KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (KIỂM NGHIỆM và độc CHẤT) xây dựng phương pháp định tính và định lượng alisol a alisol b 23 acetat trong dược liệu

LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến T.S Nguyễn Thị Phƣơng (Khoa Hóa phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu) Ths Nguyễn Thúc Thu Hƣơng (Bộ môn Dược liệu Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, ĐHQGHN) người thầy hướng dẫn, bảo, góp ý đưa ý kiến q báu để em hồn thiện khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Dược liệu PGS.TS Phƣơng Thiện Thƣơng nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn cán bộ, nhân viên khoa Hóa phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu, đặc biệt anh Nguyễn Đình Quân anh Lê Ngọc Duy – người theo sát, hướng dẫn cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô Khoa Y – Dược dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học trường Sau cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ln bên cạnh, ủng hộ, động viên em suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2018 Sinh viên MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Trạch tả (Alisma orientale (Sam.) Juzep.) 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.3 Bộ phận dùng 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Một số tác dụng dược lý 1.2 Tổng quan alisol A alisol B 23 – acetat .9 1.2.1 Tổng quan alisol A 1.2.2 Tổng quan alisol B 23 – acetat 11 1.3 Một số nghiên cứu định tính, định lượng AA AB23 Trạch tả 13 1.3.1 Các nghiên cứu giới 13 1.3.2 Các nghiên cứu nước 14 1.3.3 Tiêu chuẩn dược liệu Trạch tả số Dược điển 14 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu 16 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2 Hóa chất dung môi 17 2.1.3 Thiết bị dùng nghiên cứu .17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.2.1 Định tính AA AB23 sắc ký lớp mỏng .17 2.2.2 Định lượng AA HPLC 17 2.2.3 Phân tích mẫu thực 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu .18 2.3.1 Định tính AA AB23 sắc ký lớp mỏng 18 2.3.2 Định lượng AA HPLC 19 2.3.3 Phân tích mẫu thực 22 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Định tính AA AB23 TLC 23 3.1.1 Định tính AB23 .23 3.1.2 Định tính AA 24 3.1.3 Định tính AA AB23 số mẫu Trạch tả sắc ký lớp mỏng 25 3.2 Định lượng AA HPLC 27 3.2.1 Lựa chọn pha tĩnh 27 3.2.3 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 28 3.2.4 Thẩm định phương pháp định lượng 30 3.3 Ứng dụng phương pháp 35 3.4 Bàn luận 35 3.4.1 Tính cấp thiết việc tiêu chuẩn hóa dược liệu Trạch tả Việt Nam 35 3.4.2 Xây dựng phương pháp định tính 36 3.4.4 Phương pháp định lượng 37 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Từ viết Tên tiếng Anh tên khoa học tắt AA Alisol A ACN Acetonitrile AB23 Alisol B 23 - acetate Tên tiếng Việt Alisol A Acetonitril Alisol B 23 - acetat AOAC Association of Official Analytical Chemists Hiệp hội phân tích EtOH Ethanol Ethanol HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao kl/kl nhà Hóa Khối lượng/ khối lượng LOD Limid of Detection Giới hạn phát LOQ Limid of Qualification Giới hạn định lượng MeOH Methanol Methanol MS Mass Spectrometry Phổ khối RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối S/N Signal/Noise Tín hiệu/nhiễu đường STT TLC UVVIS v/v Số thứ tự Thin layer chromatography Sắc ký mỏng Ultraviolet Visible Phổ tử ngoại - khả kiến Volume/volume Thể tích/thể tích DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Một số nghiên cứu giới định lượng AA AB23 Trạch tả 13 Bảng 1.2 Chương trình dung mơi theo Dược điển Hồng Kơng 14 Bảng 2.1 Mẫu Trạch tả 16 Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi chiết 28 Bảng 3.2 Kết khảo sát tỷ lệ dung môi chiết 29 Bảng 3.3 Kết khảo sát thời gian chiết 29 Bảng 3.4 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống 31 Bảng 3.5 Quan hệ tuyến tính nồng độ diện tích pic AA 32 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ lặp lại 33 10 Bảng 3.7 Kết thẩm định độ phương pháp 34 11 Bảng 3.8 Kết định lượng AA số mẫu Trạch tả 35 DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình vẽ Trang Hình 1.1 Hình ảnh hoa Trạch tả 2 Hình 1.2 Thân rễ thân rễ thái lát Trạch tả 3 Hình 1.3 Cơng thức số triterpenoid thân rễ Trạch tả 4 Hình 1.4 Cơng thức số diterpenoid thân rễ Trạch tả 5 Hình Cơng thức số sequiterpenoid thân rễ Trạch tả 6 Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo AA Hình 1.7 Cơng thức cấu tạo AB23 11 Hình 2.1 Hình ảnh dược liệu Trạch tả lưu trữ Viện Dược liệu 16 Hình 3.1 Khảo sát định tính AB23 23 10 Hình 3.2 Khảo sát định tính AA 24 11 26 12 Hình 3.3 Sắc ký đồ định tính AA số mẫu Trạch tả Hình 3.4 Sắc ký đồ định tính AB23 số mẫu Trạch tả 13 Hình 3.5 Sắc ký đồ khảo sát thành phần pha động 28 14 Hình 3.6 Sơ đồ quy trình xử lý mẫu lựa chọn 30 15 Hình 3.7 Sắc ký đồ đánh giá độ đặc hiệu phương pháp HPLC - UV 31 16 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu thử LOD 32 17 Hình 3.9 Đường chuẩn AA 33 26 ĐẶT VẤN ĐỀ Trạch tả có tên khoa học Alisma orientale (Sam.) Juzep., tên đồng danh (Alisma plantago – aquatica) Thuộc họ Trạch tả Alismataceae Bộ phận dùng làm thuốc thân rễ khôn cạo vỏ Trạch tả vị thuốc quý sử dụng lâu đời Y học cổ truyền Việt Nam Trung Hoa với tác dụng: lợi tiểu, hạ mỡ máu, tăng cường miễn dịch, kháng viêm, giảm đường huyết… Nhóm chất có hoạt tính sinh học Trạch tả hợp chất triterpenoids, có alisol A alisol B 23 - acetat AB23 chứng minh có tác dụng lợi tiểu, chống viêm gan nhiễm mỡ không rượu, giảm ung thư buồng trứng, chống dị ứng… Alisol A hướng tác dụng chủ yếu tế bào viêm gan có tác dụng khác kháng khuẩn, tăng cường miễn dịch… Ở Việt Nam, việc đánh giá chất lượng dược liệu Trạch tả thường sử dụng theo Dược điển Việt Nam IV, nhiên tiêu chuẩn hạn chế, chưa đáp ứng yêu cầu đánh giá nên chất lượng dược liệu Trạch tả thị trường chưa đảm bảo Các nghiên cứu phân tích thành phần hóa học giới hầu hết sử dụng alisol B 23 - acetat làm tiêu chí đánh giá chất lượng dược liệu Trạch tả Tuy nhiên, alisol B 23 - acetat alisol A chiếm hàm lượng lớn, có nhiều tác dụng quý với tiềm nghiên cứu, phát triển để ứng dụng điều trị Vì vậy, alisol A thành phần quan trọng, sử dụng làm ―maker‖ kiểm nghiệm chất lượng dược liệu Trạch tả Từ thực tiễn trên, nhằm xây dựng phương pháp đánh giá chất lượng dược liệu Trạch tả, thực đề tài “Xây dựng phƣơng pháp định tính định lƣợng alisol A alisol B 23 - acetat dƣợc liệu Trạch tả (Alisma plantago – aquatica) trồng Việt Nam” với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định tính định lượng alisol A alisol B 23 – acetat dược liệu Trạch tả trồng Việt Nam - Áp dụng phương pháp phân tích số mẫu Trạch tả CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Trạch tả (Alisma orientale (Sam.) Juzep.) 1.1.1 Tên khoa học Trạch tả có tên khoa học Alisma orientale (Sam.) Juzep., thuộc họ Alismataceae, chi Alisma, có tên khoa học đồng nghĩa khác Alisma plantago – aquatica Ở Việt Nam, Trạch tả gọi thủy đề, mã đề nước [4] 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố Cây thảo, cao 40-50 cm Thân rễ hình cầu hình quay, nạc, màu trắng, có cuống dài, bẹ to mọc ốp vào nhau, xịe hình hoa thị, phiến hình trái xoan hay hình trứng, mép ngun lượn sóng, gân 5-7 hình cung Cụm hoa mọc cán thẳng dài có đến 1m thành chùy có nhiều vịng hoa xếp thành tầng nhỏ dần phía ngọn, tầng phân nhánh thành chùy nhỏ; hoa lưỡng tính, màu trắng hay hồng, đài có màu lục, tồn đến thành quả; tràng hoa cánh có cựa màu vàng nhạt mỏng rụng sớm; nhị – 9, dẹt, bầu nhiều xếp thành vịng, có nỗn, vòi nhụy mảnh dễ rụng Quả bế dẹp, dạng màng, có đài tồn Mùa hoa quả: tháng 10 – 12 Chi Alisma L có khoảng 10 lồi, phân bố rải rác từ vùng nhiệt đới đến vùng cận nhiệt đới ơn đới ẩm Trạch tả có nhiều Trung Quốc, Nhật Bản, Triều Tiên, Việt Nam Hiện biết có hai lồi dùng làm thuốc Trạch tả (A plantago – aquatica L.) loài A canaliculatum Ở Việt Nam, Trạch tả thấy trồng tỉnh Thái Bình, Hà Nam, Hải Dương, Hưng Yên [4] Hình 1.1 Hình ảnh hoa Trạch tả [57,58] 1.1.3 Bộ phận dùng Dược liệu Trạch tả thân rễ Trạch tả: Thân rễ thu hoạch vào tháng 4-5 chuyển sang màu vàng Loại bỏ rễ con, cạo vỏ rửa sạch, phơi hay sấy khô Khi dùng, ủ thân rễ cho mềm, thái lát, phơi khô (dùng sống) tẩm muối (100 g Trạch tả với g muối ăn hòa 60 ml nước), vàng [4] and Hình 1.2 Thân rễ thân rễ thái lát Trạch tả [56] 1.1.4 Thành phần hóa học Ở Trạch tả, thân rễ phận truyền thống sử dụng Y học cổ truyền nên hầu hết nghiên cứu tập trung vào thành phần hóa học thân rễ Theo nghiên cứu công bố trước đây, terpenoid coi thành phần Trạch tả [17] Với hợp chất đặc trưng triterpenoid protostane (alisol A – F dẫn xuất) sesquiterpenoid guaiane (alismol, alismoxide, orientalols A – F orientalols sulfat) Ngoài ra, Trạch tả chứa lượng nhỏ diterpenoid, flavonoid, alkaloid, asparagine, phytosterol, acid béo nhựa Ở Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học thân rễ Trạch tả cịn Trong nghiên cứu nhóm tác giả Phan Văn Kiệm cộng (2006) với mẫu Trạch tả thu hái Tam Đảo, Vĩnh Phúc, phương pháp sắc ký kết hợp phân lập bảy chất: alismoxid, (+) pinoresinol, octadeca 9,12 – dienoic acid octadeca – 9,12 – dienoic acid methyl ester, AA, AA 24 – acetat alisol G [2] 1.1.4.1 Các triterpenoid Các triterpenoid coi thành phần có hoạt tính sinh học rễ Trạch tả Đến nay, 55 triterpenoid phân lập xác định cấu trúc Ngay từ năm 1968, Murata cộng phân lập AA (1), alisol A 24 – acetat (2), alisol B (3), AB23 (4) alisol E (5) từ thân rễ Trạch tả [30] Sau đó, hợp chất biết hợp chất alisol C 23 – acetat (6) tách từ chiết xuất methanol thân rễ [31] Alisol O (7) alisol P (8) phân lập năm 2008 [53] Gần đây, năm 2012 Jin cộng phân lập triterpenoid alisol Q 23 – acetat (9) [18] (1) (2) (5) Hợp chất AA alisol A 24 – acetat alisol E (3) (4) (6) R1 OH OH OH R2 OH OH OH R3 OH OH OH R4 OH OH OH R5 H O H R6 O O O Hợp chất R1 R2 R3 R4 R5 R6 alisol B AB23 alisol C 23 – acetat O O O H H H OH OH OH H H H H H O OH OAc OAc (7) alisol O (8) alisol P (9) alisol Q 23 – acetat Hình 1.3 Cơng thức số triterpenoid thân rễ Trạch tả 1.1.4.2 Các diterpenoid Sắc ký đồ khảo sát với dung môi chiết methanol 40% Dataf ile Name:MeOH-40-20ul-001.lcd Sample Name:thu Sample ID:01 m AU 210nm,4n m 200 175 150 Ali so l A/ 15 64 09 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 Phụ lục 2: Sắc ký đồ khảo sát tỷ lệ dung môi 14.0 Sắc ký đồ khảo sát tỷ lệ dung môi chiết với 25ml MeOH 80% Dataf ile Name:25ml-20ul-002.lcd Sample Name:01 Sample ID:01 m AU 225 210nm,4nm 200 Ali so l A/ 16 80 38 175 150 125 100 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ khảo sát tỷ lệ dung môi chiết với 50 ml MeOH 80% 75 Dataf ile Name:50ml-20ul-002.lcd Sample Name:01 Sample ID:01 m AU 210nm,4nm 110 50 100 90 25 80 Ali so l A/ 81 18 28 70 60 50 40 30 20 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ khảo sát tỷ lệ dung môi chiết với 100ml MeOH 80% Dataf ile Name:100ml-20ul-002.lcd Sample Name:02 Sample ID:02 m AU 210nm,4n m 55 50 45 40 Ali so l A/ 41 07 38 35 30 25 20 15 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 Phụ lục 3: Khảo sát thời gian chiết 13.0 14.0 Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết 10 phút Datafile Name:T 10-20ul-001.lcd Sample Name:01 Sample ID:01 mAU 210nm,4nm 200 175 150 Ali so l A/ 15 69 96 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết 30 phút Datafile Name:T 30-20ul-002.lcd Sample Name:01 Sample ID:01 mAU 210nm,4nm 225 200 175 Ali so l A/ 17 67 70 150 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết 40 phút 11.0 12.0 13.0 14.0 Datafile Name:T 40-20ul-003.lcd Sample Name:02 Sample ID:02 mAU 210nm,4nm 200 175 150 Ali so l A/ 17 72 65 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết 60 phút Datafile Name:T 60-20ul-004.lcd Sample Name:03 Sample ID:03 mAU 210nm,4nm 225 200 175 Ali so l A/ 18 27 46 150 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết 120 phút Datafile Name:T 120-20ul-005.lcd Sample Name:04 Sample ID:04 mAU 225 210nm,4nm 200 Ali so l A/ 17 88 35 175 150 125 100 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 75 50 25 Phụ lục 4: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn 14.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 4.168µg/ml Dataf ile Name:alisolA-4.168-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:08 m AU 210nm,4nm 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 Ali so l A/ 50 45 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 10.42 µg/ml Dataf ile Name:alisolA-10.42-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:07 m AU 210nm,4nm 13 12 11 10 Ali so l A/ 12 43 08 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 20.84 µg/ml 12.0 13.0 14.0 Dataf ile Name:alisolA-20.84-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:06 m AU 27.5 210nm,4nm 25.0 Ali so l A/ 25 56 42 22.5 20.0 17.5 15.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 41.68 µg/ml Dataf ile Name:alisolA-41.68-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:05 12.5 m AU 210nm,4nm 55 50 10.0 45 40 7.535 Ali so l A/ 52 02 44 30 25 5.0 20 15 2.510 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 104.2 µg/ml 12.0 13.0 14.0 Dataf ile Name:alisolA-104.2-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:04 m AU 210nm,4nm 130 120 110 100 90 Ali so l A/ 12 82 39 80 70 60 50 40 30 20 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 208.4 µg/ml Dataf ile Name:alisolA-208.4-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:03 m AU 275210nm,4nm 250 225 200 Ali so l A/ 26 04 16 175 150 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn nồng độ 416.8 µg/ml 12.0 13.0 14.0 Dataf ile Name:alisolA-416.8-ug-ml-20ul-001.lcd Sample Name:std Sample ID:02 550 m AU 210nm,4n m 500 450 400 Ali so l A/ 52 15 84 350 300 250 200 150 100 50 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 Phụ lục 5: Sắc ký đồ định lƣợng mẫu thử 14.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M1 Dataf ile Name:T1-20ul-001.lcd Sample Name:01 Sample ID:01 m AU 210nm,4nm 130 120 110 100 90 Ali so l A/ 10 36 63 80 70 60 50 40 30 20 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M2 Dataf ile Name:T2-20ul-002.lcd Sample Name:01 Sample ID:01 m AU 210nm,4nm 75 70 65 60 55 50 Ali so l a/ 55 61 82 45 40 35 30 25 20 15 10 -5 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M3 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 Dataf ile Name:T3-20ul-003.lcd Sample Name:02 Sample ID:02 m AU 200210nm,4nm 175 150 Ali so l A/ 15 32 73 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M4 Dataf ile Name:T4-20ul-004.lcd Sample Name:03 Sample ID:03 m AU 210nm,4nm 200 175 150 Ali so l A/ 14 73 97 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M5 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Dataf ile Name:T5-20ul-005.lcd Sample Name:04 Sample ID:04 m AU 210nm,4nm 110 100 90 80 Ali so l a/ 83 96 87 70 60 50 40 30 20 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M6 Dataf ile Name:T6-20ul-006.lcd Sample Name:05 Sample ID:05 m AU 210nm,4nm 150 140 130 120 110 100 Ali so l A/ 11 56 18 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Sắc ký đồ định lượng mẫu M7 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Dataf ile Name:T7-20ul-007.lcd Sample Name:06 Sample ID:06 m AU 210nm,4n m 225 200 175 Ali so l A/ 17 46 49 150 125 100 75 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 ... ? ?Xây dựng phƣơng pháp định tính định lƣợng alisol A alisol B 23 - acetat dƣợc liệu Trạch tả (Alisma plantago – aquatica) trồng Việt Nam” với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định tính định lượng. .. THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Từ viết Tên tiếng Anh tên khoa học tắt AA Alisol A ACN Acetonitrile AB23 Alisol B 23 - acetate Tên tiếng Việt Alisol A Acetonitril Alisol B 23. .. LUẬN 23 3.1 Định tính AA AB23 TLC 23 3.1.1 Định tính AB23 .23 3.1.2 Định tính AA 24 3.1.3 Định tính AA AB23 số mẫu Trạch tả sắc ký lớp mỏng 25 3.2 Định lượng AA HPLC