Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ đông lạnh tinh dịch chó berger bảo tồn ở 196 oc

VIỆN HÀN LÂM KH&CN VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT -*** - LUẬN VĂN CAO HỌC Mã số: 60420103 Đề tài: NGIÊN CỨU HỒN THIỆN CƠNG NGHỆ ĐƠNG LẠNH TINH DỊCH CHĨ BERGER BẢO TỒN Ở -1960C Học viên: Trần Xuân Khôi Lớp: CHST _ K15 Hƣớng dẫn: TS Đỗ Văn Thu Hà Nội, 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Lời cảm ơn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới người thầy TS Đỗ Văn Thu người hướng cho tơi ý tưởng khoa học, tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể phịng Sinh học tế bào sinh sản, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán công nhân viên Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó ngiệp vụ - Bộ Công an giúp đỡ q trình thực nghiên cứu Tơi xin cảm ơn tất thầy cô giáo Đại học Thái Nguyên Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam dạy dỗ, chia sẻ, động viên, giúp vượt qua khó khăn để hồn thành tốt khóa học nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin tỏ lịng biết ơn đến bố mẹ, gia đình, bè bạn, người ln bên tơi, động viên, góp ý tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Tác giả Trần Xuân Khôi Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Lời cam đoan Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu số kết cộng tác với đồng khác Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Tác giả Trần Xuân Khơi Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii MỞ ĐẦU Mục tiêu CHƢƠNG I TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU Tình hình nghiên cứu giới 1.1 Nghiên cứu sinh học tinh dịch môi trƣờng bảo tồn 1.2 Thụ tinh nhân tạo sử dụng tinh đông lạnh 10 Tình hình phát triển sử dụng chó Berger Việt Nam 11 CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP 13 Đối tƣợng nghiên cứu 13 Nội dung nghiên cứu 14 2.1 Đánh giá số tiêu sinh học tính chất lý hóa học tinh dịch chó Berger 14 2.2 Nghiên cứu hoàn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Berger ứng dụng sản xuất tinh chó đơng lạnh bảo tồn -196 C 14 2.2.1 Nghiên cứu môi trường 14 2.2.2 Nghiên cứu điều hòa cân nhiệt 14 2.3 Sản xuất tinh chó Berger đơng lạnh 15 2.3.1 Theo dõi chất lượng tinh chó Berger đơng lạnh trình bảo tồn -1960C 15 2.3.2 TTNT cho chó Berger để thử nghiệm tinh đông lạnh sản xuất 15 Phƣơng pháp nghiên cứu 15 3.1 Phƣơng pháp lấy tinh: 15 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu sinh học tinh dịch chó 16 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 3.2.1 Lượng tinh dịch (V) 16 3.2.2 Hoạt lực tinh trùng (A) 16 3.2.3 Nồng độ tinh trùng (C) 16 3.2.4 Tổng số tinh trùng tiến thẳng (V.A.C) 17 3.2.5 Tỷ lệ tinh trùng sống (LS) 18 3.2.6 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K) 18 3.3 Nghiên cứu môi trƣờng bảo tồn 19 3.3.1 Xác định pH 19 3.3.2 Áp lực thẩm thấu (posm) 19 3.3.3 Tỷ trọng (d) 19 3.3.4 Độ nhớt ( ) 19 3.3.5 Năng lực đệm ( ) 20 3.3.6 Môi trường đông lạnh tinh dịch chó -1960C 21 3.3.7 Đơng lạnh tinh dịch chó -1960C 21 3.3.8 Phương pháp TTNT chó Berger sử dụng tinh đơng lạnh 26 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀO THẢO LUẬN 29 Sinh học tinh dịch chó Berger 29 1.1 Một số đặc điểm sinh học tinh dịch chó berger 29 1.2 Tính chất lý hóa tinh dịch chó Berger 34 Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó ứng dụng sản xuất tinh chó Berger đơng lạnh bảo tồn -196 C 36 2.1 Tính chất hóa - lý số mơi trƣờng đông lạnh tinh dịch 36 2.2 Ảnh hƣởng glycerol dimethyl sulfoxide(DMSO) lên