Luận án thạc sỹ sinh học: hoàn thiện công nghệ đông lạnh tinh dịch chó Berger bảo tồn ở 196 oC. Năm tốt nghiệp: 2013. Tác giả: Trần Xuân Khôi. Cơ sở đào tạo: Viện Sinh Thái và tài nguyên sinh vật Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
VIỆN HÀN LÂM KH&CN VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT -*** - LUẬN VĂN CAO HỌC Mã số: 60420103 Đề tài: NGIÊN CỨU HOÀN THIỆN CÔNG NGHỆ ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH CHÓ BERGER BẢO TỒN Ở -1960C Học viên: Trần Xuân Khôi Lớp: CHST _ K15 Hướng dẫn: TS Đỗ Văn Thu Hà Nội, 2013 ii Lời cảm ơn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người thầy TS Đỗ Văn Thu người hướng cho ý tưởng khoa học, tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể phòng Sinh học tế bào sinh sản, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho hoàn thành khóa học luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán công nhân viên Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó ngiệp vụ - Bộ Công an giúp đỡ trình thực nghiên cứu Tôi xin cảm ơn tất thầy cô giáo Đại học Thái Nguyên Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam dạy dỗ, chia sẻ, động viên, giúp vượt qua khó khăn để hoàn thành tốt khóa học nghiên cứu Cuối cùng, xin tỏ lòng biết ơn đến bố mẹ, gia đình, bè bạn, người bên tôi, động viên, góp ý tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Tác giả Trần Xuân Khôi i Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu số kết cộng tác với đồng khác Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Tác giả Trần Xuân Khôi ii MỤC LỤC Hình Chó Berger đực tham gia nghiên cứu 13 Bảng 1: Một số tiêu sinh học tinh dịch chó Berger (n=40) 29 Hình Tinh trùng sống - chết 32 Hình Tinh trùng kỳ hình chó Berger .33 Bảng 2: Tính chất lý hóa tinh dịch chó Berger (n= 40) .34 Bảng Một số tính chất hoá - lý môi trường đông lạnh tinh dịch 36 Bảng So sánh ảnh hưởng glycerol DMSO lên chất lượng tinh dịch 37 Hình Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh .38 Bảng Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên chất lượng tinh đông lạnh 39 Hình Ảnh hưởng nồng độ glycerol lên hoạt lực tinh trùng trước sau đông lạnh .39 Bảng Ảnh hưởng thời điểm bổ sung môi trường có glycerol lên chất lượng 41 tinh chó đông lạnh 41 Hình Ảnh hưởng thời điểm bổ sung môi trường có glycerol lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 41 Bảng Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh 43 Hình Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 43 Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh .43 Hình Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 45 Bảng Ảnh hưởng tốc độ giải đông (nhiệt độ thời gian) lên chất lượng 45 tinh đông lạnh .45 Bảng 10 Hoạt lực tinh trùng trình đông lạnh 47 Bảng 11 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trình đông lạnh 48 Bảng 12 Tỷ lệ sống tinh trùng trình đông lạnh 49 Bảng 13 Hoạt lực tinh trùng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C 50 Bảng 14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C 51 Bảng 15 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C 52 Bảng 16 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 52 Bảng 17 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C .53 Hình Chó Berger mang thai nhờ TTNT 55 Hình 10 Chó sinh nhờ TTNT 55 Bảng 18: Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Berger đông lạnh .56 iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT β: Năng lực đệm η: Độ nhớt A: Hoạt lực tinh trùng C: Nồng độ tinh trùng CHDC: cộng hoà dân chủ D: Tỷ trọng DMSO: dimethyl sulfoxide K: Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình LS :Tỷ lệ tinh trùng sống OEP: Orvus ES Paste Posm: Áp lực thẩm thấu TTNT: Thụ tinh nhân tạo V: Lượng tinh dịch V.A.C: Tổng số tinh trùng tiến thẳng iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Một số tiêu sinh học tinh dịch chó Berger (n=40) 29 Bảng 2: Tính chất lý hóa tinh dịch chó Berger (n= 40) .34 Bảng Một số tính chất hoá - lý môi trường đông lạnh tinh dịch 36 Bảng So sánh ảnh hưởng glycerol DMSO lên chất lượng tinh dịch 37 Bảng Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên chất lượng tinh đông lạnh 39 Bảng Ảnh hưởng thời điểm bổ sung môi trường có glycerol lên chất lượng 41 tinh chó đông lạnh 41 Bảng Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh 43 Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh .43 Bảng Ảnh hưởng tốc độ giải đông (nhiệt độ thời gian) lên chất lượng 45 tinh đông lạnh .45 Bảng 10 Hoạt lực tinh trùng trình đông lạnh 47 Bảng 11 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trình đông lạnh 48 Bảng 12 Tỷ lệ sống tinh trùng trình đông lạnh 49 Bảng 13 Hoạt lực tinh trùng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C 50 Bảng 14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C 51 Bảng 15 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C 52 Bảng 16 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 52 Bảng 17 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C .53 Bảng 18: Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Berger đông lạnh .56 v DANH MỤC HÌNH Hình Chó Berger đực tham gia nghiên cứu 13 Hình Tinh trùng sống - chết 32 Hình Tinh trùng kỳ hình chó Berger .33 Hình Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh .38 Hình Ảnh hưởng nồng độ glycerol lên hoạt lực tinh trùng trước sau đông lạnh .39 Hình Ảnh hưởng thời điểm bổ sung môi trường có glycerol lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 41 Hình Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 43 Hình Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 45 Hình Chó Berger mang thai nhờ TTNT 55 Hình 10 Chó sinh nhờ TTNT 55 vi MỞ ĐẦU Từ xa xưa chó loài gần gũi gắn bó với người tất loài động vật Nhờ đặc điểm bật loài vật khác, chó sử dụng nhiều lĩnh vực phục vụ người Ngày nay, số giống chó huấn luyện, biệt hóa trở thành chó nghiệp vụ phục vụ cho công tác an ninh, quốc phòng Trong đó, chó Berger bật lòng dũng cảm, trí thông minh, trung thành tuyệt đối khả học tập tiếp thu cao Chó Berger thuộc nhóm chó chăn gia súc, ban đầu gây giống để chăn cừu Do có sức lực, thông minh có khả tuân thủ mệnh lệnh huấn luyện, chúng thường dùng lực lượng cảnh sát quân Vì chúng trung thành có bảo vệ chủ, Chó Berger loài chó yêu thích toàn giới Giống chó Berger Việt Nam lai hỗn hợp từ chó Berger Trung Quốc (được nhập từ năm 1960), Berger Liên Xô CHDC Đức (nhập từ năm 1970, 1980) Đây hai giống chó chủ lực, huấn luyện trang bị cho đơn vị, quản lý sử dụng chó nghiệp vụ công an tỉnh, thành phố sở giam giữ thuộc ngành Công an đồn biên phòng, cửa lực lượng Bộ đội biên phòng Ngoài ra, có thêm giống chó Berger Bỉ chủng nhập nuôi dưỡng Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ (C69) – Bộ Công an Đàn chó Berger nước ta có hàng nghìn nuôi Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ - Bộ Công an, trường D24 Bộ đội biên phòng, nhiều khu vực nhân dân Tại C69, nuôi dưỡng huấn luyện đàn chó Berger tương đối số lượng không nhiều Trong khu vực nhân dân, chúng phổ biến dùng việc bảo vệ, trông nhà làm kinh tế Tuy nhiên, chúng bị lai tạp nhiều không chọn lọc việc nhân giống tự phát người dân Xét số lượng, đàn chó Berger nước ta có số lượng lớn, chưa có hệ thống nhân giống theo quy hoạch nên làm nhiều đặc điểm quý báu khả vốn có giống chó Mặt khác, việc nhập chó Berger chủng gặp nhiều khó khăn giá thành cao (10.000 – 15.000 USD/con) khả thích nghi chó với điều kiện khí hậu nước ta chưa cao Công nghệ đông lạnh tinh dịch chó phương pháp thụ tinh nhân tạo cho chó cho giải pháp hiệu với khó khăn công tác lưu giữ phát triển đàn chó chủng nhà khoa học thuộc Phòng Sinh học tế bào sinh sản, Viện Công nghệ sinh học tiến hành nghiên cứu từ năm 2005 Trải qua gần thập kỉ nghiên cứu phát triển, nhà khoa học cho kết nghiên cứu vô khả quan bước hoàn thiện kết nghiên cứu Tuy nhiên, kết nghiên cứu đông lạnh tinh dịch chó áp dụng cho tất giống chó nghiên cứu Do vậy, việc có nghiên cứu chuyên sâu để hoàn thiện công nghệ đông lạnh tinh dịch cho giống chó cần thiết để nâng cao hiệu việc lưu giữ bảo tồn tinh dịch chó Xuất phát từ nhu cầu thực tiễn đòi hỏi, tiếp nối từ nghiên cứu bậc tiền bối trước, tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ đông lạnh tinh dịch chó Berger bảo tồn -1960C ” Mục tiêu Hoàn thiện công nghệ đông lạnh tinh dịnh chó Berger để sản xuất bảo tồn tinh dịch chó Berger -196 0C phục vụ cho công tác an ninh, quốc phòng -1960C Chúng giải đông tinh thời điểm sau đông lạnh, 01, 03 06 tháng Kết đánh giá hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông ba giống chó thể bảng 13 Hoạt lực tinh trùng tiến thẳng sau giải đông giảm ý nghĩa thời gian bảo tồn Ở chó berger, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông tương đối ổn định tất thời điểm giải đông: sau đông lạnh, sau 1, 3, tháng bảo tồn Cụ thể hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh chó MENDY, MATRIX, MARCO 40.84%, 38.75% 41.62% Hoạt lực tinh trùng chó thời điểm tháng bảo tồn 40%, 38%, 40% thời điểm tháng bảo tồn 40%, 38%, 40% Bảng 13 Hoạt lực tinh trùng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C Mẫu tinh Hoạt lực tinh trùng tương ứng với thời gian bảo tồn Sau đông lạnh Sau 01 tháng Sau 03 tháng Sau 06 tháng MENDY 40.84% 40.50% 40.00% 40.00% MATRIX 38,75% 38.00% 38.00% 38.00% MARCO 41.62% 40.25% 40.00% 40.00% Trung bình 40.40% 39.58% 39.33% 39.33% Với kết kiểm tra hoạt lực tinh trùng sau giải đông cho thấy tinh đông lạnh có chất lượng ổn định trình bảo tồn -1960C 2.9.2 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C Chúng tiến hành giải đông tinh cọng rạ đông lạnh thời điểm: sau đông lạnh, sau 01, 03, 06 tháng, kết trình bày chi tiết bảng 14 Số liệu thu cho thấy, khác đáng kể tỷ lệ tinh trùng kỳ hình giống chó thời điểm giải đông khác 50 Cụ thể, chó MENDY, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trung bình giải đông sau đông lạnh 24,15% Sau 03 tháng bảo quản, tỷ lệ 24,52%, sau tháng 24,74% Sự khác ý nghĩa thống kê Tương tự chó lại MATRIX MARCO, khác không đáng kể Bảng số liệu cho thấy, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình khác chó nghiên cứu ý nghĩa thống kê Bảng 14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -1960C Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông tương ứng với tinh thời gian bảo tồn Mẫu đông lạnh Sau đông lạnh Sau 01 tháng Sau 03 tháng Sau 06 tháng MENDY 24,15 24,25 24,52 24,74 MATRIX 25,46 25,58 25,75 25,80 MARCO 23,35 23,68 23,86 23,93 Trung bình 24,32 24,50 24,71 24.82 Các nghiên cứu rằng, chất lượng tinh trùng bị ảnh hưởng lớn yếu tố thời gian khai thác, chất lượng giống môi trường bảo quản Môi trường bảo quản có vai trò quan trọng việc trì chất lượng tinh dịch thời gian bảo tồn, đảm bảo khả thụ tinh tinh trùng sau giải đông Ở nghiên cứu này, tiến hành giải đông tinh đông lạnh nhiều thời điểm khác nhau, kết cho thấy tỷ lệ tinh trùng kỳ hình khác không đáng kể tinh dịch giải đông thời điểm sau đông lạnh sau 06 tháng bảo quản Điều cho phép kết luận, môi trường bảo quản sử dụng phù hợp cho việc đông lạnh bảo quản tinh dịch chó Berger nitơ lỏng -1960C 2.10 Đánh giá chất lượng tinh đông lạnh - giải đông ủ 370C Sau đông lạnh tinh dịch, tiến hành giải đông thử nghiệm số tinh cọng rạ nhằm nghiên cứu, đánh giá chất lượng tinh dịch sau giải 51 đông Tinh đông lạnh giải đông với nước ấm 37 0C phút, sau tinh dịch giải đông ủ 370C Các thông số đánh giá bao gồm hoạt lực tiến thẳng, tỷ lệ tinh trùng sống tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải đông 2.10.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C Bảng 15 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông ủ 370C Mẫu tinh đông lạnh Hoạt lực (%) tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C phút 30 phút 60 phút 90 phút MENDY 40,22 ± 4,27 37,25 ± 3,68 31,79 ± 3,05 27,47 ± 3,47 MATRIX 38,06 ± 4,17 36,22 ± 2,74 29,83 ± 3,14 18,73 ± 3,50 MARCO 40,73 ± 3,74 37,73 ± 3,52 31,93 ± 3,15 28,41 ± 3,63 Trung bình 39,93 ± 3,85 36,57 ± 4,15 29,80 ± 3,74 22,71 ± 4,58 Để đánh giá khả hoạt động tinh trùng sau giải đông phục vụ cho thụ tinh nhân tạo, đánh giá hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông ủ 370C thời điểm ủ tinh dịch sau giải đông (0 phút, 30 phút, 60 phút, 90 phút Kết hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông ủ 370C thời điểm kiểm tra thể bảng 15 Kết cho thấy tinh dịch giải đông có hoạt lực tiến thẳng tinh trùng giảm nhanh thời gian ủ 370C Tại thời điểm sau giải đông, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng đạt trung bình 39,93% Sau 30 phút ủ tinh dịch 30 0C, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng giảm xuống đạt trung bình 36.57% Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau giải đông giảm nhiều sau thời gian ủ 60 phút (29,80%) Sau 90 phút ủ tinh dịch sau giải đông, Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng đạt bình quân 22,71% Với kết nhận thấy tinh đông lạnh sau giải đông nên nhanh chóng dẫn tinh cho chó Không sử dụng tinh dịch sau giải đông ủ 370C sau 60 phút 2.10.2 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Bảng 16 Tỷ lệ sống tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C 52 Mẫu tinh đông lạnh Tỷ lệ sống tinh trùng (%) sau đông lạnh giải đông ủ 370C phút 30 phút 60 phút 90 phút MENDY 70,45 ± 4,36 65,72 ± 3,21 56,35± 3,62 46,50 ± 3,15 MATRIX 68,73± 3,75 61,38 ± 3,26 54,73 ± 4,20 46,44 ± 3,78 MARCO 69,75 ± 3,62 63,81 ± 3,82 55,64 ±3,93 46,72 ± 4,12 Trung bình 69,48 ± 3,52 63,38 ± 4,61 55,40 ± 3,831 46,43 ± 3,82 Từ bảng số liệu cho thấy tỷ lệ tinh trùng sống tinh đông lạnh giải đông chịu ảnh hưởng có ý nghĩa thời gian ủ tinh dịch 37 0C Tỷ lệ sống tinh trùng giảm dần theo thời gian ủ tinh dịch Tỷ lệ sống trung bình 69,48%, 63,38%, 