SEMINAR xác ĐỊNH hàm LƯỢNG CAFEIN (dược PHÂN TÍCH)

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAFEIN TRONG CÂY CAFE BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) – PHƯƠNG PHÁP CHUẨN I ĐẶT VẤN ĐỀ  Café thức uống quen thuộc với người, phổ biến tồn giới Café sử dụng lần đầu vào kỉ     Café mang lại cảm giác hưng phấn cho người uống Vậy cảm giác hưng phấn đến từ đâu? Câu trả lời nằm thành phần hạt café: cafein Cafein chất kích thích tìm thấy số loại hạt, trái cây,… nhiên nguồn cung cấp cafein chủ yếu từ cà phê loại trà  Cung cấp lượng cafein vừa đủ cho thể có nhiều tác dụng hữu hiệu Ngồi cafein chất có tác dụng kích thích hệ thần kinh trung ương làm cho tỉnh táo, kích thích khả làm việc, đặc biệt làm việc trí óc, tăng cường hoạt động  Vậy cafein xác định nào, thuyết trình nhóm hơm xin đưa phương pháp “XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAFEIN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) – PHƯƠNG PHÁP CHUẨN” II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu: Caffein chiết xuất từ café sản phẩm café: cà phê nhân, cà phê, bột có cà phê, cà phê hòa tan, hỗn hợp hòa tan… Dấu hiệu nhận biết cafein: • Cơng thức: C8 H10 N4 O2 • • • • • Caffein dạng tinh thể, không màu, không mùi, vị đắng Khối lượng mol: 197.19 g/mol Nhiệt độ nóng chảy 2380C Tan nhiều nước nóng chloroform tan 1Phần rượu Cafein có vị đắng tạo hiệu ứng sinh lý dễ nhận biết Chúng sử dụng nhiều công nghiệp sản xuất đồ uống Cafein có khả tồn lâu máu bị thăng hoa 178 oc nên tổn thất nhiều sấy Trang thiết bị Cân phân tích, có khả cân xác đến ± 0,1 mg Bộ lọc màng, cỡ lỗ 0,45 µm, để lọc pha động dịch chiết mẫu pha loãng Máy sắc ký lỏng hiệu nâng cao Cột sắc ký dùng cho HPLC Máy khuất từ Bể siêu âm Xiranh microlit Máy xay cà phê Máy xay với bánh xe có Sàng Bình định mức vạch Pipet Trang thiết bị Cột sắc ký Hóa chất Thuốc thử: Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước phù hợp với yêu cầu loại TCVN 4851 (ISO 3696) trừ có quy định khác Metanol, loại dùng cho HPLC Magie oxit (mgo), loại nặng, có chất lượng cao Cafein (1,3,7-trimetylxantin; 1,3,7-trimetyl-1H-purin-2,6(3H,7H)-dion; metyltheobrom; C8H10N4O2), dạng khan tinh khiết Pha động, 24 % phần thể tích metanol nước Dung dịch chuẩn cafein • • Dung dịch gốc, tương ứng với 200 mg/l Dung dịch chuẩn pha lỗng cà phê thơng thường, tương ứng với khoảng 40 mg/l Điều kiện quy trình q trình thực • Chuẩn bị mẫu thử Cà phê nhân: Dùng máy nghiền để nghiền nhân cà phê nhân cho 50 % phần khối lượng mẫu lọt qua sàng Sau lấy mẫu thử từ toàn cà phê bột trộn kỹ Cà phê rang Dùng máy xay để xay nhân cà phê rang cho 50 % khối lượng lọt qua sàng Dùng ln cà phê rang xay bao gói bán sẵn mà khơng cần xử lý thêm đồng hóa mẫu Cà phê hòa tan: Đối với cà phê hòa tan khơng cần xay • Đồ uống hỗn hợp: Dùng máy xay, đồng hóa bột uống cà phê hỗn hợp trước chiết để tránh bị tách rời Cách tiến hành • Phép xác định tùy chọn chất khơ cà phê : Tính hàm lượng chất khơ cà phê từ độ ẩm xác định phần mẫu thử theo: - TCVN 6928 (ISO 6673) cà phê nhân, - TCVN 9721 (ISO 11817) cà phê rang, - TCVN 5567 (ISO 3726) cà phê hịa tan • Phần mẫu thử Cà phê rang cà phê nhân: Dùng cân ,cân khoảng g mẫu thử (cà phê nhân, cà phê rang) xác đến miligam chuyển vào bình định mức 250 ml Cà phê hòa tan: Dùng cân,cân khoảng 0,5 g mẫu thử (cà phê hịa tan) xác đến miligam chuyển vào bình định mức 250 ml Đồ uống hỗn hợp: Dùng cân ,cân khoảng g mẫu thử (đồ uống hỗn hợp) xác đến miligam chuyển vào bình định mức 250 ml Chiết cafein o Thêm g magie oxit khoảng 200 ml nước vào phần mẫu thử (cà phê: rang, nhân, hỗn hợp,hòa tan) đựng bình định mức Đặt bình vào nồi cách thủy trì điểm sơi chờ dung dịch đạt đến 90 oc Tiếp tục gia nhiệt bình nồi cách thủy 20 min, trộn lượng chứa bình cách khuấy lắc bình Lấy bình khỏi nồi cách thủy, làm nguội đến nhiệt độ phòng vòi nước thêm nước đến vạch Chờ chất rắn lắng xuống o Lấy phần dịch lỏng phía lọc qua lọc cỡ lỗ 0,45 µm, loại bỏ vài mililit Dịch lọc dùng để tách HPLC Tiến hành phân tích máy Chỉnh thiết bị: Cài đặt máy sắc ký theo dẫn nhà sản xuất chỉnh sau: • • tốc độ dịng pha động : 1,0 ml/min; detector UV cài đặt 272 nm (hoặc 254 nm trường hợp detector có lọc) Đảm bảo phạm vi nhạy detector phù hợp với pic dung dịch chuẩn (trong trường hợp nhiều chất chuẩn, theo pic cao nhất) Phân tích HPLC Khi tốc độ dòng pha động áp suất tương ứng ổn định, hệ thống cân 10 Sau bơm 10 µl dung dịch chuẩn lên cột, dùng xyranh microlit, lần chạy sau đó, bơm tiếp thể tích tương tự dịch chiết mẫu Khi sử dụng dung dịch chuẩn đơn lẻ, bơm với khoảng cách đặn (thông thường sau sáu lần bơm dịch chiết mẫu bơm lần) Sau mẻ phân tích, rửa kỹ hệ thống sắc ký với cột metanol 50 % thể tích nước, đậy nút cột để bảo quản không tiếp tục dùng Tiến hành phân tích máy Đo quang phổ III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN: Kết • Độ chụm Bảng – Giá trị trung bình, giới hạn lặp lại giới hạn tái lập Giá trị trung bình Giới hạn lặp lại R Giới hạn tái lậpR % phần khối lượng % phần khối lượng % phần khối lượng 0,057 0,004 0,009 0,075 0,003 0,006 1,14 0,05 0,15 2,18 0,096 0,37 Mẫu/sản phẩm Cà phê nhân Cà phê tách cafein (decaf) Cà phê tách cafein Cà phê chè (arabica) thông thường Cà phê vối (robusta) thông thường Cà phê rang Cà phê tách cafein 0,055 0,007 0,026 0,642 0,054 0,091 1,22 0,053 0,176 0,024 0,068 0,072 0,004 0,024 0,109 0,008 0,030 2,51 0,050 0,23 3,19 0,085 0,372 0,066 0,216 Hỗn hợp cà phê thông thường/ cà phê tách cafein Cà phê thơng thường Bột uống có thành phần cà phê Cà phê kiểu cappuccino 0,403 Cà phê hòa tan Cà phê tách cafein Cà phê tách cafein Cà phê đông khô thông thường Cà phê kết tụ thơng thường Hỗn hợp cà phê hịa tan Cà phê/chicory 2,45 • Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử nghiệm độc lập, đơn lẻ thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử, phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % (nghĩa độ lặp lại xác suất 95 %) trường hợp vượt giá trị giới hạn lặp lại, r, nêu Bảng • Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm đơn lẻ thu sử dụng phương pháp, tiến hành thử vật liệu giống thử hệt nhau, phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % (nghĩa độ tái lập xác suất 95 %) trường hợp vượt giá trị giới hạn tái lập, R, nêu Bảng Bàn luận: Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thơng tin sau: • • • • • Mọi thơng tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu; Phương pháp sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; Kết thử nghiệm thu được; Nếu kiểm tra độ lặp lại, nêu kết cuối thu được; Mọi chi tiết thao tác khác với quy định tiêu chuẩn tùy chọn cố ảnh hưởng đến kết thử nghiệm  ... việc, đặc biệt làm việc trí óc, tăng cường hoạt động  Vậy cafein xác định nào, thuyết trình nhóm hơm xin đưa phương pháp “XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CAFEIN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) – PHƯƠNG... café: cafein Cafein chất kích thích tìm thấy số loại hạt, trái cây,… nhiên nguồn cung cấp cafein chủ yếu từ cà phê loại trà  Cung cấp lượng cafein vừa đủ cho thể có nhiều tác dụng hữu hiệu Ngồi cafein. .. trước chiết để tránh bị tách rời Cách tiến hành • Phép xác định tùy chọn chất khơ cà phê : Tính hàm lượng chất khơ cà phê từ độ ẩm xác định phần mẫu thử theo: - TCVN 6928 (ISO 6673) cà phê nhân,