BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN THỊ PHƢƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG AN THẦN CỦA CAO THUỐC NADT TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 BỘ Y TẾ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, đƣợc thực dƣới hƣớng dẫn PGS TS Nguyễn Phƣơng Dung Các số liệu, kết luận luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình nghiên cứu Tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan này! Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 02 tháng 11 năm 2020 Học viên Nguyễn Thị Phƣơng LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin trân trọng cảm ơn PGS TS Nguyễn Phƣơng Dung – Nguyên Trƣởng khoa – khoa Y học cổ truyền, Đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh, ngƣời tận tình hƣớng dẫn tơi q trình nghiên cứu nhƣ việc hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn anh/chị kĩ thuật viên phịng bào chế phịng thí nghiệm Y dƣợc cổ truyền, khoa Y học cổ truyền, Đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình tơi làm nghiên cứu MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC ĐỐI CHIẾU ANH VIỆT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 MẤT NGỦ THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI 1.1.1 Đại cương 1.1.2 Định nghĩa ngủ 1.1.3 Phân loại ngủ 1.1.4 Điều trị ngủ 1.2 MẤT NGỦ THEO Y HỌC CỔ TRUYỀN 12 1.3 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC NADT 14 1.3.1 Giới thiệu thuốc NADT 14 1.3.2 Sự phối ngũ tác dụng vị thuốc thuốc NADT theo Y học cổ truyền 17 1.3.3 Cơ sở dược lý tác dụng vị thuốc thuốc NADT theo Y học đại 22 1.3.4 Một số chứng liên quan đến thuốc NADT 27 1.4 CÁC THỬ NGHIỆM SỬ DỤNG ĐỂ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG AN THẦN GIẢI LO ÂU VÀ GÂY NGỦ TRÊN THỰC NGHIỆM 32 1.4.1 Thử nghiệm chữ thập nâng cao (Elevated Plus Maze - EPM) 32 1.4.2 Thử nghiệm dây leo (Grip test) 33 1.4.3 Thử nghiệm ngăn sáng tối (Light – dark test) 34 1.4.4 Thử nghiệm Rota-Rod 36 1.4.5 Thử nghiệm vận động tự phát 36 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 38 2.1.1 Dược liệu nghiên cứu 38 2.1.2 Động vật thí nghiệm 38 2.1.3 Thuốc dược liệu đối chiếu 39 2.1.4 Hoá chất thiết bị 39 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.2.1 Phương pháp chiết xuất cao thuốc 41 2.2.2 Khảo sát số tiêu chuẩn cao 42 2.2.3 Độc tính cấp 46 2.2.4 Thử nghiệm tác dụng dược lý 47 2.3 PHƢƠNG PHÁP THỐNG KÊ VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU 51 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 52 3.1 XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CƠ BẢN VỀ CHẤT LƢỢNG CAO NADT 52 3.1.1 Độ ẩm 52 3.1.2 Độ tro toàn phần 53 3.1.3 Định tính theo phương pháp sắc ký lớp mỏng 54 3.2 KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH VÀ TÁC DỤNG AN THẦN CỦA CAO NADT 57 3.2.1 Độc tính cấp 57 3.2.2 Kết thử nghiệm tác dụng an thần, giải lo âu với thử nghiệm chữ thập nâng cao 60 3.2.3 Kết thử nghiệm tác dụng an thần, giải lo âu với thử nghiệm hai ngăn sáng tối 63 3.2.4 Kết thử nghiệm tác dụng an thần, giải lo âu với thử nghiệm dây leo 66 3.2.5 Kết thử nghiệm tác dụng an thần với thử nghiệm vận động tự phát 67 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 70 4.1 BÀN LUẬN VỀ TÍNH AN TỒN CỦA CAO NADT 70 4.2 BÀN LUẬN VỀ TÁC DỤNG AN THẦN CỦA CAO NADT TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG 72 4.2.1 Ảnh hưởng cao NADT đến số lần nhánh mở thời gian lưu lại nhánh mở thử nghiệm chữ thập nâng cao 72 4.2.2 Ảnh hưởng cao NADT đến số lần ngăn sáng thời gian lưu lại ngăn sáng thử nghiệm ngăn sáng tối 73 4.2.3 Ảnh hưởng cao NADT đến số điểm bám dây thử nghiệm dây leo 75 4.2.4 Ảnh hưởng cao NADT đến số lần vận động ngang dọc thử nghiệm vận động tự phát 76 4.2.5 Bàn luận theo Y học cổ truyền 77 4.3 ĐÓNG GÓP VÀ HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI 78 4.3.1 Đóng góp đề tài 78 4.3.2 Hạn chế đề tài 79 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 80 KẾT LUẬN 80 KIẾN NGHỊ 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TÊN VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ DĐVN V Dƣợc Điển Việt Nam V DSM-IV Diagnostic and Statistical Manual of Disorders FDA Food and Drug Administration GABA Gamma-amino butyric acid H2O2 Hydrogen peroxid ICSD International Classification of Sleep Disorders ICU Intensive Care Unit IL Interleukin IM Intramuscular injection IV Intravenous injection NADT Tên thuốc nghiên cứu: Nhĩ âm dƣỡng tâm NXB Nhà xuất TLC Thin-layer chromatography Mental TNF Tumor Necrosis Factor TT Thuốc thử DANH MỤC ĐỐI CHIẾU ANH VIỆT TÊN TIẾNG ANH TÊN TIẾNG VIỆT Diagnostic and Statistical Cẩm nang chẩn đoán thống kê Manual of Mental Disorders rối loạn tâm thần Grip test Kiểm tra độ bám Hydrogen peroxid Oxy già International Classification of Phân loại quốc tế rối loạn giấc Sleep Disorders ngủ Intensive Care Unit Đơn vị chăm sóc đặc biệt Interleukin Yếu tố miễn dịch Intramuscular injection Tiêm bắp Intravenous injection Tiêm tĩnh mạch Light – dark test Kiểm tra sáng – tối Thin-layer chromatography Sắc ký lớp mỏng Tumor Necrosis Factor Yếu tố hoại tử khối u 30 D Cunnington, et al (2013), "Insomnia: prevalence, consequences and effective treatment", Med J Aust, 199(8), pp 36-40 31 A Dallmann, et al (2018), "A Physiologically Based Pharmacokinetic Model for Pregnant Women to Predict the Pharmacokinetics of Drugs Metabolized Via Several Enzymatic Pathways", Clin Pharmacokinet, 57(6), pp 749-768 32 J S Dhaliwal, et al (2020), StatPearls, Diazepam, StatPearls Publishing Copyright © 2020, StatPearls Publishing LLC., Treasure Island (FL) 33 S S Durairajan, et al (2012), "Berberine ameliorates β-amyloid pathology, gliosis, and cognitive impairment in an Alzheimer's disease transgenic mouse model", Neurobiol Aging, 33(12), pp 2903-2919 34 H Friedman, et al (1992), "Pharmacokinetics and pharmacodynamics of oral diazepam: effect of dose, plasma concentration, and time", Clin Pharmacol Ther, 52(2), pp 139-150 35 D Gupta, et al (2014), "Anxiolytic-like effects of alverine citrate in experimental mouse models of anxiety", Eur J Pharmacol, 742, pp 94-101 36 B V Hope, et al (2019), "The submerged plus maze as an assay for studying anxiety-like behaviour in fish", MethodsX, 6, pp 1832-1837 37 L L Hu, et al (2015), "Suan zao ren tang in combination with zhi zi chi tang as a treatment protocol for insomniacs with anxiety: a randomized parallelcontrolled trial", Evid Based Complement Alternat Med, 2015, pp 913252 38 H Jamal, et al (2008), "Evaluation of chalcones a flavonoid subclass, for, their anxiolytic effects in rats using elevated plus maze and open field behaviour tests", Fundam Clin Pharmacol, 22(6), pp 673-681 39 I H Jung, et al (2012), "Lancemaside A isolated from Codonopsis lanceolata and its metabolite echinocystic acid ameliorate scopolamine-induced memory and learning deficits in mice", Phytomedicine, 20(1), pp 84-88 40 A N Kaczkurkin and E B Foa (2015), "Cognitive-behavioral therapy for anxiety disorders: an update on the empirical evidence", Dialogues Clin Neurosci, 17(3), pp 337-346 41 D Kaufmann, et al (2016), "Extracts from Traditional Chinese Medicinal Plants Inhibit Acetylcholinesterase, a Known Alzheimer's Disease Target", Molecules, 21(9) 42 M Kay-Stacey and H Attarian (2016), "Advances in the management of chronic insomnia", Bmj, 354, pp i2123 43 X Li, et al (2019), "Molecular basis for Poria cocos mushroom polysaccharide used as an antitumor drug in China", Prog Mol Biol Transl Sci, 163, pp 263296 44 Y F Lin, et al (2016), "Hazards of insomnia and the effects of acupuncture treatment on insomnia", J Integr Med, 14(3), pp 174-186 45 J Liu, et al (2019), "The combination of Radix Astragali and Radix Angelicae Sinensis attenuates the IFN-γ-induced immune destruction of hematopoiesis in bone marrow cells", BMC Complement Altern Med, 19(1), pp 356 46 H Luo, et al (2020), "Revealing the sedative-hypnotic effect of the extracts of herb pair Semen Ziziphi spinosae and Radix Polygalae and related mechanisms through experiments and metabolomics approach", BMC Complement Med Ther, 20(1), pp 206 47 E Matheson and B L Hainer (2017), "Insomnia: Pharmacologic Therapy", Am Fam Physician, 96(1), pp 29-35 48 S Y Moon, et al (2020), "Comparative Effectiveness of Cheonwangbosimdan (Tian Wang Bu Xin Dan) Versus Cognitive-Behavioral Therapy for Insomnia in Cancer Patients: A Randomized, Controlled, Open-Label, Parallel-Group, Pilot Trial", Integr Cancer Ther, 19, pp 1534735420935643 49 D J Nutt and A L Malizia (2001), "New insights into the role of the GABA(A)-benzodiazepine receptor in psychiatric disorder", Br J Psychiatry, 179, pp 390-396 50 S Y Pan, et al (2011), "Ethanol extract of fructus schisandrae decreases hepatic triglyceride level in mice fed with a high fat/cholesterol diet, with attention to acute toxicity", Evid Based Complement Alternat Med, 2011, pp 729412 51 R J Rodgers and A Dalvi (1997), "Anxiety, defence and the elevated plusmaze", Neurosci Biobehav Rev, 21(6), pp 801-810 52 T Roth, et al (2006), "Effects of ramelteon on patient-reported sleep latency in older adults with chronic insomnia", Sleep Med, 7(4), pp 312-318 53 S Suh, et al (2018), "Sex Differences in Insomnia: from Epidemiology and Etiology to Intervention", Curr Psychiatry Rep, 20(9), pp 69 54 S Sun, et al (2014), "Inhibition of organic cation transporter and may be involved in the mechanism of the antidepressant-like action of berberine", Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry, 49, pp 1-6 55 Y Tian, et al (2019), "Screening and identification of potential active components in Ophiopogonis Radix against atherosclerosis by biospecific cell extraction", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 1133, pp 121817 56 L Wang, et al (2014), "Effects of Wen Dan Tang on insomnia-related anxiety and levels of the brain-gut peptide Ghrelin", Neural Regen Res, 9(2), pp 205212 57 P L Yi, et al (2007), "Gamma-aminobutyric acid (GABA) receptor mediates suanzaorentang, a traditional Chinese herb remedy, -induced sleep alteration", J Biomed Sci, 14(2), pp 285-297 58 P L Yi, et al (2007), "The involvement of serotonin receptors in suanzaorentang-induced sleep alteration", J Biomed Sci, 14(6), pp 829-840 59 F X Zhang, et al (2016), "Rapid characterization of Ziziphi Spinosae Semen by UPLC/Qtof MS with novel informatics platform and its application in evaluation of two seeds from Ziziphus species", J Pharm Biomed Anal, 122, pp 59-80 60 M Y Zhang, et al (2018), "[Pharmacological effect of Schisandrae Chinensis Fructus and relative active components on cardiovascular and cerebrovascular diseases]", Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 43(8), pp 1536-1546 61 Qinghua Ai, et al (2014), "Post-marketing safety monitoring of Shenqifuzheng injection: a solution made of Dangshen (Radix Codonopsis) and Huangqi (Radix Astragali Mongolici)", Journal of Traditional Chinese Medicine, 34(4), pp 498-503 62 Josseara Beraldo Estudo farmacognóstico de Passiflora edulis Sims.(Passifloraceae), Universidade de São Paulo 63 Judy Yuet‐Wa Chan, et al (2008), "Protective effects of an herbal formulation of Radix Astragali, Radix Codonopsis and Cortex Lycii on streptozotocin‐ induced apoptosis in pancreatic β‐cells: an implication for its treatment of diabetes mellitus", Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Pharmacological and Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives, 22(2), pp 190-196 64 Jia-Rong Gao, et al (2013), "Effects of extracts from ziziphi spinosae semen and schisandrae chinensis fructus on amino acid neurotransmitter in rats with insomnia induced by PCPA", Zhong yao cai= Zhongyaocai= Journal of Chinese medicinal materials, 36(10), pp 1635-1639 65 Grace Gosmann, et al (2011), "Composiỗóo quớmica e aspectos farmacológicos de espécies de Passiflora L.(Passifloraceae)", Revista Brasileira de Biociências, 9(S1) 66 Hyoung-Yun Han, et al (2015), "Toxicity assessment of Polygalae radix aqueous extract orally administered to rats for consecutive weeks", Korean Journal of Pharmacognosy, 46(1), pp 44-51 67 Joshua Ka-Shun Ko and Cecilia Wai-Shan Chik (2009), "The protective action of radix Astragalus membranaceus against hapten-induced colitis through modulation of cytokines", Cytokine, 47(2), pp 85-90 68 Munekazu Komada, et al (2008), "Elevated plus maze for mice", JoVE (Journal of Visualized Experiments)(22), pp e1088 69 Xican Li, et al (2009), "Correlation between antioxidant activities and phenolic contents of radix Angelicae sinensis (Danggui)", Molecules, 14(12), pp 53495361 70 Hongjuan Li, et al (2019), "Purification of spinosin from Ziziphi Spinosae Semen using macroporous resins followed by preparative high‐performance liquid chromatography", Journal of separation science, 42(19), pp 31343140 71 X Meng and W Xie (2018), "Neuroprotective Effects of Radix Scrophulariae on Cerebral Ischemia and Reperfusion Injury via MAPK Pathways", 23(9) 72 Damião P de Sousa, et al (2011), "Pharmacological activity of (R)-(+)pulegone, a chemical constituent of essential oils", Zeitschrift für Naturforschung C, 66(7-8), pp 353-359 73 Dai-Kyu Park and Wan-Ha Lee (1983), "Effects of the Saponin of Polygalae Radix on the renal function and CNS-Depression", Korean Journal of Pharmacognosy, 14(4), pp 178-192 74 Kinga Sałat, et al (2013), "Evaluation of anxiolytic-like, anticonvulsant, antidepressant-like and antinociceptive properties of new 2-substituted 4hydroxybutanamides with affinity for GABA transporters in mice", Pharmacology Biochemistry and Behavior, 110, pp 145-153 75 Im-Joon Shin, et al (2014), "Preclinical evidence of rapid-onset antidepressantlike effect in Radix Polygalae extract", PLoS One, 9(2), pp e88617 76 Y Song, et al (2020), "Structural Features of Three Hetero-Galacturonans from Passiflora foetida Fruits and Their in Vitro Immunomodulatory Effects", 12(3) 77 Damião P de Sousa, et al (2007), "Pharmacological effects of the monoterpene alpha, beta-epoxy-carvone in mice", Revista Brasileira de Farmacognosia, 17(2), pp 170-175 78 L-E Wang, et al (2010), "Potentiating effect of spinosin, a C-glycoside flavonoid of Semen Ziziphi spinosae, on pentobarbital-induced sleep may be related to postsynaptic 5-HT1A receptors", Phytomedicine, 17(6), pp 404409 79 YK Wing (2001), "Herbal treatment of insomnia", Hong Kong Medical Journal, 7(4), pp 392-402 80 Mo Yang, et al (2009), "An herbal decoction of Radix astragali and Radix angelicae sinensis promotes hematopoiesis and thrombopoiesis", J Ethnopharmacol, 124(1), pp 87-97 81 X Q Yang and L Liu (2019), "Tian Wang Bu Xin Dan for Insomnia: A Systematic Review of Efficacy and Safety", 2019, pp 4260801 82 Jie-Shu You, et al (2012), "Evaluation of anxiolytic activity of compound Valeriana jatamansi Jones in mice", BMC Complement Altern Med, 12(1), pp 223 83 CHEN Yunwei (2007), "Effect of Zhenzhumu Pill on Insomnia Induced by Negative Life Events [J]", Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 84 Hong Zhang, et al (2008), "Effects of tenuifolin extracted from radix polygalae on learning and memory: a behavioral and biochemical study on aged and amnesic mice", Phytomedicine, 15(8), pp 587-594 85 LI Zhi-rong (2006), "Treatment of Insomnia (Sthenic-Syndrome) by Changpu Lianxin Tang: A Clinical Observation of 66 Cases [J]", New Journal of Traditional Chinese Medicine, 86 Guo Ziqiang, et al (1995), "Effects of Radix Codonopsis Pilosukae on Ischemic Reperfusion Injury in Isolated Working Heart of Rats [J]", JOURNAL OF BEIJING UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE, PHỤ LỤC THỐNG KÊ Thử nghiệm chữ thập nâng cao Số lần nhánh mở lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Thời gian lƣu lại nhánh mở lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Số lần nhánh mở lô uống cao NADT liều 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Thời gian lƣu lại nhánh mở lô uống cao NADT liều 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Số lần nhánh mở lô uống cao NADT liều 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất Thời gian lƣu lại nhánh mở lô uống cao NADT liều 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất Thử nghiệm ngăn sáng tối (Light – dark test) Số lần ngăn sáng lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Thời gian lƣu lại ngăn sáng lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Số lần ngăn sáng lô uống cao NADT liều 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Thời gian lƣu lại ngăn sáng lô uống cao NADT liều 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Số lần ngăn sáng lô uống cao NADT liều 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất Thời gian lƣu lại ngăn sáng lô uống cao NADT liều 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất Thử nghiệm dây leo (Grip test) Số điểm bám dây lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Số điểm bám dây lô uống cao NADT liều 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Số điểm bám dây lô uống cao NADT liều 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất Thử nghiệm vận động tự phát Số lần vận động ngang lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Số lần vận động dọc lô uống diazepam mg/kg lô uống nƣớc cất Số lần vận động ngang lô uống cao NADT 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Số lần vận động dọc lô uống cao NADT 0,83 g/kg lô uống nƣớc cất Số lần vận động ngang lô uống cao NADT 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất Số lần vận động dọc lô uống cao NADT 1,67 g/kg lô uống nƣớc cất ... đề tài:? ?Nghiên cứu tác dụng an thần cao thuốc NADT chuột nhắt trắng? ?? cần đƣợc tiến hành MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Mục tiêu tổng quát: Nghiên cứu tác dụng an thần cao thuốc NADT chuột nhắt trắng Mục... liên quan đến thuốc NADT Ở Việt Nam giới chƣa có nghiên cứu liên quan đến thuốc NADT, nhiên, có số nghiên cứu tác dụng an thần có liên quan đến vị thuốc thuốc NADT Bảng 1.3 Một số nghiên cứu liên... độc tính cấp cao thuốc NADT chuột nhắt trắng đƣờng uống - Đánh giá tác dụng an thần, giải lo âu cao thuốc NADT thông qua: + Số lần nhánh mở thời gian lƣu lại nhánh mở chuột nhắt trắng đực sau