Nghiên cứu thu nhận mimosine từ cây mắc cỡ

Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN THỊ XUÂN ĐÀI NGHIÊN CỨU THU NHẬN MIMOSINE TỪ CÂY MẮC CỠ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM VÀ ĐỒ UỐNG LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 08 năm 2007 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đống Thị Anh Đào Ký tên: ………………………………… Cán chấm nhận xét 1: TS Phạm Thành Quân Ký tên: ………………………………… Cán chấm nhận xét 2: TS Trần Công Luận Ký tên: ………………………………… Luận văn thạc sỹ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngày 21 tháng 08 năm 2007 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc oOo Tp HCM, ngày 10 tháng 08 nm 2007 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGUYỄN THỊ XUÂN ĐÀI Ngày, tháng, năm sinh: 26/04/1982 Giới tính : Nữ Nơi sinh: Biên Hịa – ồng Nai Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM VÀ ĐỒ UỐNG Khoá (Năm trúng tuyển): 2005 1- TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU THU NHẬN MIMOSINE TỪ CÂY MẮC CỠ - Tổng quan mắc cỡ mimosine - Nghiên cứu q trình trích ly mimosine - Định tính, định lượng, hiệu suất độ tinh cho chế phẩm mimosine 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 19/03/2007 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ : 10/08/2007 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ CHỦ NHIỆM BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn cô Đống Thị Anh Đào tận tình hướng dẫn bảo em suốt trình thực luận văn Em xin chân thành cảm ơn q thầy môn thực phẩm tạo điều kiện tốt cho em trình thực luận văn Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc thầy cô truyền đạt kiến thức quí báu suốt hai năm học qua trình làm luận văn tốt nghiệp Xin cảm ơn anh Phan Thanh Long giúp đỡ em nhiều trình làm luận văn Xin cảm ơn gia đình bạn bè nhiệt tình giúp đỡ đóng góp ý kiến để tơi hồn thành tốt đẹp luận văn Tp.HCM, 08/2007 NGUYỄN THỊ XUÂN ĐÀI LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ TĨM TẮT LUẬN VĂN Lồi thực vật Mimosa pudica L họ Mimosaceae chứa nhiều hợp chất sinh học có lợi cho thể, mimosine có ý nghĩa dược học Việc trích ly, thu nhận mimosine từ mắc cỡ để ứng dụng vào ngành khoa học khác việc làm cần thiết Trong luận văn này, chúng tơi nghiên cứu trích ly tinh mimosine từ mắc cỡ thuộc họ Mimosaceae Nguyên liệu chần 100oC phút Quá trình trích ly thực với dung mơi HCl 0,2N, pH = 2, tỉ lệ nguyên liệu (g) : dung môi (ml) 0,046, nhiệt độ 52oC thời gian 50 phút, đạt hiệu suất 84,36% Thực tinh mimosine phương pháp sắc ký cột trao đổi ion đạt độ tinh 62,86%, hiệu suất thu hồi sau qua cột 93,24% Chế phẩm mimosine thu bền điều kiện bảo quản lạnh 5oC, khơng có ánh sáng ABSTRACT Mimosa Pudica L (Mimosaceae’s family) contains a lot of good biological compounds for human body of which mimosine is very useful for medicine It’s necessary to extract and get mimosine from the sensitive plant so that it can be applied to other sciences In this research, we extracted mimosine from sensitive plant in Mimosaceae’s family and purified it The materials were boiled for minutes at 100oC While extracting, we used following materials: solvent HCl 0,2N; pH = 2, the proportion of material (g) : solvent ( ml) is 0,046, the temperature is 52oC in 50 minutes, and the productivity is 84,36% The mimosine was purified with ion exchange column chromatography to 62,86% level, the productivity is 93,24% The mimosine which we got can sustain 5oC in a dark, cool conditions LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ MỤC LỤC Nhiệm vụ luận văn Lời cảm ơn Tóm tắt luận văn i Mục lục ii Danh mục bảng v Danh mục hình vi Mở đầu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Cây mắc cỡ .2 1.1.1 Phân loại thực vật 1.1.2 Đặc điểm 1.2.3 Phân bố, sinh thái 1.1.4 Quá trình sinh sản phát triển 1.1.5 Sự lai giống 1.1.6 Thu hoạch .6 1.1.7 Thành phần hóa học .6 1.1.7 Giá trị dược lý mắc cỡ .10 1.2 Mimosine 11 1.2.1 Tính chất vật lý 12 1.2.2 Tính chất hóa học 13 1.2.3 Sự tổng hợp mimosine 15 1.2.4 Phân bố mimosine thực vật 18 1.2.5 Cơ chế gây độc mimosine 18 1.3 Q trình trích ly 23 1.3.1 Bản chất q trình trích ly .23 1.3.2 Đặc điểm q trình trích ly .23 1.3.3 Phương pháp trích ly .23 1.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng tới q trình trích ly 25 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 1.4 Sự tinh mimosine 26 1.4.1 Nguyên tắc chung 26 1.4.2 Ionit 26 1.4.3 C chế trao đổi ion 28 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .29 2.1 Nguyên liệu 29 2.1.1 Cây mắc cỡ 29 2.1.2 Chất chuẩn L - Mimosine 29 2.2 Phương pháp nghiên cứu .30 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 30 2.2.2 Sơ đồ quy trình cơng nghệ 31 2.2.3 Thuyết minh quy trình 32 2.2.4 Nội dung nghiên cứu 33 2.2.4.1 Khảo sát số tính chất mimosine 33 2.2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng thơng số trích ly mimosine đến hiệu suất trích ly mimosine từ mắc cỡ 34 2.2.4.3 Tối ưu hóa q trình trích ly mimosine .37 2.2.4.4 Nghiên cứu tinh mimosine 37 2.2.4.5 Nghiên cứu bảo quản chế phẩm .42 2.2.5 Các phương pháp phân tích 43 2.2.5.1 Phương pháp xác định độ ẩm 43 2.2.5.2 Phương pháp xác định hàm lượng tro 43 2.2.5.3 Phương pháp xác định hàm lượng mimosine 44 2.2.5.4 Phương pháp xác định độ tinh 47 2.2.5.5 Phương pháp định tính mức độ tinh quang phổ hấp thu 47 2.2.5.6 Phương pháp định tính số thành phần hoạt chất sinh học khác 48 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .51 3.1 Khảo sát số tính chất mimosine .51 3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 51 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng pH 53 3.2 Khảo sát thành phần nguyên liệu 54 3.3 Khảo sát ảnh hưởng thơng số trích ly mimosine đến hiệu suất trích ly mimosine từ mắc cỡ .55 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng chế độ xử lý nhiệt nguyên liệu đến hiệu suất trích ly mimosine 55 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng hệ dung mơi trích ly đến hiệu suất trích ly mimosine từ mắc cỡ 57 3.3.3 Kết định tính số thành phần hoạt chất sinh học .59 3.3.3.1 Định tính hợp chất flavonoid .60 3.3.3.2 Định tính hợp chất tannin 61 3.3.3.3 Định tính hợp chất protein 62 3.3.4 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu (g) : dung môi (ml) đến hiệu suất trích ly mimosine 63 3.3.5 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ thời gian đến hiệu suất trích ly mimosine.65 3.4 Tối ưu hóa q trình trích ly mimosine 67 3.5 Nghiên cứu tinh mimosine 75 3.5.1 Kết phân tích dịch trích mimosine phương pháp quang phổ hấp thu sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 76 3.5.2 Tính hiệu suất thu hồi sau qua cột 80 3.5.3 Độ tinh 80 3.5.4 Kết định tính hoạt chất sinh học dung dịch mimosine sau qua cột sắc ký trao đổi ion 81 3.5.4.1 Định tính hợp chất tannin 81 3.5.4.2 Định tính hợp chất protein 81 3.6 Nghiên cứu bảo quản chế phẩm 82 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 84 Tài liệu tham khảo Lý lịch trích ngang LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Các thành phần vô mắc cỡ Bảng 1.2: Thành phần chất béo có mắc cỡ (% chất khô) Bảng 1.3: Thành phần chất béo có hạt mắc cỡ .9 Bảng 3.1: Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền mimosine 51 Bảng 3.2: Ảnh hưởng pH đến độ bền mimosine 53 Bảng 3.3: Bảng tiêu hóa lý nguyên liệu 55 Bảng 3.4: Ảnh hưởng chế độ xử lý nhiệt đến hiệu suất trích ly mimosine 56 Bảng 3.5: Ảnh hưởng loại dung mơi trích ly đến hiệu suất trích ly 58 Bảng 3.6: Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu dung môi 63 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian trích ly 65 Bảng 3.8: Các mức yếu tố thực tối ưu 67 Bảng 3.9: Các thí nghiệm tiến hành tối ưu 68 Bảng 3.10: Các yếu tố chuyển qua hệ mã hóa 68 Bảng 3.11: Ma trận quy hoạch thực nghiệm nhân tố toàn phần 23 .69 Bảng 3.12: Các hệ số phương trình hồi quy 70 Bảng 3.13: Thí nghiệm tâm 70 Bảng 3.14: Các giá trị phân vị Student, tj 71 Bảng 3.15: Các giá trị tính tốn 72 Bảng 3.16: Kết thực nghiệm tối ưu hóa 74 Bảng 3.17: Hàm lượng mimosine phân đoạn thu sau qua sắc ký cột trao đổi ion 75 Bảng 3.18: Ảnh hưởng nhiệt độ, ánh sáng, thời gian đến hàm lượng mimosine 82 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Hình dạng tổng thể mắc cỡ .3 Hình 1.2: Hình mắc cỡ Hình 1.3: Hình hoa mắc cỡ .4 Hình 1.4: Hình hạt mắc cỡ Hình 1.5: Lá trạng thái mở Hình 1.6: Lá trạng thái cụp xuống Hình 1.7: Cấu tạo hóa học ß –sitosterol Hình 1.8: Cấu tạo hóa học dihydro- ß – sitosterol Hình 1.9: Cấu tạo hoá học cuả Crocetin .8 Hình 1.10: Potassium 5-0-β-D-glucopyranosylgentisat Hình 1.11: Mimopudin 10 Hình 12: Cơng thức cấu tạo mimosine 12 Hình 1.13: Sự phân giải mimosine enzym .13 Hình 1.14: Sự chuyển hóa mimosine thành hợp chất khác tác dụng enzym L – mimosine synthase .14 Hình 1.15: Mối quan hệ chuyển hóa cystein, mimosine – hydroxy – (1H) – pyridone (3,4 DHP) 15 Hình 1.16: Chu trình tổng hợp lysin từ asparagine 16 Hình 1.17: Chu trình tổng hợp 3, – Dihydroxypyridin từ lysine 17 Hình 1.18: Công thức cấu tạo tyrosine mimosine .18 Hình 1.19: Phức chất mimosine pyridoxal phosphate .19 Hình 1.20: Công thức cấu tạo Mimocholic 20 Hình 1.21: Cơng thức cấu tạo Mimochenodeoxycholic 20 Hình 1.22: Phức cua sắt (III) mimosine 21 Hình 2.1: Sơ đồ nghiên cứu 30 Hình 2.2: Quy trình cơng nghệ trích ly mimosine 31 Hình 2.3: Cột sắc ký .39 Hình 2.4: Quy trình chạy sắc ký cột trao đổi ion 41 Hình 2.5: Đồ thị đường chuẩn mimosine .45 Hình 3.1: Đồ thị khảo sảt ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền mimosine 52 Hình 3.2: Đồ thị khảo sát ảnh hưởng pH đến độ bền mimosine 54 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Bảng 3.16: Kết thực nghiệm tối ưu hóa Tên x1 x2 x3 y Mức sở 0,05 50 60 - Hệ số bj -2,475 0,95 -2,01 - Khoảng biến thiên Δj 0,005 15 - Bj * Δj -0,0123 4,75 -30,15 - Bước δj -0,0021 0,79 -5 - Bước làm trịn -0,002 -5 - Thí nghiệm thứ 0,048 51 55 80,55 Thí nghiệm thứ 10 0,046 52 50 84,36 Thí nghiệm thứ 11 0,044 53 45 81,91 Thí nghiệm thứ 12 0,042 54 40 78,18 Thí nghiệm thứ 13 0,040 55 35 70,24 Hiệu suất trích ly theo yếu tố thí nghiệm Hiệu suất trích ly (%) 90 85 80 75 70 65 10 11 12 13 Thí nghiệm 14 Hình 3.10: Đồ thị biểu diễn hiệu suất trích ly theo yếu tố thí nghiệm LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Qua thí nghiệm trên, chúng tơi thấy thí nghiệm thứ 10 đạt hiệu suất trích ly cao Như vậy, yếu tố nghiên cứu có giá trị tối ưu là: Tỉ lệ nguyên liệu (g) : dung môi (ml) : 0,046 (9,2g nguyên liệu với 200ml dung mơi) Nhiệt độ trích ly: 52oC Thời gian trích ly: 50 phút 3.5 Nghiên cứu tinh mimosine Để thu dịch trích có độ tinh cao nữa, tiến hành sắc ký cột trao đổi ion với nhựa trao đổi cation (Dowex 50W-X4, ion linh động H+) Dịch đem chạy sắc ký dung dịch trích ly với điều kiện tối ưu Lấy 10ml dịch trích cho qua cột sắc ký Tốc độ chảy trung bình cột 0,6 ml/phút Các phân đoạn sau chạy sắc ký, đem phân tích xác định hàm lượng mimosine, kết trình bày sau: Bảng 3.17: Hàm lượng mimosine phân đoạn thu sau qua sắc ký cột trao đổi ion Phân đoạn Hàm lượng mimosine (mg/ml) Phân đoạn Hàm lượng mimosine (mg/ml) 0,019 0,149 0,191 0,290 0,273 0,249 10 11 12 0,221 0,205 0,157 0,076 0,034 0,002 Hình 3.11: Các phân đoạn sau chạy sắc ký LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Khảo sát trình sắc ký cột Hàm lượng mimosine (mg/ml) 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 10 11 12 Phân đoạn Hình 3.12: Đồ thị biểu diễn hàm lượng mimosine theo phân đoạn thu sau qua sắc ký cột trao đổi ion Chúng thấy, từ phân đoạn đến phân đoạn hàm lượng mimosine thu tăng dần đạt giá trị cao phân đoạn 0,290 (mg/ml) Từ phân đoạn đến phân đoạn 12 hàm lượng mimosine giảm dần giảm từ 0,290 (mg/ml) đến 0,002 (mg/ml) Tập hợp phân đoạn lại cho vào lọ 20 ml, sau đem sấy chân khơng 40oC, áp suất chân không 80 KPa cịn ml Sau đó, bảo quản mẫu điều kiện thích hợp 3.5.1 Kết phân tích dịch trích mimosine phương pháp quang phổ hấp thu sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Để kiểm tra khả tinh sạch, chúng tơi tiến hành phân tích dịch trích trước qua cột sắc ký trao đổi ion sau qua cột phương pháp quang phổ hấp thu sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) thực trường Đại học Khoa học Tự nhiên ƒ Quang phổ hấp thu Quét phổ ba dung dịch mimosine chuẩn (1mM), dịch mimosie trước qua cột sắc ký trao đổi ion dịch mimosine sau qua cột từ bước sóng 200 đến 800 nm máy Varian UV – Vis Cary 50 Conc Kết thu sau: LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Hình 3.13: Đồ thị so màu dịch trích mimosine trước qua cột trao đổi ion sau ƒ Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Tiến hành phân tích sắc ký dịch mimosine trước qua cột sắc ký trao đổi ion dịch mimosine sau qua cột máy 1100 Agilent với thông số sau: − Pha động A: 0,05% trifluoroacetic acid − Pha động B: acetonitrile : 2- propanol (4:1, v/v) − Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút − Bước sóng cài đặt cho đầu dị: 250 nm LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Hình 3.14: Sắc ký đồ dịch mimosine trước qua cột sắc ký trao đổi ion Hình 3.15: Sắc ký đồ dịch mimosine trước qua cột sắc ký trao đổi ion có thêm chuẩn LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Hình 3.16: Sắc ký đồ dịch mimosine sau qua cột sắc ký trao đổi ion Hình 3.17: Sắc ký đồ dịch mimosine sau qua cột sắc ký trao đổi ion có thêm chuẩn Nhận xét: Thời gian lưu mimosine khoảng 22,9 phút LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 3.5.2 Tính hiệu suất thu hồi sau qua cột Hiệu suất thu hồi: H (%) = ∑ Hàm lượng mimosine phân đoạn x 100 ∑ Hàm lượng mimosine trước qua cột H = 2.799 x 100 3.002 = 93,24 (%) Hiệu suất thu hồi đạt 93,24%, kết luận rửa giải thu hồi mimosine hồn tồn, hiệu suất bé 100% sai số q trình phân tích 3.5.3 Độ tinh Độ tinh tính theo cơng thức sau: X= m1 × 100 m2 Sau qua cột sắc ký trao đổi ion, 18 ml mẫu thu có: m1 = 2,799 (mg) m2 = 4,453 (mg) Độ tinh sạch: X = 2,799 × 100 = 62,86% 4,453 Sau qua cột sắc ký cột trao đổi ion, dung dịch mimosine thu có độ tinh 62,86% Điều cho thấy, dung dịch mimosine lẫn số thành phần khác LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 3.5.4 Kết định tính thành phần tạp dung dịch mimosine sau qua cột sắc ký trao đổi ion Ta tiến hành định tính hợp chất tannin protein dung dịch mimosine trước tinh dung dịch mimosine sau tinh với dịch chuẩn trích ly sau: ngun liệu khơng xử lý nghiền nhỏ, đem trích ly cồn 70%v/v điều kiện 50oC, 60 phút 3.5.4.1 Định tính hợp chất tannin Các dịch trích phân tích sắc ký mỏng với hệ dung môi khai triển cloroform: n- butanol : ethylacetat : acid formic (6:2:2:0,1) dung dịch thuốc màu: dung dịch sắt (III) 5% Hình 3.18: Sắc ký đồ định tính hợp chất tannin dịch trước tinh sau tinh Với dịch trích ký hiệu là: C: dịch chuẩn A4: dịch trước tinh A5: dịch sau tinh Nhận xét: Dung dịch mimosine sau tinh khơng cịn lẫn tannin 3.5.4.2 Định tính hợp chất protein Các dịch trích phân tích sắc ký mỏng với hệ dung mơi khai triển n- butanol : nước : acid acetic (4 : : 1) dung dịch thuốc màu: hỗn hợp dung dịch ninhydrin 1% Hình 3.19: Sắc ký đồ định tính hợp chất protein dịch trước tinh sau tinh Với dịch trích ký hiệu là: C: dịch chuẩn TC : dịch trước tinh SC : dịch sau tinh Nhận xét: Dung dịch mimosine sau tinh lẫn protein LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 3.6 Nghiên cứu bảo quản chế phẩm Ảnh hưởng nhiệt độ ánh sáng theo thời gian lên chất lượng chế phẩm Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ ánh sáng đến hàm lượng mimosine theo thời gian thể bảng sau: Bảng 3.18: Ảnh hưởng nhiệt độ, ánh sáng, thời gian đến hàm lượng mimosine Điều kiện lưu mẫu Ban đầu Sau tuần Sau tuần Sau tuần Nhiệt độ phịng, có ánh sáng 2,434 2,391 2,346 2,295 Nhiệt độ phịng, khơng ánh sáng 2,434 2,405 2,367 2,316 Nhiệt độ lạnh 5oC, không ánh sáng 2,434 2,413 2,402 2,388 Ảnh hưởng nhiệt độ, ánh sáng, thời gian Hàm lượng mimosine (mg/ml) 2.45 2.4 2.35 2.3 2.25 2.2 Nhiệt độ phịng, có ánh sáng Thời gian (tuần) Nhiệt độ phòng, không ánh sáng Nhiệt độ lạnh 5oC, không ánh sáng Hình 3.20: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ, ánh sáng, thời gian đến hàm lượng mimosine LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ ™ Nhận xét: Trong điều kiện lưu mẫu lưu mẫu điều kiện khơng có ánh sáng nhiệt độ lạnh 5oC hàm lượng mimosine giảm Do mimosine mẫn cảm với ánh sáng, nên để ánh sáng chiếu vào làm cho mimosine bị phân hủy nên hàm lượng mimosine giảm theo thời gian bảo quản Nhiệt độ lạnh góp phần làm giảm phân hủy mimosine nên hàm lượng mimosine giảm theo thời gian bảo quản nhiệt độ lạnh LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ™ Kết luận Qua q trình nghiên cứu thực nghiệm, chúng tơi rút số kết luận sau: Điều kiện trích ly mimosine đạt hiệu suất trích ly 84,36% - Chế độ xử lý nguyên liệu trước trích ly: chần 100oC với thời gian phút - Dung mơi trích ly: HCl 0,2N, pH - Tỉ lệ nguyên liệu (g) : dung môi (ml): 0,046 - Nhiệt độ trích ly: 52oC - Thời gian trích ly: 50 phút Nghiên cứu tinh mimosine phương pháp sắc ký cột trao đổi ion: - Hiệu suất thu hồi sau qua cột 93,24% - Dung dịch mimosine thu có độ tinh 62,86% Dung dịch mimosine thu bền điều kiện bảo quản lạnh 5oC, khơng có ánh sáng ™ Kiến nghị Do thời gian, kinh phí, thiết bị hạn hẹp nên nội dung nghiên cứu luận văn chưa thật đầy đủ Chúng xin đề nghị hướng nghiên cứu đề tài gồm nội dung sau: Tiến hành khảo sát trích ly mimosine bằng phương pháp trích ly vi sóng So sánh kết thu với phương pháp trích ly lý Thu nhận bảo quản mimosine dạng bột Thử nghiệm tính kháng khuẩn mimosine chuẩn mimosine thu vi khuẩn nấm LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ TÀI LIỆU THAM KHẢO Phan Bảo An, Tạp chí thuốc sức khỏe, 143, 6, 1999 Bộ môn dược liệu, Bài giảng dược liệu Tập 1, Nhà xuất Y học, 1980 Bộ môn sinh hóa, Giáo trình thực tập lớn sinh hóa, Đại học khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh, 1995 Nguyễn Cảnh, Nguyễn Đình Soa, Tối ưu hóa thực nghiệm hóa học kỹ thuật hóa học, Trường Đại học kỹ thuật, 1994 Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, Bài giảng chiết xuất dược liệu, Trường Đại học y dược Thành phố Hồ Chí Minh, 2001 Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Tập 2, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Lê Trần Đức, Cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, 1997 Phạm Thị Ánh Hồng, Kỹ thuật sinh hóa, Nhà xuất đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, 2003 Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, 2001 10 Nguyễn Viết Kinh, Các phương pháp sắc ký ứng dụng nghiên cứu hóa thực vật, 2002 11 Những thuốc có ích, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật 12 Nguyễn Minh Thư, Góp phần tìm hiểu thành phần hóa học Trinh nữ Mimosa Pudica L., 2001 13 Đặng Hồng Thủy, Đàm Trung Bảo, REVPHARM, 12 – 17, 1984 14 Lê Bạch Tuyết, Các q trình cơng nghệ sản xuất thực phẩm, Khoa Hóa Thực phẩm cơng nghệ sinh học trường Đại học Bách khoa Hà Nội 15 Nguyễn Thị Thu Vân, Phân tích định lượng, Nhà xuất đại học quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, 2004 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 16 A K Pandey, U.N Dwivedi, Induction, Isolation and purification of mimosine degradation enzyme from newly isolated Pseudomonas putida STM 905, Enzyme and Microbial Technology, 2006 17 Annelise Lobstein, Bernard Weniger, Byung H Um, 4”- Hydroxymaysin and cassiaoccidentalin B, two unusual C – glycosyflavones from Mimosa pudica (Mimosacceae), Biochemical Systematics and Ecology 30 (2002), 375 – 377 18 Emia W Oppenheim, Ilya M Nasrallah, Maria G Mastri, and Patrick J Stover, Mimosine is a cell – specific antagonist of Folate metabolism, The Journal of Biological chemistry, 275, 2000 19 Farooqi, MIH, Kapoor, V.P., Indian Drug, 15 (3), 39 – 40, 1997 20 Gilbert DM, Neilson A, Miyazawa H, De-Pamphilis ML, Burhans WC, Mimosine arrests DNA synthesis at replicattion forks by inhibiting deoxyribonucleotide metabolism, J Biol Chem, 1995, 270 21 H P Tiwari, W R Penrose and Jan D Spenser, Biosynthesis of mimosine: incorporation of serine and of α - aminoadipic acid, Phytochemistry, 1967, Vol 22 J W Hylin, Toxic peptides and amino acids in Foods and Feeds, J Arg Food Chemistry 23 Josewin B., Ramachand Rapai M., Indian J.Chem, 251 – 253, 1999 24 Jurgen Englet, Yulin Jiang, Planta Med, 60 (2), 194, 1994 25 Kamada Y, Oshiro N, Oku H, Hongo F, Chinen I, Degration of toxic mimosine by hydrolytic enzyme of Leucaena psyllids (Jumping plant lice), Biosci Biotech Biochem, 1996, 60 26 K Lalitha, S Rajendra Kulothungan, Determination of mimosine by a sensitive indirect spectrophotometric method, Talanta, 63 (2004), 635 – 640 27 K Lalitha, C M Vargheese, and N Balasubramanian, Spectrophotometric Determination of Mimosine and 3-Hydroxy-4-(1H)-pyridone – The toxic Principles of Leucaena leucocephala, Analytical Biochemistry, 213, 1993 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 28 Lars F Kirk, Mette V Molller, Jette Christensen, A – deoxyflavonol derivative in Mimosa pudica, Biochemical Systematics and Ecology 31 (2003), 103 – 105 29 Lyuben M Tsvetkov, George C Russev, and Boyka B Anachkova, Effect of Mimosine on DNA Synthesis in Mammalian Cells, Cancer Research, 57, 1997 30 M.D Choudhury and P Chakrabarti, Cellular and chloroplast lipid composition of the leaves of Mimosa Pudica, Phytochemistry, 1980, Vol 19, 519 – 523 31 M Malone, Wound – induced hydraulic signals and stimulus transmission in Mimosa pudica L., New Phytol, 128, 49 – 56, 1994 32 Mimoru Ueda and Shosuke Yamamura, Leaf-opening substance of Mimosa Pudiaca L.; Chemical studies on the other leaf movement of Mimosa, Tetrahedron Letters 40 (1999), 353 – 356 33 Mita Pal, Asis Roychaudhury, Amita Pal, A novel tubulin from Mimosa pudica, Eur J Biochem, 192, 329 – 335, 1990 34 Monimala Mahanta, Ashis Kumar Mukherjee, Neutralisation of lethality, Myotoxicity and toxic enzymes of Naja kaouthia venom by Mimosa pudica root extracts, Journal of Ethnopharmacology, 75 (2001), 55 – 60 35 Muchdar Soedarjo & Dulal Borthakur, Simple procedures to remove mimosine from young leaves, pods and seeds of Leucaena leucocephala used as food, International Journal of Food Science and Technology, 31, 1996 36 R Anitha, S Jayavelu and K Murugesan, Antidermatophytic and Bacterial Activity of Mimosine, Phytother, Res 19, 992 – 993, 2005 37 R Puchala, Jennifer J Davis, T Sahlu, Determination of mimosine and 3,4 – dihydroxypyridine in milk and plasma of goats, Journal of Chromatophy B, 685 (1996), 375 – 378 LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 38 Renz, J (1936) Z physiol, Chemistry, 244, 153 39 Roblon G, Ann, Bot, 52 (5), 763 – 768, 1983 40 Romeo JT, Heterocyclic amino and imino acids (mimosine, Azetidine – 2carboxylic acid and pipecolic acid, Toxicants of plant origin III Protein and amino acid, London: CRC Press, 1989, 125 – 139 41 Schaller, Gerherd, J.Prakt, Chen.334 (4), 358 – 360, 1992 42 Shinkichi Tawata, Tran Dang Xuan and Masakazu Fukuta, Herbicidal lead compound mimosine and its degradation enzyme, 2005 43 Silvane Vestena, Arthur G Fett- Neto, Rafael Cortes Duarte, Alfredo Gui Ferreira, Regulation of mimosine accumulation in Leucaena leucocephala seedlings, Plant Science, 161 (2001), 597 – 604 44 Wibaut, J P (1953) in Progress in Organic Chemistry (Cook, J.W., Ed.), Vol 2, 179 – 181, Butterworth, London 45 Zizheng Dong and Jian – Ting Zhang, EIF3 p170, a Mediator of Mimosine Effect on Protein Synthesis and Cell Cycle Progression, Molecular Biology of the Cell, 14, 3942 – 3951, 2003 46 http://www.bio.miami.edu/mimosa/mimosa.html 47 http://www.barbadine.com/pages/mimosa_pudica_lien.html 48 http://www.issg.org/database/species/ecology.asp?si=1002&fr=1&sts 49 http://www.sbepl.com/mimosa-pudica.html 50 http://www.sci-toys.com/ingredients/saffron.html 51 http://pdrhealth.com/ /nutsupdrugs/bet 0236.shtml 52 http://www.tropilab.com/sleepinggras.html LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ ... cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ? ?? với mục tiêu nghiên cứu quy trình trích ly tinh sơ thu nhận mimosine dạng lỏng từ mắc cỡ Đề tài thực bao gồm phần sau: − Nghiên cứu trích ly mimosine từ mắc cỡ. .. lysin từ asparagine LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Hình 1.17: Chu trình tổng hợp 3, – Dihydroxypyridin từ lysine LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 1.2.4 Phân bố mimosine. .. [44]: LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ Hình 1.14: Sự chuyển hóa mimosine thành hợp chất khác tác dụng enzym L – mimosine synthase LVCH: Nghiên cứu thu nhận mimosine từ mắc cỡ 1.2.3 Sự