mạch vài ngày: "Nếu hạt lúa mạch phát triển, có nghĩa thai nhi bé trai Nếu lúa mì phát triển, có nghĩa thai nhi bé gái” Trong văn năm 155: Nước tiểu người mẹ mang thai mô tả sau: "chanh nhạt màu sắc rõ ràng nghiêng phía trắng, có đám mây bề mặt nó" Các xét nghiệm khác bao gồm rượu pha trộn với nước tiểu quan sát kết Thật vậy, rượu phản ứng với số protein nước tiểu Năm 1920: Các nhà khoa học nhận có loại hormone cụ thể (bây gọi hCG) tìm thấy người phụ nữ mang thai TEST KIT Năm 1927: Aschheim Zondek làm thử nghiệm (được gọi thử nghiệm A-Z) xác định diện hCG nước tiểu Để kiểm tra thai kỳ, nước tiểu người phụ nữ tiêm vào chuột chuột chưa trưởng thành Nếu đối tượng không mang thai, phản ứng Trong trường hợp có thai, chuột hiển thị phản ứng động dục (tăng nhiệt độ thể) Thử nghiệm ngụ ý thời gian mang thai có gia tăng sản xuất hormone Trong nghiên cứu ban đầu kiểm tra A-Z, nhà khoa học phát khối u tinh hoàn sản xuất hCG Năm 1930-1940: Các nhà khoa học xác định hCG cách tiêm mẫu để gây rụng trứng thỏ, ếch, cóc, chuột Các xét nghiệm tốn kém, đòi hỏi hy sinh số loài động vật, tốn thời gian lâu để có kết Các xét nghiệm không nhạy cảm đo hàm lượng hormone để chẩn đoán thai giống hCG chất khác luteinizing hormone (LH) Herbert Evans phát TEST KIT tiêm chất lỏng định vào tuyến sinh dục chuột hình thành thể vàng lớn bất thường Những chất lỏng kích thích tố gọi gonadotropins, kiểm tra xét nghiệm miễn dịch xét nghiệm sinh học Các thử nghiệm sử dụng hCG tinh khiết, hỗn hợp với mẫu nước tiểu kháng thể trực tiếp chống lại hCG Trong thử nghiệm dương tính, tế bào màu đỏ kết tụ, hiển thị mô hình cụ thể Thử nghiệm nhanh rẻ so với xét nghiệm sinh học cũ, tương đối không nhạy cảm, đặc biệt chẩn đoán thời gian đầu thai kỳ Các thử nghiệm qua phản ứng với loại thuốc khác Năm 1970-1977: Bắt đầu từ năm 1970, việc chăm sóc sức khỏe xét nghiệm tiền sản trở thành thường xuyên hệ thống chăm sóc sức khỏe Mỹ Các xét nghiệm thực sớm sau bốn ngày người phụ nữ bị kinh nguyệt Các nhà khoa học NIH nghiên cứu nhiều tính chất hCG Họ đặc biệt quan tâm, phận nội tiết tố cho thấy hoạt tính sinh học Sử dụng phương pháp khác nhau, họ xác định hai tiểu đơn vị hCG tập trung tiểu đơn vị beta, tận dụng phát này, họ phát triển kháng thể kháng huyết thể người Trong sách giáo khoa năm 1972t rên gonadotropins, Vaitukaitis Ross mô tả miễn dịch phóng xạ tiểu đơn vị beta-hCG mà TEST KIT cuối phân biết hCG LH, làm cho có khả hữu ích thử nghiệm cho việc mang thai Đến cuối năm 1977, que thử thai chế tạo thành công tung thị trường Hoa Kỳ KHÁI NIỆM VÀ PHÂN LOẠI “TEST KIT” 4.1 Khái niệm Là dụng cụ dùng để đo, chẩn đoán, kiểm tra, xét nghiệm, phát bệnh học, vi sinh vật nồng độ chất mẫu phẩm môi trường,…Thay phải thực hàng loạt phản ứng sinh hóa, lý hóa phức tạp tốn hàng loạt thử đời để khắc phục nhược điểm với độ xác không thua quy trình kiểm tra truyền thống phức tạp Test Kit minh chứng cho tiến cho khoa học, góp phần không nhỏ vào công đẩy mạnh tiến độ khoa học