SEMINAR xác định hàm lượng melamine trong sữa (dược PHÂN TÍCH)

CHUYÊN ĐỀ: PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO NỘI DUNG BÁO CÁO • ĐẶT VẤN ĐỀ • SƠ LƯỢC VỀ MELAMINE • PHÂN TÍCH MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO • KẾT LUẬN • TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ • Hiện nay, chất lượng thực phẩm điều gây lo ngại cho nhiều người Vì lợi ích cá nhân số người sử dụng chất cấm cho vào thực phẩm để tăng lợi nhuận • Melamine sử dụng sản xuất plastic, phân bón, thuốc trừ sâu,… nhiên, hãng sản xuất sữa bổ sung chất vào để làm gia tăng hàm lượng protein, tăng lợi nhuận Sử dụng sữa có hàm lượng melamine vượt qua mức cho phép gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người Do đó, cần thực việc phân tích hàm lưỡng melamine sữa để đảm bảo chất lượng sữa trước đưa vào thị trường tiêu thụ Sơ lược melamine Tính chất lí hố melamine (C3H6N6) − Là hợp chất hóa học tan nước, trắng đục sữa − Là non-protein nitrogen, khơng có tác dụng dinh dưỡng chất đạm − Trong thể melamine bị thủy phân vi khuẩn chuyển hóa thành Cyanuric acid Nguồn: vi.wikipedia.org Sơ lược melamine Ảnh hưởng melamine tới sức khoẻ • Mắt , da đường hơ hấp tiếp xúc lâu dài với melamine gây ung thư, ảnh hưởng đến phận sinh sản • Trong thận (pH= 4.5-8), melamine acid cyanuric kết hợp tạo muối Melamine cyanurate, hình thành sỏi Hình 2: Sỏi thận melamine Sơ lược melamine Nồng độ melamin cho phép thực phẩm: Nồng độ melamine an toàn cho người Theo chuyên gia an toàn thực phẩm giới, nồng độ melamine dung nạp hàng ngày chấp nhận (tolerable daily intake hay TDI) 0.5 mg/kg cân nặng Ở Mĩ, cục quản lí thực phẩm dược phẩm (FDA) đề nghị TDI 0.63 mg/kg cân nặng  Nồng độ an toàn cho sữa thực phẩm - Với sữa nước dành cho trẻ em: tối đa 0,15 mg/kg - Với sữa bột dành cho trẻ em : mg/kg - Với thức ăn cho động vật thực phẩm khác: 2,5 mg/kg Đó tiêu chuẩn Ủy ban luật quốc tế chất lượng an tồn thực phẩm LHQ (CAC) cơng bố ngày 5/7/2012 Đối tượng phân tích Đối tượng * Melamine sữa Hình 1: Sữa có melanin Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC (high performance liquid chromatography- HPLC) phương pháp chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh chứa cột chất rắn phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang biến liên kết hóa học với nhóm chức hữu HPLC phương pháp xét nghiệm melamine thực phẩm sử dụng phổ biến giới từ lâu, trung tâm xét nghiệm melamine Việt Nam sử dụng phương pháp Ưu điểm nhược điểm phương pháp Ưu điểm: -Độ xác cao -Độ nhạy cao -Thời gian tiến hành ngắn -Không tốn lao động -Giới hạn phát thấp -Phương pháp đơn giản Nhược điểm: - Chi phí đầu tư thiết bị ban đầu tốn Hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao Hình 3: Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao gồm có phận sau: 1: Bình chứa pha động 2: Bộ phận khử khí 3: Bơm cao áp 4: Bộ phận tiêm mẫu 5: Cộ sắc ký (pha tĩnh) 6: Đầu dò 7: Hệ thống máy tính có phần mềm ghi nhận tín hiệu, xử lý liệu điều khiển hệ thống 8: In liệu Phân tích melamine sữa phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Dụng cụ, thiết bị hóa chất Điều kiện quy trình Quy trình thực Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Đường chuẩn Sắc ký đồ Độ xác Kết khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp Dụng cụ, thiết bị hoá chất Dụng cụ: − Đầu dò UV, cột C18 (150mm x 3.2mm ID, kích thước hạt µm) − Máy sắc ký lỏng HPLC/UV – LC 20A (Shimadzu) − Cột sắc kí lỏng pha đảo C18 màng lọc 0,45µm − Máy li tâm, bể rung siêu âm − Bình định mức, loại pipet vạch, pipet bầu, cốc mỏ,… − Micropipet loại − Syranh lọc mẫu Dụng cụ, thiết bị hoá chất Hoá chất: − Chất chuẩn: Melamine (99,0%) − Dung môi rửa giải: Trifluoroacetic Methanol − Mẫu thử : sữa dạng bột − Nước sử dụng cho việc chuẩn bị pha động pha loãng lọc hệ thống Q-pod Millipore − Dung mơi 50% methanol Dụng cụ, thiết bị hố chất Dung dịch chuẩn: Điều kiện quy trình •  - Cột hấp phụ: Venusil ASBC8 (cột chưa silicac) kích thước 4.6x250mm; pha động: buffer : acetonitrile = 85:15; buffer: 10mM citricacid, 10mM sodiumoctane, pH = 3.0 ; tốc độ chảy : 1ml/min - Bước sóng tia UV : 240nm - Nhiệt độ : 40 - Máy dò : DA ( diodearray) Xử lý mẫu − Cho 1,0 g (mẫu khơ) vào bình định mức 100 ml + 10 ml dd  melamine 1000 µgmL-1 + 50 ml dd methanol 50% Rung siêu âm 30 phút − Làm lạnh nhiệt độ phòng, thêm vào dd methanol 50% thu 100ml dd hỗn hợp chứa melamine 100 µgmL-1 − Li tâm mẫu ( ≥ 3200 rpm) , lấy phần dung dịch phía ống (5 ml) chuyển sang bình định mức 50ml, lên thể tích 50 ml dd methanol 50% − Mẫu lọc qua lọc 0.45 µm (Acrodisc, 25mm, màng Nylon) − Nghiên cứu dịch lọc lọc hấp thụ melamine mức sau: 22% (cho 1ml ban đầu), 10% (2 mL),