SEMINAR xác định dư lượng chloramphenicol (dược PHÂN TÍCH)

XÁC ĐỊNH hÀM LƯỢNG KHÁNG SINH CHLORAMPHENICOL TRONG THỊT GÀ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ Danh sách sinh viên Nội dung II Đối tượng I Đặt vấn đề phương pháp thực III Tính tốn kết IV Kết luận I Đặt vấn đề Biểu đồ: Sản lượng chăn nuôi giai đoạn 2000-2008 (đơn vị: ngàn tấn) * https://vietfeed.wordpress.com I Đặt vấn đề Trị bệnh Thúc đẩy tăng Phòng bệnh trưởng Kháng sinh I Đặt vấn đề Vật nuôi Người sử Môi trường dụng Tồn dư kháng sinh Đề tài khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh chăn nuôi dư lượng kháng sinh thịt quầy thịt gà Tp Hồ Chí Minh PGS.TS Nguyễn Ngọc Hải Khoa CNTY, trường ĐH Nông Lâm II Đối tượng phương pháp thực Đối tượng Các mẫu thịt gà bán quầy thịt địa bàn Quận Thủ Đức Các đối tượng phân tích thành phần để lựa chọn mẫu đại diện để chạy sắc ký Phương pháp thực 2.1 Dấu hiệu nhận biết chloramphenicol 2.3.2 Quá trình thực a b c d Cân 10g mẫu Thêm chuẩn hỗn hợp KS CAP 20ml dung dịch Etylacetat a Tối ưu hóa điều kiện xử lý mẫu Đồng Chiết lặp với 10ml Lắc vortex phút Etylacetat Ly tâm 6.000v/phút phút Gạn lớp bình quay 100ml, cô quay tới cạn 40°C Phần rắn Hòa phần rắn 12ml NH44COO-CH3 4% Loại chất béo 5ml n –hexan, chiết lặp lại lần Qua cột chiết pha rắn C18 • • • • Hoạt hóa 3ml H22O 3ml Methanol Nạp mẫu Rửa tạp chất 2ml H22O Rửa giải 3ml Methanol LC-MS/MS b Tối ưu hóa điều kiện phân tích CAP máy LC-MS/MS Kháng sinh nhóm phenicol có khối lượng phân tử độ phân cực trung bình Để tối ưu hóa điều kiện khối phổ, dùng pipet 500µl bơm chuẩn CAP 10ng/ml vào detector để khảo sát Tối ưu hóa ion mẹ chỉnh tối ưu điều kiện chạy ESI bảng Phổ khối CAP hệ LC/MS nghiên cứu c Tối ưu điều kiện sắc ký  Lựa chọn cột phân tách CAP có độ phân cực trung bình, nên lựa chọn an toàn cho hệ pha động máy khối phổ dung môi phân cực vừa methanol, acetonitril, nước, acid formic (< 1%), amoniacetat (< 1%) Lựa chọn dung mơi thường tn theo tính kinh tế tính phù hợp với phịng thí nghiệm  Hệ pha động phương pháp gradient Pha động ảnh hưởng lớn đến trình tách chất q trình ion hóa tín hiệu chất phân tích Q trình ion hóa tối ưu hệ pha động có thêm chất acid acetid, acid formic…  Hệ pha động kênh A acid acetid 0,1%, CH COONH4 0,1% nước, nước; kênh B methanol acetonitril  Tỉ lệ pha động khảo sát theo chế độ: cố định tỉ lệ hai kênh pha động chế độ gradient quét từ 10% tới 100% kênh A thể tích theo thời gian Hệ pha động khảo sát methanol – CH3COOH 0,1% d Thẩm định phương pháp phân tích thơng qua việc phân tích mẫu trắng thử nghiệm phân tích mẫu thực tế d.1 Phân tích mẫu trắng Mẫu trắng: gà nuôi thức ăn tự nhiên không sử dụng kháng sinh thời gian nuôi) Tiến hành phân tích lặp lại lần thu độ thu hồi cao 80% mức nồng độ 0,5; ng/g d.2 Thử nghiệm phân tích mẫu thực tế Mẫu thực tế: lấy quầy thịt gà chợ địa bàn quận Thủ Đức 2.4 Q trình phân tích máy Nạp mẫu Hóa khí mẫu Ion hóa Phân tích ion theo số khối Bơm hút Xử lý số liệu Detector III Tính tốn kết Lập đường chuẩn Phương pháp LC-MS/MS có khoảng tuyến tính rõ rệt (tất hệ số hồi qui tuyến tính dao động khoảng từ 0,99 đến 1) Cụ thể CAP có khoảng tuyến tính từ 0,5 đến ng/g với hệ số hồi qui tuyến tính 0,9994 Khoảng tuyến tính khảo sát Phương trình đường chuẩn R² LOD (ng/g) LOQ (ng/g) Y= 6x10¯⁵x – 0,0256 0,9994 0,009 0,03 (ng/g) 0,5 – đường chuẩn CAP y (ng/g) 2.5 2.5 1.5 0.5 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 x (cm²) Độ xác  Giới hạn phát phương pháp (LOD) CAP = 0,009ng/g  Giới hạn định lượng phương pháp (LOQ) CAP = 0,03ng/g  Kết phân tích cho thấy phương pháp có độ tin cậy cao để phân tích dư lượng kháng sinh CAP thịt gà Hiệu suất thu hồi phương pháp Để đánh giá hiệu phương pháp, nghiên cứu xác định độ thu hồi phương pháp với mẫu trắng mẫu trắng thêm chuẩn ba mức nồng độ quan tâm (xung quanh nồng độ thấp khoảng tuyến tính) Kết cho thấy, phương pháp đáp ứng tốt với CAP nghiên cứu, độ thu hồi đạt 83% Các mức Spike Độ thu hồi RSD (%) 0,15 99,2 1,75 0,30 92,2 4,18 0,60 83,0 2,96 (ng/g) RSD: độ lệch chuẩn tương đối IV Kết luận Kết nghiên cứu kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ để phát dư lượng chất cấm CAP thịt gà:    Độ thu hồi đạt mẫu tương đối cao (>80%) Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) lần đo tương đối nhỏ (