giảm thiểu gánh nặng cho nhiều lĩnh vực nghiên cứu ứng dụng sống 4.2 Phân loại 4.2.1 Test kit y tế a/ Trong lĩnh vực xét nghiệm: - Viêm gan - HIV - Tiểu đường - Cholesterol - Máu - Ung thư - Dị ứng thực phẩm b/ Kiểm tra: - Nồng độ cồn máu Hình 1.1 Bộ kiểm tra đường huyết TEST KIT - Cocaine - Ma túy - Khả sinh sản, mang thai 4.2.2 Test kit sinh học a/ Kiểm nghiệm thực phẩm: - Khả gây dị ứng - Độc tố thực phẩm b/ Di tryền phân tử: - Xét nghiệm AND - Phân tích đột biến - Nhận biết enzim 4.2.3 Hình 1.2 Bộ kiểm tra hàn the Test kit môi trường a/ Môi trường nước: - Bộ thuốc thử độ kiềm - Bộ thuốc thử clorua - Bộ thuốc thử độ acid - Bộ thuốc thử carbon dioxit - Bộ thuốc thử amoniac nước - Bộ tuốc thử độ cứng, thử photphat,… Hình 1.3 Bộ đo PH nước TEST KIT b/ Môi trường đất: - Bộ thử kiểm soát ăn mòn - Xác định độ dẫn điện hay pH đât c/ Môi trường khí: - Test kit phát khí gas - Test kit phát CO2 nước PHƯƠNG PHÁP 5.1 Chẩn đoán phân tử (Molecular diagnostics) 5.1.1 Thu thập mẫu ADN tách chiết từ mẫu khác nhau: máu tươi, máu khô, tế bào niêm mạc, nước xúc miệng, nước ối Mẫu lấy chỗ gửi từ xa hàng nghìn kilômet, phong bì bình thường, qua bưu điện, không cần bảo quản lạnh 5.1.2 Tách chiết DNA Nhiều quy trình tách chiết ADN giới thử nghiệm thích ứng với điều kiện nước ta Góp phần giảm giá thành, đ ảm bảo chất lượng số lượng ADN từ lượng mẫu nhỏ 5.1.3 Nhân DNA đặc hiệu Các hỗn hợp hoá chất khác chu trình nhiệt thử nghiệm cho cặp mồi, nhiều cặp mồi Do tối ưu hoá thành phần hỗn hợp, chu trình nhiệt 10 TEST KIT Nhược điểm: Độ đặc hiệu huyết khác Điều dẫn đến kết khác thí nghiệm cần phải thử nghiệm với nhiều kháng huyết khác để kết tin tưởng Sandwich ELISA Đây dạng ELISA sử dụng phổ biến thực tiễn cho phản ứng mạnh nhạy Được gọi “sandwich” kết thí nghiệm đánh giá thông qua kết hợp hai loại kháng thể kháng thể bắt (capture antibodies) kháng thể phát (detection antibodies) Kỹ thuật phân làm hai dạng Direct sandwich ELISA (DAS-ELISA - Double antibody sandwich) Indirect sandwich ELISA (TAS-ELISA – Triple antibody sandwich) DAS ELISA gồm dính thụ động kháng thể vào pha rắn (đáy giếng) Những kháng thể sau kết hợp với kháng nguyên thêm vào Những kháng nguyên pha loãng blocking buffer nhằm ngăn dính không chuyên biệt chúng vào pha rắn Ở đây, phần blocking buffer không nên chứa kháng nguyên mà kết hợp với kháng thể bắt Sau ủ rửa, phức hợp kháng nguyên - kháng thể dính vào pha rắn Kháng thể bắt sau thêm vào Do vậy, kết hợp trực tiếp với kháng nguyên đích kháng thể bắt Kháng thể thứ hai giống kháng thể khác nguồn động vật hay loài động vật sản xuất kháng thể Sau ủ, rửa, thêm chất vào đọc máy đo quang phổ Vì sử dụng kháng thể gắn kết với enzyme nên hệ thống bị giới hạn tính chuyên biệt thành phần gắn liền với kháng thể chuyên biệt Điều giới hạn linh hoạt phương pháp, ví dụ kháng thể sử dụng phải đánh dấu riêng (cho kháng nguyên khác nhau) Theo cách này, direct ELISA bị giới hạn chuẩn bị kháng thể Hệ thống bị giới hạn chỗ kháng nguyên phải có hai epitope hai kháng thể bắt phát kết hợp trực tiếp với kháng nguyên 18 TEST KIT Kháng thể bắt pha rắn kháng thể phát chống lại epitope khác phức hợp kháng nguyên Do đó, thuận lợi khảo sát khác biệt nhỏ kháng nguyên sử dụng kháng thể phát kháng thể bắt khác Việc sử dụng kháng thể bắt phát dẫn đến vấn đề có giới hạn vị trí gắn kết sẵn có cho phát Kích thước mối quan hệ không gian epitope kháng nguyên đích quan trọng ảnh hưởng mạnh đến thử nghiệm Sandwich ELISA chia làm hai hệ thống:  Sandwich ELISA trực tiếp Hình 2.2 Tiến trình thực ELISA Sandwich trực tiếp Ưu điểm: Có thể phát khác biệt nhỏ kháng nguyên sử dụng kháng thể bắt kháng thể phát khác Vì phương pháp có ưu điểm hẳn phương pháp khác mà chọn phương pháp để chẩn đoán bệnh virus nghiên cứu 19 TEST KIT Chú ý:nếu sử dụng kháng thể bắt kháng thể phát giống dẫn đến vấn đề có giới hạn vị trí kết hợp sẵn có để phát Mối quan hệ kích thước vị trí không gian epitope có ảnh hưởng đến thử nghiệm  Sandwich ELISA gián tiếp Hình 2.3 Tiến trình thực phản ứng ELISA Sandwich gián tiếp Chuyên biệt Direct sanwich ELISA antispecies kháng thể gắn enzyme không phản ứng với kháng thể bắt kháng nguyên Direct C-Elisa: Kiểm tra kháng nguyên Trong hệ thống trực tiếp, lượng kháng nguyên bề mặt đĩa lượng kháng thể gắn enzyme chuẩn độ để tối ưu Kháng nguyên kháng thể gắn enzyme thêm vào đĩa lúc để tạo ưu cạnh tranh Nếu kháng nguyên tương tự kháng nguyên gắn đĩa kháng thể gắn enzyme gắn lên kháng nguyên Khi nồng độ kháng 20 TEST KIT nguyên cạnh tranh cao ngăn cản kết hợp kháng thể gắn enzyme với kháng nguyên bề mặt đĩa (cạnh tranh 100%) Nếu nồng độ kháng nguyên cạnh tranh giảm (ví dụ : pha loãng) cạnh tranh giảm Như nồng độ kháng nguyên cạnh tranh cao độ hấp thu màu giảm Kháng nguyên cạnh tranh thêm trực tiếp vào đĩa pha loãng blocking buffer trước thêm kháng thể gắn enzyme Mức độ cạnh tranh theo thời gian phụ thuộc vào mối tương quan nồng độ phân tử cần kiểm tra kháng nguyên bề mặt đĩa (và mức độ tương đồng kháng nguyên) Sau ủ rửa, lượng kháng thể đánh dấu định lượng sau thêm chất kháng nguyên mẫu kiểm tra hay tương đồng kháng nguyên gắn kết với kháng nguyên đánh dấu cạnh tranh với kháng nguyên Kết mẫu có chứa kháng nguyên cạnh tranh làm giảm cường độ màu đối chứng âm không Hình 2.4 Direct C-ELISA kiểm tra kháng nguyên 21 TEST KIT Direct C-Elisa: Kiểm tra kháng thể Direct C-ELISA kiểm tra kháng thể tương tự với Direct C-ELISA kiểm tra kháng thể Sự cạnh tranh kháng thể mẫu kháng thể đánh với vị trí kháng nguyên đĩa Mẫu kháng thể đánh dấu trộn với trước thêm vào đĩa Hình 2.5 Direct C-ELISA kiểm tra kháng thể d/ Chuẩn đoán miễn dịch nhanh bằn sắc ký miễn dịch (immunochromatography) Phức hợp kháng kháng thể (KKT) gắn chất màu phân bố giấy sắc ký K háng nguyên ( KN) đặc t hù vi si nh vật gắncố định “vạc h phản ứ ng” K hi nhỏ huyết c ần xác định kháng thể ( K T)lên sắc ký, KT đặc hiệu (nếu có) huyết kết hợp với KKT gắn màu, phức hợp miễn dịch KT-KKT gắn màu di chuyển