Phát triển hệ thống tái sinh ở cây đậu xanh vigna radiata l wilczek phục vụ chọn dòng chịu hạn và chuyển gen

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THỊ LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN VÀ CHUYỂN GEN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Chu Hoàng Mậu THÁI NGUYÊN – 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THỊ LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN VÀ CHUYỂN GEN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN – 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn THAI NGUYEN UNIVESSITY THE COLLEGE OF EDUCATION - SUMMARY OF MASTER ESSAY FOR EDUCATION SCIENCE NGUYEN THI LUYEN DEVELOPMENT OF REGENERATION ON MUNG BEAN TOCHOOSE THE DROUGHT – RESISTANT STRAIN AND TRANSGENATION Specialyty: GENETICS Code: 60.42.70 Teacher: Prof.PhD CHU HOANG MAU THAI NGUYEN – 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn Cơng trình hồn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS CHU HOÀNG MẬU Phản biện …………………………………………… Phản biện ………………………………………… Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm luận văn Họp tại: Trường Đại học Sư phạm - ĐHTN Ngày tháng năm 2009 Có thể tìm hiểu luận văn thư viện Đại học Thái Nguyên Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THỊ LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN VÀ CHUYỂN GEN Chuyên ngành: Di truyền học Mã số : 60.42.70 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái nguyên - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lời cam đoan Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố Tác giả luận văn Nguyễn Thị Luyện i Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn Lời cảm ơn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn PGS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Sinh – Kỹ thuật Nông nghiệp thầy cô giáo, cán Khoa quan tâm giúp đỡ tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn TS Nguyễn Thị Tâm, chị Vi Kiều Liên Nguyễn Thị Thủy (Phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào), xin cảm ơn Bộ môn hệ thống canh tác - Viện Ngô Trung ương cung cấp giống đậu xanh làm vật liệu cho thí nghiệm đề tài Tác giả luận văn Nguyễn Thị Luyện ii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Những chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Mở đầu Chương Tổng quan tài liệu 1.1 Sơ lược đậu xanh 1.1.1 Nguồn gốc phân loại 1.1.2 Tình hình sản xuất đậu xanh giới Việt Nam…………… 3 1.2 Ứng dụng công nghệ tế bào thực vật cải tiến giống trồng 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1.1 Cơ sở tế bào học kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật……… 1.2.1.2 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật…………………………………………………………… 7 1.2.2 Hệ thống nuôi cấy để chọn dòng……………………………………… 10 1.2.3 Phương thức chọn dòng……………………………………………… 12 1.2.4 Tái sinh cây…………………………………………………………… 13 1.3 Nghiên cứu chọn giống trồng kỹ thuật chọn dòng soma hệ thống tái sinh thực vật đậu xanh 1.3.1 Nghiên cứu chọn giống trồng kỹ thuật chọn dòng tế bào soma…… 1.3.2 Nghiên cứu hệ thống tái sinh thực vật đậu xanh ……………… 15 15 16 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu………………………… 18 2.1 Vật liệu nghiên cứu……………………………………………………… 18 2.1.1.Vật liệu thực vật………………………………………………………… 18 2.1.2 Hoá chất thiết bị…………………………………………………… 19 iii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Nhóm phương pháp ni cấy in vitro 20 2.2.2 Phương pháp đánh giá khả chịu nước mô sẹo 2.2.2.1 Phương pháp xử lý mô sẹo thổi khô 2.2.2.2 Chọn lọc mơ sẹo sống sót sau xử lý thổi khô tái sinh 2.2.2.3 Tạo hồn chỉnh từ mơ sẹo chọn lọc……………………………… 2.2.2.4 Phương pháp cây…………………………………………………… 22 22 22 23 23 2.2.3 Phương pháp tạo đa chồi từ mắt mầm……………………………… 24 2.2.4 Phương pháp xử lý kết tính tốn số liệu 24 Chương Kết thảo luận…………………………………………… 26 3.1 Hệ thống tái sinh đậu xanh từ mô sẹo……………………………… 26 3.1.1 Ảnh hưởng nồng độ chất đến kết khử trùng hạt……………… 26 3.1.2 Ảnh hưởng chất 2.4D, BAP,GA3, NAA đến khả tạo mô sẹo tái sinh từ mô sẹo 3.1.2.1 Ảnh hưởng nồng độ 2,4 D đến khả tạo mô sẹo từ phôi đậu xanh 3.1.2.2 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh từ mô sẹo phôi đậu xanh 3.1.2.3 Ảnh hưởng GA3 đến khả kéo dài chồi đậu xanh 3.1.2.4 Ảnh hưởng α-NAA đến khả rễ tạo hoàn chỉnh 26 26 31 34 35 3.1.3 Nhận xét môi trường nuôi cấy mô đậu xanh…………………… 37 3.2 Độ nước khả chịu nước mô sẹo phôi đậu xanh giống nghiên cứu ………………………………………………………… 37 3.2.1.Mức độ nước mô sẹo phôi đậu xanh giống nghiên cứu 37 3.2.2 Khả chịu nước mô sẹo phôi đậu xanh sau xử lý thổi khô……………………………………………………………………… 39 3.2.3 Nhận xét khả chịu nước mô sẹo sau xử lý thổi khô giống đậu xanh nghiên cứu………………………………… 42 3.3 Kết tái sinh đậu xanh từ mắt mầm 43 3.3.1.Môi trường nảy mầm hạt…………………………………………… 43 3.3.2 Môi trường tạo đa chồi………………………………………………… 43 3.3.3 Môi trường kéo dài chồi 45 iv Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 3.9 Khả tái sinh từ mô sẹo phơi đậu xanh sống sót sau xử lý thổi khô Thời gian Tỷ lệ tái sinh mô sẹo phôi đậu xanh sau thổi khô (%) thổi khô (giờ) VN 93- VN 99-3 VC1973A ĐX 06 VC3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 98,6 90,0 78,3 88,0 78,5 77,8 84,7 87,8 96,4 88,1 85,5 87,8 89,8 95,0 85,6 89,5 87,2 84,7 66,9 84,4 82,0 83,0 67,7 70,6 80,6 79,6 50,1 79,0 74,7 76,0 52,2 50,7 20,0 15,7 10,5 17,3 20,2 16,3 10,7 12,8 Thêi gian thỉi kh« (giê) VC 6372 VC 1973A VN 93- 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 VC 3902A Tû lƯ t¸i sinh %) VN 93- VN 99-3 VC 1973A DX 06 VC 3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A Hình 3.7 Khả tái sinh mô sẹo phôi đậu xanh sống sót sau xử lý thổi khơ 41 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Như kết cho thấy, hầu hết mô sẹo phôi đậu xanh giống qua xử lý nước 3h sống sót thường có khả tái sinh cao so với đối chứng khơng bị xử lý (0h) Điều xử lí nước, đặt lên mơi trường tái sinh, tế bào hút nước mạnh hơn, nên sức sống, sức sinh trưởng khả tái sinh cao Theo Lê Trần Bình cs (1995), nguyên nhân trình xử lý giết chết tế bào mẫn cảm, chọn tế bào có sức sống khả tái sinh cao Hiện tượng phát xử lý nước số đối tượng khác thuốc mảnh Craterosticgma plantagineum, lạc [9], [7] Kết thí nghiệm thu 289 dịng mô chịu nước giống đậuxanh 715 dịng xanh Hình 3.8 Tái sinh mơ sẹo sau xử lý thổi khô 3.2.3 Nhận xét khả chịu nƣớc xử lý thổi khô giống đậu xanh nghiên cứu (1) Cả giống đậu xanh nghiên cứu có khả chịu hạn mức độ mơ sẹo có biểu khác giống (2) Những mơ sẹo sống sót có khả tái sinh thành hồn chỉnh 42 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn (3) Kết thu 289 dịng mơ chịu nước 715 dịng xanh giống đậu xanh nghiên cứu Đây nguồn vật liệu phong phú cho chọn dòng chịu hạn đậu xanh tái sinh từ mô sẹo chịu nước 3.3 KẾT QUẢ TÁI SINH CÂY ĐẬU XANH TỪ MẮT LÁ MẦM 3.3.1 Môi trƣờng nảy mầm hạt Hạt đậu xanh giống khử trùng (điều kiện khử trùng giống phần khử trùng hạt mục 2.2.1) cấy môi trường nảy mầm, giai đoạn hạt chủ yếu sử dụng chất dinh dưỡng có sẵn hạt nên mơi trường chưa cần cung cấp chất kích thích sinh trưởng Ở giống đậu xanh, sau ngày nuôi cấy hạt bắt đầu nứt vỏ, ngày hạt nảy mầm hoàn chỉnh A B C D Hình 3.9 Hạt đậu xanh nảy mầm sau ngày (A, B), Hạt đậu xanh tách để tạo đa chồi (C, D) 3.3.2 Môi trƣờng tạo đa chồi Môi trường tạo đa chồi đa số loài thực vật cần sử dụng chất điều hồ sinh trưởng IAA, BAP, IBA,…Trong q trình thí nghiệm 43 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn sử dụng BAP để tạo đa chồi đậu xanh Việc sử dụng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng thích hợp có ý nghĩa quan trọng giai đoạn phát triển cây, nguyên tắc nuôi cấy mô tế bào Sau ngày, hạt nảy mầm dùng dao mổ tách hạt thành hai mảnh, dùng kim nhọn gây tổn thương mắt mầm, cấy mảnh mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ khác (1,5mg/l; 2mg/l; 2,5mg/l; 3mg/l; 3,5mg/l) Mỗi bình cấy 10 – 15 mảnh mầm Mỗi cơng thức thí nghiệm tiến hành 30 mầm, lặp lại lần Khả tạo chồi số chồi / mảnh mầm dùng để đánh giá khả thích ứng giống ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng hệ thống ni cấy in vitro, kết phân tích thể bảng 3.10 Bảng 3.10 Ảnh hưởng BAP đến khả tạo đa chồi đậu xanh Công Nồng độ thức BAP VN 93-1 Số chồi / mầm VN99-3 VC 1973A ĐX 06 VC 3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 1,5 1,33 0,329 1,660,639 1,660,329 1,660,639 1,660,639 1,660,329 1,660,329 1,66 0639 2 1,660,639 2,330,329 2,000,577 2,330,329 1,660,329 2,330,086 2,000,57 2,300,639 2,5 1,670,329 2,300,375 2,660,329 2,430,352 2,350,144 2,660,144 2,500,144 2,330,202 2,330,329 2,660,329 3,000,577 2,660,329 2,660,639 3,350,259 3,150,329 3,000,577 3,5 1,330,329 1,670,329 1,330,329 1,570,190 1,660,329 2,330,329 1,480,069 1,330,369 Từ bảng 3.10 cho thấy khác biệt số lượng chồi từ mắt mầm môi trường tạo đa chồi bổ sung BAP với nồng độ mg/l cho số chồi đạt tối đa mầm dao động từ 2,33  0,329 đến 3,35  0,259 gặp tất 44 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn giống đậu xanh: VN93-1; VN99-1; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A; ĐX06 Số lượng chồi không phụ thuộc vào nồng độ BAP mà q trình làm thí nghiệm mà chúng tơi cịn thấy rằng, gây tổn thương vị trí, khơng q sâu hay q nơng tạo số chồi nhiều Cũng sử dụng mầm để tái sinh mơi trường tái sinh có bổ sung BAP nhóm nghiên cứu Mai Trường cs thu số chồi tối đa chồi/lá mầm Như kết luận gây tổn thương mắt mầm vị trí mơi trường tạo đa chồi bổ sung 3mg/l BAP tạo số chồi / mầm cao Hình 3.10 Hình ảnh tạo đa chồi từ mắt mầm 3.3.3 Môi trƣờng kéo dài chồi Sau khoảng 10 ngày chồi hình thành, tách riêng chồi cấy chuyển sang mơi trường kéo dài chồi có bổ sung 1,5 mg/l GA3 chất dinh dưỡng khác chồi phát triển thuận lợi Sau 10 ngày cấy môi trường kéo dài chồi, chồi đậu xanh đạt kích thước - cm chuyển sang mơi trường rễ 45 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 3.11 Hình ảnh kéo dài chồi đậu xanh mơi trường bổ sung GA3 3.3.4 Môi trƣờng rễ Hệ rễ hình thành chuyển chồi sang mơi trường rễ có bổ sung 0,3mg/l α – NAA, khoảng 30 ngày, hoàn chỉnh với rễ phát triển tốt đạt chiều cao – cm, chuyển ngồi ni cấy khay Hình 3.12 Hình ảnh đậu xanh rễ mơi trường bổ sung 0,3mg/l α-NAA 3.3.5 Ra chế độ chăm sóc Khi ống nghiệm có kích thước - cm với hệ rễ phát triển đưa ngồi ni cấy khay (điều kiện nuôi cấy phương pháp mục 2.2.1) Sau khoảng 30 ngày đậu xanh hoa kết 46 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn B A C D Hình 3.13 Cây đậu xanh tái sinh trồng khay (A), Cây đậu xanh tái sinh trồng chậu hoa kết (B, C, D) 3.3.6 Nhận xét môi trƣờng tái sinh từ mắt mầm (1) Môi trường bổ sung 3mg/l BAP gây tổn thương vị trí trí tạo số lượng chồi / mầm cao (2) Môi trường bổ sung 1,5 mg/l GA3 sau 10 ngày nuôi cấy chồi tạo chồi đạt kích thước cấy chuyển rễ tốt (3) Cả giống đậu xanh có khả tạo đa chồi tái sinh thành hồn chỉnh, tái sinh có khả hoa kết trồng điều kiện trồng chăm sóc khay 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Thăm dị mơi trường nuôi cấy mô sẹo đậu xanh cho thấy: môi trường có bổ sung 11mg/l 2,4D mơi trường thích hợp cho tạo mô sẹo giống đậu xanh ĐX06 Môi trường có bổ sung 10mg/l 2,4D thích hợp cho tạo mơ sẹo giống cịn lại Nồng độ 3mg/l BAP cho tỷ lệ tái sinh, số chồi trung bình, kích thước trung bình chồi cao mơi trường có bổ sung 0,3mg/l α-NAA thích hợp cho tạo hoàn chỉnh 1.3 Đánh giá khả chịu nước giống đậu xanh mức độ mô sẹo sở xác định độ nước, khả chịu nước, khả sống sót khả tái sinh cho thấy giống đậu xanh có khả chịu nước mức độ mơ sẹo Đã chọn 289 dịng mơ chịu nước 715 dòng xanh tái sinh từ mơ sẹo chịu nước 1.3 Thăm dị mơi trường tái sinh đậu xanh từ mắt mầmcho thấy, mơi trường có bổ sung 3mg/l BAP gây tổn thương vị trí tạo số chồi/ mầm cao Mơi trường có bổ sung 1,5 mg/l GA3 môi trường tốt để kéo dài chồi; môi trường bổ sung 0,3 mg/l α – NAA mơi trường thích hợp cho tạo rễ chồi đậu xanh 1.4 Cả giống đậu xanh có khả tạo đa chồi từ mắt mầm tái sinh thành hồn chỉnh, có khả hoa kết trồng chậu Đề nghị 2.1 Tiếp tục sử dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro vào việc chọn dòng chịu hạn từ giống đậu xanh nghiên cứu 2.2 Cần có nghiên cứu chuyển gen thích hợp để cải tiến giống đậu xanh có chất lượng cao khảnăng chống chịu với điều kiện bất lợi mơi trường tốt 48 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Nguyễn Thị Luyện, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Lò Mai Thu, Chu Hoàng Mậu (2009), Hoàn thiện hệ thống tái sinh in vitro đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) phục vụ cho chuyển gen” Tạp chí Khoa học&Cơng nghệ-Đại học Thái Nguyên, 54(6): 123-128 49 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Cơng nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Giáo trình cao học nơng nghiệp, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội (188 trang) Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998), Phân lập gen chọn dòng chống chịu ngoại cảnh bất lợi lúa, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội Lê Trần Bình, Võ Thị Ngọc Diệp, Lê Thị Muội (1995), “Nghiên cứu khả chịu lạnh chịu khô mô sẹo lúa giống lúa có nguồn gốc sinh thái khác nhau”, Tạp chí sinh học, 17(1), tr 19 – 55 Bùi Bảo Hồn (1993), Ứng dụng kỹ thuật ni cấy mơ tế bào bảo quản, nhân giống chọn dòng chịu lạnh khoai lang (Ipomoea batatas L.), Luận văn thạc sĩ sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội Nguyễn Hữu Hồ Nguyễn Văn Uyển (2005), Nghiên cứu hai kiểu tái sinh in vitro khoai lang Inpomoea Batatas, Những vấn đề khoa học sống ; NXB khoa học kỹ thuật, 1242 – 1245 Nguyễn Thị Thuý Hường, Trần Thị Ngọc Diệp, Nguyễn Thu Hiền, Chu Hoàng Mậu, Lê Văn Sơn, Chu Hoàng Hà (2009), “Phát triển hệ thống tái sinh in vitro đậu tương (Glycine max (L.) Merill) phục vụ chuyển gen” Tạp chí Khoa học&Cơng nghệ-Đại học Thái Nguyên, 52(4): 82-88 Ngô Thị Liêm (2006),Nghiên cứu đa dạng di truyền khả chịu hạn số giống lạc (Arachis hypogaea L.), Luận văn thạc sĩ sinh học, trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên Trần Đình Long, Lê Khả Tường (1998), Cây đậu xanh NXB Nơng nghiệp 50 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Hồng Lộc (1992), Chọn dịng chịu muối NaCl chịu nước thuốc (Nicotiana tabacum L.), luận án phó tiến sĩ sinh học, Viện Cơng nghệ Sinh học, Hà Nội, 107 trang 10 Chu Hoàng Mậu (2001), Sử dụng phương pháp đột biến thực nghiệm để tạo dòng đậu tương đậu xanh đột biến đột biến thích hợp cho vùng núi đơng bắc Việt Nam Luận án tiến sĩ Sinh học Viên Công nghệ Sinh học, Hà Nội 11 Nguyễn Thị Phương Nam cộng (2007), “Xây dựng hệ thống tái sinh in vitro ngô ứng dụng nghiên cứu chuyển gen tạo protein giàu sắt nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens”, Những vấn đề khoa học sống, NXB Khoa học kỹ thuật, 887 -89 12 Đinh Thị Phòng (2001), Nghiên cứu khả chịu hạn chọn dịng chịu hạn lúa cơng nghệ tế bào thực vật, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 13 Nguyễn Thị Thanh Võ Phan MiSa (2007), “Nghiên cứu xây dựng hệ thống tái sinh in vitro ứng dụng chuyển gen hồ tiêu; Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống”, NXB Khoa học kỹ thuật, 820 – 824 14 Nguyễn Thị Tâm (2004), Nghiên cứu khả chịu nóng chọn dịng chịu nóng lúa công nghệ tế bào thực vật, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 15 Phan Hữu Tơn (2004), Giáo trình Cơng nghệ sinh học chọn tạo giống trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 16 Mai Trường, Nguyễn Hữu Hổ, Lê Tấn Đức, Nguyễn Văn Uyển (2001), “Hệ thống tái sinh đậu xanh từ cuống tử điệp ni cấy in vitro” Tạp chí sinh học, 23: 33-35 51 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 17 Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi (1996), Xử lý thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nông lâm ng nghiệp máy vi tính, Nxb Nơng Nghiệp, Hà Nội Tài liệu tiếng anh 18 Abdul B., Frinch R P., Cocking E C (1999), Plant regeneration from protoplast of wild rice (Oryza rufipogon Griff)”, Plant cell Rep, 10, pp 200 – 203 19 Adkins S M., Shiraishi T., Kunavuvatchaidach R.,Godwin I D (1995), “Somaclonal variation in rice drought – tolerance and other agronomic characters”, Aust J Bot, 4, pp 201 – 209 20 Amutha S., Muruganantham M., and Ganapathi A (2006), “Thidiazuroninduced high-frequency axillary and adventitious shoot regeneration in Vigna radiata (L.) Wilczek” In Vitro Cell Dev Biol.-Plant, 42:26–30 21 Bajai S., Rajam H (1996), “Spermidine for effcient regeneration”, Rice Bio Quar, 26, pp 22.Bertin P., Kinet J M Bouharmont J (1995), “Heritable chilling tolerance improvement in rice through somaclonal variation and cell line selection”, Aust J Bot, 44, pp 91 – 105 23 Bertin P., Kinet J M Bouharmont J (1997), “ Somaclonal variation and improvement of chilling tolerance in rice: Chance in chilling – induce chlorophyll fluorescence”, Crop Sci, 37, pp 1727 – 1735 24 Biwas G C., Zapata F J.(1993), “High – frequence plant regeneratin from protoplast of indica rice (Oryza sativa L.) using mantose”, J plant Physiol, 141, pp 475 25 Chandler S F.,Vasil I K.(1984), “Selection and characteerrizationlof 52 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn NaCl tolerance cell from embryogenesis cultures of Pennisetum purpureum Schum”, Plant Sci Lett, 37, pp 157- 164 26 Collin H A., Dix P.J (1990), “Culture systems and selection procedure In: Plant cell line selection VCH Verlagsgesellschaft” 27 Dix P.J (1986), Plant cell culture technology, Yeoman M.M (eds), Oxford, Blackwel Scientific Publication, pp 143 – 201 28 Dix P.J.(1990), Plant cell line selection (Procedures and Applications), VCH Verlagsgllchaft MBH 29 Gulati A and Jaiwal P.K (1993) “In vitro selection of salt-resistant Vigna radiata (L.) Wilczek plants by adventitious shoot formation from cultured cotyledon explants” J Plant Physiol 142: 99–10 30 Gulati A, Jaiwal PK (1994), “Plant regeneration from cotyledonary node explants of mungbean (Vigna radiata (L.) Wilczek)” Plant Cell Rep 13:523–527 31 Ignacimuthu S & Franklin G (1999), “Regeneration of plantlets from cotyledon and embryonal axis explants of Vigna mungo L Hepper”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 55: 75–78 32 Jayanti Sen & Spra Guha Mukherjee (1998), “In vitro intoduction of multiple shoots and plant regeneration in Vigna, In vitro Cell.Dev Biol plant, 34: 276 – 280 33 K Ramakrishnan · R Gnanam · P Sivakumar A Manickam, “In vitro somatic embryogenesis from cell suspension cultures of cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp)”, Plant Cell Rep (2005) 24: 449–461 34 Kaviraj C.P., G Kiran, R.B Venugopan, P.B.Kavi Kishor, Srinath Rao (2006), “Somatic embryogenesis and plant regeneration from cotyredorary 53 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn explants of green gram (Vigna radiata (L.) Wilczek)- A recalcitrant grain legume” In vitro Cell.Der Biol plant 42: 134 – 138 35 Mundy J., Chua N H (1988), Abcisis and water stress induce the expression of a novel rice gene”, EMBOJ, 8, pp 2279 – 2286 36.Muruganantham M., Amutha S.,Selvaraj N., Vengadesan G., Ganapathi A (2007), “Efficient Agrobacterium- ediated transformation of Vigna mungo using immature cotyledonary-node explants and phosphinothricin as the selection agent” In Vitro Cell.Dev.Biol.-Plant, 43:550–557 37 Norbor M W (1990), Environmental stress resistance In: Plant Cell Line Selection, Weihein, New York, Basel, Cambridge, VCH, pp 167 – 186 38 Prem R anand, Ganapathi A., Ramesh V Anbazhagan, Gengadesan G., and Selvaraj N (2001), “High frequency plant regeneration via somatic embryogenesis in cell suspension cultures of cowpea, vigna unguiculata (L.) walp” In Vitro Cell Dev Biol-Plant, 36:475-480 39 Poddar K., Vishnoi R K., Kothari S L (1998), “Plant regeneration from embryogenesis callus”, Rice Bio quar, 35, pp 40 Raghava R N V., Nabors M V., (1985), “Plant negeneration from tissue cultures of Pokali rice is promoted by optizing callus to medium volume ratio and by a medium conditioning factor produced by embryogeneic callus”, Cell Tiss Org Cult, 4, pp 241 – 248 41 Rudrabhatla Sairam, Siva Chennareddy, Madasamy Parani, Shulu Zhang, Diaa Al-abed, Wissam Abou-Alaiw, and Stephen Goldman (2005), “Obpc symposium: Maize 2004 & beyond – plant regeneration, gene discovery, and genetic engineering of plants for crop improvement” In Vitro Cell Dev Biol.-Plant, 41:411–423 42 Renato A Avenido & Kazumi Hattori (1999), “Differences in shoot 54 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn regeneration response from cotyledonary node explants in Asiatic Vigna species support genomic grouping within subgenus Ceratotropis (Piper) Verdc.” Plant Cell, Tissue and Organ Culture 58: 99–110 43 Renato A Avenido, Jo Motoda and Kazumi Hattori (2001), “Direct shoot regeneration from cotyledonary nodes as a marker for genomic groupings within the Asiatic Vigna (subgenus Ceratotropis {Piper} Verdc.) species” Plant Growth Regulation, 35: 59–67 44 Sita L Mahala, T Leela, B Kiran Kumar, B Naresh, Prathibha Devi (2006), “In vitro plant regeneration from the petioles of primary leaves of mungbean (Vigna radiata L.)” Plant Biotechnology, 23: 409–411 45 Sonia, Raman Saini, Rana P Singh, Pawan K Jaiwal (2007), “Agrobacterium tumefaciens mediated transfer of Phaseolusvulgaris amylase inhibitor-1 gene into mungbean (Vigna radiata (L.)Wilczek) using bar as selectable marker” Plant Cell Rep 26:187–198 55 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... THỊ LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L. ) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN VÀ CHUYỂN GEN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN – 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu... cs (2007) [44] Những l? ? sở để xây dựng đề tài cho luận văn thạc sĩ l? ?: ? ?Phát triển hệ thống tái sinh đậu xanh (Vigna radiata (L. ) Wilczek) phục vụ chọn dòng chịu hạn chuyển gen? ?? MỤC ĐÍCH NGHIÊN... http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THỊ LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L. ) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN