Bài báo này công bố kết quả chọn dòng chịu hạn và môi trường thích hợp cho tạo mô sẹo, tái sinh chồi, hình thành rễ, tạo cây hoàn chỉnh của 8 giống đậu xanh nghiên cứu. Tám giống đậu xanh này đều có khả năng chịu hạn ở mức độ mô sẹo và có biểu hiện khác nhau giữa các giống. Môi trường thích hợp cho tạo mô sẹo của phôi đậu xanh là môi trường MS có bổ sung 2,4D với nồng độ 10 mg/l (đối với các giống VN93-1; VN99-3; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A) còn giống đậu xanh ĐX06 thích hợp với nồng độ là 11 mg/l. Môi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ 3 mg/l là tốt nhất cho sự tạo chồi, môi trường MS bổ sung GA3 với nồng độ 1,5 mg/l là tốt nhất cho kéo dài chồi ở đậu xanh của 8 giống đậu xanh nghiên cứu. Môi trường thích hợp cho tạo rễ và cây hoàn chỉnh là môi trường MS có bổ sung α-NAA với nồng độ 0,3 mg/l. Kết quả thí nghiệm xử lý mô sẹo bằng thổi khô đã thu được 289 dòng mô chịu mất nước và 715 dòng cây xanh của 8 giống đậu xanh nghiên cứu.
TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(1): 107-113 KHẢ NĂNG CHỊU MẤT NƯỚC VÀ TÁI SINH CỦA MÔ SẸO Ở CÂY ĐẬU XANH - Vigna radiata (L.) Wilczek Nguyễn Vũ Thanh Thanh*, Chu Hồng Mậu Đại học Thái Ngun, (*)thanhthanhdhkhtn@gmail.com TĨM TẮT: Bài báo cơng bố kết chọn dòng chịu hạn mơi trường thích hợp cho tạo mơ sẹo, tái sinh chồi, hình thành rễ, tạo hồn chỉnh giống đậu xanh nghiên cứu Tám giống đậu xanh có khả chịu hạn mức độ mơ sẹo có biểu khác giống Mơi trường thích hợp cho tạo mơ sẹo phơi đậu xanh mơi trường MS có bổ sung 2,4D với nồng độ 10 mg/l (đối với giống VN93-1; VN99-3; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A) giống đậu xanh ĐX06 thích hợp với nồng độ 11 mg/l Mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ mg/l tốt cho tạo chồi, môi trường MS bổ sung GA3 với nồng độ 1,5 mg/l tốt cho kéo dài chồi đậu xanh giống đậu xanh nghiên cứu Môi trường thích hợp cho tạo rễ hồn chỉnh mơi trường MS có bổ sung α-NAA với nồng độ 0,3 mg/l Kết thí nghiệm xử lý mơ sẹo thổi khơ thu 289 dòng mơ chịu nước 715 dòng xanh giống đậu xanh nghiên cứu Từ khóa: Chồi, đậu xanh, mô sẹo, rễ, tái sinh MỞ ĐẦU Cây đậu xanh - Vigna radiata (L.) Wilczek trồng quan trọng, vừa mặt hàng nơng sản xuất có giá trị, vừa nguồn thức ăn cho người vật nuôi Không thế, trồng đậu xanh có tác dụng chống xói mòn cải tạo đất Ở Việt Nam, nhiều nguyên nhân khác nên từ trước tới nay, đậu xanh trồng chưa nhiều, chủ yếu xen canh, luân canh tăng vụ Chương trình chọn tạo giống đậu xanh nước ta hướng tới mục tiêu tạo giống đậu xanh có suất cao, sinh trưởng mạnh, thời gian sinh trưởng ngắn, có khả chống chịu tốt Một kỹ thuật quan tâm ứng dụng vào chọn giống đậu xanh sử dụng công nghệ tế bào thực vật xây dựng hệ thống tái sinh phục vụ chuyển gen nhằm cải tiến, nâng cao khả chống chịu đậu xanh Việc nghiên cứu chuyển gen đậu xanh khó thực thành công không tiến hành việc tái sinh đậu xanh Năm 2005, Rudrabhatla et al [3] tổng hợp kết nghiên cứu phát triển kỹ thuật tái sinh mầm hai mầm, tái sinh thực nuôi cấy in vitro từ phôi soma từ phận khác độc lập thể điều phụ thuộc vào gen giống Kaviraj et al (2006) [2] sử dụng 2,4D để tạo mô sẹo từ sơ cấp đậu xanh kết sử dụng 2,4D với nồng độ 10 mg/l tỷ lệ tạo mô sẹo 100% Ngồi sử dụng 2,4D bổ sung vào mơi trường tạo mơ sẹo, tác giả sử dụng αNAA kết hợp với kinetin, BAP để tái sinh tạo hoàn chỉnh đậu xanh [2] Ignacimuthu et al (1999) [1] sử dụng BAP α-NAA để tạo chồi từ cuống tử điệp đậu xanh sau 15 ngày nuôi cấy Khả tái sinh chịu ảnh hưởng lớn thành phần nồng độ chất kích thích sinh trưởng thực vật bổ sung vào môi trường nuôi cấy Cho đến nay, kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng rộng rãi lĩnh vực chọn dòng tế bào, đặc biệt chọn dòng chống chịu stress mơi trường Bằng phương pháp thổi khô mô sẹo lúa, Đinh Thị Phòng nnk (2001) [1] chọn tạo giống lúa DR1, DR2, DR3 cho suất cao, ổn định, có khả chịu hạn, chịu lạnh hẳn giống gốc Trong báo này, chúng tơi trình bày kết tái sinh đậu xanh từ mô sẹo khả chịu nước dòng đậu xanh chọn lọc nhằm xác định môi trường tái sinh đậu xanh từ mô sẹo tuyển chọn dòng đậu xanh chịu hạn có nguồn gốc từ mô sẹo chịu nước PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu thực vật Tám giống đậu xanh Bộ môn Hệ thống canh tác Viện Nghiên cứu ngô cung cấp sử dụng làm vật liệu nghiên cứu là: VN931; VN99-1; VC1973A; VC3902A; VC6148; 107 Nguyen Vu Thanh Thanh, Chu Hoang Mau VC6372; VC2768A ĐX06 Phương pháp Khử trùng hạt Hạt đậu xanh rửa nước máy, sau rửa xà phòng, tráng lại nhiều lần nước cất sau khử trùng điều kiện vô trùng cồn 70% thời gian phút, tráng lại nước cất khử trùng đến lần, thêm dung dịch javen 60%, lắc 20-25 phút, sau rửa nước cất khử trùng lần Tạo mô sẹo Hạt đậu xanh khử trùng tách bỏ lớp vỏ phần nội nhũ, thu phôi đặt lên môi trường MS có bổ sung 2,4D nồng độ từ 3-13 mg/l, saccharose 3%, agar 0,9%, pH 5,8 Nuôi tuần tối ngày ánh sáng đèn phòng ni cấy với cường độ 2000 lux, thời gian chiếu sáng 10/24 giờ, nhiệt độ 25oC ± 1oC Đánh giá tỷ lệ tạo mô sẹo theo công thức: Ci N cp Nt (%) Trong đó, Ncp số hạt tạo mơ sẹo; Nt tổng số hạt nuôi cấy; Ci tỷ lệ tạo mô sẹo (%) Đánh giá tốc độ phát triển mô sẹo giống thông qua số tăng trưởng khối mô sẹo thu sau 10 ngày nuôi cấy Tái sinh Mô sẹo phôi thu từ môi trường tốt cấy chuyển sang môi trường tái sinh MS bản, bổ sung BAP (1,5 mg/l; 2,0 mg/l; 2,5 mg/l; mg/l; 3,5 mg/l) Mỗi cơng thức thí nghiệm tiến hành 30 mô, lặp lại lần Kết đánh giá sau 10 đến 15 ngày cấy chuyển Đánh giá tỉ lệ tái sinh theo công thức: Rc N r (%) Trong đó, R khả tái c N sv sinh (%); Nr tổng số mô tái sinh cây; Nsv tổng số mô nuôi cấy Kéo dài chồi đậu xanh Môi trường kéo dài chồi môi trường MS bổ sung GA3 với nồng độ (0,5 mg/l; mg/l; 1,5 mg/l; mg/l); pH 5,7 Đánh giá khả kéo dài chồi sau 10 ngày cấy 108 chuyển Mỗi cơng thức thí nghiệm tiến hành 30 chồi lặp lại lần Tạo hoàn chỉnh Môi trường rễ môi trường MS bổ sung α-NAA (0,2 mg/l; 0,3 mg/l; 0,4 mg/l); pH 5,6 Mỗi bình cấy từ 2-3 chồi Đánh giá khả hình thành phát triển rễ tái sinh sau tuần tuần Phương pháp xử lý mô sẹo thổi khô Mô sẹo phôi đậu xanh sau 10 ngày nuôi cấy thổi khô luồng khí vơ trùng buồng cấy ngưỡng thời gian khác nhau, từ 3, 5, 7, Xác định độ nước mô sẹo sau 3, 5, 7, xử lý Độ nước mô sẹo phôi đậu xanh sau xử lý thổi khơ tính theo cơng thức: WL W f Wd (%) Trong đó, WL độ Wf nước (%); Wf khối lượng mô tươi (mg); Wd khối lượng mô sau thổi khô (mg) Chọn lọc mơ sẹo sống sót sau xử lý thổi khô tái sinh Cấy mô sẹo sau xử lý nước thổi khô lên mơi trường tái sinh Tỷ lệ sống sót mô sẹo đánh giá 15 ngày thổi khô tính theo cơng thức: S v N sv (%) Trong Nt đó, Sv tỷ lệ mơ sống sót (%); Nsv số mơ sống sót; Nt tổng số mô xử lý Tỷ lệ tái sinh cây: Rc N r (%) Trong đó, N sv Rc khả tái sinh (%); Nr số mô tái sinh cây; Nsv số mơ sống sót Tạo hồn chỉnh từ mơ sẹo chọn lọc Các chồi đậu xanh tách thành dòng cấy chuyển mơi trường tạo hồn chỉnh Ni tuần ánh sáng đèn neon phòng ni cấy với cường độ 2000 lux, thời gian chiếu sáng 10/24 giờ, nhiệt độ phòng ni 25oC ± 1oC Mơi trường tạo hoàn chỉnh: MS bổ sung α-NAA: 0,3 mg/l; pH 5,6 Phương pháp xử lý kết tính tốn số liệu TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(1): 107-113 Mỗi thí nghiệm nhắc lại lần Các số liệu xử lý máy vi tính phần mềm Excel KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Ảnh hưởng nồng độ 2,4D đến khả tạo mô sẹo từ phôi đậu xanh Phôi đậu xanh sau khử trùng cấy lên môi trường MS bổ sung 2,4D với nồng độ khác Theo dõi khả hình thành mơ sẹo sau 10 ngày ni cấy, thu kết bảng Các kết thí nghiệm bảng bảng lại xử lý thống kê theo tiêu chuẩn phi tham số Kruskal Wallis cho thấy χ tn2 > χ 02, 05 nên mẫu nghiên cứu thực khác có ý nghĩa Kết bảng cho thấy, loại môi trường có bổ sung 2,4D với nồng độ khác giống đậu xanh khác nhau, phơi đậu xanh có khả tạo mô sẹo sau 10 ngày nuôi cấy Môi trường bổ sung 2,4D với nồng độ 11 mg/l thích hợp cho khả tạo mơ sẹo phôi giống đậu xanh ĐX06, tỉ lệ mô sẹo đạt cao 100% Với nồng độ cao 11 mg/l khả tạo mô sẹo phôi đậu xanh bắt đầu giảm Qua thực nghiệm nhận thấy, mơ có màu vàng trắng, mơ sẹo cứng khơ có khả tái sinh cao so với mơ có màu nâu đen, mơ sẹo mọng nước Khả tạo mô sẹo phụ thuộc vào kiểu gen giống Kết nghiên cứu phù hợp với kết nhận Kaviraj et al (2006) [2] Bảng Khả tạo mô sẹo giống đậu xanh (%) Nồng độ 2,4D (mg/l) 10 11 12 13 VN 93-1 VN 99-3 VC 1973A ĐX 06 VC 3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 85,17 86,09 86,34 89,21 92,72 95,23 96,37 99,14 94,14 94,04 82,03 86,50 86,29 87,30 87,20 91,02 91,20 93,07 98,10 97,23 92,05 80,80 80,15 83,25 86,32 86,30 87,15 93,10 97,05 99,20 96,23 84,10 79,50 81,05 81,15 86,35 87,50 89,55 94,10 95,05 97,50 100,0 84,10 79,50 87,15 86,90 87,30 87,90 90,20 91,90 94,07 98,50 96,03 92,15 82,50 82,05 83,50 87,10 87,50 88,55 94,20 94,50 97,10 96,00 84,10 79,30 87,05 86,90 87,10 87,60 90,25 91,05 92,10 99,50 96,03 90,15 83,50 81,15 81,25 85,35 84,50 89,55 90,10 92,05 95,50 92,00 85,10 83,50 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh từ mô sẹo phôi đậu xanh Mô sẹo thu giống đậu xanh chia thành khối mơ nhỏ có kích thước khoảng × mm, cấy mơi trường MS có chứa BAP với nồng độ khác (2 mg/l; mg/l; mg/l) Kết thể bảng Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP tới khả tái sinh từ mô sẹo phôi đậu xanh cho thấy, tỉ lệ tái sinh thấp mơi trường có nồng độ BAP mg/l (60% - 66%) cao nồng độ BAP mg/l (77,3% 98,6%) Bổ sung nồng độ BAP cao (4 mg/l) không làm tăng tỷ lệ tái sinh đậu xanh mà giảm tỷ lệ tái sinh (60,5% - 64,0%) Tỷ lệ tái sinh cao giống VN93-1 (98,6% sau 10 ngày, 99,0% sau 15 ngày), giống VC6148 có tỷ lệ tái sinh thấp (75,8% sau 10 ngày, 77% sau 15 ngày) Sự khác cho thấy, điều kiện môi trường nuôi cấy giống khác (kiểu di truyền khác nhau) khả tái sinh khác Từ kết nghiên cứu nhận thấy nồng độ BAP mg/l tốt cho tái sinh giống đậu xanh nghiên cứu Ảnh hưởng GA3 đến khả kéo dài chồi đậu xanh Khi chồi đạt chiều cao 2-2,5 cm cấy chuyển sang môi trường kéo dài chồi có bổ sung GA3 với nồng độ (mg/l): 0,5; 1; 1,5 109 Nguyen Vu Thanh Thanh, Chu Hoang Mau Bảng Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh từ mô sẹo phôi đậu xanh (%) ĐX VC 06 3902A Sau 10 ngày C1 VN 93-1 VN 99-3 VC 1973A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 60,2 2,5 61,0 3,5 66,0 2,5 63,0 4,0 60,0 1,5 63,0 5,0 65,0 1,5 60,0 4,1 98,6 1,2 88,0 2,1 77,3 1,1 87,0 2,4 77,5 2,5 75,8 1,5 82,7 2,5 86,8 2,5 63,3 1,5 64,0 2,0 62,0 3,5 63,0 1,5 61,5 1,5 60,5 4,5 61,5 4,0 63,1 2,5 Sau 15 ngày 65,2 1,5 66,0 3,0 67,0 2,1 63,5 3,5 62,0 1,0 66,0 1,0 67,0 1,8 66,0 3,8 99,0 1,0 90,0 1,9 78,0 1,2 88,0 1,8 78,5 1,5 77,0 1,5 84,7 2,5 87,0 2,5 65,5 2,5 66,0 2,8 63,0 2,5 64,0 1,5 65,0 1,5 63,0 2,5 63,5 3,0 64,1 1,5 C1 Nồng độ BAP (mg/l) Hình Hình ảnh tái sinh đậu xanh mơi trường bổ sung mg/l BAP giống VN93-1 Hình Hình ảnh kéo dài chồi đậu xanh mơi trường bổ sung GA3 Kết cho thấy, sau 10 ngày cấy chuyển sang mơi trường kéo dài chồi có bổ sung GA3 với nồng độ khác làm cho chồi đậu xanh dài Nhưng môi trường bổ sung GA3 với nồng độ 1,5 mg/l làm cho chồi đậu xanh kéo dài mập nhất, nồng độ GA3 mg/l chồi kéo dài nhanh yếu sau thời gian bị héo Hiện nay, chưa thấy nghiên cứu nói mơi trường kéo dài chồi đậu xanh có sử dụng GA3, vậy, từ kết thu cho nồng độ GA3 1,5 mg/l tốt cho kéo dài chồi đậu xanh Khả rễ tạo hoàn chỉnh Để tạo rễ tái sinh chuẩn bị cho việc đưa đồng ruộng, nghiên cứu môi trường rễ đậu xanh nuôi cấy môi trường MS bổ sung α-NAA với nồng độ khác Theo dõi khả tạo rễ tái sinh sau tuần tuần cấy chuyển, thu kết sau: α-NAA có nồng độ 0,3 mg/l mơi trường thích hợp cho rễ đậu xanh, môi trường tỷ lệ tạo rễ cao (trên 90%) chiều dài rễ cao (bảng 3) 110 Từ kết thu cho thấy, việc sử dụng BAP để tạo rễ đậu xanh [6] sử dụng IAA kết hợp với α-NAA [1], sử dụng α-NAA bổ sung vào mơi trường tạo rễ, kết tạo rễ có tỷ lệ cao (trên 90%) Mức độ nước khả chịu nước mô sẹo tác động thổi khô Mức độ nước mô sẹo phôi đậu xanh tác động thổi khô Để xác định ngưỡng chịu hạn mô sẹo, chọn kỹ thuật thổi khô để xử lý mô sẹo Trong thí nghiệm này, thổi khơ luồng khí vô trùng ngưỡng thời gian 3, 5, 7, ngày Kết thể bảng TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(1): 107-113 Bảng Ảnh hưởng α-NAA tới khả rễ tái sinh từ mô sẹo phôi đậu xanh C2 VN 93-1 VC 99-3 VC 1973A 0,2 0,3 0,4 75,67 4,5 98,6 1,4 72,3 2,7 71,0 3,0 97,0 1,1 64,0 4,0 68,7 4,3 97,0 1,4 64,0 2,5 ĐX VC 06 3902A Sau tuần 68,7 4,3 97,0 1,4 64,0 2,5 60,5 4,5 97,5 2,5 61,0 1,5 VC 6148 VC 6372 VC 2768A 63,0 4,0 97,5 1,5 60,5 2,5 66,5 3,5 94,7 2,5 61,5 4,5 65,0 2,5 96,8 2,0 63,1 5,0 69,0 1,0 98,0 1,5 63,0 2,5 70,0 1,5 94,7 2,5 63,5 3,0 76,0 3,8 97,0 2,5 64,5 1,5 Sau tuần 0,2 0,3 0,4 85,5 1,5 99,0 1,0 65,5 2,5 76,0 3,0 98,0 1,9 66,0 2,0 68,7 4,3 97,0 1,4 64,0 2,5 73,5 3,5 98,0 1,8 64,0 1,5 68,0 1,0 98,5 1,5 65,0 1,5 C2 Nồng độ α-NAA; tỷ lệ rễ đậu xanh = số chồi rễ/tổng sô chồi cấy chuyển (%) Bảng Độ nước mô sẹo phôi đậu xanh sau xử lý thổi khô (% khối lượng tươi) Thời gian thổi khô (giờ) VN 93-1 VN 99-3 VC 1973A ĐX 06 VC 3902A VC 6148 VC 6372 VC 2768A 48,84 65,22 85,75 87,79 50,00 65,86 82,38 89,67 70,60 79,05 81,44 83,19 62,15 73,92 82,53 85,99 50,28 69,86 85,38 86,67 64,18 73,92 82,53 85,99 60,22 72,28 76,29 81,68 57,29 69,26 84,26 85,65 Độ nước mô tăng theo thời gian thổi khô tất giống Sau đến thổi khô, mức độ nước giống VC1973A cao (70,60-79,05% khối lượng tươi), sau giống VC6148 (64,18-73,92% khối lượng tươi), giống VN93-1 có mức độ nước thấp (48,84%-65,22% khối lượng tươi) Ở ngưỡng thổi khô giờ, độ nước mô tăng dần Mức độ nước giống có khác chút Kết phù hợp với nhận xét tác giả chọn dòng tế bào chịu thổi khô lúa [5] Khả chịu nước mô sẹo phôi đậu xanh sau xử lý thổi khơ Bảng Tỷ lệ sống sót (%) mô sẹo phôi đậu xanh sau thổi khô tuần nuôi phục hồi Thời gian thổi khô (giờ) VN 93-1 100,0 100,0 96,43 88,00 Tỷ lệ sống sót mơ sẹo phơi đậu xanh sau thổi khô tuần VN VC ĐX VC VC VC 99-3 1973A 06 3902A 6148 6372 96,29 85,00 95,00 96,00 92,00 92,40 88,00 75.00 91,00 92,00 68,00 85,83 80,00 42,86 64,38 65,38 44,82 76,43 44,00 23,80 50,00 51,00 34,61 66,35 Tỷ lệ sống sót mơ sẹo phơi đậu xanh đánh giá sau nuôi phục hồi tuần Quan sát khả phục hồi mô sẹo phôi đậu xanh sau xử lí thổi khơ cấy lên môi trường tái sinh nhận thấy, sau 2-3 ngày mơ sẹo sống sót hút nước sinh trưởng bình thường Tỷ lệ sống sót mơ sẹo tỷ lệ nghịch với thời gian xử lí (bảng 5) VC 2768A 95,38 90,20 72,18 55,78 Sau 3, 5, 7, thổi khô, tỷ lệ mô sẹo phơi đậu xanh sống sót giống VN93-1 đạt lớn cuối giống VC1973A có tỷ lệ mơ sẹo sống sót thấp nhất, sau thổi khơ 23,80% Như vậy, mức độ nước khả chịu nước mơ sẹo có khác rõ rệt giống nghiên cứu 111 Nguyen Vu Thanh Thanh, Chu Hoang Mau Khả tái sinh từ mô sẹo phơi đậu xanh sống sót sau xử lý thổi khơ Ở ngưỡng xử lí thổi khơ giờ, giống đậu xanh có khả tái sinh cao thời gian xử lí lâu tỷ lệ tái sinh giảm Giống có tỷ lệ tái sinh cao giống VN931, giống VC1973A có tỷ lệ tái sinh thấp ngưỡng thời gian xử lý (bảng 6) Bảng Khả tái sinh từ mơ sẹo phơi đậu xanh sống sót sau xử lý thổi khô Thời gian thổi khô (giờ) VN 93-1 96,4 87,2 80,6 20,0 Tỷ lệ tái sinh mô sẹo phôi đậu xanh sau thổi khô (%) VN VC ĐX VC VC VC 99-3 1973A 06 3902A 6148 6372 88,1 85,5 87,8 89,8 95,0 85,6 84,7 66,9 84,4 82,0 83,0 67,7 79,6 50,1 79,0 74,7 76,0 52,2 15,7 10,5 17,3 20,2 16,3 10,7 Từ kết thí nghiệm xử lý mô sẹo thổi khô, thu 289 dòng mơ chịu nước giống đậu xanh 715 dòng xanh Đây nguồn vật liệu phong phú cho chọn dòng chịu hạn đậu xanh tái sinh từ mô sẹo chịu nước KẾT LUẬN Mơi trường thích hợp cho tạo mơ sẹo phơi đậu xanh mơi trường MS có bổ sung 10 mg/l 2,4D giống VN93-1; VN993; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A Còn giống đậu xanh ĐX06 thích hợp với mơi trường có nồng độ 11 mg/l 2,4D Tỷ lệ tái sinh, số chồi trung bình kích thước chồi cao (77,3-98,6%) mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ mg/l Mơi trường thích hợp cho tạo hồn chỉnh mơi trường MS có bổ sung 0,3 mg/l α-NAA Cả giống đậu xanh nghiên cứu có khả chịu hạn mức độ mơ sẹo có biểu khác giống Đã thu 289 dòng mơ chịu nước 715 dòng xanh giống đậu xanh nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Ignacimuthu S and Franklin G., 1999 Regeneration of plantlets from cotyledon and embryonal axis explants of Vigna mungo L Hepper Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 55: 75-78 112 VC 2768A 89,5 70,6 50,7 12,8 Kaviraj C P., Kiran G., Venugopan R B., Kavi Kishor P B., Srinath R., 2006 Somatic embryogenesis and plant regeneration from cotyledorary explants of green gram (Vigna radiata (L.) Wilczek) A recalcitrant grain legume In vitro Cell Der Biol Plant, 42: 134-138 Rudrabhatla S., Siva C., Madasamy P., Shulu Z., Diaa A., Wissam A A and Stephen G., 2005 Obpc symposium: Maize 2004 & beyond-plant regeneration, gene discovery, and genetic engineering of plants for crop improvement In Vitro Cell Dev Biol Plant, 41: 411-423 Đinh Thị Phòng, 2001 Nghiên cứu khả chịu hạn chọn dòng chịu hạn lúa công nghệ tế bào thực vật Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Hà Nội, 137 trang Nguyễn Thị Tâm, 2004 Nghiên cứu khả chịu nóng chọn dòng chịu nóng lúa công nghệ tế bào thực vật Luận án Tiến sĩ Sinh học, Hà Nội, 129 trang Mai Trường, Nguyễn Hữu Hổ, Lê Tấn Đức, Nguyễn Văn Uyển, 2001 Nghiên cứu hệ thống tái sinh chuyển gien đậu xanh (Vigna radiata L.) Phần I: Hệ thống tái sinh đậu xanh từ cuống tử diệp ni cấy invitro Tạp chí Sinh học, 23(1): 33-35 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(1): 107-113 REGENERATION OF Vigna radiata (L.) Wilczek VIA CALLUS AND ABILITY FOR WATER STRESS TOLERANCE OF CALLUS LINES Nguyen Vu Thanh Thanh, Chu Hoang Mau Thai Nguyen University SUMMARY In this paper, we present results on plant regeneration in mungbean and drought tolerance at cullus level of eight mungbean cultivars (VN93-1; VN99-3; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A, ĐX06) Vigna radiata (L.) Wilczek were regenerated via callus The calli were formed from embryos on cullus induction medium (MS+10 mg/l 2,4D for VN93-1; VN99-3; VC1973A; VC3902A; VC6148; VC6372; VC2768A or MS+11 mg/l 2,4D for ĐX06) The formed calli were transfered onto shoots regeneration medium MS medium added with mg/l BAP was most suitable for shoot regeneration Rate of shoot regeneration was from 77.3% to 98.6% The MS medium added with 0.3 mg/l α-NAA gave the highest rate of root and plant formation 289 dehydration-tolerent callus lines and 715 plant lines have been generated Keywords: Vigna radiata, callus, regeneration, roots, shoots Ngày nhận bài: 31-1-2012 113 ... thí nghiệm xử lý mô sẹo thổi khô, thu 289 dòng mơ chịu nước giống đậu xanh 715 dòng xanh Đây nguồn vật liệu phong phú cho chọn dòng chịu hạn đậu xanh tái sinh từ mô sẹo chịu nước KẾT LUẬN Mơi... mg/l khả tạo mô sẹo phôi đậu xanh bắt đầu giảm Qua thực nghiệm chúng tơi nhận thấy, mơ có màu vàng trắng, mơ sẹo cứng khơ có khả tái sinh cao so với mơ có màu nâu đen, mô sẹo mọng nước Khả tạo mô. .. vào môi trường tạo rễ, kết tạo rễ có tỷ lệ cao (trên 90%) Mức độ nước khả chịu nước mô sẹo tác động thổi khô Mức độ nước mô sẹo phôi đậu xanh tác động thổi khô Để xác định ngưỡng chịu hạn mô sẹo,