Phát triển hệ thống tái sinh ở cây đậu xanh (vigna radiata (l.) wilczek) phục vụ chọn dòng chịu hạn và chuyển gen

Header Page of 166 I HC THI NGUYấN TRNG I HC S PHM NGUYN TH LUYN PHT TRIN H THNG TI SINH CY U XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHC V CHN DềNG CHU HN V CHUYN GEN LUN VN THC S SINH HC Chuyờn ngnh: Di truyn hc Mó s: 60.42.70 Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS Chu Hong Mu THI NGUYấN 2009 Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 I HC THI NGUYấN TRNG I HC S PHM NGUYN TH LUYN PHT TRIN H THNG TI SINH CY U XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHC V CHN DềNG CHU HN V CHUYN GEN LUN VN THC S SINH HC THI NGUYấN 2009 Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 THAI NGUYEN UNIVESSITY THE COLLEGE OF EDUCATION - SUMMARY OF MASTER ESSAY FOR EDUCATION SCIENCE NGUYEN THI LUYEN DEVELOPMENT OF REGENERATION ON MUNG BEAN TOCHOOSE THE DROUGHT RESISTANT STRAIN AND TRANSGENATION Specialyty: GENETICS Code: 60.42.70 Teacher: Prof.PhD CHU HOANG MAU THAI NGUYEN 2009 Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 Cụng trỡnh c hon thnh ti: TRNG I HC S PHM - I HC THI NGUYấN Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS CHU HONG MU Phn bin Phn bin Lun s c bo v trc Hi ng chm lun Hp ti: Trng i hc S phm - HTN Ngy thỏng nm 2009 Cú th tỡm hiu lun ti th vin i hc Thỏi Nguyờn Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 I HC THI NGUYấN TRNG I HC S PHM NGUYN TH LUYN PHT TRIN H THNG TI SINH CY U XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHC V CHN DềNG CHU HN V CHUYN GEN Chuyờn ngnh: Di truyn hc Mó s : 60.42.70 TểM TT LUN VN THC S SINH HC Thỏi nguyờn - 2009 Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 Li cam oan Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi Cỏc s liu, kt qu nghiờn cu lun l trung thc v cha c cụng b Tỏc gi lun Nguyn Th Luyn i Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 Li cm n Tụi xin by t lũng bit n PGS.TS Chu Hong Mu ó tn tỡnh hng dn, ch bo v to mi iu kin giỳp tụi hon thnh cụng trỡnh nghiờn cu ny Tụi xin chõn thnh cm n Ban lónh o Trng i hc S phm - i hc Thỏi Nguyờn, Ban ch nhim khoa Sinh K thut Nụng nghip v cỏc thy cụ giỏo, cỏn b ca Khoa ó quan tõm giỳp tụi sut quỏ trỡnh hc v hon thnh lun Tụi xin cm n TS Nguyn Th Tõm, v cỏc ch Vi Kiu Liờn v Nguyn Th Thy (Phũng thớ nghim Cụng ngh t bo), xin cm n B mụn h thng canh tỏc - Vin Ngụ Trung ng ó cung cp cỏc ging u xanh lm vt liu cho cỏc thớ nghim ca ti Tỏc gi lun Nguyn Th Luyn ii Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 166 MC LC Trang Li cam oan i Li cm n ii Mc lc iii Nhng ch vit tt vi Danh mc cỏc bng vii Danh mc cỏc hỡnh viii M u Chng Tng quan ti liu 1.1 S lc v cõy u xanh 1.1.1 Ngun gc v phõn loi 1.1.2 Tỡnh hỡnh sn xut u xanh trờn th gii v Vit Nam 3 1.2 ng dng cụng ngh t bo thc vt ci tin ging cõy trng 1.2.1 C s khoa hc ca nuụi cy mụ t bo thc vt 1.2.1.1 C s t bo hc ca k thut nuụi cy mụ t bo thc vt 1.2.1.2 nh hng ca cỏc cht iu tit sinh trng n quỏ trỡnh nuụi cy mụ t bo thc vt 7 1.2.2 H thng nuụi cy chn dũng 10 1.2.3 Phng thc chn dũng 12 1.2.4 Tỏi sinh cõy 13 1.3 Nghiờn cu chn ging cõy trng bng k thut chn dũng soma v h thng tỏi sinh thc vt v cõy u xanh 1.3.1 