giấy sắc ký bị gi ữ lại 22 TEST KIT “vạch phản ứng” K T kết hợp với KN vi sinh vật , kết “vạch p h ản ứ n g” hi ệ n m u Nế u t r o n g hu yế t t h a n h khô ng c ó K T đ ặc hi ệ u , “vạc h phản ứng” KN giữ KKT gắn màu, không màu Hình 2.6 Nguyên tắc thực sắc ký miễn dịch ỨNG DỤNG SẮC KÝ MIỄN DỊCH TRONG CHẾ TẠO KIT HIV 1/2 6.1 Mục đích sử dụng Kit thử chẩn đoán HIV1/2 dụng cụ xét nghiệm sắc ký miễn dịch định tính phát có mặt kháng thể kháng vi rút HIV típ ho ặc típ máu toàn phần, huyết huyết tương 6.2 Tổng quan Kit HIV ½ HIV tác nhân gây nên bệnh AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome) Vi rút bao quanh vỏ bọc lipid tạo thành từ màng tể bào chủ Các glycoprotein c vi rút lớp v ỏ Mỗi virút chứa gen dương tính RNAs HIV1 lấy từ bệnh nhân bị AIDS có liên 23 TEST KIT quan đến AIDS, từ người cò khoẻ mạnh có nguy cao tiến triển thành AIDS HIV2 lấy từ bệnh nhân AIDS Tây Phi từ người có máu dương tính triệu chứng lâm sàng Cả hai HIV1 HIV2 gây phản ứng miễn dịch (immune response) Việc phát kháng thể kháng HIV huyết thanh, huyết tương hay máu toàn phần cách thông thường hiệu để xác định xem bệnh nhân có bị nhiễm HIV hay không, để kiểm soát máu sản phẩm từ máu HIV Không kể tới khác đặc tính sinh học, hoạt tính huyết học chuỗi gen, HIV1 HIV2 thể phản ứng chéo kháng thể mạnh mẽ Đa số huyết HIV2 dương tính phát theo phuơ ng pháp xét nghiệm huyết học HIV1 Kit thử chẩn n HIV1/2 xét nghiệm nhanh định tính phát sựcó mặt kháng thể kháng vi rút HIV típ típ mẫu máutoàn phần, huyết than huyết tương Xét nghiệm sử dụng cộnghợp màu protein tái tổ hợp để xác định cách chọn lọc cáckháng thể kháng HIV 1/2 máu, huyết huyết tương 6.3 Nguyên lý hoạt động Kit thử chẩn đoán HIV1/2 xét nghiệm miễn dịch định tính sở sử dụng lớp màng thấm nhằm phát kháng thể kháng HIV ½ máu toàn phần, huyết huyết tương Lớp màng kit thử phủ kháng nguyên HIV tái tổ hợp Trongquá trình làm xét nghiệm, mẫu máu toàn phần, huyết huyếttương phản ứng với phần tử mang theo kháng nguyên HIV trênque thử Hỗn hợp tạo thành thấm theo màng di chuyển hướng lên nhờcác mao dẫn, gặp phản ứng kết tủa màu với kháng nguyên táitổ hợp màng Vùng kết Nếu mẫu có chứa kháng thể khángHIV1 HIV2, vạch màu xuất Vùng kết cho kết quảdương tính Nếu mẫu không chứa kháng thể kháng HIV1 HIV2,vạch màu không xuất vùng kết cho kết âm tính Nhằm mục đích kiểm tra quy trình thao tác 24 TEST KIT xét nghiệm, vạch màuluôn xuất vùng chứng (gọi vạch chứng) để thông báo lượng mẫu đủ lớp màng thấm tốt 6.4 Thành phần, vật tư kèm, đặc tính 6.4.1 Thành phần - Recombinant HIV1/2 antigen - Biotin-BSA - SA-IgG 6.4.2 Vật tư kèm - Các kit thử - Các ống nhỏ mẫu dùng lần - Dung dịch đệm - Các phụ kiện khác - Hướng dẫn sử dụng Hình 2.7 Bộ kit HIV 1/2 6.4.3 Đặc tính a/ Độ nhạy Kit thử chẩn đoán HIV1/2 kiểm tra với dàn mẫu thử với nồng độ kháng thể kháng HIV thấp (Boston Biomedica, Inc.) Kit thử so sánh kiểm chứng với loại kit thử hàng đầu EIA HIV mẫu lâm sàng Kết cho thấy kit thử chẩn đoán HIV1/2 nhạy với kháng thể kháng HIV típ típ b/ Độ đặc hiệu Độ đặc hiệu kit thử chẩn đoán HIV1/2 sánh với kit thử hàng đầu khác HIV EIA Độ nhạy tương quan: 99.9% Độ đặc hiệu tương quan: 99.6% 25 TEST KIT c/ Độ xác Độ xác ngẫu nhiên (Intra-assay) Độ xác lô sản xuất (within-run) xác định cách sử dụng dàn mẫu thử với mẫu: Âm tính, dương tính yếu dương tính cao (mỗi nồng độ có 15 mẫu thử) Các kết âm tính, dương tính yếu dương cao chiếm 99.5% d/ Độ xác ngẫu nhiên lặp (Inter-assay) Độ xác lô sản xuất (between-run) xác định cách sử dụng dàn mẫu thử với mẫu: Âm tính, dương tính yếu dương tính cao (mỗi nồng độ có 15 mẫu thử) thực lô sản xuất khác vòng tháng Các xét nghiệm cho kết chiếm 99.5% Bảng so sánh kết với Kit chuẩn EIA Phương pháp EIA Tổng cộng kết Kit thử chẩn đoán HIV1/2 Kết Kit thử chẩn ACON Tổng cộng kết 554 558 1159 1159 554 1163 1717 Dương tính Kit thử chẩn đoán HIV1/2 Âm tính tính ACON đoán HIV1/2 Dương Âm tính ACON Tổng cộng kết 26 TEST KIT 6.5 Hướng dẫn sử dụng Kit HIV ½ Lấy kit thử khỏi túi kín đựng sản phẩm sử dụng kit thử nhanh tốt Kết tốt đạt xét nghiệm tiến hành vòng sau mở túi đựng sản phẩm Đặt kit thử mặt phẳng nằm ngang Đối với mẫu huyết thanh, huyết tương máu toàn phần lấy từ tĩnh mạch: Giữ ống nhỏ giọt theo phương thẳng đứng truyền giọt mẫu huyết thanh, huyết tương máu toàn phần lấy từ tĩnh mạch (khoảng 25 µl) vào “Vùng nhỏ mẫu” (S) kit thử, tiếp tục nhỏ thêm giọt dung dịch đệm (khoảng 40 µl) bắt đầu tính thời gian Đối với mẫu máu toàn phần lấy từ đầu ngón tay: Sử dụng ống mao dẫn: Lấy đầy ống mao dẫn truyền khoảng 25 µl mẫu máu toàn phần lấy từ đầu ngón tay vào “Vùng nhỏ mẫu” kit thử, tiếp tục nhỏ thêm giọt dung dịch đệm (khoảng 40 µl) bắt đầu tính thời gian Nhỏ trực tiếp: Để giọt máu toàn phần lấy từ đầu ngón tay (khoảng 25 µl) rơi vào “Vùng nhỏ mẫu” kit thử, tiếp tục nhỏ thêm giọt dung dịch đệm (khoảng 40 µl) bắt đầu tính thời gian Chờ đến vạch đỏ xuất kit thử Đọc kết vòng 15 phút Không sử dụng kết 20 phút Hình 2.8 Cách đọc kết kit HIV 1/2 27 TEST KIT Hình 2.9 Quy trình kiểm tra HIV kit HIV ½ 6.6 Hạn sử dụng cách bảo quản kit HIV ½ Thời hạn sử dụng kit thử 24 tháng kể từ ngày sản xuất bảo quản quy định túi nhôm kín có chất chống ẩm Kit thử bảo quản nhiệt độ phòng làm lạnh (2-30°C) Kit thử giữ tính ổn định ngày hết hạn sử dụng in túi đựng sản phẩm Kit thử phải bảo quản túi hàn kín lấy sử dụng Không đượclàm đông băng sản phẩm 28 TEST KIT 6.7 Hạn chế sử dụng kit HIV ½ o Kit thử chẩn đoán HIV1/2 sử dụng cho mục đích chẩn đoánbệnh Kit thử dùng để phát kháng thể kháng HIV mẫumáu toàn phần, huyết huyết tương, vậy, kit thử sử dụng để xét nghiệm định lượng giá trị tốc độ tăng lên nồng độ kháng thể kháng HIV o Kit thử chẩn đoán HIV1/2 phát có mặt kháng thể kháng HIV mẫu phẩm không sử dụng phương pháp để chẩn đoán nhiễm vi rút HIV típ típ o Để khẳng định kết xét nghiệm, bắt buộc phải xét nghiệm mẫu máu tiếp phương pháp ELISA phân tích WESTERN BLOT o Cũng tất xét nghiệm chẩn đoán bệnh, Cần phải tư vấn với bác sỹ tất kết xét nghiệm với triệu chứng lâm sàng khác o Nếu kết xét nghiệm âm tính mà triệu chứng lâm sàng còn, cần phải làm thêm xét nghiệm phương pháp khác Vì vậy, kết xét nghiệm âm tính loại trừ khả bị lây nhiễm vi rút HIV típ típ Hình 3.1 Một số loại Kit HIV có thị trường Mỹ 29 TEST KIT 30 TEST KIT TỔNG KẾT Test kit ban đầu đời để đáp ứng nhu cầu cho cá nhân tổ chức nhằm mục đích đẩy nhanh tiến độ công việc, nhiên với nhiều tiến vượt trội khoa học mà thực tế góp phần rút ngắn thời gian, lợi nhuận kinh tế mang lại độ xác tương đối cao, đời Test kit mang công nghệ đến gần với người tiêu dùng tầng lớp xã hội chi phí thấp mức độ tiện lợi, dễ sử dụng,….Chính lý mà thị trường IVD giới năm qua có tăng trưởng vượt trội, mạng lại nguồn lợi to lớn cho công ty tham gia, thị trường hấp dẫn cho cộng đưa công nghệ vào thực tiễn Tuy nhiên trước thuận lợi có không khó khăn cho giới tham gia, chứng theo báo cáo hệ thống thông tin quản lý thị trường IVD châu Âu năm 2012 tụt giảm doanh thu xuống 2,7% mang so sánh với năm 2011, thách thức hội cho người tham gia lẽ họ cần có sách tối ưu để thoát khỏi tình cảnh 31 TEST KIT TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguồn internet [1] http://www.edma-ivd.eu [2] http://www.cancer.gov [3] http://vbs.ac.vn [4] http://legacy.genwaybio.com [5] http://medicalab.blogspot.com [6] http://vbs.ac.vn [7] http://www.bachkhoatrithuc.vn [8] http://ditruyen.com [9] http://www.elisa-antibody.com Sách + Bài báo + Bài giảng [1] Bài giảng nhập môn Công nghiệ Sinh học, TS Phạm Minh Tuấn, Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm Hồ Chí Minh, năm 2012 [2] Giáo trình nhập môn Công nghệ Sinh học, PGS-TS Nguyên Hoàng LộcNhà xuất ĐH Huế, 2007 [3] Hướng dẫn sử dụng HIV1/2 Strip WB công ty ACON, VISA: VNDP262-0905 [4] USAID List of Approved HIV/AIDS Rapid Test Kits - March 30, 2012 32 [...]... Bảng so sánh kết quả với Kit chuẩn EIA Phương pháp EIA Tổng cộng kết quả Kit thử chẩn đoán HIV1/2 Kết quả Kit thử chẩn ACON Tổng cộng kết quả 554 4 558 0 1159 1159 554 1163 1717 Dương tính Kit thử chẩn đoán HIV1/2 Âm tính tính ACON đoán HIV1/2 Dương Âm tính ACON Tổng cộng kết quả 26 TEST KIT 6.5 Hướng dẫn sử dụng Kit HIV ½ Lấy kit thử ra khỏi túi kín đựng sản phẩm và sử dụng kit thử càng nhanh càng... trên kit HIV 1/2 27 TEST KIT Hình 2.9 Quy trình kiểm tra HIV trên kit HIV ½ 6.6 Hạn sử dụng và cách bảo quản kit HIV ½ Thời hạn sử dụng của kit thử là 24 tháng kể từ ngày sản xuất nếu được bảo quản đúng quy định và trong túi nhôm kín có chất chống ẩm Kit thử có thể bảo quản ở nhiệt độ phòng hoặc làm lạnh (2-30°C) Kit thử giữ được tính ổn định cho đến ngày hết hạn sử dụng in trên túi đựng sản phẩm Kit. .. nhạy Kit thử chẩn đoán HIV1/2 được kiểm tra với dàn mẫu thử với nồng độ kháng thể kháng HIV thấp (Boston Biomedica, Inc.) Kit thử còn được so sánh kiểm chứng với các loại kit thử hàng đầu như EIA HIV trên các mẫu lâm sàng Kết quả cho thấy kit thử chẩn đoán HIV1/2 rất nhạy với kháng thể kháng HIV típ 1 hoặc típ 2 b/ Độ đặc hiệu Độ đặc hiệu của kit thử chẩn đoán HIV1/2 có thể sánh được với các kit thử... đượclàm đông băng sản phẩm 28 TEST KIT 6.7 Hạn chế sử dụng ở kit HIV ½ o Kit thử chẩn đoán HIV1/2 chỉ sử dụng cho mục đích chẩn đoánbệnh Kit thử dùng để phát hiện kháng thể kháng HIV trong mẫumáu toàn phần, huyết thanh hoặc huyết tương, vì vậy, kit thử này không thể sử dụng để xét nghiệm định lượng giá trị cũng như tốc độ tăng lên của nồng độ kháng thể kháng HIV o Kit thử chẩn đoán HIV1/2 chỉ phát hiện... thế nữa sự ra đời của Test kit đã mang công nghệ đến gần với người tiêu dùng ở mọi tầng lớp xã hội vì chi phí thấp và mức độ tiện lợi, dễ sử dụng,….Chính vì những lý do này mà thị trường IVD của thế giới trong những năm qua đã có những tăng trưởng vượt trội, nó mạng lại một nguồn lợi to lớn cho những công ty tham gia, đó quả là một thị trường khá hấp dẫn cho cộng cuộc đưa công nghệ đi vào thực tiễn Tuy... phải bao giờ cũng loại trừ được khả năng đã bị lây nhiễm vi rút HIV típ 1 hoặc típ 2 Hình 3.1 Một số loại Kit HIV đang có trên thị trường Mỹ 29 TEST KIT 30 TEST KIT 7 TỔNG KẾT Test kit ban đầu được ra đời chỉ để đáp ứng nhu cầu nào đó cho một cá nhân hoặc một tổ chức nhằm mục đích đẩy nhanh tiến độ công việc, tuy nhiên với nhiều tiến bộ vượt trội không những trong khoa học mà còn trong thực tế bởi nó... TS Phạm Minh Tuấn, Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm tp Hồ Chí Minh, năm 2012 [2] Giáo trình nhập môn Công nghệ Sinh học, PGS-TS Nguyên Hoàng LộcNhà xuất bản ĐH Huế, 2007 [3] Hướng dẫn sử dụng HIV1/2 Strip WB của công ty ACON, VISA: VNDP262-0905 [4] USAID List of Approved HIV/AIDS Rapid Test Kits - March 30, 2012 32 ... TEST KIT TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguồn internet [1] http://www.edma-ivd.eu [2] http://www.cancer.gov [3] http://vbs.ac.vn [4] http://legacy.genwaybio.com [5] http://medicalab.blogspot.com [6] http://vbs.ac.vn [7] http://www.bachkhoatrithuc.vn [8] http://ditruyen.com [9] http://www.elisa-antibody.com Sách + Bài báo + Bài giảng [1] Bài giảng nhập môn Công nghiệ Sinh học, TS Phạm Minh Tuấn, Trường Đại học Công. .. bị gi ữ lại 22 TEST KIT tại “vạch phản ứng” do K T kết hợp với KN vi sinh vật , kết quả “vạch p h ản ứ n g” hi ệ n m à u Nế u t r o n g hu yế t t h a n h khô ng c ó K T đ ặc hi ệ u , ở “vạc h phản ứng” KN không thể giữ được KKT gắn màu, vì vậy không hiện màu Hình 2.6 Nguyên tắc thực hiện sắc ký miễn dịch 6 ỨNG DỤNG SẮC KÝ MIỄN DỊCH TRONG CHẾ TẠO KIT HIV 1/2 6.1 Mục đích sử dụng Kit thử chẩn đoán HIV1/2... Thử nghiệm phức tạp nhất là thử nghiệm in vivo: Đo lường kết quả bảo hộ thực tế của kháng thể trên động vật Hình 1.6 Cơ chế hoạt động trên kit thử 12 TEST KIT 5.2.1 Miễn dịch phóng xạ (radio immunoassays) Phương pháp này để tìm nồng độ hocmon peptit trong hệ thống sinh học Các đồng vị phóng xạ được dùng để đánh dấu hocmon mà sau đó được đưa cùng với các kháng thể đặc hiệu vào các mô hoặc dung dịch cần