Tình hình nghiên cứu và mục tiêu của đề tài đề cập về: Công thức thuốc có nguồn gốc từ bài thuốc điều trị mất ngủ do GS. Bùi Chí Hiếu đề xướng, gồm 4 vị Bình vôi, Lạc tiên, Lá sen, Lá vông nem. Công thức trên cần phải được khẳng định tính an toàn cũng như các tác dụng dược lý bằng các mô hình dược lý thực nghiệm. Và nghiên cứu với mục tiêu nhằm khảo sát độc tính và tác dụng an thần của cao chiết nước Bình vôi-Lạc tiên-Lá sen-Lá vông nem.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ TÁC DỤNG AN THẦN CỦA CAO BÌNH VƠI – LẠC TIÊN – LÁ SEN – LÁ VÔNG NEM TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG Nguyễn Văn Đàn*, Phan Quan Chí Hiếu* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Cơng thức thuốc có nguồn gốc từ thuốc điều trị ngủ GS Bùi Chí Hiếu đề xướng, gồm vị Bình vơi, Lạc tiên, Lá sen, Lá vông nem Công thức cần phải khẳng định tính an tồn tác dụng dược lý mơ hình dược lý thực nghiệm Mục tiêu nghiên cứu: Khảo sát độc tính tác dụng an thần cao chiết nước Bình vơi-Lạc tiên-Lá sen-Lá vơng nem Phương pháp nghiên cứu: Trong nghiên cứu này, tác dụng an thần độc tính cao chiết nước Bình vơi-Lạc tiên-Lá sen-Lá vơng nem đánh giá với mơ hình thử nghiệm thú vật Tác động an thần đánh giá cách đo lường việc kéo dài thời gian ngủ mê chuột gây thiopental tác dụng giải lo âu đánh giá mơ hình hai ngăn sáng tối Kết quả: Cao chiết liều 1,97 g/kg khơng có tác dụng kéo dài thời gian gây ngủ thiopental sau 30 phút sử dụng, thể sau 60 phút sử dụng Trong liều 3,94 g/kg khẳng định tác dụng sau 30 60 phút sử dụng Sau 60 phút, cao chiết liều 3,94 g/kg hiệu gây ngủ tăng gấp 1,9 lần so với Sen vông-R liều 40 mg/kg Cả hai liều tác dụng giải lo âu thời điểm 30 60 phút sử dụng Chưa xác định LD50 độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng theo đường uống Kết luận: Cao chiết nước Bình vơi-Lạc tiên-Lá sen-Lá vơng nem có tác dụng hợp đồng gây ngủ với thiopental Từ khóa: Bình vơi, Lạc tiên, Lá sen, Lá vơng nem, an thần, giải lo âu, ngủ ABSTRACT RESEARCH ON THE TOXICITY AND SEDATIVE-HYPNOTIC EFFECTS OF TUBER STEPHANIAE - HERBA PASSIFLORAE FOETIDAE - FOLIUM ERYTHRINAE FOLIUM NELUMBINIS EXTRACT ON MICE Nguyen Van Dan, Phan Quan Chi Hieu * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No – 2014: 130 - 135 Background: Formulation proposed by Ph.D Hieu Bui Chi, including Tuber Stephaniae- Herba Passiflorae foetidae - Folium Erythrinae - Folium Nelumbinis for the treatment of insomnia It is necessary to evaluate pharmacological activities and toxicity of this formula in animal models Aims of study: Evaluate the hypnotic-anxiolytic effects and toxcity of Tuber Stephaniae- Herba Passiflorae foetidae - Folium Erythrinae - Folium Nelumbinis extract on mice Materials and Method: In this present study, the anxiolytic-hypnotic effects of extract were evaluated in animal models when administered oral route The light-dark test were used to evaluate the anxiolytic effect The hypnotic effect was evaluated by measuring potentiation of thiopental sleeping time in mice * Khoa Y học cổ truyền, Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: Ths.BS Nguyễn Văn Đàn ĐT: 0983731326 130 Email:vandan2685@gmail.com Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học Results: Extract given orally at the dose of 1.97 g/kg prolonged the thiopental induced sleep time after 60 minutes and the dose of 3.94 g/kg prolonged the thiopental induced sleep time after 30 minutes and 60 minutes, both of them did not shown to have anxiolytic activities After 60 minutes, extracts at dose of 3.94 g/kg of hypnotic effect more than 1.9 times the Sen vong-R at the dose of 40 mg/kg LD50 and chronic toxicity has not been determined by orally Conclusion: Tuber Stephaniae- Herba Passiflorae foetidae - Folium Erythrinae - Folium Nelumbinis extract were found to have the hypnotic activity Keywords: Tuber Stephaniae, Herba Passiflorae foetidae, Folium Erythrinae, Folium Nelumbinis, anxiolytic effect, hypnotic effect, insomnia màu sắc Rf tương tự với mẫu đối chiếu Bình ĐẶT VẤN ĐỀ vơi, Lạc tiên, Lá sen, Lá vông nem Hiện nay, chứng ngủ ngày phổ Hóa chất – Thuốc thử nghiệm - Dụng cụ biến với nhiều yếu tố nguy nguyên nhân Diazepam (Valium) liều 5mg/Kg (PO) Tác động tích lũy lâu dài ngủ liên quan thuốc đối chiếu mơ hình hai ngăn sáng tối với nhiều hậu sức khỏe nguy hiểm tác Thiopental liều 40mg/Kg (IV) thuốc dùng động kinh tế quan trọng Tuy có nhiều phương mơ hình kéo dài thời gian ngủ Sen vông-R pháp điều trị khác như: vệ sinh giấc ngủ, (cao Sen, Vông nem, Rotundin), sản phẩm dùng thuốc, đơn trị liệu thường hiệu Công ty cổ phần dược phẩm trung ương 2, quả, thời gian điều trị theo dõi dài, tỉ lệ tái thuốc so sánh mơ hình hai ngăn sáng tối phát cao Việc điều trị với nhóm thuốc an mơ hình kéo dài thời gian ngủ thần, chủ yếu nhóm bezodiazepin gây nhiều tác dụng phụ Do vậy, việc tìm kiếm phương pháp điều trị hiệu quả, khơng gây tác dụng phụ, giảm chi phí y tế cần thiết Từ thuốc điều trị ngủ GS Bùi Chí Hiếu đề xướng, gồm Bình vơi, Lạc tiên, Lá sen, Lá vơng nem(1), vị thuốc có tác dụng an thần theo kinh nghiệm dân gian, nhiên công thức chưa đánh giá nghiên cứu, mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát tính an tồn hiệu an thần cơng thức thực nghiệm, sở cho nghiên cứu lâm sàng PHƯƠNG TIỆN- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Cao chiết nước hỗn hợp Bình vơi-Lạc tiên-Lá sen-Lá vơng nem (1,5-1-1-1), ký hiệu CAT Hiệu suất chiết 11,59 %, độ ẩm 16,72 % ± 0,02, độ tro toàn phần 1,3 % ± 0,15, độ tro không tan acid hydrochloric 0, 14% ± 0,01, định tính phương pháp sắc ký lớp mỏng cho vết có Xét nghiệm cơng thức máu: Máy huyết học hồn tồn Sysmex KX-21, Nhật Xét nghiệm Glucose, Urea, Creatinin, AST, ALT máu: Máy sinh hóa Eos Bravo W (Hospitex diagonosis – Italy) Giải phẫu mô học gan, thận thực Khoa Giải phẫu bệnh -Bệnh viện Chợ Rẫy – Thành phố Hồ Chí Minh Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt trắng đực chủng Swiss albino, khỏe mạnh, - tuần tuổi, trọng lượng trung bình 25 - 32g, cung cấp Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Chuột ni điều kiện ổn định dinh dưỡng đảm bảo chu kỳ 12/12 sáng tối Chuột làm quen với điều kiện phòng thí nghiệm 24 Kích thích âm thanh, mùi phòng thí nghiệm hạn chế mức thấp Tất thử nghiệm tiến hành từ 9:00 đến 16:00, điều kiện ổn định nhiệt độ độ ẩm Phương pháp khảo sát độc tính cấp (4) Thử nghiệm thực qua giai đoạn: Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 131 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Giai đoạn thăm dò (mỗi lơ dò liều chuột): Khởi đầu từ liều cao bơm qua kim đầu tù cho uống Xác định liều LD0 (liều tối đa không gây chết) liều LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%) Giai đoạn xác định: chuột chia lô cho sử dụng thuốc liều khoảng LD0 LD100 chia theo cấp số nhân Theo dõi biểu hành vi vận động chuột vòng 72 sau dùng thuốc Ghi nhận số chuột chết lơ Xác định LD50 (nếu có) theo phương pháp Karber-Behrens Phương pháp khảo sát độc tính bán trường diễn (2) Chuột thử nghiệm chia ngẫu nhiên thành lô: - Lô chứng (n=10): Được cho uống nước cất hàng ngày 60 ngày - Lô thử (n=10): Uống cao CAT với liều 3,94 g cao khô/kg chuột (tương đương 16,42 g cao khô/kg người) 60 ngày Thể tích cho chuột uống 0,2ml/10g thể trọng Cuối thử nghiệm, ghi nhận so sánh số: số lượng hồng cầu (triệu/mm3), số lượng bạch cầu (ngàn/mm3), tiểu cầu (ngàn/mm3), hemoglobin (g/L), hematocrit (%), AST(U/L), ALT(U/L), creatinin (mg/dL), glucose máu (mg/dL), vi thể gan thận Thử nghiệm tác dụng gây ngủ (5, 7) Sau 30 60 phút dùng thuốc thử hay chất chứng, tiêm tĩnh mạch thiopental 30 mg/kg chuột Thời gian chuột ngủ mê tính từ lúc chuột phản xạ thăng chuột có lại phản xạ thăng Chuột chia ngẫu nhiên thành lô sau: - Lô (n=10): Lô chứng uống nước cất - Lô (n=10): Uống Sen vông-R liều 40 mg/kg (tính theo cao khơ sen) (dựa theo nhóm tác giả Nguyễn Lan Thùy Ty, Võ Phùng Nguyên, Nguyễn Hữu Đức (2008)) 132 - Lô (n=10): Uống cao CAT với liều 1,97 g cao khô/kg chuột (tương đương 8,21 g cao khô/ người 50 kg) - Lô (n=10): Uống cao CAT với liều 3,94 g cao khô/kg chuột (tương đương 16,42 g cao khô/ người 50 kg) - Lô (n=10): Uống thuốc Sen vông-R liều 40 mg/kg (tính theo cao khơ sen) - Lơ (n=10): Uống cao CAT với liều 1,97 g cao khô/kg chuột (tương đương 8,21 g cao khô/ người 50 kg) - Lô (n=10): Uống cao CAT với liều 3,94 g cao khô/kg chuột (tương đương 16,42 g cao khô/ người 50 kg) Chuột cho uống 30 phút trước thử nghiệm lô 1, 2, 3, Đối với lô 5,6, chuột cho uống 60 phút trước thử nghiệm Thể tích uống 0,2 ml/10 g chuột Sau tiêm thiopental đường tĩnh mạch chuột Thử nghiệm giải lo âu với mơ hình hai ngăn sáng tối (5, 7) Thiết bị thử nghiệm Panlab Black and White box–Tây Ban Nha gồm hộp nhựa Perspex chia thành hai ngăn: sáng (250 x 250 x 240 mm, lắp bóng đèn trắng 100W) ngăn tối (160 x 250 x 240 mm, lắp bóng đèn đỏ 40W) Hai bóng đèn cách sàn 370 mm Hai ngăn thơng cửa có kích thước 70 x 70 mm bên dưới, hộp Thời gian số lần chuột di chuyển vào ngăn máy tính ghi nhận thông qua phần mềm chuyên dụng (PPC Win v2.0.03) Chuột chia ngẫu nhiên thành lô thử nghiệm sau: - Lô (n=10): Lô chứng, uống nước cất - Lô (n=10): Lô đối chiếu, uống Diazepam liều mg/kg chuột - Lô (n=10): Uống cao CAT với liều 1,97 g cao khô/kg chuột (tương đương 8,21.g cao khô/kg người) - Lô (n=10): Uống cao CAT với liều 3,94 g cao khô/kg chuột (tương đương 16,42 g cao khô/kg người) Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Chuột cho uống 30 phút trước thử nghiệm Thể tích uống 0,2 ml/10 g chuột Chuột đặt cửa ngăn cách vùng sáng tối, hướng ngăn sáng Sau chuột tự khám phá phút Ghi nhận lại số lần vùng sáng chuột thời gian vùng sáng Chuột tính vùng sáng chân vượt qua lằn phân cách vùng Ghi nhận thời điểm 30 phút 60 phút sau uống thuốc lơ 3, Còn lơ ghi nhận thời điểm 30 phút sau uống Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm Các liệu trình bày dạng Mean ± SEM, xử lý phần mềm SPSS phiên 16.0 với phép kiểm Student cho dãy số liệu độc lập So sánh khác nhóm có tác dụng gây ngủ phép Nghiên cứu Y học kiểm ANOVA chiều, yếu tố Sự khác xem có ý nghĩa giá trị p < 0,05 Đồ thị vẽ theo giá trị Mean ± SEM phần mềm MS EXCEL 2007 KẾT QUẢ Độc tính cấp D max 19,7 g cao khô/kg chuột (khoảng 169,95 g dược liệu khô) gấp 257 lần liều thường sử dụng ngày (khoảng 24 - 42 g/ngày), khơng có chuột chết vòng 72 Liều thử nghiệm dò liều tác dụng dược lý trường hợp chưa xác định LD50 chuột nhắt trắng theo đườn g uống gồm liều 1/20, 1/10 1/5 D max.(4) Liều có hiệu tác dụng dược lý lấy làm liều thử độc tính bán trường diễn Sau dò liều có hai liều 1/10 D max (1,97 g cao khô/kg chuột) 1/5 D max (3,94 g cao khô/kg chuột) thể tác dụng dược lý Độc tính bán trường diễn Bảng 1: Trị số huyết học, sinh hóa chuột nhắt sau uống thuốc liều 3,94 g cao khô/kg 60 ngày Lô chứng (n=10) Trị số Bạch cầu (ngàn/mm ) Hồng cầu (triệu/mm ) Hemoglobin (g/dL) Hematocrit (%) Tiểu cầu (ngàn/mm ) ALT (U/L) AST (U/L) Creatinin (mg/dL) Trước 4,49 ± 0,44 6,12 ± 0,3 10,3 ± 0,36 36,61 ± 0,12 363,71 ± 67,79 50,51 ± 8,68 90,37 ± 8,27 0,64 ± 0,83 Trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt uống cao CAT liều 3,94 g cao khô/kg chuột, sau 60 ngày khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng uống nước cất (p> 0,05) Hình ảnh giải phẫu mô học gan, thận chuột uống cao CAT liều 3,94 g cao khô/kg chuột sau 60 ngày khơng có khác biệt so với lơ chứng uống nước cất Cao CAT khơng có tác dụng hiệp lực gây ngủ với thiopental liều 1,97 g/kg thời điểm 30 phút có tác dụng thời điểm 60 phút sau sử dụng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Lô thuốc (n=10) Sau 60 ngày 5,32 ± 1,01 6,23 ± 0,97 10,23 ± 0,80 31,98 ± 0,45 385,17 ±40,86 43,2 ± 6,94 78,1 ± 5,69 0,67 ± 0, 91 Trước 4,34 ± 0,46 5,8 ± 0,21 9,53 ± 0,42 35,78 ± 0,12 398,71 ± 52,18 50,26 ± 2,87 89,89 ± 5,25 0,65 ± 0,7 Sau 60 ngày 5,8±0,51 6,34 ± 0,40 10,29 ± 0,82 32,38 ± 0,24 412,83 ± 48,9 43,4 ± 5,69 79,51 ± 4,61 0,69 ± 0,88 Cao CAT có tác dụng hiệp lực gây ngủ với thiopental liều 3,94 g/kg hai thời điểm 30 phút 60 phút sau sử dụng (p