Nghiờn cu chn ging cõy trng bng k thut chn dũng t bo soma 1.3.2 Nghiờn cu h thng tỏi sinh thc vt v cõy u xanh 15 15 16 Chng Vt liu v phng phỏp nghiờn cu 18 2.1 Vt liu nghiờn cu 18 2.1.1.Vt liu thc vt 18 2.1.2 Hoỏ cht v thit b 19 iii Footer Page of 166 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 10 of 166 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 19 2.2.1 Nhúm phng phỏp nuụi cy in vitro 20 2.2.2 Phng phỏp ỏnh giỏ kh nng chu mt nc ca mụ so 2.2.2.1 Phng phỏp x lý mụ so bng thi khụ 2.2.2.2 Chn lc mụ so sng sút sau x lý bng thi khụ v tỏi sinh cõy 2.2.2.3 To cõy hon chnh t mụ so chn lc 2.2.2.4 Phng phỏp cõy 22 22 22 23 23 2.2.3 Phng phỏp to a chi t mt lỏ mm 24 2.2.4 Phng phỏp x lý kt qu v tớnh toỏn s liu 24 Chng Kt qu v tho lun 26 3.1 H thng tỏi sinh cõy u xanh t mụ so 26 3.1.1 nh hng nng cỏc cht n kt qu kh trựng ht 26 3.1.2 nh hng ca cỏc cht 2.4D, BAP,GA3, NAA n kh nng to mụ so v tỏi sinh cõy t mụ so 3.1.2.1 nh hng ca nng 2,4 D n kh nng to mụ so t phụi u xanh 3.1.2.2 nh hng ca BAP n kh nng tỏi sinh cõy t mụ so phụi u xanh 3.1.2.3 nh hng ca GA3 n kh nng kộo di chi ca u xanh 3.1.2.4 nh hng ca -NAA n kh nng r v to cõy hon chnh 26 26 31 34 35 3.1.3 Nhn xột v mụi trng nuụi cy mụ cõy u xanh 37 3.2 mt nc v kh nng chu mt nc ca mụ so phụi u xanh cỏc ging nghiờn cu 37 3.2.1.Mc mt nc ca mụ so phụi u xanh ca cỏc ging nghiờn cu 37 3.2.2 Kh nng chu mt nc ca mụ so phụi u xanh sau x lý bng thi khụ 39 3.2.3 Nhn xột v kh nng chu mt nc ca mụ so sau x lý bng thi khụ ca cỏc ging u xanh nghiờn cu 42 3.3 Kt qu tỏi sinh cõy u xanh t mt lỏ mm 43 3.3.1.Mụi trng ny mm ca ht 43 3.3.2 Mụi trng to a chi 43 3.3.3 Mụi trng kộo di chi 45 iv Footer Page 10Trung of 166 S húa bi tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 55 of 166 Bng 3.9 Kh nng tỏi sinh cõy t mụ so phụi u xanh sng sút sau x lý bng thi khụ Thi gian T l tỏi sinh ca mụ so phụi u xanh sau thi khụ (%) thi khụ (gi) VN 93- VN 99-3 VC1973A X 06 VC3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 98,6 90,0 78,3 88,0 78,5 77,8 84,7 87,8 96,4 88,1 85,5 87,8 89,8 95,0 85,6 89,5 87,2 84,7 66,9 84,4 82,0 83,0 67,7 70,6 80,6 79,6 50,1 79,0 74,7 76,0 52,2 50,7 20,0 15,7 10,5 17,3 20,2 16,3 10,7 12,8 Thời gian thổi khô (giờ) VC 6372 VC 1973A VN 93- 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 VC 3902A Tỷ lệ tái sinh %) VN 93- VN 99-3 VC 1973A DX 06 VC 3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A Hỡnh 3.7 Kh nng tỏi sinh cõy ca cỏc mụ so phụi u xanh sng sút sau x lý bng thi khụ 41 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 55 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 56 of 166 Nh vy kt qu cho thy, hu ht mụ so phụi u xanh ca cỏc ging qua x lý mt nc 3h sng sút thng cú kh nng tỏi sinh cõy cao hn so vi i chng khụng b x lý (0h) iu ny cú th x lớ mt nc, t lờn mụi trng tỏi sinh, cỏc t bo hỳt nc mnh hn, nờn sc sng, sc sinh trng v kh nng tỏi sinh cao hn Theo Lờ Trn Bỡnh v cs (1995), nguyờn nhõn l quỏ trỡnh x lý ó git cht nhng t bo mn cm, chn nhng t bo cú sc sng v kh nng tỏi sinh cao Hin tng ny cng c phỏt hin x lý mt nc mt s i tng cõy khỏc nh thuc lỏ v mnh lỏ cõy Craterosticgma plantagineum, lc [9], [7] Kt qu cỏc thớ nghim ó thu c 289 dũng mụ chu mt nc ca ging uxanh v 715 dũng cõy xanh Hỡnh 3.8 Tỏi sinh mụ so sau x lý thi khụ 3.2.3 Nhn xột v kh nng chu mt nc bng x lý thi khụ ca cỏc ging u xanh nghiờn cu (1) C ging u xanh nghiờn cu u cú kh nng chu hn mc mụ so v cú biu hin khỏc gia cỏc ging (2) Nhng mụ so sng sút u cú kh nng tỏi sinh thnh cõy hon chnh 42 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 56 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 57 of 166 (3) Kt qu thu c 289 dũng mụ chu mt nc v 715 dũng cõy xanh ca ging u xanh nghiờn cu õy l ngun vt liu phong phỳ cho chn dũng chu hn cõy u xanh tỏi sinh t mụ so chu mt nc 3.3 KT QU TI SINH CY U XANH T MT L MM 3.3.1 Mụi trng ny mm ca ht Ht u xanh ca ging c kh trựng (iu kin kh trựng ging nh phn kh trựng ht ca mc 2.2.1) cy trờn mụi trng ny mm, giai on ny ht ch yu s dng cht dinh dng cú sn ht nờn mụi trng cha cn cung cp cht kớch thớch sinh trng c ging u xanh, sau mt ngy nuụi cy ht bt u nt v, ngy ht ny mm hon chnh A B C D Hỡnh 3.9 Ht u xanh ny mm sau ngy (A, B), Ht u xanh c tỏch to a chi (C, D) 3.3.2 Mụi trng to a chi Mụi trng to a chi a s cỏc loi thc vt cn s dng cỏc cht iu ho sinh trng nh IAA, BAP, IBA,Trong quỏ trỡnh thớ nghim 43 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 57 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 58 of 166 chỳng tụi ó s dng BAP to a chi u xanh Vic s dng nng cỏc cht iu ho sinh trng thớch hp cú ý ngha quan trng i vi tng giai on phỏt trin ca cõy, õy l nguyờn tc c bn nuụi cy mụ t bo Sau ngy, ht ny mm dựng dao m tỏch ht thnh hai mnh, dựng kim nhn gõy tn thng mt lỏ mm, cy cỏc mnh ú mụi trng MS c bn cú b sung BAP vi nng khỏc (1,5mg/l; 2mg/l; 2,5mg/l; 3mg/l; 3,5mg/l) Mi bỡnh cy 10 15 mnh lỏ mm Mi cụng thc thớ nghim c tin hnh trờn 30 lỏ mm, lp li ln Kh nng to chi v s chi / mnh lỏ mm c dựng ỏnh giỏ kh nng thớch ng ca ging v nh hng ca cht kớch thớch sinh trng h thng nuụi cy in vitro, kt qu phõn tớch c th hin bng 3.10 Bng 3.10 nh hng ca BAP n kh nng to a chi u xanh Cụng Nng thc BAP VN 93-1 S chi / mt lỏ mm VN99-3 VC 1973A X 06 VC 3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 1,5 1,33 0,329 1,660,639 1,660,329 1,660,639 1,660,639 1,660,329 1,660,329 1,66 0639 2 1,660,639 2,330,329 2,000,577 2,330,329 1,660,329 2,330,086 2,000,57 2,300,639 2,5 1,670,329 2,300,375 2,660,329 2,430,352 2,350,144 2,660,144 2,500,144 2,330,202 2,330,329 2,660,329 3,000,577 2,660,329 2,660,639 3,350,259 3,150,329 3,000,577 3,5 1,330,329 1,670,329 1,330,329 1,570,190 1,660,329 2,330,329 1,480,069 1,330,369 T bng 3.10 cho thy s khỏc bit s lng chi t mt lỏ mm mụi trng to a chi b sung BAP vi nng mg/l cho s chi t ti a trờn mt lỏ mm dao ng t 2,33 0,329 n 3,35 0,259 gp tt c 44 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 58 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 59 of 166 ging u xanh: VN93-1; VN99-1; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A; X06 S lng chi khụng ch ph thuc vo nng BAP m quỏ trỡnh lm thớ nghim m chỳng tụi cũn thy rng, nu gõy tn thng ỳng v trớ, khụng quỏ sõu hay quỏ nụng s to c s chi nhiu nht Cng s dng lỏ mm tỏi sinh v mụi trng tỏi sinh cú b sung BAP nhng nhúm nghiờn cu ca Mai Trng v cs ch thu c s chi ti a l chi/lỏ mm Nh vy cú th kt lun rng gõy tn thng mt lỏ mm ỳng v trớ v mụi trng to a chi b sung 3mg/l BAP to c s chi / lỏ mm l cao nht Hỡnh 3.10 Hỡnh nh to a chi t mt lỏ mm 3.3.3 Mụi trng kộo di chi Sau khong 10 ngy chi c hỡnh thnh, tỏch riờng tng chi v cy chuyn sang mụi trng kộo di chi cú b sung 1,5 mg/l GA3 v cỏc cht dinh dng khỏc cho chi phỏt trin thun li Sau 10 ngy cy trờn mụi trng kộo di chi, chi u xanh t kớch thc - cm c chuyn sang mụi trng r 45 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 59 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 60 of 166 Hỡnh 3.11 Hỡnh nh kộo di chi u xanh trờn mụi trng b sung GA3 3.3.4 Mụi trng r H r c hỡnh thnh chuyn cỏc chi sang mụi trng r cú b sung 0,3mg/l NAA, khong 30 ngy, cõy hon chnh vi b r phỏt trin tt t chiu cao cm, cõy c chuyn ngoi nuụi cy cỏc khay Hỡnh 3.12 Hỡnh nh cõy u xanh r trờn mụi trng b sung 0,3mg/l -NAA 3.3.5 Ra cõy v ch chm súc Khi cõy ng nghim cú kớch thc - cm vi h r phỏt trin c a ngoi nuụi cy khay (iu kin nuụi cy nh phng phỏp cõy mc 2.2.1) Sau khong 30 ngy cõy u xanh hoa v kt qu 46 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 60 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 61 of 166 B A C D Hỡnh 3.13 Cõy u xanh tỏi sinh c trng khay (A), Cõy u xanh tỏi sinh c trng chu hoa kt qu (B, C, D) 3.3.6 Nhn xột v mụi trng tỏi sinh t mt lỏ mm (1) Mụi trng b sung 3mg/l BAP v gõy tn thng ỳng v trớ trớ to c s lng chi / lỏ mm l cao nht (2) Mụi trng b sung 1,5 mg/l GA3 sau 10 ngy nuụi cy chi to c chi t kớch thc cy chuyn r tt nht (3) C ging u xanh u cú kh nng to a chi v tỏi sinh thnh cõy hon chnh, cõy tỏi sinh u cú kh nng hoa kt qu trng iu kin trng v chm súc khay 47 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 61 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 62 of 166 KT LUN V NGH Kt lun 1.1 Thm dũ mụi trng nuụi cy mụ so u xanh cho thy: mụi trng cú b sung 11mg/l 2,4D l mụi trng thớch hp cho to mụ so ging u xanh X06 Mụi trng cú b sung 10mg/l 2,4D thớch hp cho to mụ so ging cũn li Nng 3mg/l BAP cho t l tỏi sinh, s chi trung bỡnh, kớch thc trung bỡnh chi l cao nht v mụi trng cú b sung 0,3mg/l -NAA l thớch hp cho to cõy hon chnh 1.3 ỏnh giỏ kh nng chu mt nc ca cỏc ging u xanh mc mụ so trờn c s xỏc nh mt nc, kh nng chu mt nc, kh nng sng sút v kh nng tỏi sinh cõy ó cho thy c ging u xanh u cú kh nng chu mt nc mc mụ so ó chn c 289 dũng mụ chu mt nc v 715 dũng cõy xanh tỏi sinh t mụ so chu mt nc 1.3 Thm dũ mụi trng tỏi sinh cõy u xanh t mt lỏ mmcho thy, mụi trng cú b sung 3mg/l BAP v gõy tn thng ỳng v trớ s to c s chi/ lỏ mm cao Mụi trng cú b sung 1,5 mg/l GA3 l mụi trng tt nht kộo di chi; mụi trng b sung 0,3 mg/l NAA l mụi trng thớch hp cho to r chi u xanh 1.4 C ging u xanh u cú kh nng to a chi t mt lỏ mm v tỏi sinh thnh cõy hon chnh, cú kh nng hoa kt qu trng chu ngh 2.1 Tip tc s dng k thut nuụi cy in vitro vo vic chn dũng chu hn t cỏc ging u xanh nghiờn cu trờn 2.2 Cn cú nhng nghiờn cu chuyn gen thớch hp ci tin cỏc ging u xanh cú cht lng cao v khnng chng chu vi iu kin bt li ca mụi trng tt 48 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 62 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 63 of 166 CễNG TRèNH CễNG B LIấN QUAN N LUN VN Nguyn Th Luyn, Nguyn V Thanh Thanh, Lũ Mai Thu, Chu Hong Mu (2009), Hon thin h thng tỏi sinh in vitro cõy u xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) phc v cho chuyn gen Tp Khoa hc&Cụng ngh-i hc Thỏi Nguyờn, 54(6): 123-128 49 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 63 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 64 of 166 TI LIU THAM KHO Ti liu ting vit Lờ Trn Bỡnh, H Hu Nh, Lờ Th Mui (1997), Cụng ngh sinh hc thc vt ci tin ging cõy trng, Giỏo trỡnh cao hc nụng nghip, Nxb Nụng nghip, H Ni (188 trang) Lờ Trn Bỡnh, Lờ Th Mui (1998), Phõn lp gen v chn dũng chng chu ngoi cnh bt li cõy lỳa, Nxb i hc Quc Gia, H Ni Lờ Trn Bỡnh, Vừ Th Ngc Dip, Lờ Th Mui (1995), Nghiờn cu kh nng chu lnh v chu khụ mụ so lỳa ca cỏc ging lỳa cú ngun gc sinh thỏi khỏc nhau, Tp sinh hc, 17(1), tr 19 55 Bựi Bo Hon (1993), ng dng k thut nuụi cy mụ t bo bo qun, nhõn ging v chn dũng chu lnh khoai lang (Ipomoea batatas L.), Lun thc s sinh hc, Vin Cụng ngh Sinh hc, H Ni Nguyn Hu H v Nguyn Vn Uyn (2005), Nghiờn cu hai kiu tỏi sinh in vitro cõy khoai lang Inpomoea Batatas, Nhng c bn khoa hc s sng ; NXB khoa hc v k thut, 1242 1245 Nguyn Th Thuý Hng, Trn Th Ngc Dip, Nguyn Thu Hin, Chu Hong Mu, Lờ Vn Sn, Chu Hong H (2009), Phỏt trin h thng tỏi sinh in vitro cõy u tng (Glycine max (L.) Merill) phc v chuyn gen Tp Khoa hc&Cụng ngh-i hc Thỏi Nguyờn, 52(4): 82-88 Ngụ Th Liờm (2006),Nghiờn cu s a dng di truyn v kh nng chu hn ca mt s ging lc (Arachis hypogaea L.), Lun thc s sinh hc, trng i hc S phm Thỏi Nguyờn Trn ỡnh Long, Lờ Kh Tng (1998), Cõy u xanh NXB Nụng nghip 50 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 64 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 65 of 166 Nguyn Hong Lc (1992), Chn dũng chu mui NaCl v chu mt nc thuc lỏ (Nicotiana tabacum L.), lun ỏn phú tin s sinh hc, Vin Cụng ngh Sinh hc, H Ni, 107 trang 10 Chu Hong Mu (2001), S dng phng phỏp t bin thc nghim to cỏc dũng u tng v u xanh t bin t bin thớch hp cho vựng nỳi ụng bc Vit Nam Lun ỏn tin s Sinh hc Viờn Cụng ngh Sinh hc, H Ni 11 Nguyn Th Phng Nam v cng s (2007), Xõy dng h thng tỏi sinh in vitro cõy ngụ v ng dng nghiờn cu chuyn gen to protein giu st nh vi khun Agrobacterium tumefaciens, Nhng c bn khoa hc s sng, NXB Khoa hc v k thut, 887 -89 12 inh Th Phũng (2001), Nghiờn cu kh nng chu hn v chn dũng chu hn lỳa bng cụng ngh t bo thc vt, Lun ỏn Tin s Sinh hc, Vin Cụng ngh Sinh hc, H Ni 13 Nguyn Th Thanh v Vừ Phan MiSa (2007), Nghiờn cu xõy dng h thng tỏi sinh in vitro v ng dng chuyn gen h tiờu; Nhng nghiờn cu c bn khoa hc s sng, NXB Khoa hc v k thut, 820 824 14 Nguyn Th Tõm (2004), Nghiờn cu kh nng chu núng v chn dũng chu núng lỳa bng cụng ngh t bo thc vt, Lun ỏn tin s sinh hc, H Ni 15 Phan Hu Tụn (2004), Giỏo trỡnh Cụng ngh sinh hc chn to ging cõy trng, Nxb Nụng nghip, H Ni 16 Mai Trng, Nguyn Hu H, Lờ Tn c, Nguyn Vn Uyn (2001), H thng tỏi sinh cõy u xanh t cung t ip nuụi cy in vitro Tp sinh hc, 23: 33-35 51 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 65 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 66 of 166 17 Nguyn Hi Tut, Ngụ Kim Khụi (1996), X lý thng kờ kt qu nghiờn cu thc nghim nụng lõm ng nghip trờn mỏy vi tớnh, Nxb Nụng Nghip, H Ni Ti liu ting anh 18 Abdul B., Frinch R P., Cocking E C (1999), Plant regeneration from protoplast of wild rice (Oryza rufipogon Griff), Plant cell Rep, 10, pp 200 203 19 Adkins S M., Shiraishi T., Kunavuvatchaidach R.,Godwin I D (1995), Somaclonal variation in rice drought tolerance and other agronomic characters, Aust J Bot, 4, pp 201 209 20 Amutha S., Muruganantham M., and Ganapathi A (2006), Thidiazuroninduced high-frequency axillary and adventitious shoot regeneration in Vigna radiata (L.) Wilczek In Vitro Cell Dev Biol.-Plant, 42:2630 21 Bajai S., Rajam H (1996), Spermidine for effcient regeneration, Rice Bio Quar, 26, pp 22.Bertin P., Kinet J M Bouharmont J (1995), Heritable chilling tolerance improvement in rice through somaclonal variation and cell line selection, Aust J Bot, 44, pp 91 105 23 Bertin P., Kinet J M Bouharmont J (1997), Somaclonal variation and improvement of chilling tolerance in rice: Chance in chilling induce chlorophyll fluorescence, Crop Sci, 37, pp 1727 1735 24 Biwas G C., Zapata F J.(1993), High frequence plant regeneratin from protoplast of indica rice (Oryza sativa L.) using mantose, J plant Physiol, 141, pp 475 25 Chandler S F.,Vasil I K.(1984), Selection and characteerrizationlof 52 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 66 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 67 of 166 NaCl tolerance cell from embryogenesis cultures of Pennisetum purpureum Schum, Plant Sci Lett, 37, pp 157- 164 26 Collin H A., Dix P.J (1990), Culture systems and selection procedure In: Plant cell line selection VCH Verlagsgesellschaft 27 Dix P.J (1986), Plant cell culture technology, Yeoman M.M (eds), Oxford, Blackwel Scientific Publication, pp 143 201 28 Dix P.J.(1990), Plant cell line selection (Procedures and Applications), VCH Verlagsgllchaft MBH 29 Gulati A and Jaiwal P.K (1993) In vitro selection of salt-resistant Vigna radiata (L.) Wilczek plants by adventitious shoot formation from cultured cotyledon explants J Plant Physiol 142: 9910 30 Gulati A, Jaiwal PK (1994), Plant regeneration from cotyledonary node explants of mungbean (Vigna radiata (L.) Wilczek) Plant Cell Rep 13:523527 31 Ignacimuthu S & Franklin G (1999), Regeneration of plantlets from cotyledon and embryonal axis explants of Vigna mungo L Hepper, Plant Cell, Tissue and Organ Culture 55: 7578 32 Jayanti Sen & Spra Guha Mukherjee (1998), In vitro intoduction of multiple shoots and plant regeneration in Vigna, In vitro Cell.Dev Biol plant, 34: 276 280 33 K Ramakrishnan ã R Gnanam ã P Sivakumar A Manickam, In vitro somatic embryogenesis from cell suspension cultures of cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp), Plant Cell Rep (2005) 24: 449461 34 Kaviraj C.P., G Kiran, R.B Venugopan, P.B.Kavi Kishor, Srinath Rao (2006), Somatic embryogenesis and plant regeneration from cotyredorary 53 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 67 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 68 of 166 explants of green gram (Vigna radiata (L.) Wilczek)- A recalcitrant grain legume In vitro Cell.Der Biol plant 42: 134 138 35 Mundy J., Chua N H (1988), Abcisis and water stress induce the expression of a novel rice gene, EMBOJ, 8, pp 2279 2286 36.Muruganantham M., Amutha S.,Selvaraj N., Vengadesan G., Ganapathi A (2007), Efficient Agrobacterium- ediated transformation of Vigna mungo using immature cotyledonary-node explants and phosphinothricin as the selection agent In Vitro Cell.Dev.Biol.-Plant, 43:550557 37 Norbor M W (1990), Environmental stress resistance In: Plant Cell Line Selection, Weihein, New York, Basel, Cambridge, VCH, pp 167 186 38 Prem R anand, Ganapathi A., Ramesh V Anbazhagan, Gengadesan G., and Selvaraj N (2001), High frequency plant regeneration via somatic embryogenesis in cell suspension cultures of cowpea, vigna unguiculata (L.) walp In Vitro Cell Dev Biol-Plant, 36:475-480 39 Poddar K., Vishnoi R K., Kothari S L (1998), Plant regeneration from embryogenesis callus, Rice Bio quar, 35, pp 40 Raghava R N V., Nabors M V., (1985), Plant negeneration from tissue cultures of Pokali rice is promoted by optizing callus to medium volume ratio and by a medium conditioning factor produced by embryogeneic callus, Cell Tiss Org Cult, 4, pp 241 248 41 Rudrabhatla Sairam, Siva Chennareddy, Madasamy Parani, Shulu Zhang, Diaa Al-abed, Wissam Abou-Alaiw, and Stephen Goldman (2005), Obpc symposium: Maize 2004 & beyond plant regeneration, gene discovery, and genetic engineering of plants for crop improvement In Vitro Cell Dev Biol.-Plant, 41:411423 42 Renato A Avenido & Kazumi Hattori (1999), Differences in shoot 54 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 68 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 69 of 166 regeneration response from cotyledonary node explants in Asiatic Vigna species support genomic grouping within subgenus Ceratotropis (Piper) Verdc. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 58: 99110 43 Renato A Avenido, Jo Motoda and Kazumi Hattori (2001), Direct shoot regeneration from cotyledonary nodes as a marker for genomic groupings within the Asiatic Vigna (subgenus Ceratotropis {Piper} Verdc.) species Plant Growth Regulation, 35: 5967 44 Sita L Mahala, T Leela, B Kiran Kumar, B Naresh, Prathibha Devi (2006), In vitro plant regeneration from the petioles of primary leaves of mungbean (Vigna radiata L.) Plant Biotechnology, 23: 409411 45 Sonia, Raman Saini, Rana P Singh, Pawan K Jaiwal (2007), Agrobacterium tumefaciens mediated transfer of Phaseolusvulgaris amylase inhibitor-1 gene into mungbean (Vigna radiata (L.)Wilczek) using bar as selectable marker Plant Cell Rep 26:187198 55 S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn Footer Page 69 of 166 http://www.lrc-tnu.edu.vn ... ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THỊ LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN VÀ CHUYỂN GEN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN – 2009 Footer... LUYỆN PHÁT TRIỂN HỆ THỐNG TÁI SINH Ở CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHỤC VỤ CHỌN DÒNG CHỊU HẠN VÀ CHUYỂN GEN Chuyên ngành: Di truyền học Mã số : 60.42.70 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH. .. (2007) [44] Những lý sở để xây dựng đề tài cho luận văn thạc sĩ là: Phát triển hệ thống tái sinh đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) phục vụ chọn dòng chịu hạn chuyển gen MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU