Khảo sát hoạt tính của quercetin từ cây an điền hai hoa ( hedyotis biflora (l) lam) lên chỉ tiêu về sinh lý của chuột nhắt trắng (mus musculus var albino) đề xuất sử dụng quercetin chống lại bệnh ung thư

1 TÁC GIẢ: Nguyễn Thái Kim Hằng Chương 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Lý chọn đề tài Từ xa xưa, người biết sử dụng thảo mộc làm thuốc trị bệnh Ngày nay, với phát triển khoa học, đặc biệt lãnh vực nghiên cứu hợp chất thiên nhiên kết hợp với ngành sinh học, dược học y học, người ta xác định cách khoa học nguồn gốc chữa bệnh phương thuốc cổ truyền Hơn thế, việc cô lập, ly trích, xác định cấu trúc, thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất thiên nhiên đóng vai trò then chốt trình khám phá loại thuốc tổng hợp hợp chất hữu ích cho đời sống người Như biết, ung thư bệnh nguy hiểm có tỉ lệ tử vong cao bệnh khác Khảo sát gần Hà Nội, TP.HCM, cần Thơ, Thái Nguyên Huế cho thấy, tỷ lệ mắc nhiều loại ung thư Việt Nam ngày tăng, ước tính Việt Nam có 100.000 người mắc ung thư mới/năm Ngày chứng ta chưa có biện pháp dùng dể ngăn ngừa bệnh ung thư mà điều trị ung thư phương pháp sau: hóa trị, xạ trị, giải phẫu Mặc dầu với tốc độ phát triển kỹ thuật cao để tìm giải pháp chữa trị có hiệu mặt y học lẫn kinh tế bệnh ung thư nhiều mặt hạn chế tốn Gần đây, có số nghiên cứu cho thấy, vài ly trích từ thực vật có khả kháng phân bào Ngày không nước ta nước có Y học cổ truyền khu vực Châu Á - Thái Bình Dương biết sử dụng cỏ làm thuốc, mà nhiều nước phát triển giới ngày có xu hướng quay lại với thảo dược để tận dụng hoạt chất gần gũi với thiên nhiên, độc hại cho người để dự phòng điều trị ung thư cách riêng rẽ kết hợp với phương pháp điều trị để làm giảm độc tính tác dụng không mong muốn.Chứng ta sẵn có dồi nguồn dược liệu thiên nhiên ban tặng, lẽ lại coi nhẹ Chính muốn tiến hành nghiên cứu khả kháng phân bào chiết xuất tự nhiên này, cụ thể quercetin An điền hai hoa (Hedyotií biflora (L.) Lam.) Chúng hy vọng khám phá vài chiết xuất tự nhiên cỗ khả ngăn ngừa bệnh ung thư dùng đề chữa ung thư hiệu Đây bưởc đầu nghiên cứu hoạt tính quercetin - ly ưích từ An điền hai hoa (Hedyotis biflora (L.) Lam.) 12* Giới hạn đề tàỉ - Xác định tiêu trọng lượng sinh lý máu chuột (số lượng hồng cầu, sé lượng bạch cầu, hàm lượng hemoglobin) - Nghiên cứu chuột nhắt trắng Mus musculus Var Albino 13 Thòi gỉan địa điểm - Thời gian thực hiện: từ tháng 03/2009 đến tháng 05/2009 - Địa điểm thực hiện: Phòng thí nghiệm khoa Công nghệ Sinh học - Đại học Công Nghiệp IV 1A Tồng quan 1.4.1 Cây An điền hai hoa: - Tên khoa học: Hedyotis biflora (L.) Lam - Tên gọi: Cây An điền Tên khác: Cây hai hoa - hai mồng - Họ: Hình 1.1: Cây An điền hai hoa Cà phê Rubiaceae Thân thảo, không lông, cỗ rễ sái vị, thân mập Lá cỗ phiến thon hẹp, dài từ - cm, gân phụ không rõ, cuống có cánh, bẹ có hai Tán nách nhánh mang 2-4 hoa màu trắng Nang láng, to 4mm, đài cố gân, hột nhỏ, nhiều Mọc sân vườn, bình nguyên Cây An điền hai hoa (Hedyotis biflora (L.) Lam.) thích hợp với đất cát, nơi thoáng mát, thường gặp sân vườn, từ bình nguyên đến trung du khắp nước ta, nhiều nước nhiệt đới khác (Nam Trung Quốc, nước Châu Á, Phi, Mỹ Ấn Độ, Indonesia ) An điền hai hoa có vị đắng, tính mát, có tác dụng nhiệt, bổ thần kinh, trị vết rắn cắn trị đau bao tử Ở Minh Hải nhân dân dùng sắc nước uống để giúp kháng viêm sau mổ, đau xương cốt thấp khớp Ở Ấn Độ dùng để chữa dày bị kích thích, suy giảm thần kinh 1.4.2 Quercetin: 1.4.2.1 Nguồn gốc: Quercetin số màu vàng tự nhiên phân bố rộng rãi thực vật Nó phát dạng aglycon quercetin có vỏ Quercus tinctoria; thủy giải quercetin môi trương acid nhận quercetin phân tử rhamnose C21H20On + H2O - ► C15H10O7 + CH3(CHOH)4CHO Quercetrin 1.4.2.2 Quercetin Rhamnose Tên gọi: - Tên thương mại: Quercetin - Tên quốc tế: 2-(3, - dihydroxyphenyl) - , , - trihydroxy- 4H- chromen 4- one Tên gọi khác: 3, 3’, 4’, 5, 7- Pentahydroxyflavone; Meletin; Sophoretin 1.4.2.3 Công thức: Công thức phân tử: C15H10O7 (M = 302,236 g/mol) Công thức cấu tạo: H = rutinose 1.4.2.4 rr" O-nnnciia Thành phần nguyên tố: H = 3, 34% o = 37, 06% c = 59, 60% Tính chất vật lý: Bột kết tinh màu vàng, hình kim - Điểm nóng chảy: 316 - 317°c (có tài liệu ghi 313 - 314°C) - Độ hòa tan: lg quercetin hòa tan 290 ml cồn tuyệt đối, 23 ml cồn sôi Tính tan: tan acid acetic băng, tan dung dịch kiềm có màu vàng, không tan nước 1.4.2.5 - Tính chất hóa học: Quercetin đun với KOH tạo thành hai sản phẩm có cấu trúc đơn giản 12 phloroglucinol acid protocatechuic Tác dụng với diazometan dimetilsulíat môi trường kiềm tạo thảnh hợp chất pentametilquercetin (3, 5, 7, 3’, 4’ - pentametoxiflavon) có điểm nóng chảy 152°c Hợp chất đun sôi với dung dịch KOH EtOH nhận hai sản phẩm - Nhóm - o - metal quercetin pentametil eter thủy giải nhanh môi trường acid 1.4.2.6 - Tính kháng ngăn chặn phát triển tế bào ung thư: Dựa nghiên cứu thử nghiệm in vitro quercetin có hoạt tính kháng ung thư mà có tác dụng ngăn chặn phát triển dòng ung bướu ác tính Kết nghiên cứu Yoshida cộng cho thấy quercetin có khả ngăn chặn phát triển dòng ung thư dày HGC-27, NUGC-2, NKN-7 MKN-28 - Nghiên cứu Markaverich Scambia cho thấy quercetin có khả ngăn chặn phát triển tế bào ung thư vú, buồng trứng ung thư ruột (COLON 320 DM) 1.4 Các công trình nghiên cứu liên quan Trong nước: Phạm Nguyễn Kim Tuyến (2008), Luận án tiến sĩ hóa học - “Tìm hiểu thành phần hóa học số thuộc chi Hedyotis mọc Việt Nam điều chế số dẫn xuất Thioílavon từ Flavon cô lập được”, ĐH Khoa học tự nhiên - Nguyễn Trung Nhân (2000), Luận án thạc sĩ hóa học - “Ly trích Rutin từ hoa hòe Sophora jaonica., điều chế Quercetin dẫn xuất”, ĐH Khoa học tự nhiên - Lương Đăng Hoàng (2007), “ Sử dụng phương pháp bàn cờ để khảo sát tác dụng hiệp đồng Flavonoid kháng sinh Staphylococcus aureus đề kháng methicillin”, ĐH Y Dược TP.HCM Bài báo: - Nguyễn Cửu Khoa , Hoàng Thị Kim Dung (2003), “Nghiên cứu tổng hợp số dẫn xuất Quercerin, xác định hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn chúng”, Hoả học kỷ XXI phát triển bền vững: Tuyển tập session, Phạm Nguyễn Kim Tuyến; Nguyễn Kim Phi Phụng; Phạm Đình Hùng, Khảo sát hỏa học an điền hai hoa Hedyotis biflora L., Tuyển tập công trình Hội nghị khoa học công nghệ hoá học hữu toàn quốc lần thứ tư - Hội Hoá học Việt Nam ; 2007/SỐ 00 552-555 Hoàng Thị Kim Dung, Nguyễn Cửu Khoa, Nguyễn Ngọc Hạnh (2006), “So sánh hoạt tính chống ôxy hoá số flavonoid (dạng glucosid genin) chiết từ hoa hoè vỏ quýt”( Extraction - hydrolysis and comparison of antioxidant activity of some flavonoids from Sophora japonica and Citrus deliciosa Peel), Tạp Dược liệu Nước ngoài: Ryu SY (1997), In-vitro antitumor-activity of flavonoids from Sophora- Flavescens, The Phytotherapy research, pp 23-29 Nitra Nuengchamnon (2004), Separation and detection of the antioxidant flavonoids, rutin and quercetin, using HPLC coupled on-line with colorimetric detection of antioxidant activity, The Naresuan University Journal Lee Wattenberg (2006), Influence of quercetin and rutin on growth and antioxidant defense system of a human hepatoma cell line (HepG2), The European Journal of Nutrition European Journal of Nutrition (2006), “Ảnh hưởng quercetin rutin lên phát triển hệ bảo vệ chống oxi hóa dòng tế bào ung thư gan người” (Influence of quercetin and rutin on growth and antioxidant defense system of a human hepatoma cell line (HepG2)) Chương 2: MỤC TIÊU - PHƯƠNG PHÁP 2.1 Muc tiêu Khảo sát tác dụng quercetin tiêu sinh lý chuột nhắt trắng Mus musculus var Albino Với mục tiêu: Tác dụng quercetin trọng lượng chuột nhắt trắng Tác dụng quercetin tiêu sinh lý máu chuột nhắt trắng (hồng cầu, bạch cầu hemoglobin ) 2.2 Phương pháp 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu: Cây An điền hai hoa ( Hedyotis biflora (L.) Lam.) thu hái ven sườn đồi thuộc địa phận huyện Đồng Xoài, tỉnh Bình Phước Cây An điền hai hoa( Hedyotis biflora (L.) Lam.) nhận danh khoa học ThS Liêu Hồ Mỹ Trang, Trường Đại Học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh - Chuột nhắt trắng Mus musculus Var Albino mua viện Pastuer Hồ Chí Minh nuôi ổn định tuần chuồng chuột sở chuột Chuột thỉ muscuỉus 2.2.2 Bố trí thí nghiệm - Thí nghiệm lặp lại lô chuột giống Mỗi lô chia thành liều thí nghiệm: • Liều liều thí nghiệm cho chuột uổng 0,01 ml dung dịch vởi tỉ lệ 2mg/ml Quercetin pha với Dimethylsunlphoxide (DMSO) • Liều liều thí nghiệm cho chuột uống 0,01 ml dung dịch với tỉ lệ 5mg/ml Quercertin pha DMSO • Liều đối chứng liều thí nghiệm cho chuột uống 0,01 ml dung dịch DMSO Mỗi liều gồm nhóm chuột đực chuột (5 con/nhỗm) Cứ cách ngày khảo sát cho uống thuốc khảo sát tiêu: trọng lượng, sinh lý máu lô Bảng 2.1: Phân liều thí nghiệm lô Nghiệm thức Đối chứng liều liều Giới tính Cái Đực Cái Đực Cái Đực Số lưọrng 5 5 5 Hình 2.2: Phần ỉô chuột ỉàm thỉ nghiệm Các tiêu sinh lí khảo sát: trọng lượng, số lượng hồng cầu, bạch cầu, hàm lượng hemoglobin mốc thời gian 3, 6, 9,12,15,18,21 ngày uống quercetin Dụng cụ thí nghiệm: a Theo dối trọng lượng chuột: - Cân điện tử - Hộp nhựa đựng chuột - Giấy - Bút Becher 200 ml Hình 2.3: Dụng cụ theo dõi trọng lượng b Theo dõi hồng cầu - bạch cầu - hemoglobin: - Buồng đếm hồng cầu, bạch cầu - Lamelle - Bộ huyết sắc kế Sahli - Kính hiển vi - Dụng cụ sát trùng chích máu - Ống nhốt chuột - Dụng cụ lấy máu để theo dối hàng cầu, bạch cầu - cồn 70°, gòn - Ống trộn hồng cầu, bạch cầu, hemoglobin - Giá kẹp đỡ chuột cầu, bạch cầu, hàm lượng hemoglobin 2.2.3 Theo dõi trọng lượng chuột: Trọng lượng chuột cân kiểm tra cân điện tử ghi nhận thay đổi trọng lượng chuột 2.2.4 Phưomg pháp đếm sá lượng hồng cầu: Nguyên tắc: Pha loãng máu tỉ lệ định, cho máu vào phòng đếm biết rõ kích thưởc đếm kính hiển vi số thể tích định, tính số lượng hồng cầu có lmm3 máu Dung dịch đếm hồng cầu: sử dụng dung dịch Marcano (gồm 5g Na2 SO4 , ml formol, vài giọt xanh methylen, nước cất vừa đủ 100 ml) Cách tính số lượng hồng cầu: - Trong 50 ô lớn có 80 ô nhỏ, Vậy số lượng hồng cầu ô nhỏ A/ 80 - Thể tích ô nhỏ V = l/20m X l/20m X l/10m = l/4000mm3 - Máu pha loãng 200 lần, Đếm sổ lượng cầu lần buồng đếm khác nên: A = (Aj+ A2)/2 - Công thức tính hồng cầu /mm3 máu là: N = A/80 X 4000 X 200= A xioooo (tế bào/mm3máu) Vói N: số lượng hồng cầu lmm3 máu Kết quả: 10 số lượng hồng cầu đếm lmm3 máu số lượng hồng cầu đếm ô lớn phòng đếm Neubauer nhân với 104 2.2.5 Phương pháp đếm số lượng bạch cầu: Nguyên tắc: Pha loãng máu tỷ lệ định dung dịch Lazarus, để phá vỡ hồng cầu tạo xanh để nhận dạng bạch cầu Sau vào phòng đếm biết rõ kích thước đếm kính hiển vi số thể tích định, tính số lượng bạch cầu có lmm3 máu Dung dịch đếm bạch cầu: sử dụng dung dịch Lazarus (gồm ml dung dịch acid acetic bão hòa, 2-3 giọt xanh methylen cồn 90°, nước cất vừa đủ 100 ml) Cách tính số lượng bạch cầu: Đem số lượng bạch cầu lần buồng đếm khác nên: B = (B1+B2)/2 Số lượng bạch cầu lmm3 là: (B X 20 X 4000)7400 = B X 200 (tế bào/mm3máu) Kết quả: Số lượng bạch cầu đếm lmm3 máu số lượng bạch cầu đếm ô lớn phòng đếmNeubauer nhân với 104 2.2.6 Phương pháp định lượng hemoglobin (Hb): Nguyên tắc: Dùng HC1 để chuyển toàn hemoglobin có thể tích máu định thành hematin chlorhydrate màu nâu sẫm, pha loãng cách cho nước cất vào đếm màu ống thí nghiệm trùng với màu ống chuẩn Sau ghi nhận lượng Hb có 100 ml máu Kết quả: Đọc theo kết hemoglobin chuẩn có huyết sắc kế Sahli 2.2.7 Phương pháp xử lý sổ liệu: 20 Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,28 > 0,05) Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,24 > 0,05) Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,047 < 0,05, F = 4,81 >Fc = 4,75) Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả hàm lượng hemoglobin trung bình chuột theo thời gian (bảng 10 phần phụ lục) cho thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (98,20% - 98,44%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (1,56%- 1,80%) Như vậy, hàm lượng hemoglobin trung bình chuột liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt trắng uống quercetin không ảnh hưởng đến hàm lượng hemoglobin trung bình máu chuột bình thường Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực chuột cái: Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực chuột thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bảng 3.6, đồ thị 3.6 Bảng 3.6: Hàm lượng hemoglobin TB (%) chuột đực mốc thời gian khảo sát Liều thí nghiệm Giống Đối chứng Đực 12.13+0.25 11,69 + 1,09 11,75+0,85 Cái 11,53+0,45 11,21+0,57 12,65 + 1,19 Đực 11,95+0,21 11,87 + 1,45 12,08+0,95 khảo sát Cái 12,59 + 1,61 11,55+0,25 12,00 + 0,20 (ngày) Đực 12,21 +0,32 11,97+0,85 12,17 + 1,60 Cái 12,21 +0,06 11,97 + 1,21 12,17 + 1,35 Thời gian 21 Đực 12,79+0,35 12,25+0,64 12,49 + 1,09 Cái 12,31 ±0,38 11,99+0,90 12,95 + 1,11 Đực 12,37+0,40 12,41 +0,72 12,51 +1,32 Cái 12,52 + 0,34 12,44 + 1,40 12,87 + 1,59 Đực 12,69+0,15 12,71 +0,38 12,79+0,80 Cái 12,85+0,11 12,80+0,52 13,21 +0,86 Đực 12,91 +0,65 12,51 +0,35 12,71 +0,45 Cái 12,81 +0,32 12,66+0,24 13,05+0,47 12 15 18 21 Đồ thị 3.6: Hàm lượng hemoglobin TB (%) chuột đực cải mốc thời gian khảo sát Dựa vào bảng 3.6, đồ thị 3.6 kiểm định ANOVA (bảng 11 phần phụ lục) ta thấy: Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,07 > 0,05) Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,11 > 0,05) 22 Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,49> 0,05) Hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,03 Fc = 4,23) Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực chuột theo thời gian (bảng 12 phần phụ lục); cho ta thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (96,10% - 96,82%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (3,18% 3,90%) Như vậy, hàm lượng hemoglobin trung bình chuột đực liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt trắng đực uống quercetin không ảnh hưởng đến hàm lượng hemoglobin trung bình máu chuột bình thường 3.2.2 Số lượng bạch cầu trung bình: Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực: Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bảng 3.7, đồ thị 3.7 Bảng 3.7: số lượng bạch cầu TB (103TB/ml) chuột đực mốc thời gian khảo sát Liều thí nghiệm Thời Đối chứng 27,4 ± 1,79 25,93 + 1,03 22,67 +2,41 28,93 +4,47 27,67 +4,71 26,47 + 2,74 36,93 ± 1,60 33,53 +4,45 32,8 + 3,48 12 33,13+4,51 32,8 + 4,74 29,4 + 3,44 15 36,47 + 0,76 34,93 +4,62 34,67 +4,03 18 38,8 + 4,24 38,53 +4,23 36,67 +4,51 21 37,73 +4,17 39,07 +5,21 38,6 + 5,88 gian khảo sát (ngày) 23 45.00 “ 40.00 _ 35.00 « ^ 30.00 o J 25.00 20.00 §!t 15^00 J "" 10.00 5.00 0.00 12 15 □ liều ■ liều □ Đối chứng 18 21Ngày ĐỒ thị 3.7: số lượng bạch cầu TB (103TB/mỉ) chuột đực mốc thời gian khảo sát Dựa vào bảng 3.7, đồ thị 3.7 kiểm định ANOVA (bảng 13 phần phụ lục) ta thấy: Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,64 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,70 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,36 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,59 < 0,05) Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả bạch cầu trung bình chuột đực theo thời gian (bảng 14 phần phụ lục) cho thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (96,94% 98,24%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (1,76% - 3,06%) Như vậy, số lượng bạch cầu trung bình liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt trắng đực uống quercetin không ảnh hưởng đến số lượng bạch cầu trung bình máu chuột bình thường 24 Số lượng bạch cầu trung bình chuột Số lượng bạch cầu trung bình chuột thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bảng 3.8, đồ thị 3.8 Bảng 3.8: số lượng bạch cầu TB (103TB/ml) chuột cải mốc thời gian khảo sát Liều thí nghiệm Đối chứng 26,73 +5,54 23,20 + 1,31 24,33 +2,87 28,87 +4,05 26,60 + 3,26 26,47+4,62 36,33 +5,27 32,27 +5,21 33,87 +5,20 12 33,13+5,22 29,33 +5,91 30,53 +4,98 15 35,00 + 5,14 33,13+5,89 34,73 +2,50 36,07 + 5,63 35,33 +5,47 36,93 +5,45 38,87 + 2,01 37,80 + 5,73 30,53 +4,98 Thời gian khảo sát (ngày) 18 21 Đồ thị 3.8: số lượng bạch cầu TB (103TB/mỉ) chuột mốc thời gian khảo sát 25 Dựa vào bảng 3.8, đồ thị 3.8 kiểm định ANOVA (bảng 15 phần phụ lục) ta thấy: Số lượng bạch cầu trung bình chuột liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,65> 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,35 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,59 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,71 < 0,05) Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả bạch cầu trung bình chuột theo thời gian (bảng 16 phần phụ lục); cho ta thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (97,06% 98,60%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (1,40% - 2,94%) Như vậy, số lượng bạch cầu trung bình chuột liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát.Vậy việc cho chuột nhắt trắng uống quercetin không ảnh hưởng đến số lượng bạch cầu trung bình máu chuột bình thường Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực chuột cái: Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực chuột thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bảng 3.9, đồ thị 3.9 26 Bảng 3.9: sổ lượng bạch cầu TB (103TB/ml) chuột đực cải mốc thời gian khảo sát Liều thí nghiệm Thời gian 12 khảo sát(ngày) 15 18 21 Đối chứng Đực 27,40 ± 1,79 25,93 + 1,03 22,67 + 2,41 Cái 26,73 +5,54 23,20 + 1,31 24,33 + 2,87 Đực 28,93 +4,47 27,67 + 4,71 26,47 + 2,74 Cái 28,87+4,05 26,60 + 3,26 Đực 36,93 + 1,60 33,53 + 4,45 Cái 36,33 +5,27 32,27 + 5,21 Đực 33,13 +4,51 32,80 + 4,74 29,40 + 3,44 Cái 33,13+5,22 29,33 + 5,91 30,53 + 4,98 Đực 36,47 +0,76 34,93 + 4,62 34,67 + 4,03 Cái 35,00 +5,14 33,13 + 5,89 Đực 38,80 +4,24 38,53 + 4,23 36,67 + 4,51 Cái 36,07 +5,63 35,33 + 5,47 36,93 + 5,45 Đực 37,73 +4,17 39,07 + 5,21 38,60+ 5,88 Cái 38,87 +2,01 37,80 + 5,73 30,53 + 4,98 26,47 + 4,62 32,80 + 3,48 33,87 + 5,20 34,73 + 2,50 27 Đồ thị 3.9: số lượng bạch cầu TB ị103TB/ml) chuột đực mốc thời gian khảo sát Dựa vào bảng 3.9, đồ thị 3.9 kiểm định ANOVA (bảng 17 phần phụ lục) ta thấy: Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,36 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,33 > 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,16> 0,05) Số lượng bạch cầu trung bình chuột đực liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,67> 0,05) Bên cạnh đó, kết bảng thống kê mô tả bạch cầu trung bình chuột đực theo thời gian (bảng 18 phần phụ lục); cho thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (90,54% 93,33%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (6,67% - 9,46%) Như vậy, số lượng bạch cầu trung bình liều thí nghiệm chuột đực khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt đực uống quercetin không ảnh hưởng đến số lượng bạch cầu trung bình chuột bình thường 28 3.2.3 Số lượng hồng cầu trung bình: Sổ lượng hồng cầu trung bình chuột đực: Số lượng hồng cầu trung bình chuột đực thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bảng 3.10, đồ thị 3.10 Bảng 3.10: số lượng hồng cầu TB (104TB/ml) chuột đực mốc thời gian khảo sát Liêu thí nghiệm Thời gian khảo sát (ngày) 12 15 18 Đối chứng 873,40 + 17,84 789,60 + 13,35 932,33 +22,18 969,60 + 11,50 1029,60 + 39,02 1140,80 + 33,23 1321,67+58,46 1263,80 + 56,77 1490,80 + 59,97 1600,70 + 21,96 1485,3 +25,55 1526,90 + 28,55 1633,00+42,71 1588,40 + 63,77 1581,00 ±35,98 1758,60 + 64,24 1670,87 +63,19 1635,40+43,88 1806,8 +27,30 1813,13+33,98 1691,67 ±15,48 21 Đồ thị 3.10: Sổ lượng hồng cầu TB (104TB/ml) chuột đực mốc thời gian khảo sát 29 Dựa vào bảng 3.10, đồ thị 3.10 kiểm định ANOVA (bảng 19 phần phụ lục) ta thấy: Số lượng hồng cầu trung bình chuột đực liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (.p = 0,95 > 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình chuột đực liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,82 > 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình chuột đực liều thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê Số lượng hồng cầu trung bình chuột đực liều thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê liều đối chứng mốc (p = 0,98 > 0,05) liều đối chứng mốc (p = 0,78 > 0,05) Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả hồng cầu trung bình chuột đực theo thời gian (bảng 20 phần phụ lục); cho thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (96,14% 98,24%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (1,76% - 3,86%) Như vậy, số lượng hồng cầu trung bình chuột đực liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt trắng đực uống quercetin không ảnh hưởng đến số lượng hồng cầu trung bình máu chuột bình thường Số lượng hồng cầu trung bình chuột cái: Số lượng hồng cầu trung bình chuột thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bảng 3.11 đồ thị 3.11 Bảng 3.11: số lượng hồng cầu TB ịl04TB/ml) chuột mốc thời gian khảo sát Liều thí nghiệm Đối chứng 839,53 ± 25,53 777,00+ 14,42 862,33 + 13,32 1127,47 + 33,76 1109,93 + 35,45 1166,53 + 31,92 1406,00+32,29 1412,40+30,29 1513,67 + 24,86 Thời gian khảo sát (ngày) 30 1531,60 ±40,46 1662,53+ 16,70 1730,27 + 43,72 15 1618,33 ±51,34 1754,00 ± 56,02 1727,20 ± 51,93 18 1705,47 ± 50,64 1846,20 ±45,33 1745,27 ± 54,95 21 1795,93 ±25,58 1856,00 ± 52,98 1788,33 ±45,13 12 Đồ thị 3.11: Số lượng hồng cầu TB (104TB/ml) chuột mốc thời gian khảo sát Dựa vào bảng 3.11, đồ thị 3.11 kiểm định ANOVA (bảng 21 phần phụ lục) ta thấy: Số lượng hồng cầu trung bình chuột liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,93 > 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình chuột liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,79 > 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình chuột liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,7> 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình chuột liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,94 > 0,05) 31 Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả hồng cầu trung bình chuột theo thời gian (bảng 22 phần phụ lục) cho thấy độ xác (P) giao động tương đối lớn (95,77% 97,96%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (2,04% - 4,23%) Như vậy, số lượng hồng cầu trung bình chuột liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt trắng uống quercetin không ảnh hưởng đến số lượng hồng cầu trung bình máu chuột bình thường Số lương hồng cầu trung bình chuôt đưc chuôt cái: số lượng hồng cầu trung bình chuột đực chuột thí nghiệm xử lí thống kê trình bày bày bảng 3.12, đồ thị 3.12 Bảng 3.12: Sổ lượng hồng cầu TB ịl04TB/ml) chuột đực cải mốc thời gian khảo sát Liều thí nghiệm Đối chứng Thời Đực 873,40 + 17,84 789,60 + 13,35 932,33 +22,18 Cái 839,53 +25,53 777,00 + 14,42 862,33 + 13,32 Đực 969,60 + 11,50 1029,60 + 39,02 1140,80 + 33,23 Cái 1127,47 + 33,76 1109,93 +35,45 1166,53 +31,92 Đực 1321,67+58,46 1263,80 + 56,77 1490,80 + 59,97 Cái 1406,00 + 32,29 1412,40 + 30,29 1513,67 + 24,86 Đực 1600,70 + 21,96 1485,3 +25,55 1526,90 + 28,55 Cái 1531,6+40,46 1662,53 + 16,70 1730,27 +43,72 Đực 1633,00 + 42,71 1588,40 + 63,77 1581,00 + 35,98 Cái 1618,33+51,34 1754,00 + 56,02 1727,20 + 51,93 gian khảo sát (ngày) 12 15 32 Đực 1758,60 + 64,24 1670,87 + 63,19 1635,40 + 43,88 Cái 1705,47 ± 50,64 1846,20 + 45,33 1745,27 + 54,95 Đực 1806,8 +27,30 1813,13+33,98 1691,67 + 15,48 Cái 1795,93 +25,58 1856,00 + 52,98 1788,33 +45,13 18 21 200 õ ¿Cữ ¿cữ ¿cữ ¿Cữ ¿Cữ ¿Cữ o o o o o o 12 15 18 o Đực Đực xo Đực bb ITT Đực c xoOI «D- 1800 1600 g- 1400 É 1200 Ễ 1000 800 ễ 600 400 Đực OI 2000 Đực m 21 □ Liều ■ Liều □ Đối chứng Ngày ĐỒ thị 3.12: sổ lượng hồng cầu TB (104TB/ml) chuột đực cải mốc then gian khảo sát Dựa vào bảng 3.12, đồ 3.12 kiểm định ANOVA (bảng 23 phần phụ lục) ta thấy: Số lượng hồng cầu trung bình liều 1, liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,95 > 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình liều liều mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,97 > 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,76> 0,05) Số lượng hồng cầu trung bình liều liều đối chứng mốc thời gian khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê (p = 0,79> 0,05) Bên cạnh đó, với kết bảng thống kê mô tả hồng cầu trung bình chuột đực chuột theo thời gian (bảng 24 phần phụ lục); cho thấy độ xác (P) giao 33 động tương đối lớn (82,82% - 87,46%) hệ số phân tán (CV) giao động tương đối nhỏ (12,54%- 17,18%) Như vậy, số lượng hồng cầu trung bình chuột đực liều thí nghiệm khác biệt không ý nghĩa thống kê sinh học điểm thời chuột gian khảo sát Vậy việc cho chuột nhắt trắng đực uống quercetin không ảnh hưởng đến số lượng hồng cầu trung bình máu chuột bình thường 34 CHƯƠNG : KÉT LUÂN VÀ KIÉN NGHI •• 4.1 Kết luân Qua trình khảo sát tiêu sinh lý trọng lượng sinh lý máu chuột nhắt trắng theo mốc thời gian, ta nhận thấy khả ức chế trình phân bào quercetin không xảy tất loại tế bào sinh dưỡng Đồng thời, khi tiến hành khảo sát tiêu sinh sản chuột đực không ảnh hưởng mặt thống kê sinh học Chứng tỏ quercetin khả gây ảnh hưởng đến khả sinh sản chuột đực sau dùng quercetin Như vậy, kết nghiên cứu này, làm tảng cho việc thử nghiệm khả kháng phân bào quercetin chứng tỏ khả không gây ảnh hưởng quercetin số loại tế bào thể khảo sát, từ tế bào sinh dưỡng đến tế bào sinh dục Việc chứng minh mở hướng việc nghiên cứu dược liệu điều trị bệnh ung thư, góp phần cung cấp thêm dược liệu cho ngành y tế Với tác dụng quercetin vậy, đóng góp nhiều cho việc sản xuất thuốc phòng ngừa điều trị ung thư Ngoài ra, chiết xuất điều chế quercetin hoàn toàn mang ý nghĩa to lớn đến kinh tế, với nguồn tài nguyên thực vật Việt Nam phong phú có giá trị cao 4.2 Kiến nghị Đe khẳng định cụ thể hoạt tính sinh học dược liệu quercetin, tiếp tục khảo sát tiến trình tiếp theo: - Khảo sát tác dụng quercetin tiêu sinh lí sinh sản chuột nhắt trắng - Khảo sát tác dụng quercetin tiêu sinh lí chuột nhắt trắng kết họp sử dụng phương pháp chạy PCR - Khảo sát tác dụng quercetin vi sinh vật gây bệnh - Khảo sát tác dụng quercetin chuột gây ung thư ... Nghiệp IV 1A Tồng quan 1.4.1 Cây An điền hai hoa: - Tên khoa học: Hedyotis biflora (L.) Lam - Tên gọi: Cây An điền Tên khác: Cây hai hoa - hai mồng - Họ: Hình 1.1: Cây An điền hai hoa Cà phê Rubiaceae... line (HepG2)) Chương 2: MỤC TIÊU - PHƯƠNG PHÁP 2.1 Muc tiêu Khảo sát tác dụng quercetin tiêu sinh lý chuột nhắt trắng Mus musculus var Albino Với mục tiêu: Tác dụng quercetin trọng lượng chuột nhắt. .. chuột nhắt trắng Tác dụng quercetin tiêu sinh lý máu chuột nhắt trắng (hồng cầu, bạch cầu hemoglobin ) 2.2 Phương pháp 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu: Cây An điền hai hoa ( Hedyotis biflora (L.) Lam.)