KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (KIỂM NGHIỆM và độc CHẤT) nghiên cứu định lượng atractylenolide III trong thân rễ bạch truật bằng HPLC bắt cặp detector DAD

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực : NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH2014.Y Người hướng dẫn: TS Hoàng Lê Sơn PGS.TS Nguyễn Thanh Hải HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Hoàng Lê Sơn – Khoa Bào chế Chế biến PGS.Tiến sĩ Nguyễn Thanh Hải – Chủ nhiệm môn Bào chế khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, Viện Dược Liệu người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ suốt q trình thực khóa luận Tơi xin cảm ơn thầy cô môn Bào chế - khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội khoa Bào chế Chế biến – Viện Dược Liệu, tạo điều kiện để tơi thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm, Phòng ban khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tồn thể thầy giáo khoa cho kiến thức quý báu suốt năm học tập, sinh hoạt rèn luyện khoa Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè ln bên cạnh, động viên tơi lúc khó khắn q trình thực khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2019 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT LOD Giới hạn phát (Limit Of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit Of Quantitation) HPLC Sắc ký lỏng hiệu Chromatography) DAD Máy đo quang (Diode Array Detector) RSD Độ lệch chuẩn tương đối ACN Acetonitrile USP Dược điển Hoa Kì ICH Hội nghị quốc tế hài hồ hố thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người cao (High Performance Liquid DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Tên bảng Số trang Hóa chất thuốc thử dùng nghiên cứu Trang thiết bị, máy móc sủ dụng nghiên cứu 16 Kết sắc ký đồ khảo sát hệ dung mơi pha động với chương trình chạy đẳng dịng HPLC-DAD, bước sóng phát 220nm Kết diện tích pic lần chiết mẫu Bạch truật với Ethanol 96% phân tích HPLC-DAD 17 Các thông số đánh giá HPLC Atractylenolide III 18 Kết độ tuyến tính phương pháp HPLC định lượng Atractylenolide III với dãy nồng độ chuẩn 20 21 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu chuẩn nồng độ 26µg/ml Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu Bạch truật chiết với Ethanol 96% 22 Kết đánh giá độ thu hồi phương pháp định lượng mẫu thử thêm chuẩn Atractylenolide III 22 10 Kết xác định hàm lượng Atractylenolide III mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc 23 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Số trang Công thức cấu tạo số chất bạch truật Cơng thức cấu tạo Atractylenolide III Sắc ký đồ phân tích bước sóng 220nm - 254nm bước sóng hấp thụ cực đại Atractylenolide III 15 Sắc ký đồ HPLCđánh giá độ đặc hiệu phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn mẫu chuẩn 28 Sắc ký đồ HPLC Atractylenolide III với nồng độ 0,065µg/ml 0,65µg/ml 19 Đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ nồng độ diện tích pic dung dịch chất chuẩn Atractylenolide III 20 Sắc ký đồ phân tích Atractylenolide III mẫu Bạch truật HPLC-DAD 24 Phổ hấp thụ UV thành phần khác mẫu Bạch truật Việt Nam 24 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung bạch truật 1.1.1 Tên khoa học 1.1.2 Mô tả thực vật, phận dùng 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.2 Tổng quan vị thuốc Bạch thuật 1.3 Vài nét hoạt chất Atractylenolide III 1.4 Các nghiên cứu định lượng Atractylenolide III bạch truật CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Trang thiết bị, dung môi, hóa chất .9 2.3 Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 10 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 10 2.3.3 Thẩm định quy trình phân tích 10 2.3.4 Phương pháp xử lý đánh giá kết 13 CHƯƠNG - KẾT QUẢ 15 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III 15 3.1.1 Xác định bước sóng phát chất chuẩn Atractylenolide III .15 3.1.2 Xây dựng điều kiện sắc ký mẫu Bạch truật HPLC-DAD 15 3.1.3 Xác định điều kiện tối ưu hóa xử lý mẫu 17 3.1.4 Điều kiện chạy sắc ký HPLC 17 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 18 3.2.1 Tính đặc hiệu phương pháp 18 3.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng 19 3.2.3 Độ tuyến tính .19 3.2.4 Độ thích hợp hệ thống 21 3.2.5 Độ lặp lại 21 3.2.6 Độ 22 3.3 Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng dược chất củ Bạch truật .23 CHƯƠNG - BÀN LUẬN .25 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO MỞ ĐẦU Bạch truật vị thuốc từ lồi Atractylodes macrocephala Koidz (Họ Compossitae), có vị trí quan trọng cổ phương đơn độc Đông Á ngàn năm để điều trị số chứng bệnh đau dày, bụng trướng đầy, ung thư, chứng loãng xương béo phì Khoảng bảy mươi hợp chất xác định cấu trúc hóa học đa phần thuộc nhóm sesquiterpenoid, phenolic acid polyacetylene mối liên hệ với tác dụng lâm sàng chưa rõ ràng Cả chất tinh khiết lẫn cao dịch chiết thể tác dụng dược lý mạnh cải thiện hệ tiêu hóa thơng qua bào IEC-6, kháng số dòng tế bào ung thư gồm HepG2, LOVO, CEM, MKN-45, kích thích miễn dịch, kháng viêm, chống oxy hóa, cải thiện khả nhớ chuột Với lợi ích lâm sàng hiệu điều trị chứng minh, Bạch truật bắt đầu di thực Việt Nam từ năm 1970 trồng phổ biên Lào Cai, Sơn La, Hà Giang, Hà Nội Lâm Đồng Hiện tại, nghiên cứu cơng bố hàm lượng dược chất có Bạch truật di thực cịn hạn chế Do đó, thực đề tài “Nghiên cứu định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật (Atractylodes macrophala Koidz) sắc ký lỏng hiệu cao bắt cặp detector DAD” với hai mục tiêu đây: - Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III thân rễ Bạch truật phương pháp HPLC-DAD - Ứng dụng phương pháp để định lượng hàm lượng Atractylenolide III mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc Lựa chọn chất nghiên cứu Atractylenolide III hoạt chất thể tác dụng bảo vệ đường tiêu hóa, chống lỗng xương, cải thiện trí nhớ, kháng viêm mơ hình dược lý giải thích sau Hàm lượng Atractylenolide III thấp so với atractylenolide I II gây khó khăn q trình định lượng điều phản ảnh thực tế tác dụng cao dịch chiết Bạch truật lại tốt đơn chất riêng biệt Kiểm soát chất nhỏ có lợi ích trường hợp CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung bạch truật 1.1.1 Tên khoa học Bạch truật có tên khoa học Atractylodes macrocephala Koidz thuộc họ Cúc (Compossitae) [1] 1.1.2 Mô tả thực