55,40%, 46,43%, tương ứng với thời gian ủ tinh dịch 0, 30, 60, 90 phút Tinh đông lạnh hạn chế trao đổi chất tinh trùng, trì lực dự trữ tinh trùng Sau giải đông tinh dịch ủ 370C, điều kiện nhịêt độ lý tưởng giúp tinh trùng vận động mạnh, làm tiêu tốn phần lớn lượng dự trữ, nguyên nhân làm tinh trùng chết nhanh thời gian ủ Kết nhận khuyến cáo sau giải đông tinh đông lạnh cần nhanh dẫn tinh cho chó để đạt tỷ lệ thụ tinh cao 2.10.3 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Tinh đông lạnh giải đông ủ 370C đánh giá tỷ lệ kỳ hình tinh trùng qúa trình ủ thời điểm phút (ngay sau giải đông), 30, 60, 90 phút, kết nhận cho thấy: thời gian ủ tinh dịch sau giải đông ảnh hưởng ý nghĩa lên tỷ lệ kỳ hình tinh trùng Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng trung bình 23,76%, 25,54%, 25,92%, 26,14% tương ứng với thời gian ủ 0, 30, 60, 90 phút Bảng 17 Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng sau đông lạnh - giải đông ủ 370C Mẫu tinh đông lạnh Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng (%) sau giải đông ủ 370C phút 30 phút 53 60 phút 90 phút MENDY 24,36 ± 2,83 25,71 ± 1,75 26,12 ± 2,85 26,35 ± 2,42 MATRIX 25,35 ± 2,35 25,72 ± 1,52 25,89 ± 2,69 26,07 ± 2,26 MARCO 23,13 ± 2,43 25,36 ± 1,71 25,75 ± 2,18 26,05 ± 3,71 Trung bình 23,76 ± 1,17 25,54 ±2,95 25,92 ± 2,82 26,14 ± 2,17 Như vậy, tỷ lệ kỳ hình tinh trùng thể chịu ảnh hưởng chủ yếu thay đổi nhiệt độ trình đông lạnh giải đông tinh đông lạnh, điều cho thấy môi trường đông lạnh tinh dịch có tính chất lý, hoá học phù hợp để trì ổn định cấu trúc tinh trùng Kết thụ tinh nhân tạo cho chó Berger Chúng tiến hành sử dụng tinh đông lạnh dạng cọng rạ chó MENDY, MATRIX, MARCO bảo tồn nitơ lỏng -196 0C để thụ tinh nhân tạo cho 10 chó giống Cục Quản lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ (C69) - Bộ Công an Tỉ lệ mang thai đạt 60%, số non sinh 41 tỉ lệ đực/cái 21/20 Số lượng chó trung bình 6,8 con/lứa Các tinh cọng rạ sử dụng cho thụ tinh có chất lượng đồng đều, hoạt lực tinh trùng sau giải đông đạt 38 - 40% Sử dụng cọng rạ tích 0,25 ml, phối cọng rạ/một lần ( tương đương 50 x106 tinh trùng) phối lần Khoảng cách thời gian lần phối 24 - 48 Trong nghiên cứu này, sử dụng hầu hết tinh cọng rạ có thời gian bảo tồn từ 25 ngày đến 245 ngày, kết thụ thai đạt 60% Kết cho thấy tinh trùng chó Berger bảo quản dạng đông lạnh nitơ lỏng có chất lượng cao ổn định theo thời gian Kết nghiên cứu có ý nghĩa lớn, thành công nghiên cứu công nghệ đông lạnh tinh chó Berger giúp cho việc bảo tồn nguồn gen quí chó có chất lượng 54 Hình Chó Berger mang thai nhờ TTNT Hình 10 Chó sinh nhờ TTNT 55 Bảng 18: Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Berger đông lạnh Tên đực giống Ngày sản xuất tinh Hoạt lực tinh Liều phối trùng sau (Cọng rạ giải đông 0,25 ml) Chó Ngày phối Ngày phối giống giống lần giống lần Ngày đẻ Số Đực Cái MENDY 22.01.2013 40 02 MONA 17.02 2013 19.02 2013 22.04.2013 MENDY 22.01.2013 40 02 MURRY 04.03 2013 06.03 2013 05.05.2013 MENDY 28.01.2013 40 02 MONIKA 10.04 2013 12.04 2013 Không chửa MENDY 28.01.2013 40 02 MARSHA 11.05.2013 13.05.2013 12.07.2013 MATRIX 22.01.2013 38 02 MELISA 08.06.2013 10.06.2013 Không chứa MATRIX 22.01.2013 38 02 MEENA 24.06.2013 26.06.2013 Không chửa MATRIX 28.01.2013 39 02 MORRIS 07.07 2013 09.07 2013 10.09.2013 3 MARCO 22.01.2013 40 02 14.07 2013 16.07 2013 Không chửa 28.01.2013 40 02 Mic 15.07.2013 17.07.2013 18.09.2013 28.01.2013 40 02 Jech 28.09.2013 30.09.2013 29.11.2013 MARCO MARCO MONY Tổng số: 41 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đánh giá số tiêu sinh học tính chất lý hóa học tinh dịch chó Berger Lượng tinh dịch chó 1,86 ml, hoạt lực tinh trùng tiến thẳng 72,50%, nồng độ tinh trùng 250 triệu/ml, tỷ lệ tinh trùng sống 82,70%, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 18,70%, pH 6,64, Áp lực thẩm thấu 344,12 miliosmol/kg, lực đệm 1329,98, Tỷ trọng 1,03, độ nhớt 3,12 từ xây dựng môi trường đông lạnh tinh dịch chó Berger - Xây dựng công nghệ đông lạnh tinh dịch chó Berger Bổ sung chất bảo vệ lạnh glyceron 6,5-7% vào môi trường đông lạnh, thời gian ủ tinh dịch khoảng 6-8 giờ, nhiệt độ đông lạnh trước đưa tinh vào nitơ lỏng -1650C - Đã sản xuất bảo tồn 200 liều tinh chó Berger đông lạnh cọng rạ (hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 38 - 40%) Tinh chó đông lạnh có chất lượng ổn định thời gian bảo tồn nitơ lỏng -1960C - Thụ tinh nhân tạo cho chó Berger sử dụng tinh đông lạnh bảo tồn -1960C Tỷ lệ thụ thai đạt 60%, số chó sinh 41 , số trung bình 6,8 con/ổ, Tỷ lệ đực 21/20 Kiến nghị - Cho áp dụng công nghệ đông lạnh tinh dịch TTNT chó Berger vào thực tiễn sản xuất - Do thời gian có hạn nên kiến nghị tiếp tục nghiên cứu để hoàn thiện công nghệ đông lạnh tinh dịch chó Berger số giống chó có chất lượng khác 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Đỗ Văn Thu (2001), Nghiên cứu sinh học tinh dịch công nghệ bảo quản tinh dịch Dê nhằm góp phần phát triển đàn dê nuôi Việt Nam, Luận án TS Sinh học, Viện Công nghệ sinh học Đỗ Văn Thu (2010), Ứng dụng công nghệ bảo tồn tinh dịch thụ tinh nhân tạo chó để nhân giống bảo tồn số giống chó nghiệp vụ ngành Công an, Báo cáo tổng kết đề tài cấp Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Tài liệu nước A.Lopez – saez; L.Ortiz; L.Gallego; J.J.Garde (2000), "Liquid store (5oC) of Ram semen in diffierent diluents", Achives of Androcogy 44: 155 – 156 Andersen Insermination with frozen dog semen based on a new insermination technique Zuchthygien 1975;10:1-4 Cardoso Rde C, Silva AR, Uchoa DC, da Silva LD 2003 Cryopreservation of canine semen using a coconut water extender with egg yolk and three different glycerol concentrations Theriogenology 59(3-4):743-51 Chemineau and Caynie Y.1991, Training manual on artificial insemination in sheepand goats.FAO Animal production and Health 83 - Rome 1991 Farstad W, Berg KA 1989 Factors influencing the success rate of artificial insemination with frozen semen in the dog J Reprod Fertil Suppl 39:289-92 Farstad W 2000 Assisted reproductive technology in canid species Theriogenology 53(1):175-86 58 Hermansson U, Linde-Forsberg C 2006 Freezing of stored, chilled dog spermatozoa Theriogenology 65: 584-593 10 Linde-Forsberg C, Forsberg M 1993 Results of 527 controlled artificial inseminations in dogs J Reprod Fertil Suppl 47:313-23 11 Linde-Forsberg C, Strom Holst B, Govette G 1999 Comparison of fertility data from vaginal vs intrauterine insemination of frozen-thawed dog semen: a retrospective study Theriogenology 52(1):11-23 12 Linde-Forsberg C 1991 Achieving canine pregnancy by using frozen or chilled extended semen Vet Clin North Am Small Anim Pract 21(3): 467-85 13 Nizanski W, Dubiel A, Bielas W, Dejneka GJ 2001 Effects of three cryopreservation methods and two semen extenders on the quality of dog semen after thawing J Reprod Fertil Suppl 57:365-9 14 Pena A, Linde-Forsberg CB 2000 Effects of spermatozoal concentration and post-thaw dilution rate on survival after thawing of dog spermatozoa Theriogenology 54(5):703-18 15 Pinto CR, Paccamonti DL, Eilts BE 1999 Fertility in bitches artificially inseminated with extended, chilled semen Theriogenology 52(4):609-16 16 Platz CC, Seager SW 1977 Successful pregnancies with concentrated frozen canine semen Lab Anim Sci 27(6):1013-6 17 Rijsselaere T, Van Soom A, Maes D, de Kruif A 2002 Effect of centrifugation on in vivo survival of fresh diluted canine spermatozoa Theriogenology 57: 1669-1681 18 Rohloff D, Laiblin C, Heidrich S 1978 Cryoprotective ability of glycerin and DMSO in the deep freezing of dog sperm Berl Munch Tierarztl Wochenschr 91(2):31-3 59 19 Rota A, Frishling A, Vannozzi I, Camillo F, Romagnoli S 2001 Effect of the inclusion of skimmed milk in freezing extenders on the viability of canine spermatozoa after thawing J Reprod Fertil Suppl 57:377-81 20 Rota A, Strurm B, Linde-Forsberg C 1995 Effects of seminal plasma and three extenders on canine semen stored at 0C Theriogenology 44: 855-900 21 Salisbury G.W.W (1978), Physiology of reprodution and artificial insemination of cattle, Second Edition, Fracisco WW.H Framan and Company Samsuddin M, Y Amiri and M.M.U Bhuiyan 22 Seager SW, Platz CC 1977 Artificial insemination and frozen semen in the dog Vet Clin North Am 7(4):757-64 23 Silva AR, Cardoso R.C, Uchoa DC, Silva LD 2003 Quality of canine semen submitted to single or fractionated glycerol addition during the freezing process Theriogenology 59(3-4):821-9 24 Silva LD, Onclin K, Lejeune B, Verstegen JP 1996 Comparisons of intravaginal and intrauterine insemination of bitches with fresh or frozen semen Vet Rec 138(7):154-7 25 Sirivaidyapong S, Ursem P, Bevers MM, Colenbrander B 2001 Effect of prostatic fluid on motility, viability and acrosome integrity of chilled and frozen-thawed dog spermatozoa J Reprod Fertil Suppl 57:383-6 26 Thomassen R, Farstad W, Krogenaes A, Fougner JA, Berg KA 2001 Artificial insemination with frozen semen in dogs: a retrospective study J Reprod Fertil Suppl 57:341-6 27 Tsutsui T, Tezuka T, Mikasa Y, Sugisawa H, Kirihara N, Hori T, Kawakami E 2003 Artificial insemination with canine semen stored at a low temperature J Vet Med Sci 65(3):307-12 28 Yildiz C, Kaya A, Aksoy M, Tekeli T 2000 Influence of sugar 60 supplementation of the extender on motility, viability and acrosomal integrity of dog spermatozoa during freezing Theriogenology 54(4):579-85 61 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU Chó Berger tham gia nghiên cứu Chuẩn bị môi trường Khai thác tinh dịch Kiểm tra chất lượng tinh dịch 62 Đông lạnh tinh dịch Giải đông kiểm tra chất lượng tinh dịch Thụ tinh nhân tạo cho chó Berger 63 Chó mang thai nhờ TTNT Chó sinh nhờ TTNT 64 ... lý, huấn luyện sử dụng chó nghiệp vụ (C69) – Bộ Công an + Thời gian: tháng 6/2012 – tháng 9/2013 Hình Chó Berger đực tham gia nghiên cứu 13 Nội dung nghiên cứu 2.1 Đánh giá số tiêu sinh học tính... vượt qua khó khăn để hoàn thành tốt khóa học nghiên cứu Cuối cùng, xin tỏ lòng biết ơn đến bố mẹ, gia đình, bè bạn, người bên tôi, động viên, góp ý tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập... công trình nghiên cứu số kết cộng tác với đồng khác Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Tác giả Trần Xuân Khôi ii MỤC LỤC Hình Chó Berger đực tham gia nghiên