Khảo sát tác động hạ đường huyết và ức chế hấp thu glucose của viên nang cứng sapentol

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGÔ TRÚC DUYÊN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT VÀ ỨC CHẾ HẤP THU GLUCOSE CỦA VIÊN NANG CỨNG SAPENTOL LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGÔ TRÚC DUYÊN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT VÀ ỨC CHẾ HẤP THU GLUCOSE CỦA VIÊN NANG CỨNG SAPENTOL Ngành: Dƣợc lý Dƣợc lâm sàng Mã số: 8720205 Luận văn Thạc sĩ Dƣợc học NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS ĐỖ THỊ HỒNG TƢƠI Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng dƣới hƣớng dẫn PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tƣơi Kết số liệu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố nghiên cứu khoa học trƣớc Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 16 tháng 10 năm 2020 Tác giả luận văn Ngô Trúc Duyên LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đƣợc luận văn tốt nghiệp tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến Quý Thầy, Cô Khoa Dƣợc - Đại học Y Dƣợc Thành phố Hồ Chí Minh, Bộ mơn Dƣợc lý, Hố dƣợc, Vi sinh - ký sinh, phịng Đào tạo Sau đại học,… giúp đỡ, hƣớng dẫn tạo điều kiện tốt môi trƣờng, trang thiết bị nghiên cứu suốt q trình tơi thực đề tài Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tƣơi – ngƣời tạo hội, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm tận tình giúp đỡ suốt thời gian từ lúc bắt đầu hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến tất anh chị, bạn em monitor Bộ mơn Dƣợc lý nhiệt tình hỗ trợ suốt q trình tơi thực nghiên cứu Trân trọng cảm ơn! Ngô Trúc Duyên i TÓM TẮT TIẾNG VIỆT Mục tiêu: Với mong muốn tạo chế phẩm hỗ trợ điều trị ĐTĐ cho ngƣời bệnh, viên nang cứng Sapentol đƣợc bào chế từ cao chiết khô hỗn hợp 03 dƣợc liệu: Sâm Việt Nam, Ổi Mắc cỡ Do đó, nhằm cung cấp sở khoa học cho sản phẩm, đề tài đƣợc thực để ―Khảo sát tác động hạ đƣờng huyết ức chế hấp thu Glucose viên nang cứng Sapentol‖ mức độ in vitro, ex vivo in vivo Phƣơng pháp nghiên cứu: Về thử nghiệm in vitro, khảo sát hoạt tính ức chế αglucosidase phƣơng pháp so màu, với acarbose chất đối chứng Về thử nghiệm ex vivo, khảo sát tác động ức chế hấp thu glucose phƣơng pháp đoạn ruột lộn ngƣợc chuột khỏe mạnh với phloridzin acarbose chất đối chứng Ở mức độ in vivo, đề tài tiến hành khảo sát độc tính cấp đƣờng uống, tác động hạ đƣờng huyết ức chế dung nạp glucose Sapentol chuột khỏe mạnh chuột ĐTĐ gây bệnh Streptozotocin Kết quả: Sapentol (IC50 = 177,57 µg/mL) thể hoạt tính ức chế α-glucosidase so với acarbose (IC50 = 467,19 µg/mL) Trong thử nghiệm ex vivo, Sapentol thể khả ức chế hấp thu glucose qua ruột nồng độ 30 mg/mL 60 mg/mL Trong thử nghiệm in vivo, Sapentol độc tính cấp liều Dmax 30 g/kg, khơng thể ảnh hƣởng lên đƣờng huyết cân nặng chuột khỏe mạnh ĐTĐ nhƣng có tác động hạ đƣờng huyết chuột ĐTĐ đánh giá đƣờng huyết đói đƣờng huyết sau ăn chuột liều 300 mg/kg 600 mg/kg Kết luận kiến nghị: Viên nang cứng Sapentol cho thấy tác động hạ đƣờng huyết ức chế hấp thu glucose mức độ in vitro, ex vivo in vivo Với kết thu đƣợc, đề tài có kiến nghị sau: khảo sát tác động ức chế hấp thu glucose qua ruột chuột ĐTĐ, độc tính bán trƣờng diễn, tác động tăng lực chống stress viên nang cứng Sapentol Từ khóa: Sapentol, Sâm Việt Nam, Panax vietnamensis, Ổi, Psidium guajava L., Mắc cỡ, Mimosa pudica L., hạ đƣờng huyết, ức chế hấp thu glucose ii TÓM TẮT TIẾNG ANH Objective: With the desire to create a product to support the treatment of diabetes for patients, Sapentol hard capsule was made from a dry extract from 03 medicinal herbs: Panax vietnamensis, Psidium guajava L and Mimosa pudica L Therefore, in order to provide a scientific basis for the product, the study was conducted to "Investigate the hypoglycemic effect and inhibition of Glucose absorption of Sapentol hard capsule" at in vitro, ex vivo and in vivo levels Methods: About in vitro test, the α-glucosidase inhibitory activity by spectrophotometric method was investigated, with acarbose as the control Regarding ex vivo test, the effect of inhibition of glucose uptake was evaluated by the everted gut sac model with healthy mouse intestines with phloridzin and acarbose as the control At the in vivo level, the thesis determined the acute oral toxicity, hypoglycemic effect and inhibition of glucose tolerance of Sapentol on healthy mice and diabetic mice induced by Streptozotocin Results: Sapentol (IC50 = 177,57 µg / mL) exhibited α-glucosidase inhibitory activity compared to acarbose (IC50 = 467,19 µg / mL) In the ex vivo test, Sapentol showed inhibition of intestinal glucose uptake at concentrations of 30 mg/mL and 60 mg/mL In in vivo tests, Sapentol displayed no acute toxicity at a Dmax dose of 30 g/kg, no effect on blood glucose and weight of healthy and diabetic mice, but had a hypoglycemic effect in diabetic mice when their fasting and postprandial blood glucose were assessed at Sapentol doses of 300 mg/kg and 600 mg/kg Conclusions: The Sapentol hard capsule showed hypoglycemic effects and inhibitory effects on glucose uptake at in vitro, ex vivo and in vivo levels With the obtained results, the thesis has the following recommendations: investigating the effect of inhibition of intestinal glucose absorption in diabetic mice, subchronic toxicity, psychomotor effects and anti-stress effects of Sapentol hard capsule Key words: Sapentol, Panax vietnamensis, Psidium guajava L., Mimosa pudica L., hypoglycemic effect, inhibition of glucose uptake iii MỤC LỤC TÓM TẮT TIẾNG VIỆT i TÓM TẮT TIẾNG ANH ii MỤC LỤC iii DANH MỤC KÝ HIỆU, CAC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ x ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 BỆNH ĐÁI THÁO ĐƢỜNG 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Chẩn đoán 1.1.4 Cơ chế bệnh sinh .5 1.1.5 Biến chứng 1.1.6 Điều trị 1.2 VIÊN NANG CỨNG SAPENTOL 15 1.2.1 Tổng quan viên nang cứng Sapentol .15 1.2.2 Tổng quan dƣợc liệu viên nang cứng Sapentol .16 1.3 PHƢƠNG PHÁP THỬ ĐỘC TÍNH CẤP TRÊN ĐỘNG VẬT 24 1.3.1 Mục tiêu 24 1.3.2 Một số mơ hình thử 24 1.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT .25 1.4.1 Nghiên cứu tác động hạ đƣờng huyết in vitro .25 iv 1.4.2 Nghiên cứu tác động hạ đƣờng huyết ex vivo 26 1.4.3 Nghiên cứu tác động hạ đƣờng huyết in vivo 26 1.4.4 Một số mơ hình động vật nghiên cứu bệnh ĐTĐ 27 1.4.5 Mơ hình động vật áp dụng với streptozocin 27 1.5 KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ HẤP THU GLUCOSE QUA RUỘT .28 1.5.1 Cơ chế hấp thu glucose qua ruột .28 1.5.2 Một số mơ hình nghiên cứu hấp thu glucose qua ruột .29 1.5.3 Phƣơng pháp đoạn ruột lộn ngƣợc 31 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG & PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU .33 2.1.1 Viên nang cứng Sapentol 33 2.1.2 Động vật nghiên cứu .33 2.1.3 Hóa chất 33 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ .34 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.2.1 Khảo sát độc tính cấp đƣờng uống chuột nhắt 35 2.2.2 Khảo sát hoạt tính ức chế alpha glucosidase in vitro 35 2.2.3 Khảo sát tác động ức chế hấp thu glucose ex vivo qua ruột chuột khoẻ mạnh 36 2.2.4 Khảo sát tác động hạ đƣờng huyết in vivo 40 2.2.5 Khảo sát tác động ức chế dung nạp glucose in vivo 41 2.2.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu .43 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .44 3.1 ĐỘC TÍNH CẤP ĐƢỜNG UỐNG TRÊN CHUỘT NHẮT 44 v 3.2 HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ALPHA GLUCOSIDASE IN VITRO 45 3.2.1 Acarbose 45 3.2.2 Sapentol 46 3.3 TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ HẤP THU GLUCOSE EX VIVO QUA RUỘT CHUỘT NHẮT KHỎE MẠNH 47 3.4 TÁC ĐỘNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT IN VIVO .48 3.4.1 Trên chuột khoẻ mạnh 48 3.4.2 Trên chuột đái tháo đƣờng 49 3.5 TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ DUNG NẠP GLUCOSE IN VIVO 51 3.5.1 Trên chuột khoẻ mạnh 51 3.5.2 Trên chuột đái tháo đƣờng 52 Bàn luận .56 Độc tính cấp đƣờng uống viên nang Sapentol .56 Hoạt tính ức chế  glucosidase in vitro 56 Tác động ức chế hấp thu glucose qua ruột chuột nhắt khoẻ mạnh ex vivo .58 Tác động ức chế dung nạp glucose in vivo .59 Tác động hạ đƣờng huyết chuột nhắt 59 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 4.1 KẾT LUẬN 61 4.2 KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 PHỤ LỤC vi DANH MỤC KÝ HIỆU, CAC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt ADA ALX AUC BB BMI CCĐ cGMP CVBs DCCT DNA DPP-4 ĐTĐ ĐVTN GABA GIP GK GLP-1 GLUT2 GTG HDL IDDM IDF JCR KDP KK LCMV LETL LEW Tiếng Anh American Diabetes Association Alloxan Area under the curve Bio - breeding Body Mass Index 3',5'-cyclic guanosine monophosphate Coxsackie B virus The diabetes control nad complications trial Deoxyribonucleic acid Dipeptidyl peptidase – Tiếng Việt Hiệp hội đái tháo đƣờng Hoa Kỳ Diện tích dƣới đƣờng cong Chỉ số khối thể Chống định GMP vịng Thử nghiệm kiểm sốt ĐTĐ biến chứng Đái tháo đƣờng Động vật thử nghiệm Gamma aminobutyric acid Glucose-dependent insulinotropic polypeptide Goto - Kakizaki Glucagon-like peptide-1 Glucose transporter Gold thioglucose High Density Lipoprotein Insulin dependent diabetes mellitus Internatioanal Diabetes Federation James C Russel Komeda diabetes-prone Kuo Kondo Lymphocytic choriomeningitis virus Long - Evans Tokushima Lean Lewis Lipoprotein tỷ trọng cao ĐTĐ phụ thuộc insulin Liên đoàn đái tháo đƣờng giới Virus LCM Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 67 [72] Maruyama Y., Matsuda H., Matsuda R et al (1985), "Study on Psidium guajava L.(I) Antidiabetic effect and effective components of the leaf of Psidium guajava L.(Part 1)", Shoyakugaku Zasshi, book 39 (4), pp 261-269 [73] Mateer S W., Cardona J., Marks E et al (2016), "Ex vivo intestinal sacs to assess mucosal permeability in models of gastrointestinal disease", JoVE (Journal of Visualized Experiments), book (108), p e53250 [74] Matsuo T., Hanamure N., Shimoi K et al (1994), "Identification of (+)gallocatechin as a bio-antimutagenic compound in Psidium guava leaves", Phytochemistry, book 36 (4), pp 1027-1029 [75] Mazumdar S., Akter R., Talukder D (2015), "Antidiabetic and antidiarrhoeal effects on ethanolic extract of Psidium guajava (L.) Bat leaves in Wister rats", Asian Pacific journal of tropical biomedicine, book (1), pp 10-14 [76] Merat A., Sahmani M (2003), "Effect of acarbose on in vitro intestinal absorption of monosaccharides in diabetic rats" [77] Merino B., Fernández-Díaz C M., Cózar-Castellano I et al (2020), "Intestinal fructose and glucose metabolism in health and disease", Nutrients, book 12 (1), p 94 [78] Metwally A., Omar A., Harraz F et al (2010), "Phytochemical investigation and antimicrobial activity of Psidium guajava L leaves", Pharmacognosy magazine, book (23), p 212 [79] Monaco J., Anderson R (1994), "Tai's formula is the trapezoidal rule", Diabetes Care, book 17 (10), pp 1224-1225 [80] Mukhtar H M., Ansari S., Naved T et al (2004), "Hypoglycemic activity of Psidium guajava Linn leaf extract", Journal of Natural Remedies, book (2), pp 186-189 [81] Nag S A., Qin J., Wang W et al (2012), "Ginsenosides as anticancer agents: in vitro and in vivo activities, structure-activity relationships, and molecular mechanisms of action", Frontiers in Pharmacology, book 3, p 25 [82] Naik S R., Kokil G R (2013), "Development and discovery avenues in bioactive natural products for glycemic novel therapeutics", Studies in natural products chemistry, Elsevier, p.^pp Number of 431-466 [83] Nyambe-Silavwe H., Villa-Rodriguez J A., Ifie I et al (2015), "Inhibition of human α-amylase by dietary polyphenols", Journal of Functional Foods, book 19, pp 723-732 [84] Nham N., De P., Luan T et al (1995), "Pharmacognostical and chemical studies on Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv.(Araliaceae)", J Jpn Bot, book 70, pp 1-10 [85] Nham N T (1989), "Study on Panax vietnamensis Ha et Grushv Araliaceae Botany-Tissue culture-Chemistry-Biological properties", Herba Pol, book 35, pp 31-35 [86] Oboh G., Ogunsuyi O B., Ogunbadejo M D et al (2016), "Influence of gallic acid on α-amylase and α-glucosidase inhibitory properties of acarbose", Journal of food and drug analysis, book 24 (3), pp 627-634 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 68 [87] Ojewole J (2005), "Hypoglycemic and hypotensive effects of Psidium guajava Linn.(Myrtaceae) leaf aqueous extract", Methods and findings in experimental and clinical pharmacology, book 27 (10), pp 689-696 [88] Organization W H (2019), "Classification of diabetes mellitus" [89] Parasuraman S., Ching T H., Leong C H et al (2019), "Antidiabetic and antihyperlipidemic effects of a methanolic extract of Mimosa pudica (Fabaceae) in diabetic rats", Egyptian Journal of Basic and Applied Sciences, book (1), pp 137-148 [90] Park J.-E., Lee J.-H., Han J.-S (2017), "Sargassum yezoense extract inhibits carbohydrate digestive enzymes in vitro and alleviates postprandial hyperglycemia in diabetic mice", Preventive nutrition and food science, book 22 (3), p 166 [91] Qaisar M N., Chaudhary B A., Sajid M U et al (2014), "Evaluation of αglucosidase inhibitory activity of dichloromethane and methanol extracts of Croton bonplandianum Baill", Tropical Journal of Pharmaceutical Research, book 13 (11), pp 1833-1836 [92] Rajendiran D., Kandaswamy S., Sivanesan S et al (2017), "Potential antidiabetic effect of Mimosa pudica leaves extract in high fat diet and low dose streptozotocin-induced type diabetic rats", International Journal of Biology Research, book (4), pp 55-62 [93] Sales P M., Souza P M., Simeoni L A et al (2012), "α-Amylase inhibitors: a review of raw material and isolated compounds from plant source", Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Sciences, book 15 (1), pp 141-183 [94] Sanches N R., Garcia Cortez D A., Schiavini M S et al (2005), "An evaluation of antibacterial activities of Psidium guajava (L.)", Brazilian Archives of Biology and Technology, book 48 (3), pp 429-436 [95] Seshadri T., Vasishta K (1965), "Polyphenols of the leaves of psidium guava—quercetin, guaijaverin, leucocyanidin and amritoside", Phytochemistry, book (6), pp 989-992 [96] Sha X., Fang X (2004), "Transport characteristics of 9-nitrocamptothecin in the human intestinal cell line Caco-2 and everted gut sacs", International journal of pharmaceutics, book 272 (1-2), pp 161-171 [97] Shai L J., Masoko P., Mokgotho M P et al (2010), "Yeast alpha glucosidase inhibitory and antioxidant activities of six medicinal plants collected in Phalaborwa, South Africa", South African Journal of Botany, book 76 (3), pp 465-470 [98] Shekins O O., Dorathy I U (2014), "Anti-diarrhoea property of crude aqueous leave extract of red apple Psidium guajava in castor oil-induced diarrhoea in rats", Journal of Pharmaceutical Research International, pp 2694-2701 [99] Shen S C., Cheng F C., Wu N J (2008), "Effect of guava (Psidium guajava Linn.) leaf soluble solids on glucose metabolism in type diabetic rats", Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 69 Pharmacological and Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives, book 22 (11), pp 1458-1464 [100] Subramanian R., Asmawi M Z., Sadikun A (2008), "In vitro alphaglucosidase and alpha-amylase enzyme inhibitory effects of Andrographis paniculata extract and andrographolide", Acta Biochimica Polonica, book 55 (2), pp 391-398 [101] Tahara A., Matsuyama-Yokono A., Nakano R et al (2008), "Effects of antidiabetic drugs on glucose tolerance in streptozotocin-nicotinamide-induced mildly diabetic and streptozotocin-induced severely diabetic mice", Hormone and metabolic research, book 40 (12), pp 880-886 [102] Tan S.-J., Li N., Zhou F et al (2014), "Ginsenoside Rb1 improves energy metabolism in the skeletal muscle of an animal model of postoperative fatigue syndrome", Journal of Surgical Research, book 191 (2), pp 344-349 [103] Taslimi P., Gulỗin (2017), "Antidiabetic potential: In vitro inhibition effects of some natural phenolic compounds on α‐glycosidase and α‐amylase enzymes", Journal of biochemical and molecular toxicology, book 31 (10), p e21956 [104] Tasnuva S., Qamar U., Ghafoor K et al (2019), "α-glucosidase inhibitors isolated from Mimosa pudica L", Natural product research, book 33 (10), pp 1495-1499 [105] Tchercansky D M., Acevedo C., Rubio M C (1994), "Studies of tyramine transfer and metabolism using an in vitro intestinal preparation", Journal of pharmaceutical sciences, book 83 (4), pp 549-552 [106] Tiwari S., Srivastava R., Singh C et al (2015), "Amylases: an overview with special reference to alpha amylase", J Global Biosci, book 4, pp 1886-1901 [107] Tomimatsu T., Horie T (2005), "Enhanced glucose absorption in the rat small intestine following repeated doses of 5-fluorouracil", Chemico-biological interactions, book 155 (3), pp 129-139 [108] Thilagam E., Parimaladevi B., Kumarappan C et al (2013), "α-Glucosidase and α-amylase inhibitory activity of Senna surattensis", Journal of acupuncture and meridian studies, book (1), pp 24-30 [109] Tran Q L., Adnyana I K., Tezuka Y et al (2001), "Triterpene Saponins from Vietnamese Ginseng (Panax vietnamensis) and Their Hepatocytoprotective Activity", Journal of Natural Products, book 64 (4), pp 456-461 [110] Trinder P (1969), "Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor", Annals of clinical Biochemistry, book (1), pp 24-27 [111] Uddin N., Hasan M R., Hossain M M et al (2014), "In vitro α–amylase inhibitory activity and in vivo hypoglycemic effect of methanol extract of Citrus macroptera Montr fruit", Asian Pacific journal of tropical biomedicine, book (6), pp 473-479 [112] Ugenyi A U., Ozoh P O., Ukwandu N C et al (2018), "Evaluation of Toxicological Effects Ethanol Extracts of Mimosa pudica in Adult Male Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 70 Albino Rats", International Journal of Advanced Research in Biological Sciences, book (10), pp 98-109 [113] Wang H., Du Y.-J., Song H.-C (2010), "α-Glucosidase and α-amylase inhibitory activities of guava leaves", Food Chemistry, book 123 (1), pp 6-13 [114] Wilson T., Wiseman G (1953), "A method for studying intestinal metabolism and absorption", The Journal of physiology, book 121 (2), p 45P [115] Wilson T H., Wiseman G (1954), "The use of sacs of everted small intestine for the study of the transference of substances from the mucosal to the serosal surface", The Journal of physiology, book 123 (1), pp 116-125 [116] Wu J.-W., Hsieh C.-L., Wang H.-Y et al (2009), "Inhibitory effects of guava (Psidium guajava L.) leaf extracts and its active compounds on the glycation process of protein", Food Chemistry, book 113 (1), pp 78-84 [117] Yamanobe Y., Hattori F., Shimomura K (2000), "Extracts from Uncaria gambier, Psidium guajava, Filipendula as lipase inhibitors", Patency number JP, book 2000103741 [118] Yamasaki K (2000), "Bioactive saponins in Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis", Pharmaceutical biology, book 38 (sup1), pp 16-24 [119] YAMASAKI K., TANAKA O (1994), "Saponins from Vietnamese Ginseng, Panax vietnamensis HA et Grushv Collected in central Vietnam II", Chemical and pharmaceutical bulletin, book 42 (1), pp 115-122 [120] Yang W.-z., Hu Y., Wu W.-y et al (2014), "Saponins in the genus Panax L.(Araliaceae): a systematic review of their chemical diversity", Phytochemistry, book 106, pp 7-24 [121] Yau J W., Rogers S L., Kawasaki R et al (2012), "Global prevalence and major risk factors of diabetic retinopathy", Diabetes Care, book 35 (3), pp 556-564 [122] Yupparach P., Konsue A (2017), "Hypoglycemic and hypolipidemic activities of ethanolic extract from Mimosa pudica L in normal and streptozotocin-induced diabetic rats", Pharmacognosy Journal, book (6) [123] Zaware B., Chaudhari S., Shinde M (2014), "An overview of Mimosa pudica Linn Chemistry and pharmacological profile", Res J Pharm Biol Chem Sci, book 5, pp 754-761 Tƣ liệu từ website [124] Công ty TNHH Sâm Sâm, " http://samsam.net.vn/san-pham/sapentol-ho-trodieu-tri-benh-tieu-duong/ [Accessed: 6/10, 2020] [125] Tra cứu Dƣợc liệu, "Mắc cỡ" http://tracuuduoclieu.vn/mimosa-pudica-l-varhispida-brenan.html [Accessed: 19/09, 2020] [126] Tra cứu Dƣợc liệu, "Sâm Ngọc Linh" http://tracuuduoclieu.vn/sam-ngoclinh.html [Accessed: 19/09, 2020] [127] Tra cứu Dƣợc liệu, "Ổi" http://tracuuduoclieu.vn/oi.html [Accessed: 19/09, 2020] Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.1 PHỤ LỤC Phụ lục Kết đo độ hấp thu khảo sát hoạt tính ức chế α – glucosidase OD chuẩn OD trắng chuẩn TB TB 0,512 0,513 0,506 0,510 0,050 0,051 0,051 0,051 Nồng độ acarbose (µg/mL) 2000 1000 500 250 125 62,5 31,25 15,625 OD mẫu thử % ức chế OD trắng thử Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần 0,116 0,179 0,234 0,386 0,362 0,492 0,443 0,576 0,113 0,181 0,237 0,407 0,363 0,490 0,431 0,601 0,116 0,185 0,231 0,398 0,367 0,503 0,441 0,574 0,047 0,055 0,054 0,069 0,056 0,068 0,056 0,147 0,047 0,054 0,052 0,064 0,066 0,064 0,053 0,152 0,052 0,050 0,058 0,066 0,053 0,067 0,050 0,142 84,99 73,02 60,84 31,04 33,43 7,76 15,81 6,67 85,64 72,37 59,75 25,38 35,39 7,32 17,77 2,32 86,08 70,63 62,36 27,77 31,69 5,15 14,94 6,02 Nồng độ OD mẫu thử OD trắng thử % ức chế Sapentol Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần (µg/mL) 1000 0,094 0,099 0,099 0,076 0,073 0,074 96,08 94,34 94,56 500 0,123 0,119 0,121 0,082 0,079 0,079 91,08 91,30 90,86 250 0,209 0,201 0,217 0,058 0,059 0,056 67,15 69,11 64,97 125 0,287 0,275 0,276 0,067 0,064 0,066 52,14 54,10 54,31 62,5 0,428 0,443 0,437 0,053 0,055 0,051 18,42 15,59 16,03 31,25 0,519 0,523 0,516 0,110 0,116 0,113 11,02 11,46 12,33 15,625 0,432 0,421 0,435 0,049 0,051 0,050 16,68 19,51 16,24 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.2 Phụ lục Đƣờng huyết, diện tích bề mặt ruột, thể tích dịch thu đƣợc tính thấm biểu kiến thử nghiệm ức chế hấp thu glucose ex vivo qua ruột Đƣờng huyết Diện tích Thể tích Papp x 10-3 Lơ STT (mg/dL) (cm2) (mL) (cm/phút) 125,51 11.34 1,6 1.763 89,55 9.06 1,5 1.081 235,58 8.80 1,5 5.245 Sinh lý 81,23 9.34 1,5 0.827 160,18 10.74 1,5 2.550 222,93 10.36 1,5 4.152 92,41 10.48 1,3 0.868 63,29 9.67 1,5 0.337 74,03 10.62 1,4 0.521 Phloridzin 50 µM 52,28 11.09 1,5 0.046 107,31 11.46 1,25 1.033 67,53 8.03 1,4 0.501 82,44 8.51 1,1 0.691 64,41 9.88 1,5 0.358 71,00 9.83 1,5 0.527 Acarbose 1,0 mg/mL 74,81 9.90 1,75 0.722 61,29 7.91 1,3 0.302 88,85 9.71 1,5 0.990 66,93 9.28 1,2 0.359 62,07 10.12 1,4 0.272 62,25 10.03 1,5 0.299 Sapentol 30 mg/mL 73,77 8.93 1,3 0.569 58,35 11.53 1,4 0.164 50,29 10.23 1,4 0.002 58,95 10.34 1,5 0.210 54,79 10.90 1,3 0.091 61,29 9.00 1,2 0.245 Sapentol 60 mg/mL 71,35 11.62 1,5 0.453 73,86 10.51 1,5 0.560 67,97 7.14 1,6 0.660 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.3 Phụ lục Trọng lƣợng (g) chuột khỏe mạnh thử nghiệm hạ đƣờng huyết in vivo Lô STT Ngày Ngày Ngày 14 26,3 28,2 30,5 25,6 29,2 33,8 23,3 25,5 28,7 24,1 26,4 29,4 Sinh lý 27,3 30,5 34,5 28,7 27,7 27,6 25,1 31,3 35,9 25,2 29,7 33,8 28,3 32,4 32,7 27,4 29,5 33,8 25,8 30,5 33,7 24,3 28,7 31,7 Sapentol 300 mg/kg 30,5 33,4 36,6 18,7 19,6 21,8 27,9 29,7 34,6 26,5 28,8 31,3 25,4 25,4 28,6 32,4 34,6 38,4 23,4 24,6 26,7 28,6 27,9 31,7 Sapentol 600 mg/kg 25,4 27,7 32,9 30,1 30,6 34,5 23,7 25,8 28,7 25,8 27,5 30,5 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.4 Phụ lục Đƣờng huyết chuột khỏe mạnh thử nghiệm tác động hạ đƣờng huyết in vivo Đƣờng huyết (mg/dL) Lô STT Ngày Ngày 14 106,87 112,00 111,40 134,77 103,31 97,36 115,28 100,61 Sinh lý 105,25 131,52 98,79 74,99 115,28 148,19 104,93 125,82 121,42 114,84 127,89 138,84 124,98 155,10 103,64 126,23 Sapentol 300 mg/kg 128,86 141,68 87,15 88,41 122,07 131,92 132,09 129,89 102,99 100,20 115,93 131,11 106,55 109,96 109,14 130,70 Sapentol 600 mg/kg 105,90 118,10 94,91 99,39 92,00 125,01 107,19 138,84 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.5 Phụ lục Đƣờng huyết chuột ĐTĐ thử nghiệm tác động hạ đƣờng huyết in vivo Đƣờng huyết (mg/dL) Lô STT Ngày Ngày Ngày 15 103,07 96,26 85,20 74,09 130,84 93,06 75,41 117,40 105,00 Sinh lý 70,80 119,00 101,80 90,56 110,03 121,01 94,84 107,47 99,47 337,25 381,01 193,50 277,65 355,65 249,98 244,71 283,53 319,84 Chứng bệnh 316,08 293,08 370,21 229,02 269,37 287,82 203,92 293,41 314,60 439,22 283,17 116,12 337,25 280,61 122,20 310,59 225,64 197,76 Glibenclamid mg/kg 242,35 166,83 221,45 268,24 69,03 106,83 223,53 93,96 82,82 417,25 168,11 164,78 299,61 174,50 126,36 Sapentol 232,94 146,38 154,22 300 mg/kg 352,94 278,69 245,14 232,41 131,04 119,96 210,20 291,48 70,97 327,84 53,69 71,93 202,75 115,70 122,84 207,84 159,80 109,39 Sapentol 600 mg/kg 392,16 56,25 192,64 224,81 127,20 166,06 476,86 210,30 127,00 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.6 Phụ lục Trọng lƣợng chuột ĐTĐ thử nghiệm tác động hạ đƣờng huyết in vivo Trọng lƣợng (g) Lô STT Ngày Ngày Ngày 14 20,0 25,5 34,2 22,5 30,2 34,9 20,0 30,1 32,6 Sinh lý 21,0 27,5 33,1 20,0 22,4 29,4 20,0 24,3 36,5 22,00 21,10 16,70 17,30 17,20 22,10 19,10 22,50 22,80 Chứng bệnh 19,90 19,60 19,90 25,60 30,30 31,00 20,00 24,30 23,40 20,9 22,40 21,10 18,7 19,20 19,10 16,7 19,10 18,70 Glibenclamid mg/kg 21,9 23,10 21,10 26,2 36,80 38,80 17,8 20,80 21,10 24,30 18,30 16,70 22,50 21,20 28,10 Sapentol 21,70 22,40 23,10 300 mg/kg 19,80 33,60 33,20 27,20 21,00 21,40 18,80 31,00 30,60 17,1 16,90 17,10 24,8 29,10 28,40 22,0 23,10 23,60 Sapentol 600 mg/kg 17,2 18,80 19,00 26,9 32,30 32,90 22,9 22,80 24,10 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.7 Phụ lục Đƣờng huyết chuột thời điểm khảo sát diện tích dƣới đƣờng cong (AUC) thử nghiệm ức chế dung nạp glucose in vivo chuột khỏe mạnh Đƣờng huyết (mg/dL) AUC Lô STT phút 30 phút 60 phút 120 phút (mg/dL.phút) Sinh lý Acarbose 10 mg/kg Sapentol 300 mg/kg Sapentol 10 10 10 65,91 97,06 68,54 109,35 77,31 53,18 60,64 119,44 105,40 48,79 76,88 83,46 83,46 86,53 47,04 63,27 70,29 69,42 98,38 101,45 75,12 104,52 100,57 68,54 58,45 74,24 58,01 54,50 64,15 70,29 58,01 60,64 59,76 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 116,23 132,12 183,28 171,36 161,92 198,18 98,34 251,32 163,41 117,72 165,89 157,45 199,67 173,34 163,91 119,70 86,92 130,63 125,17 156,46 156,46 180,30 176,32 164,90 174,34 163,91 189,74 93,87 107,78 101,32 164,90 186,26 203,15 68,73 78,80 74,01 120,04 90,31 86,95 36,60 132,03 96,54 50,51 134,91 97,50 107,57 85,03 72,09 92,71 61,54 69,69 67,77 73,05 79,28 113,33 131,55 78,80 80,24 111,89 94,63 78,80 69,21 27,01 107,09 91,75 42,36 57,66 87,05 60,03 80,41 82,31 76,62 40,60 110,74 84,20 51,50 76,15 85,15 115,01 95,58 55,77 84,20 48,66 91,79 91,79 102,69 68,56 105,06 118,33 70,93 63,82 107,42 87,99 64,30 79,46 83,73 72,35 70,93 102,69 7402,21 9089,20 9647,08 11588,28 9961,22 10500,96 5567,05 14953,29 10642,61 6551,15 11319,29 10177,70 12194,22 10482,97 8621,92 8584,41 6238,04 8427,61 8640,56 9947,12 9227,38 11952,36 12519,63 9403,12 9471,37 10998,88 10720,84 6962,18 7463,97 6160,46 10115,23 10313,79 9801,83 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.8 600 mg/kg 10 74,68 58,89 77,75 94,43 68,98 63,27 67,22 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 130,13 161,92 106,29 100,83 119,70 148,51 94,37 56,26 85,51 87,43 68,73 87,43 71,13 78,80 47,71 61,93 81,83 96,52 87,52 82,78 76,62 7427,75 9235,24 8205,51 7951,05 8561,50 8779,97 7352,79 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.9 Phụ lục Trọng lƣợng chuột ĐTĐ thử nghiệm ức chế dung nạp glucose in vivo Lô Sinh lý Chứng bệnh Acarbose 10 mg/kg Sapentol 300 mg/kg Sapentol 600 mg/kg STT 6 6 Ngày Ngày 32,3 35,5 32,9 36,5 34,7 36,4 23,4 27,3 32,7 29,9 24,2 23,5 23,6 26,1 27,7 23,5 25,8 22,6 25,5 23,9 27,8 30,1 27,2 29,3 26,3 23,5 22,9 26,3 22,4 22,9 30,9 32,8 32,8 34,3 33,8 36,9 22,9 26,9 32,9 29,9 26,2 24,1 22,1 25,9 26,8 24,2 25,1 21,1 26,8 22,2 27,6 30,0 27,0 27,5 26,4 24,8 24,3 26,3 23,7 22,8 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Trọng lƣợng (g) Ngày Ngày 10 34,2 35,1 35,4 38,3 37,9 39,2 22,8 27,6 34,2 31,6 29,1 24,0 21,6 26,1 26,2 23,6 24,8 20,5 25,8 22,0 26,9 29,1 25,4 26,3 25,4 22,3 22,1 25,2 24,1 22,4 37,9 35,8 38,1 41,3 38,7 41,5 20,1 27,3 32,9 30,4 26,8 24,2 21,5 25,6 24,1 21,6 25,1 19,7 25,4 22,2 29,3 29,9 25,9 25,5 26,8 22,5 22,6 25,7 24,9 22,1 Ngày 13 Ngày 14 39,7 36,8 40,1 41,3 39,8 42,6 22,7 26,6 34,7 32,1 28,0 24,3 23,5 27,5 26,4 22,1 25,1 23,1 27,3 21,7 29,8 30,3 27,6 27,1 26,5 25,1 22,8 25,2 25,7 23,2 41,3 38,7 42,3 42,4 40,6 43,3 23,0 26,3 35,8 33,2 26,3 24,2 22,7 27,5 24,1 22,5 25,8 23,3 26,6 22,2 31,0 30,5 28,0 27,5 25,8 24,3 20,4 24,9 26,3 23,4 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.10 Phụ lục Đƣờng huyết chuột thời điểm khảo sát diện tích dƣới đƣờng cong (AUC) thử nghiệm ức chế dung nạp glucose chuột ĐTĐ ngày Đƣờng huyết (mg/dL) AUC Lô STT 30 60 120 (mg/dL.phút) Ngày phút phút phút phút 85,43 202,61 77,57 49,82 10434,15 138,80 178,68 122,21 99,89 12607,05 112,42 106,90 83,60 82,40 8637,30 Sinh lý 133,90 135,74 125,22 102,30 11371,80 137,58 113,04 88,43 82,40 9343,80 121,63 119,17 109,54 87,83 10003,20 344,81 338,19 344,33 263,36 216,31 26548,20 219,60 168,87 301,99 251,29 310,41 23787,60 277,02 178,68 320,40 268,18 216,31 23582,25 Chứng bệnh 203,52 145,55 294,63 255,51 141,51 20810,10 221,33 159,66 314,26 313,42 219,93 24524,25 229,37 259,66 380,52 302,56 271,80 28464,30 241,98 193,40 268,87 198,21 113,76 18619,80 332,17 180,52 197,70 90,24 51,63 12120,45 226,50 243,71 283,59 215,10 126,43 20512,80 Acarbose 10 mg/kg 287,36 65,80 110,58 38,97 36,55 6021,75 353,42 89,11 188,50 140,91 63,70 12174,45 277,02 53,53 186,66 115,57 38,36 10445,25 226,47 90,95 210,58 210,27 119,48 15781,95 274,15 94,63 151,69 95,06 34,70 9342,45 212,69 116,10 207,52 291,10 219,21 19988,25 Sapentol 300 mg/kg 289,09 94,63 209,97 219,93 104,52 15884,25 210,96 70,09 242,48 195,19 52,78 14973,15 240,83 75,61 190,34 92,05 40,93 10219,80 239,11 229,60 350,22 252,50 148,15 23747,85 320,11 125,92 119,79 60,68 26,60 7701,90 213,26 336,35 297,74 245,26 198,02 24305,55 Sapentol 600 mg/kg 225,32 188,50 259,74 237,42 129,45 19684,05 317,23 40,03 182,53 119,79 351,50 14942,55 253,47 128,99 242,24 188,56 119,48 16651,05 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL.11 Phụ lục 10 Đƣờng huyết chuột thời điểm khảo sát diện tích dƣới đƣờng cong (AUC) thử nghiệm ức chế dung nạp glucose chuột ĐTĐ ngày 14 Đƣờng huyết (mg/dL) AUC Lô STT phút 30 phút 60 phút 120 phút (mg/dL.phút) 85,55 148,21 85,41 104,35 9857,06 129,85 152,64 127,07 92,36 11724,30 86,18 258,97 125,81 84,78 14107,64 Sinh lý 102,00 175,42 121,39 93,62 11838,65 95,04 198,21 98,04 86,04 11603,60 100,11 215,93 117,60 83,52 12760,29 238,08 437,45 267,18 122,02 26540,34 143,14 353,27 267,18 214,17 23973,16 210,23 354,54 305,05 176,30 25585,49 Chứng bệnh 174,16 395,04 381,42 260,87 29819,15 195,04 422,26 345,44 204,07 29017,62 242,51 381,12 319,57 245,09 28334,53 115,93 246,94 187,66 61,43 15698,34 158,97 225,42 115,71 79,73 13814,40 125,42 254,54 113,81 64,59 13900,64 Acarbose 10 mg/kg 145,30 263,52 190,56 118,99 17586,75 85,55 289,35 203,44 58,91 16950,28 89,35 162,76 80,36 41,23 9252,55 143,78 276,05 185,13 88,57 17320,83 85,55 262,76 105,61 50,07 13085,49 168,46 349,47 274,75 219,85 24551,40 Sapentol 148,84 276,69 198,39 60,17 17387,37 300 mg/kg 139,35 294,41 296,84 180,72 22538,53 212,76 284,92 151,68 61,43 17210,87 162,13 335,55 102,45 65,22 16550,31 98,21 188,71 93,62 45,02 10618,36 224,79 303,90 161,15 65,22 18301,69 Sapentol 600 mg/kg 98,84 471,62 199,02 52,59 22390,80 93,78 298,21 142,85 70,27 15692,26 175,42 272,26 240,04 98,04 19470,86 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... đánh giá tác động viên nang cứng Sapentol, đề tài ? ?Khảo sát tác động hạ đƣờng huyết ức chế hấp thu Glucose viên nang cứng Sapentol? ?? đƣợc thực với câu hỏi nghiên cứu ? ?Viên nang cứng Sapentol ảnh hƣởng... đƣờng huyết động vật thử nghiệm?‖ mục tiêu cụ thể: Khảo sát tác động ức chế enzym α-glucosidase in vitro viên nang cứng Sapentol Khảo sát tác động ức chế hấp thu glucose qua ruột ex vivo viên nang. .. để ? ?Khảo sát tác động hạ đƣờng huyết ức chế hấp thu Glucose viên nang cứng Sapentol? ?? mức độ in vitro, ex vivo in vivo Phƣơng pháp nghiên cứu: Về thử nghiệm in vitro, khảo sát hoạt tính ức chế