chất lƣợng tinh dịch chó Berger 36 2.3 Ảnh hƣởng nồng độ glycerol lên chất lƣợng tinh dịch 38 2.4 Ảnh hƣởng thời điểm bổ sung phần mơi trƣờng có glycerol lên chất lƣợng tinh đông lạnh 40 2.5 Ảnh hƣởng thời gian ủ tinh dịch trƣớc đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh 42 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 2.6 Ảnh hƣởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lƣợng tinh đông lạnh 44 2.7 Ảnh hƣởng tốc độ giải đông lên phẩm chất tinh đông lạnh 45 2.8 Kết sản xuất đông lạnh tinh dịch chó 47 2.8.1 Hoạt lực tinh trùng trình đông lạnh 47 2.8.2 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình q trình đơng lạnh 48 2.8.3 Tỷ lệ sống tinh trùng q trình đơng lạnh 49 2.9 Kết kiểm tra định kỳ chất lƣợng tinh chó đơng lạnh 50 2.9.1 Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng chó đơng lạn thời gian bảo tồn -1960C 50 2.9.2 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đơng lạnh thời gian bảo tồn 1960C 51 2.10 Đánh giá chất lƣợng tinh đông lạnh - giải đông ủ 370C 52 2.10.1.Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C 52 2.10.2.Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 53 2.10.3.Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 54 Kết thụ tinh nhân tạo cho chó Berger 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 Kết luận 58 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 Tài liệu nƣớc 59 Tài liệu nƣớc 59 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT : Năng lực đệm : Độ nhớt A: Hoạt lực tinh trùng C: Nồng độ tinh trùng CHDC: cộng hoà dân chủ D: Tỷ trọng DMSO: dimethyl sulfoxide K: Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình LS :Tỷ lệ tinh trùng sống OEP: Orvus ES Paste Posm: Áp lực thẩm thấu TTNT: Thụ tinh nhân tạo V: Lƣợng tinh dịch V.A.C: Tổng số tinh trùng tiến thẳng Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Một số tiêu sinh học tinh dịch chó Berger (n=40) 29 Bảng 2: Tính chất lý hóa tinh dịch chó Berger (n= 40) 34 Bảng Một số tính chất hố - lý môi trƣờng đông lạnh tinh dịch 36 Bảng So sánh ảnh hƣởng glycerol DMSO lên chất lƣợng tinh dịch 37 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ glycerol môi trƣờng lên chất lƣợng tinh đông lạnh 39 Bảng Ảnh hƣởng thời điểm bổ sung mơi trƣờng có glycerol lên chất lƣợng tinh chó đơng lạnh 41 Bảng Ảnh hƣởng thời gian ủ tinh dịch trƣớc đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh 43 Bảng Ảnh hƣởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lƣợng tinh đông lạnh 44 Bảng Ảnh hƣởng tốc độ giải đông (nhiệt độ thời gian) lên chất lƣợng tinh đông lạnh 45 Bảng 10 Hoạt lực tinh trùng q trình đơng lạnh 48 Bảng 11 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình q trình đơng lạnh 48 Bảng 12 Tỷ lệ sống tinh trùng q trình đơng lạnh 49 Bảng 13 Hoạt lực tinh trùng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn 1960C 50 Bảng 14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C 51 Bảng 15 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C 52 Bảng 16 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 53 Bảng 17 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 54 Bảng 18: Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Berger đơng lạnh 57 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC HÌNH Hình Chó Berger đực tham gia nghiên cứu 13 Hình Tinh trùng sống - chết 32 Hình Tinh trùng kỳ hình chó Berger 33 Hình Ảnh hƣởng chất bảo vệ lạnh lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 38 Hình Ảnh hƣởng nồng độ glycerol lên hoạt lực tinh trùng trƣớc sau đông lạnh 40 Hình Ảnh hƣởng thời điểm bổ sung mơi trƣờng có glycerol lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 42 Hình Ảnh hƣởng thời gian ủ tinh dịch trƣớc đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 44 Hình Ảnh hƣởng nhiệt độ đơng lạnh lên hoạt lực tinh trùng 45 Hình Chó Berger mang thai nhờ TTNT 56 Hình 10 Chó sinh nhờ TTNT 56 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỞ ĐẦU Từ xa xƣa chó ln lồi gần gũi gắn bó với ngƣời tất loài động vật Nhờ đặc điểm bật lồi vật khác, chó đƣợc sử dụng nhiều lĩnh vực phục vụ ngƣời Ngày nay, số giống chó đƣợc huấn luyện, biệt hóa trở thành chó nghiệp vụ phục vụ cho cơng tác an ninh, quốc phịng Trong đó, chó Berger bật lịng dũng cảm, trí thơng minh, trung thành tuyệt đối khả học tập tiếp thu cao Chó Berger thuộc nhóm chó chăn gia súc, ban đầu đƣợc gây giống để chăn cừu Do có sức lực, thơng minh có khả tn thủ mệnh lệnh huấn luyện, chúng thƣờng đƣợc dùng lực lƣợng cảnh sát quân Vì chúng trung thành có bảo vệ chủ, Chó Berger lồi chó đƣợc u thích tồn giới Giống chó Berger Việt Nam lai hỗn hợp từ chó Berger Trung Quốc (đƣợc nhập từ năm 1960), Berger Liên Xô CHDC Đức (nhập từ năm 1970, 1980) Đây hai giống chó chủ lực, đƣợc huấn luyện trang bị cho đơn vị, quản lý sử dụng chó nghiệp vụ công an tỉnh, thành phố sở giam giữ thuộc ngành Công an đồn biên phòng, cửa lực lƣợng Bộ đội biên phịng Ngồi ra, cịn có thêm giống chó Berger Bỉ chủng đƣợc nhập nuôi dƣỡng Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ (C69) – Bộ Cơng an Đàn chó Berger nƣớc ta có hàng nghìn đƣợc ni Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ - Bộ Cơng an, trƣờng D24 Bộ đội biên phòng, nhiều khu vực nhân dân Tại C69, ni dƣỡng huấn luyện đàn chó Berger tƣơng đối nhƣng số lƣợng không nhiều Trong khu vực nhân dân, chúng phổ biến đƣợc dùng việc bảo vệ, trông nhà làm kinh tế Tuy nhiên, chúng bị lai tạp nhiều không đƣợc chọn lọc việc nhân giống tự phát Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hoạt lực tinh trùng tƣơng ứng với thời gian bảo tồn Mẫu tinh đông lạnh Sau đông lạnh Sau 01 tháng Sau 03 tháng Sau 06 tháng MENDY 40.84% 40.50% 40.00% 40.00% MATRIX 38,75% 38.00% 38.00% 38.00% MARCO 41.62% 40.25% 40.00% 40.00% Trung bình 40.40% 39.58% 39.33% 39.33% Với kết kiểm tra hoạt lực tinh trùng sau giải đông cho thấy tinh đơng lạnh có chất lƣợng ổn định q trình bảo tồn -1960C 2.9.2 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đơng lạnh thời gian bảo tồn -1960C Chúng tiến hành giải đông tinh cọng rạ đông lạnh thời điểm: sau đông lạnh, sau 01, 03, 06 tháng, kết đƣợc trình bày chi tiết bảng 14 Số liệu thu đƣợc cho thấy, khơng có khác đáng kể tỷ lệ tinh trùng kỳ hình giống chó thời điểm giải đơng khác Cụ thể, chó MENDY, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trung bình đƣợc giải đơng sau đông lạnh 24,15% Sau 03 tháng bảo quản, tỷ lệ 24,52%, sau tháng 24,74% Sự khác khơng có ý nghĩa thống kê Tƣơng tự chó cịn lại MATRIX MARCO, khác không đáng kể Bảng số liệu cho thấy, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình khác chó nghiên cứu khơng có ý nghĩa thống kê Bảng 14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đơng lạnh thời gian bảo tồn -1960C Mẫu đông lạnh tinh Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đơng lạnh - giải đông tƣơng ứng với thời gian bảo tồn Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Sau đơng lạnh Sau 01 tháng Sau 03 tháng Sau 06 tháng MENDY 24,15 24,25 24,52 24,74 MATRIX 25,46 25,58 25,75 25,80 MARCO 23,35 23,68 23,86 23,93 Trung bình 24,32 24,50 24,71 24.82 Các nghiên cứu rằng, chất lƣợng tinh trùng bị ảnh hƣởng lớn yếu tố thời gian khai thác, chất lƣợng giống mơi trƣờng bảo quản Mơi trƣờng bảo quản có vai trị quan trọng việc trì chất lƣợng tinh dịch thời gian bảo tồn, đảm bảo khả thụ tinh tinh trùng sau giải đông Ở nghiên cứu này, tiến hành giải đông tinh đông lạnh nhiều thời điểm khác nhau, kết cho thấy tỷ lệ tinh trùng kỳ hình khác không đáng kể tinh dịch đƣợc giải đông thời điểm sau đông lạnh sau 06 tháng bảo quản Điều cho phép kết luận, môi trƣờng bảo quản sử dụng phù hợp cho việc đông lạnh bảo quản tinh dịch chó Berger nitơ lỏng -1960C 2.10 Đánh giá chất lƣợng tinh đông lạnh - giải đông ủ 370C Sau đông lạnh tinh dịch, tiến hành giải đông thử nghiệm số tinh cọng rạ nhằm nghiên cứu, đánh giá chất lƣợng tinh dịch sau giải đông Tinh đông lạnh đƣợc giải đông với nƣớc ấm 370C phút, sau tinh dịch giải đông đƣợc ủ 370C Các thông số đánh giá bao gồm hoạt lực tiến thẳng, tỷ lệ tinh trùng sống tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải đông 2.10.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C Bảng 15 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C Mẫu tinh đông lạnh Hoạt lực (%) tinh trùng sau đông lạnh - giải đơng ủ 370C Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ phút 30 phút 60 phút 90 phút MENDY 40,22 ± 4,27 37,25 ± 3,68 31,79 ± 3,05 27,47 ± 3,47 MATRIX 38,06 ± 4,17 36,22 ± 2,74 29,83 ± 3,14 18,73 ± 3,50 MARCO 40,73 ± 3,74 37,73 ± 3,52 31,93 ± 3,15 28,41 ± 3,63 Trung bình 39,93 ± 3,85 36,57 ± 4,15 29,80 ± 3,74 22,71 ± 4,58 Để đánh giá khả hoạt động tinh trùng sau giải đông phục vụ cho thụ tinh nhân tạo, đánh giá hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông ủ 370C thời điểm ủ tinh dịch sau giải đông (0 phút, 30 phút, 60 phút, 90 phút Kết hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông ủ 370C thời điểm kiểm tra đƣợc thể bảng 15 Kết cho thấy tinh dịch giải đơng có hoạt lực tiến thẳng tinh trùng giảm nhanh thời gian ủ 370C Tại thời điểm sau giải đông, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng đạt trung bình 39,93% Sau 30 phút ủ tinh dịch 300C, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng giảm xuống đạt trung bình 36.57% Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông giảm nhiều sau thời gian ủ 60 phút (29,80%) Sau 90 phút ủ tinh dịch sau giải đông, Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng đạt bình quân 22,71% Với kết nhận đƣợc thấy tinh đơng lạnh sau giải đơng nên nhanh chóng dẫn tinh cho chó Khơng sử dụng tinh dịch sau giải đông ủ 370C sau 60 phút 2.10.2 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Bảng 16 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Tỷ lệ sống tinh trùng (%) sau đông lạnh giải đông ủ 370C Mẫu tinh đông lạnh MENDY phút 30 phút 60 phút 90 phút 70,45 ± 4,36 65,72 ± 3,21 56,35± 3,62 46,50 ± 3,15 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MATRIX 68,73± 3,75 61,38 ± 3,26 54,73 ± 4,20 46,44 ± 3,78 MARCO 69,75 ± 3,62 63,81 ± 3,82 55,64 ±3,93 46,72 ± 4,12 Trung bình 69,48 ± 3,52 63,38 ± 4,61 55,40 ± 3,831 46,43 ± 3,82 Từ bảng số liệu cho thấy tỷ lệ tinh trùng sống tinh đông lạnh giải đơng chịu ảnh hƣởng có ý nghĩa thời gian ủ tinh dịch 370C Tỷ lệ sống tinh trùng giảm dần theo thời gian ủ tinh dịch Tỷ lệ sống trung bình 69,48%, 63,38%, 55,40%, 46,43%, tƣơng ứng với thời gian ủ tinh dịch 0, 30, 60, 90 phút Tinh đông lạnh hạn chế trao đổi chất tinh trùng, trì đƣợc lực dự trữ tinh trùng Sau giải đông tinh dịch đƣợc ủ 370C, điều kiện nhịêt độ lý tƣởng giúp tinh trùng vận động mạnh, làm tiêu tốn phần lớn lƣợng dự trữ, nguyên nhân làm tinh trùng chết nhanh thời gian ủ Kết nhận đƣợc khuyến cáo sau giải đông tinh đông lạnh cần nhanh dẫn tinh cho chó để đạt đƣợc tỷ lệ thụ tinh cao 2.10.3 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Tinh đông lạnh giải đông ủ 370C đánh giá tỷ lệ kỳ hình tinh trùng qúa trình ủ thời điểm phút (ngay sau giải đông), 30, 60, 90 phút, kết nhận đƣợc cho thấy: thời gian ủ tinh dịch sau giải đơng ảnh hƣởng khơng có ý nghĩa lên tỷ lệ kỳ hình tinh trùng Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng trung bình 23,76%, 25,54%, 25,92%, 26,14% tƣơng ứng với thời gian ủ 0, 30, 60, 90 phút Bảng 17 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng (%) sau giải đơng ủ 370C Mẫu tinh đông lạnh phút MENDY 24,36 ± 2,83 Số hóa Trung tâm Học liệu 30 phút 60 phút 25,71 ± 1,75 26,12 ± 2,85 90 phút 26,35 ± 2,42 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MATRIX 25,35 ± 2,35 25,72 ± 1,52 25,89 ± 2,69 26,07 ± 2,26 MARCO 23,13 ± 2,43 25,36 ± 1,71 25,75 ± 2,18 26,05 ± 3,71 Trung bình 23,76 ± 1,17 25,54 ±2,95 25,92 ± 2,82 26,14 ± 2,17 Nhƣ vậy, tỷ lệ kỳ hình tinh trùng ngồi thể chịu ảnh hƣởng chủ yếu thay đổi nhiệt độ trình đơng lạnh giải đơng tinh đơng lạnh, điều cho thấy mơi trƣờng đơng lạnh tinh dịch có tính chất lý, hố học phù hợp để trì ổn định cấu trúc tinh trùng Kết thụ tinh nhân tạo cho chó Berger Chúng tơi tiến hành sử dụng tinh đông lạnh dạng cọng rạ chó MENDY, MATRIX, MARCO bảo tồn nitơ lỏng -1960C để thụ tinh nhân tạo cho 10 chó giống Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ (C69) - Bộ Cơng an Tỉ lệ mang thai đạt 60%, số non sinh 41 tỉ lệ đực/cái 21/20 Số lƣợng chó trung bình 6,8 con/lứa Các tinh cọng rạ sử dụng cho thụ tinh có chất lƣợng đồng đều, hoạt lực tinh trùng sau giải đông đạt 38 - 40% Sử dụng cọng rạ tích 0,25 ml, phối cọng rạ/một lần ( tƣơng đƣơng 50 x106 tinh trùng) phối lần Khoảng cách thời gian lần phối 24 - 48 Trong nghiên cứu này, sử dụng hầu hết tinh cọng rạ có thời gian bảo tồn từ 25 ngày đến 245 ngày, kết thụ thai đạt đƣợc 60% Kết cho thấy tinh trùng chó Berger đƣợc bảo quản dạng đơng lạnh nitơ lỏng có chất lƣợng cao ổn định theo thời gian Kết nghiên cứu có ý nghĩa lớn, thành công nghiên cứu công nghệ đông lạnh tinh chó Berger giúp cho việc bảo tồn nguồn gen q chó có chất lƣợng Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hình Chó Berger mang thai nhờ TTNT Hình 10 Chó sinh nhờ TTNT Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Bảng 18: Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Berger đơng lạnh Tên đực giống Ngày sản xuất tinh Hoạt lực tinh Liều phối trùng sau (Cọng rạ giải đơng 0,25 ml) Chó Ngày phối Ngày phối giống giống lần giống lần Số Ngày đẻ Đực Cái MENDY 22.01.2013 40 02 MONA 17.02 2013 19.02 2013 22.04.2013 MENDY 22.01.2013 40 02 MURRY 04.03 2013 06.03 2013 05.05.2013 MENDY 28.01.2013 40 02 MONIKA 10.04 2013 12.04 2013 Không chửa MENDY 28.01.2013 40 02 MARSHA 11.05.2013 13.05.2013 12.07.2013 MATRIX 22.01.2013 38 02 MELISA 08.06.2013 10.06.2013 Không chứa MATRIX 22.01.2013 38 02 MEENA 24.06.2013 26.06.2013 Không chửa MATRIX 28.01.2013 39 02 MORRIS 07.07 2013 09.07 2013 10.09.2013 3 MARCO 22.01.2013 40 02 MONY 14.07 2013 16.07 2013 Không chửa MARCO 28.01.2013 40 02 Mic 15.07.2013 17.07.2013 18.09.2013 MARCO 28.01.2013 40 02 Jech 28.09.2013 30.09.2013 29.11.2013 Tổng số: 41 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đánh giá đƣợc số tiêu sinh học tính chất lý hóa học tinh dịch chó Berger Lƣợng tinh dịch chó 1,86 ml, hoạt lực tinh trùng tiến thẳng 72,50%, nồng độ tinh trùng 250 triệu/ml, tỷ lệ tinh trùng sống 82,70%, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 18,70%, pH 6,64, Áp lực thẩm thấu 344,12 miliosmol/kg, lực đệm 1329,98, Tỷ trọng 1,03, độ nhớt 3,12 từ xây dựng mơi trƣờng đơng lạnh tinh dịch chó Berger - Xây dựng đƣợc cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Berger Bổ sung chất bảo vệ lạnh glyceron 6,5-7% vào môi trƣờng đông lạnh, thời gian ủ tinh dịch khoảng 6-8 giờ, nhiệt độ đông lạnh trƣớc đƣa tinh vào nitơ lỏng -1650C - Đã sản xuất bảo tồn đƣợc 200 liều tinh chó Berger đơng lạnh cọng rạ (hoạt lực tinh trùng sau đơng lạnh 38 - 40%) Tinh chó đơng lạnh có chất lƣợng ổn định thời gian bảo tồn nitơ lỏng -1960C - Thụ tinh nhân tạo cho chó Berger sử dụng tinh đơng lạnh bảo tồn - 1960C Tỷ lệ thụ thai đạt 60%, số chó sinh 41 , số trung bình 6,8 con/ổ, Tỷ lệ đực 21/20 Kiến nghị - Cho áp dụng công nghệ đơng lạnh tinh dịch TTNT chó Berger vào thực tiễn sản xuất - Do thời gian có hạn nên tơi kiến nghị đƣợc tiếp tục nghiên cứu để hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Berger số giống chó có chất lƣợng khác Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc Đỗ Văn Thu (2001), Nghiên cứu sinh học tinh dịch công nghệ bảo quản tinh dịch Dê nhằm góp phần phát triển đàn dê nuôi Việt Nam, Luận án TS Sinh học, Viện Công nghệ sinh học Đỗ Văn Thu (2010), Ứng dụng công nghệ bảo tồn tinh dịch thụ tinh nhân tạo chó để nhân giống bảo tồn số giống chó nghiệp vụ ngành Cơng an, Báo cáo tổng kết đề tài cấp Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Tài liệu nƣớc ngồi A.Lopez – saez; L.Ortiz; L.Gallego; J.J.Garde (2000), "Liquid store (5oC) of Ram semen in diffierent diluents", Achives of Androcogy 44: 155 – 156 Andersen Insermination with frozen dog semen based on a new insermination technique Zuchthygien 1975;10:1-4 Cardoso Rde C, Silva AR, Uchoa DC, da Silva LD 2003 Cryopreservation of canine semen using a coconut water extender with egg yolk and three different glycerol concentrations Theriogenology 59(3-4):743-51 Chemineau and Caynie Y.1991, Training manual on artificial insemination in sheepand goats.FAO Animal production and Health 83 - Rome 1991 Farstad W, Berg KA 1989 Factors influencing the success rate of artificial insemination with frozen semen in the dog J Reprod Fertil Suppl 39:289-92 Farstad W 2000 Assisted reproductive technology in canid species Theriogenology 53(1):175-86 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hermansson U, Linde-Forsberg C 2006 Freezing of stored, chilled dog spermatozoa Theriogenology 65: 584-593 10 Linde-Forsberg C, Forsberg M 1993 Results of 527 controlled artificial inseminations in dogs J Reprod Fertil Suppl 47:313-23 11 Linde-Forsberg C, Strom Holst B, Govette G 1999 Comparison of fertility data from vaginal vs intrauterine insemination of frozen-thawed dog semen: a retrospective study Theriogenology 52(1):11-23 12 Linde-Forsberg C 1991 Achieving canine pregnancy by using frozen or chilled extended semen Vet Clin North Am Small Anim Pract 21(3): 467-85 13 Nizanski W, Dubiel A, Bielas W, Dejneka GJ 2001 Effects of three cryopreservation methods and two semen extenders on the quality of dog semen after thawing J Reprod Fertil Suppl 57:365-9 14 Pena A, Linde-Forsberg CB 2000 Effects of spermatozoal concentration and post-thaw dilution rate on survival after thawing of dog spermatozoa Theriogenology 54(5):703-18 15 Pinto CR, Paccamonti DL, Eilts BE 1999 Fertility in bitches artificially inseminated with extended, chilled semen Theriogenology 52(4):609-16 16 Platz CC, Seager SW 1977 Successful pregnancies with concentrated frozen canine semen Lab Anim Sci 27(6):1013-6 17 Rijsselaere T, Van Soom A, Maes D, de Kruif A 2002 Effect of centrifugation on in vivo survival of fresh diluted canine spermatozoa Theriogenology 57: 1669-1681 18 Rohloff D, Laiblin C, Heidrich S 1978 Cryoprotective ability of glycerin and DMSO in the deep freezing of dog sperm Berl Munch Tierarztl Wochenschr 91(2):31-3 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 19 Rota A, Frishling A, Vannozzi I, Camillo F, Romagnoli S 2001 Effect of the inclusion of skimmed milk in freezing extenders on the viability of canine spermatozoa after thawing J Reprod Fertil Suppl 57:377-81 20 Rota A, Strurm B, Linde-Forsberg C 1995 Effects of seminal plasma and three extenders on canine semen stored at 40C Theriogenology 44: 855-900 21 Salisbury G.W.W (1978), Physiology of reprodution and artificial insemination of cattle, Second Edition, Fracisco WW.H Framan and Company Samsuddin M, Y Amiri and M.M.U Bhuiyan 22 Seager SW, Platz CC 1977 Artificial insemination and frozen semen in the dog Vet Clin North Am 7(4):757-64 23 Silva AR, Cardoso R.C, Uchoa DC, Silva LD 2003 Quality of canine semen submitted to single or fractionated glycerol addition during the freezing process Theriogenology 59(3-4):821-9 24 Silva LD, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP 1996 Comparisons of intravaginal and intrauterine insemination of bitches with fresh or frozen semen Vet Rec 138(7):154-7 25 Sirivaidyapong S, Ursem P, Bevers MM, Colenbrander B 2001 Effect of prostatic fluid on motility, viability and acrosome integrity of chilled and frozen-thawed dog spermatozoa J Reprod Fertil Suppl 57:383-6 26 Thomassen R, Farstad W, Krogenaes A, Fougner JA, Berg KA 2001 Artificial insemination with frozen semen in dogs: a retrospective study J Reprod Fertil Suppl 57:341-6 27 Tsutsui T, Tezuka T, Mikasa Y, Sugisawa H, Kirihara N, Hori T, Kawakami E 2003 Artificial insemination with canine semen stored at a low temperature J Vet Med Sci 65(3):307-12 28 Yildiz C, Kaya A, Aksoy M, Tekeli T 2000 Influence of sugar Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ supplementation of the extender on motility, viability and acrosomal integrity of dog spermatozoa during freezing Theriogenology 54(4):579-85 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG Q TRÌNH NGHIÊN CỨU Chó Berger tham gia nghiên cứu Chuẩn bị môi trƣờng Khai thác tinh dịch Kiểm tra chất lƣợng tinh dịch Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Đông lạnh tinh dịch Giải đông kiểm tra chất lƣợng tinh dịch Thụ tinh nhân tạo cho chó Berger Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Chó mang thai nhờ TTNT Chó sinh nhờ TTNT Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ... hóa học tinh dịch chó Berger 14 2.2 Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Berger ứng dụng sản xuất tinh chó đơng lạnh bảo tồn -196 C 14 2.2.1 Nghiên cứu môi... học tinh dịch: áp lực thẩm thấu, lực đệm, độ nhớt, tỷ trọng, pH tinh dịch 2.2 Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Berger ứng dụng sản xuất tinh chó đông lạnh bảo tồn -196 C... học tinh dịch chó Berger 29 1.1 Một số đặc điểm sinh học tinh dịch chó berger 29 1.2 Tính chất lý hóa tinh dịch chó Berger 34 Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch