Khảo sát hoạt tính biến tính tinh bột gạo của enzyme phân nhánh tái tổ hợp trong bacillus subtilis

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN THANH LƯU KHẢO SÁT HOẠT TÍNH BIẾN TÍNH TINH BỘT GẠO CỦA ENZYME PHÂN NHÁNH TÁI TỔ HỢP TRONG Bacillus subtilis Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã chuyên ngành: 60540101 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2020 Cơng trình hồn thành Trường Đại học Cơng nghiệp TP Hồ Chí Minh Người hướng dẫn khoa học 1: TS Đoàn Thị Ngọc Thanh Người hướng dẫn khoa học 2: TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh Luận văn thạc sĩ bảo vệ Hội đồng chấm bảo vệ Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Cơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh ngày 16 tháng 01 năm 2021 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: GS.TS Đống Thị Anh Đào - Chủ tịch Hội đồng TS Phan Thế Đồng - Phản biện PGS.TS Nguyễn Thị Minh Nguyệt - Phản biện TS Nguyễn Đức Vượng - Ủy viên TS Lê Hương Thuỷ - Thư ký CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG VIỆN TRƯỞNG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRẦN THANH LƯU MSHV: 17000611 Ngày, tháng, năm sinh: 13/10/1987 Nơi sinh: Tiền Giang Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm Mã chuyên ngành: M540101 I TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát hoạt tính biến tính tinh bợt gạo enzyme phân nhánh tái tổ hợp Bacillus subtilis NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Tinh thu nhận enzyme phân nhánh từ Bacillus subtilis tái tổ hợp; Khảo sát hoạt tính biến tính bột gạo enzyme phân nhánh ảnh hưởng pH, nhiệt độ, nồng độ bột gạo, nồng độ enzyme, thời gian thủy phân II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: Theo QĐ số 1883/QĐ-ĐHCN ngày 16/10/2019 III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 16/11/2020 IV NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Người hướng dẫn 1: TS Đoàn Thị Ngọc Thanh Người hướng dẫn 2: TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh Tp Hồ Chí Minh, ngày … tháng … năm 20 … NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) NGƯỜI HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) VIỆN TRƯỞNG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM (Họ tên chữ ký) LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc nhất đến TS Đoàn Thị Ngọc Thanh TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh - người giao đề tài, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý giá, tận tình hướng dẫn, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình nghiên cứu Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Cơng nghiệp TP Hồ Chí Minh, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm; Lãnh đạo Trường Đại học Tiền Giang, Khoa Nông nghiệp Công nghệ thực phẩm quý thầy cô giáo giảng dạy lớp cao học tận tình giúp đỡ tơi hồn thành luận văn khóa học Cuối cùng, tơi xin dành tình cảm đặc biệt đến gia đình, người thân người bạn tôi, người mong mỏi, động viên tiếp sức cho tơi để hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, tháng 11 năm 2020 Trần Thanh Lưu i TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ Cuộc sống đại ngày nay, người giải phóng sức lao đợng (giảm lao đợng chân tay), điều kiện kinh tế nâng cao ăn uống chưa hợp lý, đặc biệt ăn nhiều tinh bột dẫn đến nhiều bệnh xuất béo phì, tiểu đường Với mong muốn lượng tinh bột ăn vào làm chậm tiêu hóa giúp người ăn tiếp nhận lượng, kỹ thuật biến tính tinh bột nghiên cứu Trong đề tài này, tinh thu nhận enzyme phân nhánh tái tổ hợp Bacillus subtilis khảo sát điều kiện ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme Tinh bợt gạo sử dụng nghiên cứu (gạo IR50404) có chỉ tiêu hóa lý: tinh bợt gạo hịa tan nước nhiệt độ 25oC: 6,5 ± 1,4 (mg/ml); độ nhớt dung dịch hồ tinh bột nhiệt độ 25oC: 1,7 ± 0,5 (cP); tỷ lệ thối hóa gel tinh bợt biến tính 10% bảo quản nhiệt độ 4oC; hàm lượng amylose (%): 26,7 ± 0,5; amylopectin có DP 612 chiếm 25%, DP 13-24 chiếm đến 44%, mạch DP 25-36 chiếm 19% amylopectin có DP > 36 chiếm 10% Kết khảo sát điều kiện hoạt đợng thích hợp cho q trình biến tính tinh bợt gạo enzyme phân nhánh: pH 7, nhiệt độ 65℃, nồng độ tinh bột 5%, nồng độ enzyme 25 U thời gian ủ Phân tích cấu trúc tinh bợt biến tính có tỷ lệ mạch nhánh tăng thêm 12,3% so với tinh bột gạo tự nhiên Kết bước đầu trình ứng dụng tinh bợt gạo biến tính dùng chế biến bún, hủ tiếu có khả chậm tiêu hóa Từ khóa: tinh bợt biến tính, enzyme phân nhánh, Bacillus subtilis ii ABSTRACT Today, people are liberated to work (reduced manual labor), advanced economic conditions but inadequate eating, especially eating too much starch will lead to many diseases such as obesity, diabetes With the desire to eat the same amount of starch but will slow digestion, modified starch techniques have been studied This study, purification and acquisition of recombinant branching enzyme in Bacillus subtilis and investigated the conditions affecting enzyme activity Physico-chemical properties of rice starch (rice IR50404) used in the study were: water solubility at 25oC: 6.5 ± 1.4 (mg/ml); viscosity of gelatinized at 25oC: 1.7 ± 0.5 (cP); The retrogradation rate of modified starch gel is 10% when stored at 4oC; Amylose content (%): 26.7 ± 0.5; amylopectin has DP 6-12 accounting for 25%, DP 13-24 accounts for 44%, DP 25-36 circuit accounts for 19% and amylopectin has DP> 36 accounting for 10% Results showed that appropriate conditions for modified rice starch by branching enzymes: pH 7, temperature 65oC, starch concentration 5%, enzyme concentration 25 U and incubation time hours Structural analysis of modified starch had an increase of 12.3% of the branched chain compared to natural rice starch This result is the first step in the application process of modified rice starch used in the processing of vermicelli and noodles with the ability to slow digestion Key words: modified starch, branching enzyme, Bacillus subtilis iii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các kết nghiên cứu kết luận luận văn trung thực, không chép từ bất kỳ một nguồn bất kỳ hình thức Việc tham khảo nguồn tài liệu (nếu có) thực trích dẫn ghi nguồn tài liệu tham khảo quy định Học viên Trần Thanh Lưu iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ ii ABSTRACT iii LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH MỤC HÌNH ẢNH ix DANH MỤC BẢNG BIỂU x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xi MỞ ĐẦU .1 Đặt vấn đề .1 Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu Cách tiếp cận phương pháp nghiên cứu .3 Ý nghĩa đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tình hình tiêu thụ tinh bợt bệnh có liên quan đến sử dụng tinh bợt .5 1.1.1 Tình hình tiêu thụ tinh bợt 1.1.2 Các bệnh liên quan đến sử dụng tinh bột v 1.2 Tổng quan tinh bợt biến tính 1.2.1 Các phương pháp biến tính tinh bợt 1.2.2 Cơng dụng tinh bợt biến tính .10 1.2.3 Các dạng biến tính tinh bợt sử dụng enzyme 11 1.3 Enzyme phân nhánh 14 1.3.1 Tình hình nghiên cứu enzyme phân nhánh 15 1.3.2 Cơ chế tác động enzyme phân nhánh 16 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme phân nhánh 18 1.4.1 Ảnh hưởng pH 18 1.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ 18 1.4.3 Ảnh hưởng nồng độ chất 19 1.4.4 Ảnh hưởng nồng độ enzyme 20 1.4.5 Ảnh hưởng thời gian phản ứng 21 1.5 Phương pháp tinh enzyme mục tiêu 21 1.5.1 Phương pháp sắc ký 22 1.5.2 Thẩm tích 24 1.6 Tình hình nghiên cứu nước 25 1.6.1 Trong nước .25 1.6.2 Ngoài nước .26 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28 2.1 Vật liệu nghiên cứu .28 2.1.1 Vật liệu .28 2.1.2 Dụng cụ thiết bị .28 2.1.3 Hóa chất 30 vi 2.1.4 Môi trường .32 2.2 Nội dung nghiên cứu 33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 34 2.3.1 Nội dung 1: Phân tích tính chất hố lý cấu trúc phân tử tinh bột gạo 34 2.3.2 Nội dung 2: Biến nạp plasmid mang gen mã hóa cho enzyme phân nhánh vào vi khuẩn Bacillus subtilis; biểu hiện, thu nhận tinh enzyme phân nhánh 35 2.3.3 Nội dung 3: Khảo sát hoạt tính enzyme phân nhánh tinh bột gạo nhiều điều kiện khác 38 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .49 3.1 Phân tích tính chất hoá lý cấu trúc phân tử tinh bợt gạo 49 3.1.1 Phân tích tính chất hóa lý tinh bợt gạo 49 3.1.2 Cấu trúc phân tử bột gạo 51 3.2 Biến nạp plasmid mang gen mã hóa enzyme phân nhánh vào vi khuẩn B subtilis; nuôi cấy vi khuẩn B subtilis thu nhận, tinh enzyme phân nhánh 52 3.2.1 Biến nạp plasmid mang gen mã hóa enzyme phân nhánh vào vi khuẩn B subtilis .52 3.2.2 Thu nhận tinh enzyme phân nhánh .53 3.3 Khảo sát hoạt tính biến tính tinh bợt gạo enzyme phân nhánh .55 3.3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng pH 55 3.3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 56 3.3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ bột gạo 58 3.3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ enzyme 59 3.3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian thủy phân 60 3.3.6 Kết cấu trúc tinh bợt sau biến tính 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 vii KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Tinh bột sử dụng nghiên cứu có chỉ tiêu hóa lý: tinh bột gạo tan nước nhiệt độ 25oC: 6,5 ± 1,4 (mg/ml); độ nhớt dung dịch hồ bột gạo nhiệt độ 25oC: 1,7 ± 0,5 (cP); tỷ lệ thối hóa gel tinh bợt 10% bảo quản nhiệt độ 4oC; hàm lượng amylose (%): 26,7 ± 0,5; amylopectin có DP 6-12 chiếm 25% , DP 13-24 chiếm đến 44%, mạch DP 25-36 chiếm 19% amylopectin có DP > 36 chiếm 10% Biểu thành công enzyme BBE thông qua hệ thống biểu B subtilis 1012 tinh chế, thu nhận hệ thống sắc ký lực Ni-NTA thu BBE tinh có kích thước khoảng 80 kDa Dưới tác dụng enzyme phân nhánh BBE, tinh bột gạo bị thủy phân thành mạch glucan phân nhánh bó amylopectin Thơng qua đó, cải thiện cấu trúc tinh bợt, giúp hình thành tinh bợt biến tính chậm tiêu hóa Kết khảo sát điều kiện hoạt đợng thích hợp cho q trình biến tính tinh bợt gạo enzyme phân nhánh: pH 7, nhiệt độ 650C, nồng độ tinh bột 5%, nồng độ enzyme 25 U thời gian ủ Phân tích cấu trúc tinh bợt biến tính có tỷ lệ mạch nhánh tăng thêm 12,3% so với tinh bột gạo tự nhiên Kiến nghị So sánh hoạt tính chuyển hóa BBE với enzyme chuyển hóa khác để thu nhận tinh bợt tinh bợt biến tính cao nhất Nghiên cứu tạo sản phẩm (bún, hủ tiếu, bánh, ) từ sản phẩm tinh bợt biến tính 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] World Health Organization “Diabetes in Viet https://www.who.int/vietnam/health-topics/diabetes Nam.” Internet: [2] Trương Thị Thảo Nguyên Trần Hữu Dũng “Nghiên cứu điều chế tinh bợt biến tính bền vững với amylase làm thực phẩm chức hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường,” Tạp chí Dược học ISSN: 0866-7861, 2012 [3] N S M Yazid et al “Application of Starch and Starch-Based Products in Food Industry,” Journal of Science and Technology Vol 10, no 2, pp 144174, 2018 [4] Transparency Market Research “Starch Market - Global Industry Analysis, Size, Share, Growth, Trends and Forecast 2016 – 2024.” Internet: http://www.transparencymarketresearch.com/starch-market.html [5] Lee et al “Impact of Diverse Cultivars on Molecular Structures of Rice Starch for Food and Crystalline Processing,” Carbohydrate Polymers Vol 169, pp 33-40, 2017 [6] W Girsang “Feasibility Of Small-Scale Sago Industries in The Maluku Islands, Indonesia Sago Palm,” Springer Pp 109-121, 2018 [7] L Amagliania et al “Chemistry, structure, functionality and applications of rice starch,” Journal of Cereal Science Vol 70, pp 291-300, 7/2016 [8] World Health Organization “Global report on diabetes.” Internet: https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/204871/9789241565257_en g.pdf?utm_medium=email&utm_source=transaction, 2016 [9] Lê Thị Tuyết cộng “Ảnh hưởng một số đặc điểm ăn uống lối sống tĩnh đến bệnh béo phì nam học sinh tiểu học Hà Nội năm 2012,” Khoa học Tự nhiên Công nghệ Số 31, tập 2, trang 60-66, 2015 64 [10] Bantle and John P “The Dietary Treatment of Diabetes Mellitus,” Medical Clinics of North America Vol 72, no 6, 11/1988 [11] E Bertoft “On the building block and backbone concepts of amylopectin structure,” Cereal Chemistry Vol 90, pp 294-311, 2013 [12] Bismark S et al “Effects of Differential Degree of Chemical Modification on the Properties of Modified Starches: Sizing,” The Journal of Adhesion Vol 94, no 2, pp 97-123, 2018 [13] Din, Zia-ud- et al “Physical and Chemical Modification of Starches - A Review,” Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2015 [14] Butler D.P et al “Starch-acting enzymes” Pp 128-155, 2004 [15] Mehta D., and Satyanarayana T “Bacterial and archaeal α‐amylases: Diversity and amelioration of the desirable characteristics for industrial applications,” Frontiers in Microbiology Vol 7, pp 1129, 2007 [16] Miao et al “Slowly digestible starch-A review,” Critical Reviews in Food Science and Nutrition Vol 55, pp 1642-1657, 2015 [17] Nisha M., and Satyanarayana T “Recombinant bacterial amylopullulanases: Developments and perspectives,” Bioengineered Vol 4, pp 388-400, 2013 [18] R N Tharanathan “Starch-Value addition by modification,” Critical Reviews in Food Science and Nutrition Vol 45, pp 371-384, 2005 [19] J H Park et al “Physicochemical properties of enzymatically modified maize starch using 4‐α‐glucanotransferase,” Food Science and Biotechnology Vol 16, pp 902-909, 2007 [20] M W Kanning et al “Improved creaminess in stirred yoghurt through amylomaltase‐treated starch domains,” International Dairy Journal Vol 27, pp 86-91, 2012 65 [21] S Mun et al “Development of reduced‐fat mayonnaise using 4αGTase‐modified rice starch and xanthan gum,” International Journal of Biological Macromolecules Vol 44, pp 400-407, 2009 [22] P S Hoon et al “Properties and applications of starch modifying enzymes for use in the baking industry,” Food Sci Biotechnol Vol 27, pp 299-312, 4/2018 [23] H N Englyst et al “Classification and measurement of nutritionally important starch fractions,” Eur J Clin Nutr Vol 46, pp S33-50, 1992 [24] L C Tapsell “Diet and metabolic syndrome: Where does resistant starch fit in?,” J AOAC Int Vol 87, pp 756-760, 2004 [25] J Nissar et al “Resistant Starch- Chemistry and Nutritional properties,” International Journal of Food Science and Nutrition, Vol 2, pp 95-108, 2017 [26] A P Nugent “Health properties of resistant starch,” Nutr Bull Vol 30, pp 27-54, 2005 [27] H S Lee et al “Cooperative action of β-glucanotransferase and maltogenic amylase for an improved process of isomaltooligosaccharide (IMO) production,” J Agric Food Chem Vol 50, pp 2812-2817, 2017 [28] N Grewal et al “Structure of waxy maize starch hydrolyzed by maltogenic α‐amylase in relation to its retrogradation,” Journal of Agriculture and Food Chemistry Vol 63, pp 4196-4201, 2015 [29] H Leemhuis et al “Isomalto/malto‐ polysaccharide, a novel soluble dietary fiber made via enzymatic conversion of starch,” Journal of Agricultural and Food Chemistry Vol 62, pp 12034-12044, 2014 [30] D Goffin et al “Will isomalto‐oligosaccharides, a well‐established functional food in Asia, break through the European and American market? 66 The status of knowledge on these prebiotics,” Critical Reviews in Food Science and Nutrition Vol 51, pp 394-409, 2011 [31] S J Lee et al “Production and characterization of branched oligosaccharides from liquefied starch by the action of Bacillus licheniformis amylase,” Starch Vol 47, pp 127-134, 1995 [32] J N BeMiller and R L Whistler “Starch: Chemistry and technology ( 3rd ed.)” Burlington, MA: Academic Press, 2009 [33] J H Auh et al “Modification of rice starch by selective degradation of amylose using alkalophilic Bacillus cyclomaltodextrinase,” Journal of Agricultural and Food Chemistry Vol 54, pp 2314– 2319, 2006 [34] M L Shinoharaet et al “A novel thermostable branching enzyme from an extremely thermophilic bacterial species, Rhodothermus obamensis,” Applied Microbiology and Biotechnology Vol 57, pp 653– 659, 2001 [35] H Kamasaka et al “ Bacillus stearothermophilus neopullulanase selective hydrolysis of amylose to maltose in the presence of amylopectin,” Applied and Environmental Microbiology Vol 68, pp 1658– 1664, 2002 [36] E J Oh et al “Modification of granular corn starch with 4‐αglucanotransferase from Thermotoga maritima: Effects on structural and physical properties,” Journal of Food Science Vol 73, pp C158–C166, 2008 [37] M Miao et al “Impact of mild acid hydrolysis on structure and digestion properties of waxy maize starch,” Food Chemistry Vol 126, pp 506– 513, 2011 [38] G Potocki‐Veronese et al “Amylose synthesized in vitro by amylosucrase: Morphology, structure, and properties,” Biomacromolecule Vol 6, pp.1000– 1011, 2013 67 [39] A Rolland‐Sabaté et al “Elongation and insolubilisation of α‐glucans by the action of Neisseria polysaccharea amylosucrase,” Journal of Cereal Science Vol 40, pp 17– 30, 2004 [40] Q T Le et al “Amylolytically‐resistant tapioca starch modified by combined treatment of branching enzyme and maltogenic amylase,” Carbohydrate Polymers Vol 75, pp 9– 14, 2009 [41] H Kajiura et al “A novel enzymatic process for glycogen production,” Biocatalysis and Biotransformation Vol 26, pp 133– 140, 2008 [42] B H Lee et al “Enzyme‐synthesized highly branched maltodextrins have slow glucose generation at the mucosal α‐glucosidase level and are slowly digestible in vivo,” Plos One Vol 8, pp 59745, 2013 [43] M Miao et al “Dual‐enzymatic modification of maize starch for increasing slow digestion property,” Food Hydrocolloids Vol 38, pp 180– 185, 2014 [44] L C Kyu et al “Enzymatic Synthesis and Properties of Highly Branched Rice Starch Amylose and Amylopectin Cluster,” Journal of Agricultural and Food chemistry Vol 56, pp 126-131, 2008 [45] Smith A M et al “The synthesis of the starch granule,” Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol Vol 48, pp 65–87, 1997 [46] Davies Henrissat B et al “Glycosyltransferases, glycoside hydrolases: Surprise, surprise!,” Current Opinion in Structural Biology Vol 18, pp 527– 533, 2008 [47] Boyer C D., and Preiss J “Multiple forms of (1,4)-α-D-glucosyl transferase from developing Zea mays L kernels,” Carbohydr Res Vol 61, pp 321– 334, 1978 68 [48] Haworth W N et al “Synthesis of amylopectin,” Nature (Lond.) Vol 154, pp 236–238, 1994 [49] A Regina et al “Control of starch branching in barley defined through differential RNAi suppression of starch branching enzyme IIa and Iib,” Carbohydrate Polymers Vol 61, pp 1469-1482, 3/2010 [50] H Guan et al “Comparing the properties of Escherichia coli branching enzyme and maize branching enzyme," Arch Biochem Biophys Vol 342, pp 92-98, 1/1997 [51] I J Tetlow and M J Emes, “A review of Starch-branching enzymes and their role in amylopectin biosynthesis,” IUBMB Life Pp 546-558, 2015 [52] X Li et al “ Partial branching enzyme treatment increases the low glycaemic property and α‐1,6 branching ratio of maize starch,” Food Chemistry Vol 164, pp 502– 509, 2004 [53] H Takata et al “Application of branching enzyme in starch processing,” Biocatalysis and Biotransformation Vol 28, pp 60-63, 2010 [54] S A Barker et al “Enzymic synthesis of polysaccharides,” Q Rev Vol 5, pp 56–83, 1951 [55] M L Shinohara et al “A novel thermostable branching enzyme from an extremely thermophilic bacterial species, Rhodothermus obamensis,” Appl Microbiol Biotechnol Vol 57, pp 653–659, 2001 [56] Đỗ Quý Hai “Giáo trình Động học enzyme.” Internet: https://voer.edu.vn/c/dong-hoc-enzyme/c6628b9e/0a676f67 [57] Nguyễn Đức Lượng cộng Công nghệ enzyme Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, 2004 69 [58] K T Jip et al “Modes of action of Acarbose hydrolysis and transglycosylation catalyzed by a Thermostable Maltogenic Amylase, the gene for which was cloned from a Thermus strain,” Applied and environmental microbiology Pp 1644-1651, 4/1999 [59] Fan LT et al “Mechanism of the enzymic hydrolysis of cellulose: effects of major structural features of cellulose on enzymic hydrolysis,” Biotechnol Bioeng Vol 22, pp 177–99, 1980 [60] Nguyễn Trọng Cẩn cộng Công nghệ enzyme Nhà xuất Nông nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, 1998 [61] D L Purich “Factors influencing enzyme activities,” Enzyme Kinetics: Catalysis & Control Pp 379-484, 2010 [62] Chaiken I.M “Analytical affinity chromatography in studies of molecular recognition in biology: a review,” J Chromatogr Pp 201-203, 1986 [63] J W Goding “Affinity Chromatography,” Monoclonal Antibodies princibles and practice Vol 3, pp 327-351, 1996 [64] J A Bornhorst and J J Falke “Purification of Proteins Using Polyhistidine Affinity Tags,” Methods in Enzymology Vol 326, pp 245-254, 2000 [65] S Harcum “Purification of protein solutions,” Biologically Inspired Textiles A volume in Woodhead Publishing Series in Textiles, pp 26-43, 2008 [66] Hồng Kim Anh Ngơ Kế Sương “Nghiên cứu cơng nghệ sản x́t tinh bợt biến tính từ tinh bợt sắn gạo,” trình bày Hội nghị Cơng nghệ sinh học tồn quốc, Hà Nợi, trang 627-634, 2009 [67] Vũ Thị Thuận cộng “Kết nghiên cứu lựa chọn enzyme thích hợp cho trình sản x́t tinh bợt biến tính,” Tạp chí Thơng tin Khoa học Công nghệ số 2, 2015 70 [68] Nguyễn Thị Minh Hạnh cộng “Nghiên cứu quy trình cơng nghệ, thiết bị mơ hình chế biến tinh bợt biến tính,” Báo cáo khoa học kỹ thuật Đề tài nhánh thuộc đề tài cấp Nhà nước KC 07-14 Viện Công nghiệp Thực phẩm, 2003 [69] Trương Thị Thảo Nguyên Trần Hữu Dũng “Nghiên cứu điều chế tinh bợt biến tính bền vững với amylase làm thực phẩm chức hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường,” Tạp chí Dược học, ISSN: 0866-7861, 2012 [70] Hiroki Takata et al “Production and some properties of a dextrin with a narrow size distribution by the cyclization reaction of branching enzyme,” Journal of Fermentation and Bioengineering Vol 84, pp 119-123, 1997 [71] Kwang Yeon Lee et al “Effects of α-glucanotransferase treatment on the thermo-reversibility and freeze-thaw stability of a rice starch gel,” Carbohydrate Polymers Vol 63, pp 347-354, 2006 [72] H J Ah et al “Preparation and physical characteristics of slowly digesting modified food starches,” Carbohydrate Polymers Vol 67, pp 366-374, 2007 [73] N.S Seo et al “Structural characterization of rice starch in rice cake modified by Thermus scotoductus 4-alpha-glucanotransferase (TS alpha GTase),” Journal of Food Science Vol 72, pp C331-6, 2007 [74] Quang-Tri Le et al “Amylolytically-resistant tapioca starch modified by combined treatment of branching enzyme and maltogenic amylase,” Carbohydrate Polymers Vol 75, pp 9–14, 2009 [75] Mukherjee, P.K et al “V Pharmbit,” Carbohydrate Vol 1, pp 23-29, 2007 71 [76] D K Reddy and M.G Bhotmange “Viscosity of Starch: A Comparative Study of Indian Rice (Oryza Sativa L.) Varieties,” International Review of Applied Engineering Research Vol 4, pp 397-402, 2014 [77] A A Perdon et al “Starch Retrogradation and Texture of Cooked Milled Rice During Storage,” Journal of Food Science Vol 64, no 5, 1999 [78] J Y Han et al “Molecular structure of sorghum and waxy sorghum starches,” Food science and biotechnology Vol 17, pp 176-179, 2008 [79] 79 Lê Ngọc Tú Hóa Sinh Công Nghiệp Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 1998, trang 440 [80] F Shih et al “Physicochemical Properties of Rice Starch Modified by Hydrothermal Treatments,” Journal of Cereal Chemistry Vol 84, pp 527531, 2007 [81] R M Daniel et al “The effect of temperature on enzyme activity: new insights and their implications,” Extremophiles Vol 12, pp 51–59, 2008 [82] W.D Crabb and M Colin “Enzymes involed in the processing of starch to sugar,” Journal of Trend in Biotechnology Vol 15, pp 349-352, 1997 [83] L Li et al “Characterization of maize amylose-extender (ae) mutant starches,” Carbohydrate Polymers Vol 1, pp 202-205, 2002 72 PHỤ LỤC KẾT QUẢ THỐNG KÊ Khảo sát ảnh hương pH đến hoạt tính enzyme ANOVA DE Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 019 004 20.571 000 Within Groups 002 12 000 Total 021 17 DE Subset for alpha = 0.05 Duncana pH N 1204 1378 3 1447 1783 1901 Sig 1901 2124 056 301 065 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khảo sát ảnh hương nhiệt độ đến hoạt tính enzyme ANOVA DE Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 020 003 13.905 000 Within Groups 003 16 000 Total 023 23 73 DE Subset for alpha = 0.05 Duncana NĐ N 1110 1393 1423 3 1519 1614 1614 1617 1617 3 1866 2124 Sig 1.000 101 057 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khảo sát ảnh hương nồng độ tinh bột đến hoạt tính enzyme ANOVA DE Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 018 004 3.090 051 Within Groups 014 12 001 Total 031 17 DE Subset for alpha = 0.05 Duncana NDcc N 3 1167 1732 1732 1775 1775 1981 2009 2124 Sig .057 218 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 74 Khảo sát ảnh hương nồng đợ enzyme đến hoạt tính enzyme ANOVA DE Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 016 003 3.457 036 Within Groups 011 12 001 Total 027 17 DE Subset for alpha = 0.05 Duncana NDez N 1142 3 1561 1734 1761 1819 2124 Sig 1561 116 060 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khảo sát ảnh hưởng thời gian phản ứng đến hoạt tính enzyme ANOVA DE Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 046 008 3.819 018 Within Groups 028 14 002 Total 074 20 75 DE Subset for alpha = 0.05 Duncana TG N 1008 1089 1089 3 1108 1108 1126 1126 3 2019 2124 Sig 1912 771 056 1912 591 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 76 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG CỦA HỌC VIÊN I LÝ LỊCH SƠ LƯỢC: Họ tên: TRẦN THANH LƯU Giới tính: Nam Ngày, tháng, năm sinh: 13/10/1987 Nơi sinh: Tiền Giang Email: luutranthanh@gmail.com Điện thoại: 0902 870 819 II QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: Năm 2005 - 2009: Kỹ sư Công nghệ chế biến thủy sản - Trường Đại học Nha Trang Năm 2017 đến nay: Thạc sĩ Công nghệ thực phẩm - Trường Đại học Công nghiệp TP Hồ Chí Minh III Q TRÌNH CƠNG TÁC CHUN MƠN: Thời gian 2009 - 2011 2011 Nơi công tác Trường Đại học Tiền Giang Công việc đảm nhiệm Viên chức (Chuyên viên) đến Chi cục Quản lý chất lượng Nông lâm Công chức (Chuyên viên) sản Thủy sản tỉnh Tiền Giang Tp HCM, ngày tháng năm 20 Người khai (Ký tên) 77 ... TÀI: Khảo sát hoạt tính biến tính tinh bợt gạo enzyme phân nhánh tái tổ hợp Bacillus subtilis NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Tinh thu nhận enzyme phân nhánh từ Bacillus subtilis tái tổ hợp; Khảo sát hoạt. .. bợt gạo biến tính Mục tiêu cụ thể: - Tinh thu nhận enzyme phân nhánh (168 branching enzyme) từ Bacillus subtilis tái tổ hợp - Khảo sát hoạt tính biến tính bợt gạo enzyme phân nhánh ảnh hưởng... ứng enzyme tạo sản phẩm phụ Từ vấn đề trên, đề tài ? ?Khảo sát hoạt tính biến tính tinh bột gạo enzyme phân nhánh tái tổ hợp Bacillus subtilis? ?? tiến hành, tạo tiền đề cho nghiên cứu biến tính