Nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt tính sinh học của polysaccharide từ hạt me (tamarindus indica l ) việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI BÙI NGỌC TÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA POLYSACCHARIDE TỪ HẠT ME (TAMARINDUS INDICA L.) VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỮU CƠ Hà Nội – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI BÙI NGỌC TÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA POLYSACCHARIDE TỪ HẠT ME (TAMARINDUS INDICA L.) VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 62440114 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỮU CƠ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS THÀNH THỊ THU THỦY TS NGUYỄN TUẤN ANH Hà Nội – 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thực dƣới hƣớng dẫn PGS.TS Thành Thị Thu Thủy TS Nguyễn Tuấn Anh Các số liệu kết luận án hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc tác giả khác công bố Hà Nội, ngày TM Tập thể hƣớng dẫn tháng Nghiên cứu sinh Bùi Ngọc Tân i năm 2017 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận án này, nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ quý báu thầy cô, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực bạn bè đồng nghiệp Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Thành Thị Thu Thủy, TS Nguyễn Tuấn Anh - ngƣời thầy tận tình hƣớng dẫn, bảo tơi suốt q trình học tập thực nội dung nghiên cứu luận án này, cho lời khuyên bổ ích, lời động viên lúc tơi gặp khó khăn truyền cho tơi lòng say mê khoa học Tiếp theo, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện mặt cô chú, anh chị em tại: - Trung tâm phƣơng pháp phổ ứng dụng -Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Bộ môn Hữu - Trƣờng Đại học Bách khoa Hà Nội - Bộ mơn Hóa học - trƣờng Đại học Y Dƣợc Hải Phòng - Phòng Hóa phân tích Triển khai cơng nghệ, Viện Nghiên cứu Ứng dụng cơng nghệ Nha Trang - Phòng Thử nghiệm Sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Dự án Hộ trợ Nguồn nhân lực Y tế (ADB) - Bộ Y tế - GS Yoshiaki Yuguchi Đại học Osaka – Nhật Bản Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện Kỹ thuật Hóa học, Viện Đào tạo sau Đai học - Trƣờng Đại học Bách khoa Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành học phần luận án thủ tục cần thiết Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, ngƣời thân bạn bè quan tâm, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận án Tác giả luận án Bùi Ngọc Tân ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC KÍ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH x ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Polysaccharide lớp chất Xyloglucan 1.2 Polysaccharide từ me 1.2.1 Vài nét me 1.2.2 Cấu trúc hóa học ứng dụng polysaccharide từ me 11 1.3 Tình hình nghiên cứu nƣớc liên quan đến nội dung nghiên cứu luận án 13 1.3.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 13 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 20 CHƢƠNG 2: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Phƣơng pháp chiết tách 21 2.2 Phƣơng pháp xác định cấu trúc 21 2.2.1 Phƣơng pháp sắc ký thẩm thấu gel (GPC) 21 2.2.2 Phƣơng pháp phổ IR 22 2.2.3 Phƣơng pháp phổ NMR 23 26 2.2.5 Phƣơng pháp tán xạ ánh sáng (LS) tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS) 29 2.3 Phƣơng pháp thử hoạt tính sinh học 32 2.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào 32 2.3.2 Hoạt tính chống oxy hóa 33 2.3.3 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 35 2.3.4 Hoạt tính chống đơng tụ máu 36 2.3.5 Hoạt tính ly giải cục máu đông 36 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM 38 iii 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 38 3.2 Thu hái, định danh xử lý mẫu me 39 3.2.1 Thu hái định danh 39 3.2.2 Xử lý mẫu 39 3.3 Chiết tách tinh chế Tamarind Seed Polysaccharide (TSP) từ thịt hạt me 39 3.3.1 Xác định thành phần hóa học thịt hạt me 39 3.3.2 Chiết tách tinh chế TSP từ thịt hạt me 41 3.4 Điều chế dẫn xuất 43 3.4.1 Sulfate hóa 43 3.4.2 Acetyl hóa 46 3.5 Xác định thành phần cấu trúc hóa học TSP 49 3.5.1 Xác định thành phần đƣờng 49 3.5.2 GPC 49 3.5.3 Phổ IR 49 3.5.4 Phổ NMR 49 3.5.5 Phổ MS 50 3.5.6 Phƣơng pháp SEM 50 3.5.7 Phƣơng pháp LS 50 3.5.8 Phƣơng pháp SAXS 50 3.6 Đánh giá hoạt tính sinh học 51 3.6.1 Hoạt tính gây độc tế bào 51 3.6.2 Hoạt tính chống oxy hóa 52 3.6.3 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 53 3.6.4 Hoạt tính chống đơng tụ máu 54 3.6.5 Hoạt tính ly giải cục máu đông 54 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 55 4.1 Xác định thành phần thịt hạt me 55 4.2 Lựa chọn quy trình chiết tách mẫu nghiên cứu 56 4.3 Xác định cấu trúc TSP 59 4.4 Điều chế dẫn xuất 81 iv 4.4.1 Dẫn xuất TSPS 81 4.4.2 Dẫn xuất TSPA 88 4.5 Đánh giá hoạt tính sinh học ảnh hƣởng mức độ sulfate hóa acetyl hóa đến hoạt tính TSP dẫn xuất 94 KẾT LUẬN 102 KIẾN NGHỊ 104 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU 105 TÀI LIỆU THAM KHẢO 106 PHỤ LỤC 120 v DANH MỤC KÍ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Association of Official Analytical Chemist Arabinopyranose Diễn giải Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon 13 COSY Correlation spectroscopy Phổ COSY CS% Cell survival % % tế bào sống sót DA Mức độ acetyl hóa DMSO DPPH DS EC50 Degree of Acetylation Distortionless enhancement by polarisation transfer Dimethyl sulfoxide 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl Degree of Sulfation Effective Concentration 50% ESI-MS Electron spray ionization mass spectra Phổ khối lƣợng ESI-MS Fucp Gal Galp Glc Glcp GPC Fucopyranose Galactose Galactopyranose Glucose Glucopyranose Gel Permeation Chromatography Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy Human cervical cell cancer Human hepatocellular carcinoma AOAC Arap 13 C-NMR DEPT H-NMR HeLa Hep-G2 HMBC HPLC HR-ESI-MS HSQC Heteronuclear Mutiple Mond Correlation High Performance liquid Chromatography High resolution electrospray ionization mass spectrum Heteronuclear Single-Quantum correlation vi Hiệp hội hóa học phân tích Phổ DEPT Mức độ sulfate hóa Nồng độ có hiệu 50% Sắc ký thẩm thấu gel Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton Ung thƣ cổ tử cung Ung thƣ gan ngƣời Phổ HMBC Sắc kí lỏng cao áp hiệu cao Phổ khối lƣợng phân giải cao HRESI-MS Phổ HSQC IC50 Inhibitory concentration at 50% IR KB Infrared spectroscopy Human epidemoid carcinoma LD50 lethal dose 50% LS MCF7 Light Scattering Michigan cancer foundation-7 Nồng độ ức chế 50% đối tƣợng thử nghiệm Phổ hồng ngoại Ung thƣ biểu mô ngƣời Liều gây chết 50% động vật thực nghiệm Tán xạ ánh sáng Ung thƣ vú ngƣời MIC Minimum inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối thiểu Phổ NOESY OD Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy Optical density ROESY Rotating-Frame NOE Spectroscopy Phổ ROESY SAXS SC% SEM SRB TCA TFA TKP TMS TSP Small Angle X-ray scattering % scavenging capacity Scanning Electron Microscope Sulforhodamine B Trichloracetic acid Trifluoroacetic acid Tamarind kender power Tetramethylsilane Tamarind Seed Polysaccharide Tán xạ tia X góc nhỏ % khả trung hòa gốc tự Hiển vi điện tử quét TSPA Acetyl Tamarind Seed Polysaccharide TSP acetyl hóa NOESY TSPS WHO XyG Xyl Xylp Sulfated Tamarind Seed Polysaccharide World Health Organization Xyloglucan Xylose Xylosepyranose vii Mật độ quang học Acid trichloracetic Acid trifluoroacetic Bột hạt me Polysaccharide từ hạt me TSP sulfate hóa Tổ chức Y tế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số monosaccharide polysaccharide có nguồn gốc từ thực vật Bảng 2.1 Một số nhóm đặc trƣng băng sóng hấp thụ phổ FT-IR polysaccharide Bảng 2.2 Độ chuyển dịch hoá học δ(ppm) từ sở liệu sugabase dạng glucose, galactose xylose dung môi D2O Bảng 2.3 Thông số số dạng cấu trúc polymer Bảng 3.1 Ký hiệu mẫu tỉ lệ số mol chất tạo tác nhân sulfate hóa Bảng 3.2 Ký hiệu mẫu nồng độ tác nhân acetyl hóa Bảng 4.1 Thành phần thịt hạt me Bảng 4.2 Hiệu suất chiết tách TSP (% khối lƣợng) Bảng 4.3 Thành phần đƣờng TSPchiết từ hạt thịt me Bảng 4.4 Thành phần đƣờng TSP Bảng 4.5 Trọng lƣợng phân tử thành phần đƣờng TSP Bảng 4.6 Kết phân tích thành phần phổ IR TSP Bảng 4.7 Độ dịch chuyển hóa học phổ 1H 13C NMR TSP Bảng 4.8 Phổ ESI-MS TSP-oligosaccharide Bảng 4.9 Phổ ESI-MS/MS mảnh m/z 1224 Bảng 4.10 Phổ ESI-MS/MS mảnh m/z 1077 Bảng 4.11 Phổ ESI-MS/MS mảnh m/z 1011 Bảng 4.12 Phổ ESI-MS/MS mảnh m/z 457 Bảng 4.13 Phổ ESI-MS/MS mảnh m/z 413 Bảng 4.14 Kết từ phép đo LS TSP Bảng 4.15 Mối tƣơng quan tỉ lệ số mol tác nhân sulfate với DS Bảng 4.16 Kết phân tích phổ IR TSPS4 Bảng 4.17 Kết từ phép đo LS TSP TSPS4 Bảng 4.18 Mối tƣơng quan tỉ lệ số mol acetyl với DA Bảng 4.19 Kết phân tích phổ IR TSPA4 Bảng 4.20 Giá trị IC50 hoạt tính gây độc tế bào ( g/ml) Bảng 4.21 Kết hoạt tính khử sắt chống oxy hóa tổng số Bảng 4.22 Kết xác định hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định viii 14 Anupama A Suralkar, Kishor N Rodge, Rahul D Kamble, Kanchan S Maske, (2012) Evaluation of Anti-inflammatory and Analgesic Activities of Tamarindus indica Seeds International Journal of Pharmaceutical Sciences and Drug Research, 4(3), pp 213-217 15 AOAC International (1990) Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists 15th edition, Washington, D.C Association of Official Analytical Chemists 16 Arkhel Alka, Bhumarkar Laxmi, Ramteke Suman (2011) Formulation development and evaluation of sustainedrelease matrix tablet of lamivudine using tamarind seed polysaccharide Der Pharmacia Lettre, 3(4), pp 20-28 17 ASTM D570-98 (2010) Standard Test Method for Water Absorption of Plastics 18 Bernard Wathelet (1999), Nutritional analyses for proteins and amino acids in beans (Phaseolus sp.) Biotechnol Agron Soc Environ, (4), pp.197–200 19 Bock K, Pedersen.C, and Pedersen H, (1984) Carbon-13 nuclear magnetic resonance data for oligosaccharide Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry 42, pp.193-225 20 Brisco M., C Haniff R Hull, T M A Wilson and D B Sattelle (1986), Virology, 148, pp.218 -220 21 Brown.W, ed (1993) Dynamic Light Scattering; Theory and Applications Oxford Univ Press, U.K 22 Burchard.W (1992) In Laser Light Scattering in Biochemistry S E Hardirlg, D B Sattelle, and V A Bloomfield, eds., Royal Society of Chemistry, Cambridge, U.K, pp 3-22 23 Coimbra.M.A., Barros.M, Barros.A, Rutdledge.D, and Delgadillo.I, (1998) Quantification of arabinose in pectic polysaccharides by FT-IR spectroscopy Carbohydrate Polymer 34, p.426 24 Cui.W, (2002) Application of two dimensional (2D) NMR spectroscopy in the structural analysis of selected polysaccharides Gums and Stabilizers for the Food Industry 11(P.A.Williams, and G.O Phillips, eds.), Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK, pp 27-53 107 25 Dabrowski J (1987) Application of two dimensional NMR methods in the structural analysis of oligosaccharides and other complex carbohydrates Twodimensional NMR Spectroscopy: Applications for Chemists and Biochemists (W.R Croasmun, and R.M.K Carlson, eds.) VCH Publishers Inc., New York, p 349 26 De Zwart, L.L., Meerman, J.H., Commandeur, J.N., Vermeulen, N.P (1999) Biomarkers of free radical damage applications in experimental animals and in humans Biology and Medicine, 26, pp.202 – 226 27 Deveswaran R, Bharath.S, Sharon Furtado, Sindhu Abraham, Basavaraj.B.V, Madhavan.V (2010) Isolation and Evaluation of Tamarind SeedPolysaccharide as a Natural Suspending Agent International Journal of Pharmaceutical& Biological Archives, 1(4), pp.360-363 28 Deveswaran R, Sindhu Abraham, Bharath S, Basavaraj B.V, Sharon Furtado, Madhavan.V (2009) Design and Characterization of Diclofenac sodium tablets containing Tamarind seed polysaccharide as Releaseretardant International Journal of Pharm Tech, 1(2), pp.191-195 29 Doughari JH (2006) Antimicrobial Activity of Tamarindus indica Linn Tropical Journal of Pharmaceutical Research, (2), pp 597-603 30 El-Siddig K, Gunasena.H.P.M, Prasad.B.A, Pushpakumara.D.K.N.G, Ramana.K.V.R, Vijayanand.P, Williams J.T, (2006) Tamarind Tamarindus indica L International Centre for Underutilised Crops University of Southampton, Southampton, UK 31 Emmy De Caluwé, Kateřina Halamová, Patrick Van Damme (2010) Tamarindus indicaL – A review of traditional uses, phytochemistry and pharmacology Afrika focus, 23(1), pp 53-83 32 Escalona-Arranz Jesús Rodriguez-Âmdo; Renato Perez-Ses; Javier CanizaresLay;Gustavo Sierra -Gonzalez; Humberto Morris-Uevedo; Irina Licea-Jimenez, (2011) Metabolites extraction optimization in Tamarindus indica L leaves Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 10(4), pp 369 – 378 108 33 Ferreira D, Barros.A, Coimbra.M.A, and Delgadillo.I, (2001) Use of FT-IR spectroscopy to follow the effect of processing in cell wall polysaccharide extracts of a sun-dried pear, Carbohydrate Polymers, 45, pp.175-182 34 Freitas.R.A and et al, (2005) Physico-chemical properties of seed xyloglucans from different sources Carbohydrate Polymers, 60, pp.507–514 35 Gidley, M.J., Lillford, P.J., Rowlands, D.W et al (1991) Structure and properties of tamarind-seed polysaccharide Carbohydrate Research, 214, 299– 314 36 Grant T.D., Luft J.R., Wolfley J.R., Tsuruta H., Martel A., Montelione G.T and Snell E.H (2011) Small angle X-ray scattering as a complementary tool for highthroughput structural studies Biopolymers, 95, pp 517530 37 Hans-Juărgen Butt, Brunero Cappella, Michael Kappl, (2005) Force measurements with the atomic force microscope:Technique, interpretation and applications Surface Science Reports, 59, pp 1–152 38 Heinze, T., Liebert, T., Koschella, A (2006) Esterification of Polysaccharides Springer-Verlag Berlin Heidelberg, pp 240 39 Huang Ronghua, Du Yumin, Yang Jianhong (2003) Preparation and in vitro anticoagulant activities of alginate sulfate and its quaterized derivatives Carbohydrate Polymers 52, pp.19–24 40 Huda Abdallah Mohamed Omer (2009) The Potential of Tamarind (Tamarindus indicaL.) Kernels as a Substitute Source of Pectic Substances University of Khartoum, pp.136 41 Hughes J P, Rees S, Kalindjian SB, Philpott KL (2011) Principles of early drug discovery British Journal of Pharmacology,162(6), pp 1239–1249 42 Huimin Qi, Quanbin Zhang, Tingting Zhao, Rugui Hu, Kun Zhang and Zhien Li (2006) In vitro antioxidant activity of acetylated and benzoylated derivatives of polysaccharide extracted from Ulva pertusa (Chlorophyta) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 16, pp 2441–2445 43 Iain C M Dea (1989) Industrial polysaccharides Pure &Application Chemistry 61(7), pp 1315-1322 109 44 Jesús Rodríguez-Amado, Renato Pérez Rosés, Julio César Escalona-Arranz, Ariadna Lafourcade Prada, C Gustavo Sierra González (2012) Standardization of the quality control parameters of the Tamarindus indica L soft extract Revista Cubana de Plantas Medicinales, 17(1), pp.108-114 45 Jharna Bansal, Nitin Kumar, Rishabha Malviya and Pramod Kumar Sharma (2014) Extraction and Evaluation of Tamarind Seed Polysaccharide as Pharmaceutical In situ Gel Forming System American-Eurasian Journal of Scientific Research (1), pp 01-05 46 Johnsen R M and W Brown (1992) in Laser Light Scattering in Biochemistry, S E Harding, D B Sattelle, and V A Bloomfield, eds., Royal Society of Chemistry, Cambridge, U.I, pp 77-91 47 Jong-il Choi, Jae-Kyung Kim, Periasamy Srinivasan, Jae-Hun Kim, Hyun-Jin Park, Myung-Woo Byuna, Ju-Woon Lee (2009) Comparison of gamma ray and electron beam irradiation on extraction yield, morphological and antioxidant properties of polysaccharides fromtamarind seed Radiation Physics and Chemistry 78, pp 605–609 48 Joshny Joseph, S N Kanchalochana, G Rajalakshmi, vedha Hari1, Ramya Devi Durai (2012) Tamarind seed polysaccharide: A promising natural excipient for pharmaceuticals International Journal of Green Pharmacy 6, pp.270-278 49 Juan Carlos González-Hernández et al, (2012) Chemical Hydrolysis of the Polysaccharides of the Tamarind Seed Journal of Mexican Chemical Society, 56(4), pp 395-401 50 Jun Liu, Victor Kisonen, Stefan Willför, Chunlin Xu, Francisco Vilaplana, (2016) Profiling the substitution pattern of xyloglucan derivatives by integrated enzymatic hydrolysis, hydrophilic-interaction liquid chromatography and mass spectrometry, Journal of Chromatography A, 1463, pp: 110–120 51 Kacurakova M, Capek P, Sasinkova V, Wellner N, and Ebringerova A (2000), FT-IR study of plant cell wall model compounds: pectic polysaccharides and hemicelluloses, Carbohydrate Polymer 43, pp.195-203 110 52 Kardono.L B S, Angerhofer.C K, Tsauri S., Padmawinata.K, Pezzuto J M, Kinghorn.A D (1991) Cytotoxic and antimalarial constituents of the roots of Eurycoma longifolia Journal of Natural Products, 5(54), pp.1360-1367 53 Karthikeyan Ganesan, Shyam Kumar Rajaram, Arunachalam Chinnathambi, Veerlakshmi Murugesan, Kasturiprabha Muruganantham, Thoufik Rahuman Amanullah, Infant Santhose Barthelomai, SathishkumarChinnasamy (2013) - A sustained release of tablet granules associated with ZnS nanocrystalsusing Tamarind seed polysaccharide Journal of Applied Pharmaceutical Science 3(4.1), pp 44-47 54 Kazuhiko Nishitani (1998) Construction and Restructuring of the CelluloseXyloglucan Framework in the Apoplast as Mediated by the Xyloglucan- Related Protein Family-A hypothetical scheme Journal of Plant Research 111, pp 159166 55 Khanittha Chawananorasest, Patsuda Saengtongdee and Praphakorn Kaemchantuek (2016) Extraction and Characterization of Tamarind (Tamarind indica L.) Seed Polysaccharides (TSP) from Three Difference Sources Molecules, 21, pp 1-9 56 Kumar, Bhattacharya S (2008) Tamarind seed: properties, processing and utilization Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 48(1), pp.1-20 57 Landi Librandi AP, Chrysóstomo TN, Azzolini AE, Recchia CG, Uyemura SA, de Assis-Pandochi AI, (2007) Effect of the extract of the tamarind (Tamarindus indica) fruit on the complement system: Studies in vitro and in hamsters submitted to a cholesterol-enriched diet Food and Chemical Toxicology 45, pp 1487–1495 58 Lang.P and Burchard.W, Makromol (1993) Structure and aggregation behavior of tamarind seed polysaccharide in aqueous solution Macromolecular Chemistry and Physics, 194(11), 3157–3166 59 Lang.P, Masci G, Dentini M, Crescenzi V, Cooke D, Gidley.M J, Fanutti.C & Reid.J S.G (1992) Tamarind seed polysaccharide: preparation, characterisation and solution properties of carboxylated, sulfated and alkylaminated derivatives Carbohydrate Polymers 17, pp 185-198 111 60 Lihong Fan, Lan Jiang, Yongmei Xu, Yue Zhou, Yuan Shen, Weiguo Xie, Zhongheng Long, Jinping Zhou (2011) Synthesis and anticoagulant activity of sodium alginate sulfates Carbohydrate Polymers, 83, pp.1797–1803 61 Luis A Bello-Pérez, Edith Agama-Acevedo, Paul B Zamudio-Flores, Guadalupe Mendez-Montealvo,Sandra L Rodriguez-Ambriz, (2010) Effect of low and high acetylation degree in the morphological, physicochemical and structural characteristics of barley starch Food Science and Technology, 43, pp.1434-1440 62 Maruf Iftekhar A.S.M., (2006) Effect of Tamarindus indica fruits on blood pressure and lipid-profile in human model: an in vivo approach Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, 19(2), pp.125-129 63 Meenakshi, Munish Ahuja, (2015) Metronidazole loaded carboxymethyl tamarind kernel polysaccharide-polyvinyl alcohol cryogels: Preparation and characterization International Journal of Biological Macromolecules, 72, pp.931–938 64 Michael J Gidley, Peter J Lillford, David W Rowlands, (1991) Structure and solution properties of tamarind-seed polysaccharide Carbohydrate Research, 214, pp 299-314 65 Michel Dubois, Gilles K.A, Hamilton J.K, Rebers P.A, and Fred Smith, (1956) Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Substances Analytical Chemistry 28, pp.350-356 66 Mishra, Khandare N.J, (2010) Evaluation of tamarind seed polysaccharide as abiodegradable carrier for colon specific drug delivery International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 3(1), pp.139-142 67 Mohamed HA, Mohamed BE and Ahmed KE, (2015) Physicochemical Properties of Tamarind (Tamarindus indica) Seed Polysaccharides Journal of Food Processing & Technology, 6(6), pp 1-5 68 Mohd Yusof Mohamad, Haris B Akram & Dinie Najwa Bero (2012) Tamarind Seed Extract Enhances Epidermal Wound Healing International Journal of Biology, 4(1), pp 81-88 112 69 Monks A, Scudiero.D , Skehan P, Shoemake.R, Paull K, Vistica D, Hose C, Langley J, Cronise P, Campbell H, Mayo J, Boyd M (1991) Feasibility of a high-flux anticancer drug screen using a diverse panel of cultured human tumor cell lines Journal of National Cancer Institute, 11(83), pp.757-766 70 Nagwa M Ammar Nagwa M Ammar, Abdel Nasser B Singab, Sherweit H ElAhmady, Amira A El-Anssary, Eman G Haggag and Rania S Shabban, (2010) Phytochemical and biological studies of some polysaccharide isolated from Aloe, Tamarindus, Opuntia and Citrus Journal of the Arab Society for Medical Research, 5(2), pp 141-152 71 Nanditha Billa, Dylan Hubin-Barrows, Tylor Lahren, Lawrence P Burkhard, (2014) Evaluation of micro-colorimetric lipid determination method with samples prepared using sonication and accelerated solvent extraction methods Talanta 119, pp 620–622 72 Nehad M Gumgumjee, Alaa Khedr and A S Hajar (2012) Antimicrobial activities and chemical properties of Tamarindus indica L leaves extract African Journal of Microbiology Research 6(32), pp.6172-6181 73 Nurhanan A R and Wan Rosli W I (2012) Evaluation of Polyphenol Content and Antioxidant Activities of Some Selected Organic and Aqueous Extracts of Cornsilk (Zea MaysHairs) Journal of Medical and Bioengineering 1(1), pp.4851 74 Nyadoi P, Okori P, Okullo J B L, Obua J, Burg K, Magogo Nasoro, Haji Saleh, Temu A B and Jamnadass R (2009) Tamarinds' (Tamarindus indica L.) niche tree species diversity characterisation reveals conservation needs and strategies International Journal of Biodiversity and Conservation, 1(4), pp.151176 75 O Seedevi, S Sudharsan, S Vasanth Kumar, A Srinivasan, S Vairamani and Shanmugam.A(2013)Isolation and characterization of sulfated polysaccharides from Codium tomentosum (J Stackhouse,1797) collected from southeast coast of India Advances in Applied Science Research, 4(5), pp.72-77 76 Oliveira R, Marques.F, Azeredo (1999) Purification of polysaccharide from a biofilm matrix by selective precipitation of protein Bio Tech 13, pp.391-393 113 77 Patel.T.R, Gordon A Morris, Anna Ebringerová, Melita Vodeničarová, Vladimír Velebný, Alvaro Ortegad, Jose Garcia de la Torre, Stephen E Hardinget al., (2008) Global conformation analysis of irradiated xyloglucans Carbohydrate Polymers 74, pp 845–851 78 Phani Kumar G.K, Gangarao battu, Kotha N.S Lova Raju (2011) Isolation and Evaluation of Tamarind Seed Polysaccharide being used as a Polymer in Pharmaceutical Dosage Forms Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 2(2), pp.274-290 79 Pitchaon, M., Tanawan, W and Thepkunya, H (2013) Tamarind kernel powder, gum arabic and maltodextrin as a novel combination for encapsulating agents of phenolic antioxidants International Food Research Journal 20(2), pp.645-652 80 Pusey P N (1974) in Photon Correlation and Light Beating Spectroscopy, (H Z Cummings and E R Pike, eds.) Plenum Press, New York, pp 387-428 81 Rao.PS, Srivastava HC (1973) Industrial Gums Edn 2, Academic Press, New York, pp 369-411 82 Rashmi Manchanda, S.C Arora, Rajesh Manchanda (2014) Tamarind Seed Polysaccharide and its ModificationsVersatile Pharmaceutical Excipients - A Review International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 6(2), pp.412-420 83 Rashmirekha Sahoo, Soumendra Sahoo, Padma Lochan Nayak (2010) Release Behavior of Anticancer Drug Paclitaxel fromTamarind Seed Polysaccharide Galactoxyloglucan European Journal of Scientific Research, 47(2), pp.197206 84 Ravi Kumar, Sachin R Patil, M B Patil, Mahesh S Paschapur, Mahalaxmi R (2010) Isolation and evaluation of the emulsifying properties of tamarind seed polysaccharide on castor oil emulsion Der Pharmacia Lettre, 2(1), pp.518-527 85 Rupali Singh, Rishabha Malviya, Pramod Kumar Sharma (2011) Extraction and Characterization of Tamarind Seed Polysaccharide as a Pharmaceutical Excipient Pharmacognosy Journal, 3(20), pp.17-19 114 86 Samina Kabir Khanzada, W Shaikh, Shahzadi Sofia, T.G Kazi, K Usmanghani, Amina Kabir and T.H Sheerazi (2008) Chemical Constituents of Tamarindus Indica L Medicinal plant in singh Pakistan Journal of Botany, 40(6), pp.2553-2559 87 Samira A Ben Mussa, Hawaa S Elferjani, Faiza A Haroun, Fatma F Abdelnabi (2009) Determination of Available Nitrate, Phosphate and Sulfate in Soil Samples International Journal of PharmTech Research, 1(3), pp.598-604 88 Sanders J.K.M., Constable E.C., Hunter B.K and Pearce C.M (1995) Modern NMR spectroscopy Oxford University Press, pp.78 89 Sanders A H and D S Cannell (1980) in Light Scattering in Liquids and Macromolecular Solutions, V Degiorgio, M Corti, and M Giglio, eds., Plenum Press, New York, pp 173-182 90 Scudiero.D A., Shoemaker.R H, Paull.K D, Monks A., Tierney S Nofziger T H, Currens M J., Seniff D, Boyd M R (1988) Evaluation of a soluble Tetrazolium/Formazan assay for cell growth and drug sensivity in culture using human and other tumor cell lines Cancer Research 48, pp.4827-4833 91 Seedevi P., S Sudharsan, S Vasanth Kumar, A Srinivasan, S Vairamani and A Shanmugam (2013) Isolation and characterization of sulfated polysaccharides from Codium tomentosum (J Stackhouse, 1797) collected from southeast coast of India Scientific Research and Essays, 4(5), pp.72-77 92 Shailaja T, Latha K1,Sasibhushan P, Alkabab A M, Uhumwangho M U (2012) A novel bioadhesive polymer: grafting of tamarind seed polysaccharide and evaluation of its use in buccal delivery of metoprolol succinate Der Pharmacia Lettre, (2), pp.487-508 93 Shoemaker R H., Scudiero D A, Suasville E A (2002) Application of highthroughput, molecular targeted screening to anticancer drug discovery Current Topics in Medicinal Chemistry, (3), pp.229-246 94 Sone.Y and Sato.K, (1994) Measurement of oligosaccharides derived from tamarind xyloglucan by competitive ELISA assay Biosci Biotechnol Biochemistry, 58(12):2295-2296 115 95 Sougata Jana, Dibyendu Lakshman, Kalyan Kumar Sen, Sanat Kumar Basu (2010) Development and Evaluation of Epichlorohydrin Cross-linked Mucoadhesive Patches of Tamarind Seed Polysaccharide for Buccal Application International Journal of Pharmaceutical Sciences and Drug Research, 2(3), pp.193-198 96 Soumendra Sahoo, Rashmirekha Sahoo, and Padma Lochan Nayak (2010) Tamarind Seed Polysachharide: A Versatile Biopolymer For Mucoadhesive Applications, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, 08(08), pp.112 97 Souza.A and Aka, K J (2007) Spasmogenics effect of the aqueous extract of Tamarindus Indica L (Caesalpiniaceae) on the contractile acticity of Guineapig Teania Coli African Journal of Traditional, Complementary and Alternative medicines (AJTCAM), (3), pp.261 – 266 98 Srikanth, (2013) Investigation of Tamarindus Indica Linn Hydromethanolic leaf extract againts glucose induced cataractogenesis World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 2(1), pp.232-244 99 Stephen E Harding (2005) Analysis of Polysaccharides by Ultracentrifugation Size, Conformation and Interactions in Solution Journal of Polymer Science, 186, pp 211–254 100 Surawase.R.K (2011) “Formulation and evaluation of metoprolol succinate buccal tablet containing tamarind seed polysaccharide” International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(5), pp.550-553 101 Takuo Nakano, Mirko Betti and Zeb Pietrasik (2010) Extraction, Isolation and Analysis of Chondroitin Sulfate Glycosamino glycans Recent Patents on Food, Nutrition & Agriculture 2, pp.61-74 102 Tao Qiu, Xiaojing Ma, Ming Ye, Ruyue Yuan, Yanna Wu (2013) Purification, structure, lipid lowering and liver protecting effects of polysaccharide from Lachnum YM281 Carbohydrate Polymers 98, pp 922– 930 103 Taylor I.E.P and Atkins E.D.T (1985) X-ray diffraction studies on the xyloglucan from tamarind (Tamarindus indica) seed, FEBS Lett, 181(2), 300302 116 104 Thanh Thi Thu Thuy, Hidekazu Yasunaga, Ryo Takano, Hiroshi Urakawa, Kanji Kajiwara (2002), Molecular characteristics and Gelling Properties of Carrageenan Family 1: Preparation of novel carrageenan and dilute solution properties, Macromolecular Chemistry and Physic 203, pp.5-23 105 Thanh Thi Thu Thuy, Hidekazu Yasunaga, Ryo Takano, Hiroshi Urakawa, Kanji Kajiwara (2003), Molecular characteristics of native heparin and its derivatives: the changing of conformation by regioselective desulfation of native heparin, Advances in Natural Sciences, 1, pp.43-54 106 Thuy T.T.T., Van T.T.T., Yuguchi Y., Ly B.M.and Tai N.T (2013), Structure of fucoidan from brown seaweed Turbinaria ornata as studied by ESIMS and SAXS techniques, Marine Drugs, 11, pp.2431-2443 107 Tissot B., Salpin J.-Y., Martinez M., Gaigeot M.P and Daniel R (2006) Differentiation of the fucoidan sulfated L-fucose isomers constituents by CEESIMS and molecular modeling Carbohydrate Research, 341(5), pp 598 – 609 108 Uchechukwu U Nwodo, Grace E Obiiyeke, Vincent N Chigor and Anthony I Okoh (2011) Assessment of Tamarindus indica Extracts for Antibacterial Activity International Journal of Molecular Sciences,12, pp.6385-6396 109 Vandana Singh and Pramendra Kumar (2011) Design of Nanostructured Tamarind Seed Kernel Polysaccharide-Silica Hybrids for Mercury (II) Removal Separation Science and Technology, 46, pp 825–838 110 Vanden B.D.A and Vlietinck A.J (1991) Methods in plant Biochemistry: Screening Methods for Antibacterial and Antiviral Agents from Higher Plants Academic Press, London, 6, pp 47-69 111 William S York, Lisa K Harvey, Rafael Guillen, Peter Albersheim and Alan G Darvill (1993) Structural analysis of tamarind seed xyloglucan oligosaccharides using galactosidase digestion and spectroscopic methods Carbohydrate Research, 248, pp 285-301 112 Worapol Aengwanich, Maitree Suttajit, Praweena Chaleerin, Prach Thangklang, Siriporn Kapan, Tida Srikhun, Thongchai Boonsorn (2009) Antibiotic Effect of 117 Polyphenolic Com-pound Extracted from Tamarind (Tamarindus indica L.) Seed Coat on Pro-ductive Performance of Broilers International Journal of Poultry Science (8), pp.749-751 113 Xiaolin Chen, Shengfeng Yang, Jinxia Wang, Lin Song, Ronge Xing, Song Liu, Huahua Yu, and Pengcheng Li (2015) Sulfated Polysaccharides Isolated from Cloned Grateloupia filicinaand Their Anticoagulant Activity BioMed Research International , 2015, pp.1-5 114 Xiao-xiao Liu, Zhen-jiang Wan, Lin Shi, Xiao-xia Lu (2011) Preparation and antiherpetic activities of chemically modified polysaccharides from Polygonatum cyrtonema Hua Carbohydrate Polymers 83, pp.737–742 115 Yen GC, Chen HY (1995) Antioxidant activity of various tea extracts in relation to their antimutagenicity Agric Food Chem, 43, pp.27–37 116 Yerram Chandramouli, Shaik Firoz, Amaravathi Vikram, B Mahitha, B Rubia yasmeen, K Hemanthpavankumar (2012) Tamarind Seed Polysaccharide (TSP) - an adaptable excipient for novel drug delivery systems International Journal of Pharmacy Practice & Drug Research, 2(2), pp.57-63 117 Yi Li, Russ Lander, Walt Manger, Ann Lee (2004) Determination of lipid profile in meningococcal polysaccharide using reversed-phase liquid chromatography, Journal of Chromatography B, 804 (2), pp.353–358 118 York WS, Harvey LK, Guillen R, Albersheim P, Darvill AG (1993) The structure of plant cell walls XXXVI Structural analysis of tamarind seed xyloglucan oligosaccharides using β-galactosidase digestion and spectroscopic methods Carbohydrate Research 248: 285-301 119 Yoshiaki Yuguchi, Takahiro Hirotsu and Jun Hosokawa (2005) Structural characteristics of xyloglucan – Congo red aggregates as observed by small angle X-ray scattering Cellulose, 12, pp.469–477 120 Yoshiaki Yuguchi, Van T T Tran, Ly M Bui, Shizuka Takebe, Shiho Suzuki, Nobukazu Nakajima, Shinichi Kitamura, Thuy T TThanh (2016), Primary structure, conformation in aqueous solution, and intestinal immunomodulating 118 activity of fucoidan from two brown seaweed species Sargassum crassifolium and Padina australis Carbohydrate Polymers, 147, pp.69-78 121 Zhongshan Zhang, Xiaomei Wang, Shuchi Yu, Li Yin, Mingxing Zhao, Zhiping Han (2011) Synthesized oversulfated and acetylated derivatives of polysaccharide extractedfrom Enteromorpha linza and their potential antioxidant activity International Journal of Biological Macromolecules, 49, pp.1012– 1015 122 Zhu, Q.Y, Hackman, R.M., Ensunsa, J.L., Holt, R.R., Keen, C.L (2002) Antioxidative activities of oolong tea Journal of Agricultural and Food Chemistry, 50, pp.6929–6934 119 PHỤ LỤC Phụ lục 1a: Sắc đồ sắc kí thẩm thấu Gel GPC TSP từ hạt me Phụ lục 1b: Sắc đồ sắc kí thẩm thấu Gel GPC TSP từ thịt me Phụ lục 1c: Sắc đồ sắc kí thẩm thấu Gel GPC TSPS Phụ lục 1d: Sắc đồ sắc kí thẩm thấu Gel GPC TSPS Phụ lục 1e: Kết xác định thành phần đƣờng TSP chiết tách từ hạt me thu hái Hải Phòng Phụ lục 1f: Kết xác định thành phần đƣờng TSP chiết tách từ hạt me thu hái Long An Phụ lục 2a: Phổ IR TSP Phụ lục 2b: Phổ IR TSPS Phụ lục 2c: Phổ IR TSPA Phụ lục 3a: Phổ 1H-NMR TSP Phụ lục 3b: Phổ 13C-NMR TSP Phụ lục 3c: Phổ COSY TSP Phụ lục 3d: Phổ HMBC TSP Phụ lục 3e: Phổ HSQC TSP Phụ lục 3f: Phổ ROESY TSP Phụ lục 4a: Phổ 1H-NMR TSPS Phụ lục 4b: Phổ 13C-NMR TSPS Phụ lục 4c: Phổ HSQC TSPS Phụ lục 5a: Phổ 1H-NMR TSPA Phụ lục 5b: Phổ 13C-NMR TSPA Phụ lục 5c: Phổ HSQC TSPA Phụ lục 6a: Phổ khối ESI-MS oligosaccharide Phụ lục 6b: Phổ khối ESI-MS/MS mảnh m/z: 1224 Phụ lục 6c: Phổ khối ESI-MS/MS mảnh m/z: 1077 Phụ lục 6d: Phổ khối ESI-MS/MS mảnh m/z: 1011 Phụ lục 6e: Phổ khối ESI-MS/MS mảnh m/z: 457 Phụ lục 6f: Phổ khối ESI-MS/MS mảnh m/z: 413 Phụ lục 7a: Ảnh kính hiển vi điện tử quét TSP 120 Phụ lục 7b: Ảnh kính hiển vi điện tử quét TSPS Phụ lục 7c: Ảnh kính hiển vi điện tử quét TSPA Phụ lục 8a: Sắc đồ Zimm TSP Phụ lục 8b: Sắc đồ LS TSP Phụ lục 9a: Sắc đồ Zimm TSPS Phụ lục 9b: Sắc đồ LS TSPS Phụ lục 10a: Kết thử hoạt tính gây độc tế bào TSP, TSPS, TSPA Phụ lục 10b: Kết thử hoạt tính khử sắt oxy hóa tổng TSP, TSPS, TSPA Phụ lục 10c: Kết thử hoạt tính MDA TSP, TSPS Phụ lục 10d: Kết thử hoạt tính vi sinh vật kiểm định TSP, TSPS, TSPA Phụ lục 10e: Kết thử hoạt tính chống đơng máu TSP, TSPS, TSPA Phụ lục 10f: Kết thử hoạt tính ly giải cục máu đông TSP, TSPS 121 ... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI BÙI NGỌC TÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA POLYSACCHARIDE TỪ HẠT ME (TAMARINDUS INDICA L. ) VIỆT NAM Chuyên... xuất hóa học hợp chất thiên nhiên với mục đích tìm kiếm chất có hoạt tính sinh học cao Với l nêu trên, chọn đề tài luận án " phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học polysaccharide từ hạt me (Tamarindus. .. (TSP) có hạt me  Điều chế đƣợc dẫn xuất sulfate hóa acetyl hóa có hoạt tính sinh học cao TSP tự nhiên từ góp phần l m sáng tỏ ảnh hƣởng mức độ sulfate hóa acetyl hóa đến hoạt tính sinh học Với