vật, phận dùng Đặc điểm: Cây thảo, sống lâu năm, có thân rễ to, mọc đất Thân thẳng, cao 0.3-0.8m, đơn độc phân nhánh phận trên, phần thân hóa gỗ Lá mọc cách, dài Lá phần thân có cuống dài, phần có cuống ngắn, gốc rộng, bọc lấy thân Phiến xẻ sâu thành thùy, thùy lớn, hình trứng trịn, hai đầu nhọn, hai thùy bên nhỏ hơn, hình trứng mũi mác, phần gốc không đối xứng Các gần thân có phiến ngun, hình thn hình trứng mũi mác, mép có cưa Đầu lớn, phần có bắc hình xẻ sâu, hình lơng chim Bao hình chng, có bắc mỏng xếp thành hàng Lá bắc nhỏ hình trứng tam giác, to dần phía Hoa nhiều, tràng hình ống, phần màu trắng, phần màu đỏ tím, xẻ làm thùy hình mũi mác, xoắn ngồi Năm nhị hàn liền (có nhị bị thối hóa), nhị hình sợi dẹp Bầu thon mặt ngồi có lơng nhung, màu nâu nhạt, đoạn có lơng hình lơng chim Vịi hình màu tím nhạt đầu nhị xẻ thành thùy nơng hình đầu, mặt ngồi có lơng ngắn Quả bế, thuôn, dẹp, màu xám [2] Bộ phận dùng làm thuốc: Dùng thân rễ cứng chắc, có dầu thơm nhẹ, ruột màu trắng ngà [2,10] 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến Phân bố: Bạch truật trồng chủ yếu Trung Quốc Đến năm 1970, Bạch truật bắt đầu di thực trồng Lào Cai, Sơn La, Hà Giang, Hà Nội Lâm Đồng [2,10] Thu hái sơ chế: Cây trồng bạch truật thu hái từ cuối tháng 10 đến đầu tháng 11 (thường từ 8-22/11) Lúc thu hoạch, chọn ngày nắng ráo, đất khô, nhổ nhẹ nhàng Sau nhổ, lấy dao cất bỏ thân đem củ chế biến [1,10] CHƯƠNG - KẾT QUẢ 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III 3.1.1 Xác định bước sóng phát chất chuẩn Atractylenolide III Tiến hành khảo sát với mẫu chuẩn Atractylenolide III với nồng độ 6.5µg/ml điều kiênh cột Supleco C18, tốc độ dòng 1ml/phút, chế độ chạy sắc ký gradient dung môi ACN từ 20 đến 80% 60 phút Kết thu hình A B Hình 3: Sắc ký đồ HPLC bước sóng hấp thụ cực đại Atractylenolide III đó: A – sắc ký đồ chất chuẩn bước sóng 1- 254nm 2- bước sóng 220nm; B – Bước sóng hấp thụ cực đại Kết nhận xét: Chúng ta thấy mẫu hấp thụ cực đại bước sóng 220nm Dựa vào sắc ký đị, chúng tơi thấy chất chuẩn Atractylenolide III mà chúng tơi sử dụng hồn tồn theo tiêu chuẩn nhà sản xuất với độ tinh khiết 98% 3.1.2 Xây dựng điều kiện sắc ký mẫu Bạch truật HPLC-DAD Chuẩn bị mẫu thử với phương pháp xử lý mẫu nêu dung môi Ethanol 96% Tiến hành sắc ký kháo sát pha động với điều kiện sắc ký khảo sát pha động với cột pha đảo Supleco C18, tốc độ dòng ml/phút, thể tích tiêm mẫu 20µl, nhiệt độ phòng 25 C chế độ chạy đẳng dòng Kết thu bảng 3: 15 Bảng 3: Kết sắc ký đồ khảo sát hệ dung môi pha động với chương trình Hệ dung mơi Sắc ký đồ chạy đẳng dịng HPLC-DAD, bước sóng phát 220nm Hệ 1: Thời gian MeOH Dataf ile Name:Et-AMTQ.2.lcd m AU 220nm, 4nm 200 0-15 150 50 0 0.0 2.5 5.0 7.5 10 12 100 tR=13,044 Dataf ile Name:EtOH-AM-ACN-20-80.lcd Hệ 2: m AU 254nm, 4nm 5.0 Thời gian 0-30 Hệ 3: CAN 0.0 5.0 10 015 20 25 30 2.5 tR= 27,481 20 Datafile Name:n-hexan-AM-ACN gradient 45-50.lcd 0.0 mAU 100 220nm,4nm 75 50 25 Thời gian 0-30 Hệ 4: 0.05.0 CAN 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 tR= 19,835 45 Dataf ile Name:Et-AM-43ACN.5.lcd mAU 25 220nm, 4nm 20 Thời gian CAN 0-30 43 5.0 10 15 10 tR (phút): Thời gian lưu hoạt chất cần phân tích Atractylenolide III 0.0 15 tR= 23,356 20 25 Kết quả: Chúng thấy hệ dung môi ACN Nước tỷ lệ 43:57 cho sắc ký đồ tốt nhất, phân tách rõ ràng, pic khơng có tượng kéo đi, thời gian lưu đủ dài để rửa giải không làm pic chồng lên 3.1.3 Xác định điều kiện tối ưu hóa xử lý mẫu Chúng tơi tiến hành xử lý mẫu bạch truật với dung môi Nước, Ethanol 30%, 50%, 70%, 96%, Methanol n-hexane, phương pháp siêu âm Từ kết chạy sắc ký lỏng hiệu cao với mẫu xử lý trên, thấy việc xử lý mẫu dung môi Ethanol 96% tốt Tiếp theo, tiến hành xử lý mẫu bạch truật với dung dịch Ethanol 96% chiết phương pháp siêu âm lần Kết thu bảng Bảng 4: Kết diện tích pic lần chiết mẫu bạch với Ethanol 96% phân tích HPLC-DAD Lần chiết S pic Lần 216030 Lần 24229 Lần Kết quả: Sau lần chiết, hàm lượng dược chất dược liệu hết hoàn toàn Lần chiết thứ 2, diện tich pic 1/10 diện tích pic chiết lần Nhận xét: Từ kết trên, lựa chọn phương pháp chiết sau âm mẫu Bạch truật lần 3.1.4 Điều kiện chạy sắc ký HPLC Dựa vào nghiên cứu trên, xác định điều kiện chạy sắc ký sau: - Cột pha đảo Supleco C18 (5µm, 250 x 46mm) - Tốc độ dòng ml/phút - Nhiệt độ phịng 25 C - Bước sóng 220 nm - Pha động đẳng dòng với hệ dung môi ACN Nước (43:57) 30 phút Các thông số peak trình bày bảng Bảng 5: Các thông số HPLC đánh giá Atractylenolide III STT Thông số đánh giá Thời gian lưu, tR Diện tích pic (ứng với dung dịch chuẩn có nồng Giá trị 23,356 2452822 độ 26µg/ml) Độ phân giải, R 26,054 Hệ số kéo đuôi pic 1,244 Số đĩa lý thuyết 1662,6 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 3.2.1 Tính đặc hiệu phương pháp Tiến hành phân tích mẫu: Dung dịch Atractylenolid III chuẩn, dung dịch mẫu thử, dung dịch mẫu thử thêm chuẩn dung dịch mẫu trắng với điều kiện phân tích HPLC trình bày trên, thu kết đánh giá sắc ký đồ tương ứng hình Hình 4: Sắc ký đồ HPLC đánh giá độ đặc hiệu phương pháp đó: 1Mẫu trắng; 2- Mẫu thử; 3-Mẫu thử thêm chuẩn; 4- Mẫu chuẩn Kết nhận xét: Trên sắc ký đồ thu cho thấy, thời gian lưu mẫu Atractylenolid III mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn tương ứng với mẫu trắng khơng có Pic Atractylenolid III khơng bị trùng với pic khác Phương pháp xây dựng phù hợp với chất Atractylenolide III cần phân tích 3.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Chúng tiến hành chạy với điều kiện xây dựng Dựa vào diện tích pic chất nền, chúng tơi tiến hành pha lỗng dung dịch chuẩn đến S/N= 2-3 pha lỗng thêm lần S/N không nằm khoảng giới hạn Hình 5: Sắc ký đồ HPLC Atractylenolide III với nồng độ 0,065µg/ml 0,65µg/ml giá trị giá trị giới hạn phát LOD, từ suy giới hạn định lượng LOQ Kết nhận xét: Tại nồng độ 0.065 µg/ml tỷ lệ S/N tương ứng Từ chúng tơi suy kết LOD với tỷ lệ tín hiệu nhiễu S/N=3 giá trị LOD = 0,039µg/ml Kết thu sau: - Giới hạn phát (LOD): 0,039 (µg/ml) - Giới hạn định lượng (LOQ): 0,117 (µg/ml) 3.2.3 Độ tuyến tính Tiến hành chạy sắc ký dãy dung dịch chuẩn Atractylenolide III có nồng độ từ 104µg/ml đến 1,625µg/ml với điều kiện xây dựng Kết khảo sát nồng độ diện tích pic dung dịch Atractylenolide tương ướng bảng Bảng 6: Kết độ tuyến tính phương pháp HPLC định lượng Atractylenolide III với dãy nồng độ chuẩn Nồng độ (µg/ml) Diện tích pic (mAU.s) Nồng độ tính lại từ đường chuẩn (µg/ml) 1.625 120783 2,487 3.25 243363 3,824 6.5 587771 7,580 13 1111158 13,287 19.5 1643712 19,095 26 2188350 25,034 32.5 2797135 31,673 52 4468481 49,899 104 9566241 105,490 Phương trình đường y= 91701x – 107362 0, 9987 R Hình 6: Đường chuẩn biểu diễn m ối quan hệ nồng độ diện tích pic mẫu chuẩn Atractylenolide III 2 Kết nhận xét: Độ tuyến tính đánh giá qua hệ số tương quan R R = 0,9987 cho thấy đường chuẩn có độ tuyến tính cao đảm bảo để thực phép phân tích định lượng Atractylenolide III 3.2.4 Tính thích hợp hệ thống Tính thích hợp hệ thống thực sắc ký tiêm lần với mẫu chuẩn nồng độ 26µg/ml Kết đánh giá thơng qua giá trị độ lệch tương đối RSD (%) diện tích pic thời gian lưu sau lần phân tích lặp lại mẫu chuẩn Atractylenolide III có nồng độ 26 µg/ml Kết trình bày bảng7 Bảng 7: Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu chuẩn nồng độ 26µg/ml STT Diện tích pic ( mAU.s) Thời gian lưu ( phút ) 2611305 23,169 2572585 23,152 2604363 23,363 2626525 23,398 2687905 23,445 Trung bình 2620537 23,305 RSD (%) 1,621 0,582 Kết nhận xét: Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) diện tích pic thời gian lưu nhỏ 2%, kết cho thấy tính thích hợp phương pháp xây dựng đạt 3.2.5 Độ lặp lại Độ lặp lại đánh giá theo phương pháp trình bày Độ lặp lại đánh giá thông qua sô độ chệch tương đối (RSD) hàm lượng dược chất dược liệu 2% Kết thu trình bày bảng Bảng 8: Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu bạch truật chiết với Ethanol 96% Lần Lần Lần Lần Lần Khối lượng dược liệu (g) 0,2019 0,1975 0,1532 0,1989 0,1512 Hàm lượng Atractynolide III (%) 0,0822 0,0800 0,0789 0,0805 0,0808 TB hàm lượng (%) 0,0836 RSD (%) 1,2691 Kết nhận xét: Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) 2% cho thấy phương pháp xây dựng có độ lặp lại cao 3.2.6 Độ Độ đánh giá theo phương pháp trình bày Độ đánh giá qua độ thu đồ dược chất cần phân tích Atractylenolide III 98-102% theo quy định ICH độ lệch chuẩn tương đối (RSD) lần lặp lại mẫu đánh giá độ thu hồi 2% Kết trình bày bảng Bảng 9: Kết đánh giá độ thu hồi phương pháp định lượng mẫu thử thêm chuẩn Atractylenolide III Nồng độ Nồng độ Nồng độ thêm Nồng độ dược dược chất thêm chuẩn mẫu chuẩn chất thu hồi (µg/ml) (µg/ml) (µg/ml) 19,5 24,2 23,9 Độ thu hồi RSD (µg/ml) (%) (%) 44,080 19,8801 101,95 44,097 19,8970 102,04 44,021 19,8209 101,65 47,711 23,5112 98,37 0,20 1,79 47,974 23,7744 99,48 29,39 49,027 24,3452 101,86 54,204 29,9667 101,96 54,084 29,8840 101,68 54,067 29,8671 101,62 0,19 Kết nhận xét: Độ thu hồi trung bình phương pháp định lượng Atractylenolide III dược liệu bạch truật sắc ký lỏng hiệu cao HPLC đạt khoảng 98-102%, chứng tỏ phương pháp xây dựng có độ cao 3.3 Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng dược chất củ bạch truật Phân tích hàm lượng Atractylenolide III mẫu dược liệu Việt Nam Trung Quốc phương pháp xây dựng Kết trình bày bảng 10 so sánh sắc ký đồ hai mẫu bạch truật Việt Nam truật Trung Quốc hình Bảng 10: Kết xác định hàm lượng Atractylenolide III mẫu bạch truật Việt Nam Trung Quốc Mẫu Tên Mẫu Hàm lượng Atractylenolide III(%) Mẫu Việt Nam M1 0,0628 Mẫu Trung Quốc M2 0,0822 B A Hình 7: Sắc ký đồ phân tích Atractylenolide III mẫu Bạch truật HPLCDAD A- Bạch truật Việt Nam, B- Bạch truật Trung Quốc Medici ne of Hình 8: Phổ hấp thụ UV thành phần khác mẫu bạch truật Việt Nam Nhận xét: Dựa vào kết cho thấy bạch truật trồng Việt Nam Trung Quốc có hàm lượng Atractynolide III 0,06 0,08%, tương ứng So sánh phổ đồ, bạch truật Việt Nam xuất số pic khác (UV hình 8), điều cho thấy, bạch truật Việt Nam cần số nghiên cứu khác thành phần hóa học Điều lý giải áp dụng điều kiện chạy dược điển Hồng Kông lại thất bại mẫu dược liệu Việt Nam CHƯƠNG - BÀN LUẬN Trong nghiên cứu này, phương pháp định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật xây dựng thẩm định Trong đó, điều kiện pha động HPLC-DAD MeOH :H2O có tỷ lệ 43 :57 Độ xác phương pháp đạt sau thẩm định theo hướng dẫn ICH Kết áp dụng phương pháp vừa xây dựng cho thấy Atractynolide III mẫu trồng Việt Nam thấp Trung Quốc Do mẫu thu thập bị giới hạn số lượng, cần nghiên cứu với cỡ mẫu lớn để khẳng định chắn khác biệt Tuy nhiên, giá trị thu cao nhiều lần yêu cầu dược điển Hồng Kông yêu cầu 0,019% Chứng tỏ, bạch truật thu hái Việt Nam có đủ điều kiện thâm nhập thị trường dược liệu Hồng Kông, nơi cửa ngõ giao thương bên vào Trung Quốc nhiều nơi khác giới Bên cạnh đó, hai phổ đồ thu thể rõ khác biệt peak phụ Điều cho thấy tiềm sinh học thành phần hóa học trồng Việt Nam chưa khám phá hết Mặt khác, điều gây khó khăn khơng thể áp dụng dược điển Hồng Kơng phân tích mẫu Bạch truật Việt Nam Phương pháp phân tích vừa xây dựng áp dụng tốt cho đối tượng Dược liệu nguồn gốc từ Trung quốc Từ đó, đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu thành phần hóa học tác dụng dược lý bạch truật Việt Nam Và nghiên cứu sau tập trung tăng số lượng mẫu để đưa giới hạn hàm lượng Atractynolide III tiêu chuẩn sở bạch truật trồng Việt Nam KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Điều kiện phân tích HPLC Atractynolide III mẫu bạch truật sau: - Hệ dung môi: ACN: nước (43: 57) - Cột sắc ký pha đảo: Supleco C-18(5µm, 250 x 4,6mm) - Thể tích tiêm mẫu: 20 µl - Bước sóng cực đại: 220 nm - Thời gian sắc ký: 30 phút Bạch truật thu hái Việt Nam có hàm lương Atractynolide III 0,06% Trung Quốc 0,08% Phổ đồ Bạch Truật Việt Nam có quan sát thấy khác biệt với Trung Quốc peak phụ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam Bạch truật IV, Nhà xuất Y học, pp 693 - 694 [2] Bộ Khoa học cơng nghệ (2007), Thực vật chí Việt Nam họ Cúc tập 7, Nhà xuất Khoa [3] Trường Thụ Sinh (2012) , Trung Dươc Lâm Sàng, Nhà xuất Y học, pp 314 – 316 [4] Viện Dược Liệu (1993), Tài nguyên thuốc Việt Nam Bạch truật, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật liệu, pp 360 – 382 [5] Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hoá học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật, pp.10-59 Tiếng Anh [6] Bilal Yilmaz, Emrah Alkan (2015), “Spectrofluorometric and Spectrofluorometric and UV Spectrofluorometric Methods for the Determination of Flurbiprofen in Pharmaceutical Preparations”, Journal of Pharmaceutical Analysis, 4(4) [7] Bo Zhu (2018), “The traditional uses, phytochemistry, and pharmacology of Atractylodes macrocephala Koidz”, Journal of ethnopharmacology [8] Brian A Bidlingmeyer (1992), Practical HPLC Methodology and Applications, Wiley Series in Engineering and Technology Management, pp 67 – 103 [9] Danilo Corradini (2016), Handbook of HPLC second edition, Chromatographic science serie [10] Chinese Pharmacopoeia Commission (2015), Pharmacopoeia of the peoples republic of China – English Edition(2015), Chemical Industry Press, pp 524 – 526 [11] Elsevier Science (2017), “Application of Atractylodes Macrocephala Koidz Extract in Meth [12] George Lunn, Norman R Schmuff (2000) - HPLC Methods for [13] Hao Kai (2012), “Study on chemical fingerprinting of crude and processed Atractylodes macrocephala from different locations in Zhejiang province by reversed-phase high-performance liquid chromatography coupled with hierarchical cluster analysis”, Pharmacognosy magazine, 8(32) [14] Hildebert Wagner, Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines: Thin-layer [15] Hson-Mou Chang(1986), Pharmacology and Applications of Chinese Materia Medica, Wo and [16] Kokane Vikrant (2014), “Formulation and evaluation of topical flurbiprofen gel using different gelling agents”, World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(9), pp 654 - 663 [17] Jiaju Zhou (2003), Traditional Chinese Medicines: Molecular Structures, Natural Sources and Applications, Wiley, pp 235 - 242 [18] Joel K Swadesh (2000), HPLC: Practical and Industrial Applications, Second Edition CRC P [19] Lena Ohannesian (2001), Handbook of Pharmaceutical Analysis, CRC Press, [20] Monika Waksmundzka-Ha nos, Joseph Sherma (2010), High Performance [21] Murray, Kermit K., et al (2013), "Definitions of terms relating to mass spectrometry (IUPAC Recommendations 2013)", Pure and Applied Chemistry, 85(7), pp 1515-1609 [22] The Europaean Pharmacopieal Commission (2010), Pharmacopoeia Europaea th Edition vol 2, Maisonneuve, pp, 1047 – 1050 [23] The government of Hong Kong Special Administrative region (2002), – 273 [24] Toshihiko T Hanai (2007), HPLC: A Practical Guide, Royal Society of Chemistry, pp 11 – 29 [25] United States Pharmacopoeial Convention (2010), United States Pharmacopoeia 35th Edition, United States Pharmacopeial Convention, pp 970 – 973 and [26] hizao (2018), “UPLC-MS/MS of Atractylenolide I, Atractylenolide II, Atractylenolide III, an [27] Weici Tang, Gerhard Eisenbrand (2013), Chinese Drugs of Plant Origin: Chemistry, Pharmacology, and Use in Traditional and Modern Medicine, Springer Science & Business Media, pp.199 – 201 ... lượng Atractylenolide III thân rễ Bạch truật phương pháp HPLC- DAD - Ứng dụng phương pháp để định lượng hàm lượng Atractylenolide III mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc Lựa chọn chất nghiên cứu Atractylenolide. .. 1.4 Các nghiên cứu định lượng Atractylenolide III bạch truật Trong nghiên cứu nhóm tác giả Hao Cai đồng nghiệp vào năm 2012 định lượng hai hoạt chất Bạch truật Atractynolid I Atractynolid III với...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực : NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR