nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá của cao quả nhàu trên thỏ bịchiếu xạ và trên 2 mô hình gây tổn thương gan bằng carbon tetraclorid vàparacetamol ở chuột nhắt trắng

Ket-noi.com diễn đàn công nghê, giáo dục Đặt vấn đề Miễn dịch học lĩnh vực ngày phát triển có nhiều ứng dụng rộng rãi y, sinh học Một hướng nghiên cứu quan trọng miễn dịch tìm hiểu yếu tố mạng lưới điều hồ, kiểm sốt hoạt động hệ thống Trong trình hoạt động hệ thống miễn dịch, có tham gia nhiều chất đóng vai trị truyền đạt thơng tin tế bào Các chất có tác dụng kích thích hay kìm hãm trưởng thành hoạt động chức tế bào miễn dịch Những chất gọi chất kích thích miễn dịch làm tăng cường đáp ứng miễn dịch ngược lại có tác dụng gây suy giảm đáp ứng miễn dịch gọi chất ức chế miễn dịch [3] [8] [9] Trên lâm sàng tình trạng bệnh lý liên quan đến suy giảm miễn dịch, đặc biệt suy giảm miễn dịch thứ phát phổ biến nhiễm trùng cấp, mạn tính, nhiễm độc hố chất, sau trị liệu ung thư tia xạ, AIDS Điều trị bệnh lý ngồi việc điều trị ngun nhân cần dùng thêm biện pháp kích thích miễn dịch thích hợp Các chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc khác nhau, quan trọng phải kể đến chất kích thích miễn dịch nội sinh (đây sản phẩm chế tiết tế bào miễn dịch) như: interleukin (IL) 1, 2, 35, interferon (IFN) gọi chung cytokin [53] Các chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc từ vi khuẩn, virus, ký sinh trùng, nấm nh BCG, bronchovaxom, lentinan [3], [9], [29], [62], [90] Các chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc hoá học tổng hợp bán tổng hợp sử dụng nh levamisol, imuthiol Hiệu mang lại việc sử dụng chất kích thích miễn dịch khả quan, nhiên nhiều tồn chi phí cho đợt điều trị cao sử dụng thuốc kích thích miễn dịch có nguồn gốc nội sinh, khơng phù hợp với điều kiện kinh tế phần lớn người bệnh Trong thuốc có nguồn gốc hố học lại có độc tính cao, ảnh hưởng xấu tới chức gan, thận Vì vậy, việc tìm kiếm Ket-noi.com diễn đàn công nghê, giáo dục đưa vào sử dụng chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc từ thực vật, đặc biệt dược liệu có sẵn nước vấn đề cấp thiết đặt Cây nhàu (Morinda citrifolia L Rubiaceae), mét dược liệu nhân dân sử dụng lâu đời với mục đích nâng cao sức đề kháng thể [5], [28] Đặc biệt gần nhiều nhà khoa học giới nghiên cứu sâu nhàu trồng Hawaii đưa nhiều kết nghiên cứu khả quan tác dụng chống ung thư, chống oxyhóa kích thích miễn dịch [46], [75], [81], [97].[98], [99], [100], [101], [102], [116], [175], [218] Trong nghiên cứu trước chứng minh cao nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch thơng qua tác dụng kích thích hồi phục số miễn dịch súc vật thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch chiếu tia gamma tiêm cyclophosphamid [2] Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài nhằm nghiên cứu tác dụng chống oxyhóa đánh giá sâu tác dụng kích thích miễn dịch thực nghiệm cao nhàu Việt Nam Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch in vitro in vivo cao nhàu chuột nhắt trắng Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá cao nhàu thỏ bị chiếu xạ mơ hình gây tổn thương gan carbon tetraclorid paracetamol chuột nhắt trắng Ket-noi.com diễn đàn công nghê, giáo dục Chương Tổng quan tài liệu 1.1 suy giảm miễn dịch lâm sàng 1.1.1 Khái niệm suy giảm miễn dịch Suy giảm miễn dịch trạng thái hoạt động hệ miễn dịch không đủ mạnh để chống lại kháng nguyên nhằm bảo vệ thể Hậu suy giảm miễn dịch dÔ mắc bệnh nhiễm khuẩn, tái nhiễm nhiều lần loại tác nhân gây bệnh, mắc bệnh mạn tính Suy giảm miễn dịch chia làm nhóm: bẩm sinh mắc phải Suy giảm miễn dịch bẩm sinh hậu nhiều khiếm khuyết trình phát triển bào thai Suy giảm miễn dịch bẩm sinh thường khó điều trị, biểu lâm sàng nặng nề tỷ lệ tử vong cao [63], [64], [77] Suy giảm miễn dịch mắc phải không bắt nguồn từ khiếm khuyết di truyền mà thường yếu tố từ môi trường sống gây Điều trị suy giảm miễn dịch mắc phải bên cạnh việc điều trị nguyên nhân thường dùng thêm thuốc hỗ trợ điều biến miễn dịch, chất chống oxy hoá[16], [68], [150], [170], [176], [189], [192], [203] 1.1.2 Suy giảm miễn dịch mắc phải: Đây loại bệnh lý thường gặp nước phát triển phát triển [92] Dựa vào nguyên nhân gây tình trạng suy giảm miễn dịch người ta chia số nhóm sau: - Suy giảm miễn dịch suy dinh dưỡng - Suy giảm miễn dịch nhiễm vi sinh vật: nhiễm vi khuẩn, nấm, kÝ sinh trùng, virus Đặc biệt suy giảm miễn dịch nhiễm HIV/AIDS - Suy giảm miễn dịch bệnh lý: bệnh mạn tính kéo dài, đặc biệt bệnh ung thư - Suy giảm miễn dịch phóng xạ Ket-noi.com diễn đàn công nghê, giáo dục - Suy giảm miễn dịch thuốc hóa chất - Suy giảm miễn dịch khác như: tuổi già, chấn thương [173] * Suy giảm miễn dịch nhiễm HIV/AIDS Nhiễm HIV/AIDS bệnh thời kỷ toàn giới Bệnh AIDS retrovirus HIV-1 hay HIV-2 gây HIV có lực cao với phân tử CD4 đồng thụ thể (Co - receptor) CXCR4 có tế bào có thẩm quyền miễn dịch chủ yếu tế bào T CD4+ đại thực bào Thời kỳ ủ bệnh thường khơng có triệu chứng Diễn biến lâm sàng trình nhiễm HIV phản ánh tương tác phức tạp tác động virus chức tế bào có thẩm quyền miễn dịch đáp ứng miễn dich vật chủ Suy giảm miễn dịch mắc phải nhiễm HIV/AIDS tình trạng nhiễm khuẩn kéo dài, trường diễn dai dẳng, diễn biến chậm hậu nặng nề dẫn đến thể bị suy giảm miễn dịch đặc biệt suy giảm miễn dịch qua trung gian tế bào Virus công vào tế bào T CD4, chemokin (CCR-5, CXCR-4) tế bào có thụ thể với virus Người nhiễm HIV bị lympho T CD4 Do thiếu hụt TCD4 dẫn đến tổn thương miễn dịch kèm theo T CD4 có vai trị to lớn đáp ứng miễn dịch dịch thể qua trung gian tế bào [8], [9], [77], [169] * Suy giảm miễn dịch ung thư Ung thư bệnh ngày phổ biến gia tăng tồn giới Về mặt tế bào học tế bào ung thư bắt nguồn từ tế bào bình thường thể nguyên nhân tế bào bị đột biến phát triển vô hạn định làm thể kiểm soát Về mặt gen học, đột biến trình phân bào tượng bình thường, chúng ln bị loại trừ theo chế miễn dịch Như bị mắc ung hệ miễn dịch thể bị suy giảm thân bệnh ung thư làm hệ miễn dịch bị suy yếu hơn, đặc biệt suy giảm miễn dịch qua trung gian tế bào tế bào lympho T đảm nhận [3], [9], [79] Ket-noi.com diễn đàn công nghê, giáo dục Điều trị miễn dịch có nhiều hướng cịn thời kỳ thử nghiệm Các kháng thể đơn dịng đặc hiệu thuộc loại khác loài nên biến chứng gây mẫn cảm dị lồi cịn nghiêm trọng tác dụng diệt tế bào ung thư Nhiều trường hợp sử dụng cytokin kết chưa rõ phản ứng toàn thân mạnh mẽ nhiều phải bỏ thuốc INF-α dùng popilloma, leukose, IL-2 adenocarcinoma melanoma tạo thời kỳ thoái lui kéo dài bệnh Rosenberg lần dùng IL-2 ex-vivo nghĩa ủ tế bào lympho bệnh nhân với cytokin thể để tạo LAK, sau tiêm trả lại cho bệnh nhân ung thư thu nhỏ lại [3], [8], [9], [73], [205] Trong u lympho phương pháp điều trị có nhiều hứa hẹn tự ghép tế bào tuỷ xương tế bào máu cuống rốn Chọn lúc bệnh thoái lui tự nhiên, lấy tuỷ xương cất đông lạnh sâu, sau dùng tia xạ với liều gây chết tế bào (các tế bào ung thư ngoại vi bị tiêu diệt hết), Êy truyền lại lượng tế bào gốc dự trữ cho bệnh nhân Hoặc dùng tế bào máu cuống rốn truyền cho bệnh nhân Các tế bào giúp thể hồi phục hồn toàn chúng sử lý trước để có tế bào gốc truyền vào Một hướng ý tác dụng vào vị trí mà q trình phát triển tế bào bị phong bế nhằm phục hồi lại trình biệt hóa tế bào Đó dùng chất chống oxyhóa chỗ toàn thân, dùng thực phẩm chức chất chống oxyhoá [29], [61],[63],[78], [196] 1.2 Các tác nhân gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm: Các tác nhân gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm chia thành nhiều nhóm khác nhau: Thuốc hóa chất, yÕu tố vật lý: phóng xạ, xạ ion, gây ung thư thực nghiệm, gây nhiễm vi sinh vật: vi khuẩn, nấm, virus 1.2.1.Thuốc hóa chất: Hoá chất thường sử dụng cyclophosphamid (CY), cyclosporinA, dexamethason, azathioprin… Mỗi chất có hiệu lực chế gây suy giảm miễn dịch riêng Ket-noi.com diễn đàn cơng nghê, giáo dục * Nhóm kháng purin: Ba chất thường dùng 6-mercaptopurin, azathioprin thioguanin Azathioprin (Imuran) dẫn xuất nitro-imidazol mercaptopurin chất hay sử dụng - Tác dụng chế: Tác dụng ức chế miễn dịch: nồng độ thấp 10 -2 mg/l, azathioprin ức chế sinh sản lympho T, gây độc tế bào ức chế tế bào tạo kháng thể Với nồng độ thấp 1mg/l, azathioprin ức chế phản ứng tạo hoa hồng tự nhiên chuột cống Trên người, với liều ức chế miễn dịch thông thường không làm giảm bạch cầu, tác dụng xuất liều cao gây độc Azathioprin tác dụng lên miễn dịch đặc hiệu không đặc hiệu, kéo dài thời gian tồn mảnh ghép Tác dụng lên sản xuất kháng thể có đặc điểm: dùng đồng thời 48 giê sau dùng kháng ngun có tác dụng, cịn dùng trước khơng có tác dụng Tác dụng lên sản xuất IgG IgM, tác dụng lên đáp ứng miễn dịch nguyên phát thứ phát Phối hợp azathioprin với kháng nguyên liều cao tạo tình trạng dung nạp miễn dịch đặc hiệu Trên chuột nhắt trắng dùng liều 20-35 mg chuột cống liều 15-20 mg/kg thể trọng để gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm [6], [88], [205] .* Nhóm mù tạc nitơ (nitrogen mustard) Hai thuốc thường dùng cyclophosphamid (CY) clorambuci -Cơ chế tác dụng ức chế miễn dịch: Liều cao CY: 100-300mg/kg thể trọng chuột cống trắng thấy giảm tế bào lympho, teo hạch lympho, teo vùng vỏ tuyến ức, teo lách Các tổn thương phục hồi nhanh, sau ngừng thuốc vài ngày thấy tăng sinh quan lympho đáp ứng miễn dịch trở lại bình thường sau - tuần Cyclophosphamid tác dụng Ket-noi.com diễn đàn công nghê, giáo dục mạnh lympho B lympho T Điều thời gian sống lympho B ngắn lympho T Trên đáp ứng miễn dịch dịch thể: cyclophosphamid tác dụng chủ yếu lên IgG tác dụng yếu với IgM, tác dụng lên phản ứng miễn dịch nguyên phát mạnh thứ phát Làm phản ứng mẫn cảm chậm Cyclophosphamid thường dùng liều 100 - 200 mg/kg chuột nhắt, liều 150mg/kg chuột cống để gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm [6], [20], [32] * Methotrexat: chế miễn dịch tế bào miễn dịch dịch thể, thông qua ức chế nhân lên giảm chức tế bào lympho B T Tuy nhiên thuốc Ýt dùng thực nghiệm [3], [6] * Cyclosporin A: Cycloporin có cấu trúc pepid vòng chiết xuất từ nấm Tolypoclodium inflatum gams Thuốc ức chế chọn lọc với lympho T Với nồng độ điều trị, cyclosporin không gây ức chế tủy xương Liều điều trị thuốc ức chế sản sinh ức chế giải phóng lymphokin, đặc biệt interleukin làm cho lympho T không trở thành tế bào lympho T nhận cảm Liều cao, thuốc ức chế interleukin 2receptor [3], [11], [73], [205] Ket-noi.com diễn đàn cơng nghê, giáo dục Hình 1.1: Cơ chế tác dụng suy giảm miễn dịch cycloporin A * Corticoid: với liều 2-10mg, chuột cống corticoid hủy tế bào lympho, đặc biệt huỷ tế bào tuyến ức Tác dụng làm giảm tế bào lympho sớm xuất hiện, đồng thời làm giảm khả tập trung tế bào lympho, tế bào đơn nhân bạch cầu đa nhân vị trí viêm Corticoid ức chế phản ứng mẫn chậm, ức chế di tản đại thực bào, làm giảm lympho độc với tế bào, kéo dài thời gian tồn mảnh ghép da Hiệp đồng với azathioprin ghép quan, làm giảm khả lưu giữ kháng nguyên bề mặt đại thực bào, làm giảm tính thực bào thơng qua giảm giải phóng interleukin Corticoid làm giảm sản xuất IL-2, IFN γ, làm tăng dị hóa IgG Liều lượng: chuột nhắt dùng liều 20-40 mg/kg thể trọng để gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm [6], [9], [205] Ket-noi.com diễn đàn công nghờ, giỏo dc Tiết cytokin: IL-2,TNF Diệt tế bào Đáp ứng miễn dịch tế bào Hỡnh1.2 C ch tỏc dụng suy giảm miễn dịch corticoid * Kháng thể kháng lympho Có thể dùng kháng thể đa clơn hay kháng thể đơn clôn chống phân tử có mặt tế bào lympho nh CD1, 2, 3, tùy theo mục đích gây suy giảm đáp ứng miễn dịch tế bào hay dịch thể mà dùng kháng thể kháng CD đặc trưng, ví dụ: dùng kháng CD2, CD3 để ức chế miễn dịch tế bào (ức chế tế bào T), kháng CD40 để ức chế miễn dịch dịch thể (ức chế tế bào B) [3], [73], [205] + Kháng thể đa dòng:Được tạo cách gây miễn dịch cho súc vật tế bào lympho người Nếu kháng nguyên lympho lấy từ tuyến ức tạo kháng thể kháng tế bào T (antithymocyteserum- ATS) Khi Ket-noi.com diễn đàn cơng nghê, giáo dục 10 kháng ngun lympho có nguồn gốc từ lách, máu ngoại vi tạo thể kháng lympho B Cơ chế tác dụng: Lympho T có đời sống kéo dài nên bị phá hủy gan, huyết kháng lympho bào loại trừ lympho Tác dụng bật kháng thể đa dòng lên miễn dịch tế bào, đặc biệt phản ứng mẫn chậm, phản ứng loại trừ mảnh ghép, phản ứng mảnh ghép chống vật chủ Kháng thể đa dòng làm trở ngại nhận biết kháng nguyên receptor tế bào lympho [3], [73], [205] + Kháng thể đơn dòng :Những kháng thể tạo gây mẫn cảm kháng nguyên đặc hiệu màng tế bào lympho T B nên có ưu điểm kháng thể đa dịng, : - Thuốc có phản ứng chọn lọc với kháng nguyên bề mặt có loại tế bào miễn dịch, đặc trưng Ví dụ: CD-3 có mặt hầu hết tế bào T chín, CD-4 có mặt tế bào Th CD-8 lại có mặt trờn cỏc tế bào Tc - Khơng có phản ứng chéo với tế bào lympho tiểu cầu - Kháng thể định lượng nên việc sử dụng xác Kháng thể muromonab CD3 (biệt dược Orthoclone OKT3) loại kháng thể thuộc nhóm IgG-2a có trọng lượng phân tử 150.000 daltons Thuốc tác dụng thông qua giảm chức sản xuất cytokin lympho T [88], [205] * Kháng cytokin receptor chúng: Đây nhóm thuốc mới, đặc hiệu Khi dùng lâm sàng Ýt tác dụng khơng mong muốn nhóm thuốc ức chế miễn dịch khác Dùng thực nghiệm để gây suy giảm miễn dịch súc vật giúp tìm Kết quảở bảng 3.22 cho thấy: lơ chuột bị tia xạ , tỷ lệ tế bào lympho lách tiết TNFα giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p