xác định hàm lượng ursolic acid trong lá bần trắng (sonneratia alba)

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG URSOLIC ACID TRONG LÁ BẦN TRẮNG (SONNERATIA ALBA) Mã số: 26/2017/HĐ-NCKH Chủ nhiệm đề tài: TS NGUYỄN THỊ HOÀI THU Tp Hồ Chí Minh, 5/2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG URSOLIC ACID TRONG LÁ BẦN TRẮNG (SONNERATIA ALBA) Mã số: 26/2017/HĐ-NCKH Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) NGUYỄN THỊ HỒI THU Tp Hồ Chí Minh, 5/2018 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI Nguyễn Thị Hồi Thu Bộ mơn Hóa – Khoa Khoa học Nguyễn Trường Thiên Kim Bộ mơn Hóa hữu – ĐH KHTN TP HCM MỤC LỤC Trang DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ ĐỒ THỊ DANH MỤC HÌNH ẢNH THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 1 MỞ ĐẦU THỰC NGHIỆM 13 2.1 Điều chế loại cao từ Bần trắng 13 2.2 Cô lập hợp chất ursolic acid 14 2.3 Xây dựng quy trình định lượng ursolic acid 15 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Kết điều chế loại cao từ Bần trắng 18 3.2 Giải đoán cấu trúc ursolic acid 18 3.3 Phân tích định lượng ursolic acid từ 16 loại cao 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 Trang DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1: Kết kháng oxid hóa thuộc chi Sonneratia Bảng Kết kháng peroxid hóa lipid thuộc chi Sonneratia Bảng 3: Kết thử hoạt tính làm chậm q trình phát triển tế bào ung thư thuộc chi Sonneratia Bảng 4: Kết thử nghiệm hoạt tính kháng 15 chủng vi khuẩn cao trích Bần Chua 11 Bảng Khối lượng (g) loại cao phân đoạn mẫu khảo sát 18 Bảng Dữ liệu phổ NMR SA1 so sánh với tài liệu tham khảo 22 Bảng Số liệu đường chuẩn ursolic acid 23 Bảng Hàm lượng ursolic acid (mg/g) loại cao từ Bần trắng 25 Bảng Hàm lượng cao ursolic acid, số thuốc Trung Quốc 26 DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ ĐỒ THỊ Sơ đồ Quy trình điều chế loại cao từ Bần trắng 13 Đồ thị Đường chuẩn ursolic acid 23 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Cây, rễ, hoa, Bần trắng (Sonneratia alba) Hình Các hợp chất cô lập từ Bần trắng thu hái rừng ngập mặn Cần Giờ Hình Lá Bần trắng (Sonneratia alba) 13 Hình Cơng thức hóa học ursolic acid 15 Hình Sắc ký đồ cho mẫu chuẩn ursolic acid oleanolic acid nồng độ 10 25 µg/mL 16 Hình Phổ 1H-NMR hợp chất ursoic acid (SA1) 19 Hình Phổ 13C-NMR hợp chất ursoic acid (SA1) 20 Hình Phổ HR-ESI-MS hợp chất ursoic acid (SA1) 21 Hình sắc ký đồ định lượng ursolic acid mẫu cao nước-lá già-Bần trắng 24 THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Thông tin chung: - Tên đề tài: Xác định hàm lượng ursolic acid Bần trắng (Sonneratia alba) - Mã số:26/2017/HĐ-NCKH - Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Hoài Thu Điện thoại: 0904203342 Email: hoaithudhyd@gmail.com - Đơn vị quản lý chuyên môn: Khoa Khoa học bản, Bộ mơn Hóa - Thời gian thực hiện: 6/2017-5/2018 Mục tiêu: Xác định sơ hàm lượng ursolic acid từ Bần trắng phương pháp HPLC Nội dung chính:  Lá Bần trắng thu hái rừng ngập mặn Cần Giờ TPHCM, rửa sạch, phơi khơ, xay nhuyễn, sau trích với ethanol  Thực cô quay thu hồi dung môi thu cao ethanol thô  Từ cao ethanol thô, điều chế loại cao hexan, ethyl acetate cao nước phương pháp trích lỏng-lỏng với hexan ethyl acetate sau quay thu hồi dung mơi  Xây dựng quy trình định lượng ursolic acid Sau đó, tiến hành định lượng ursolic acid từ loại cao sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)  Đánh giá hàm lượng ursolic acid có Bần trắng Kết đạt (khoa học, đào tạo, kinh tế-xã hội, ứng dụng, ): Có kết hàm lượng ursolic acid có 16 loại cao từ già non Bần trắng thu hái hai mùa mưa nắng Hiệu kinh tế - xã hội đề tài mang lại: Kết hàm lượng ursolic acid cao có non Bần trắng Sonneratia alba thu hái vào mùa mưa (10.87 mg/g) Tuy nhiên, thay thu hoạch non ảnh hưởng đến phát triển bền vững cây, việc tận dụng nguồn sinh khối già thu hái vào mùa nắng mùa mưa với hàm lượng ursolic acid (~ 10 mg/g) nguồn tốt để ly trích lập ursolic acid Ursolic acid phân cực nên hexan dung mơi tốt để ly trích acid Đây nguồn nguyên liệu hoá học từ thiên nhiên cho công ty dược phẩm, mỹ phẩm, thực phẩm… , tiết kiệm chi phí khơng phải mua ursolic acid thương phẩm MỞ ĐẦU 1.1 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.1.1 Đặc điểm thực vật Chi Bần-Sonneratia, họ Bần (Sonneratiaceae) có khoảng 20 lồi [1] Cây gỗ cao 10-25m, khơng lơng, có rễ trườn, sinh nhánh khơng hướng đất hay rễ thở Lá mọc đối, nguyên, có cuống, dai, mọng nước, nhiều hay ít, khơng có kèm Cụm hoa gồm 1-3 hoa, khơng có bắc Đài thành ống hình nón - chng, thùy hình tam giác, xếp van, tồn đồng trưởng Cánh hoa dạng sợi, xen kẽ với đài, dễ rụng, có khơng có Nhị nhiều, gấp lại nụ, rời, thị ra; bao phấn hình dải, cong hình móng ngựa Bầu có 10-20 ơ; nỗn nhiều, hướng lên; vịi nhụy dài thẳng; đầu nhụy dạng đĩa Quả nang hình cầu dẹp nhiều hay ít, dính với đài hoa; hạt nhỏ, hình tam giác ngược; vỏ dày, phôi thẳng, nắm cuộn lại Các bần phân bố rừng ngập mặn Ấn Độ Dương Thái Bình Dương: bờ vịnh, vùng có sóng dữ, dịng sơng chịu ảnh hưởng nước mặn hay nước lợ, rạn đá san hô Ở nước ta, chi Sonneratia có lồi [2]: Bần trắng: Sonneratia alba J E Smith Bần ổi: Sonneratia ovata Bần chua: Sonneratia caseolaris (L.) Engl Bần vô cánh: Sonneratia apetala Buch.–Ham,in Sim Bần đắng Sonneratia griffithii Kurz Đặc điểm thực vật Bần trắng: Cây Bần trắng (Sonneratia alba) (hình 1), họ Bần (Sonneratiaceae), phân bố rừng ngập mặn Ấn Độ Dương Thái Bình Dương: bờ vịnh, vùng có sóng dữ, dịng sơng chịu ảnh hưởng nước mặn hay nước lợ, rạn đá san hô [2] Đại mộc to, cao đến 15 m, phế đứng, mảnh Lá có phiến xoan, đầu tròn, thường lõm, dài 8-12 cm, dày, dòn Hoa to, nỗn sào hình chén, đài 6-7, mặt đỏ, cánh hoa 6-7 hẹp chỉ, đo đỏ giống tiểu nhụy, tiểu nhụy nhiều, trắng, noãn sào 14-18 buồng Phí cao, rộng, n=11 Mọc rừng Sác, Vũng Tàu Chịu mặn bần [2] a (Cây) b (Rễ) c (Hoa) d (Quả) Hình 1, b, c, d: Bần trắng (Sonneratia alba J.E Smith) 1.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Hiện nay, giới số lượng nghiên cứu thành phần hóa Bần ít, hợp chất hóa học phân lập bao gồm dẫn xuất flavonoid, polyphenol, triterpene, sterol [3] Bần trắng – Sonneratia alba J E Smith Năm 2004, Kanchuree Chaiyadej cộng [4] cô lập từ cành bần trắng lupeol, acid oleanolic, acid betulinic, 2,6-dimetoxy-p-benzoquinon, hỗn hợp stigmasterol β-sitosterol Trong đó, acid oleanolic acid betulinic thể hoạt tính kháng nấm với MIC 25 50µg/ml, hợp chất 2,6-dimethoxy-pbenzoquinon thể hoạt tính kháng lại chủng P falciparum gây bệnh sốt rét với IC50 3.08 µg/ml Kjer Julia cộng [5] cô lập acid xannalteric I hay acid 10-oxo- 10H-phenaleno[1,2,3-de]chromen-2-carboxylic, acid xannalteric II hợp chất phenol từ loài nấm Alternaria sp sống bần trắng Tại Việt Nam, có nhóm nghiên cứu chúng tơi khảo sát thành phần hoá học bước đầu khảo sát hoạt tính sinh học phận già Bần trắng rừng ngập mặn Cần Giờ [6,7,8,9] Chúng cô lập nhiều hợp chất có khung sườn steroid, triterpenoid, flavonoid, lignan, megastigmane, phenolic, số glucoside gel pha thường (cột: 50 x cm), giải ly với hệ dung môi ether dầu hỏa – ethyl acetate (9:1, 0:1) thu phân đoạn (từ E2.1 đến E2.5) Thực phương pháp sắc ký cột silica gel pha thường, pha đảo, sắc ký điều chế phân đoạn E2.1 (12,9 g) thu hợp chất ursolic acid (SA1, 508,0 mg) 2.3 Xây dựng quy trình định lượng ursolic acid Chất chuẩn - Sử dụng chất chuẩn ursolic acid (Hình 4) Ursolic acid cô lập từ Bần trắng xác định cấu trúc hóa học dựa vào liệu phổ 1H 13 C-NMR so sánh với tài liệu tham khảo Hình Cơng thức hóa học ursolic acid Sắc ký lỏng sử dụng đầu dò UV-VIS Sắc ký lỏng ghép với đầu dò UV-VIS Kromasil-C18 (2.1 x 150 mm, 3.5 mm) với tốc độ dòng chảy 0,25 ml/phút Các mẫu chuẩn pha loãng với nồng độ 1, 5, 10, 25 50 µg / mL (Hình 5) Thể tích tiêm mẫu 20 µL Sử dụng bước sóng 210 nm nhiệt độ cột 20 0C Chương trình đẳng dịng với pha động hệ gồm 12% dung mơi A (đệm trietylamine/HCl pH = 3) 88% dung môi B (methanol) pha động phù hợp để tách ursolic acid oleanolic acid Tất dung môi mẫu lọc qua màng 0,45 micromet (Fisher Scientific) giai đoạn đầu khử khí trước tiêm vào HPLC Hình Sắc ký đồ cho mẫu chuẩn ursolic acid oleanolic acid nồng độ 10 25 µg/mL Xây dựng phương trình tuyến tính: Phương trình tuyến tính xây dựng dựa việc khảo sát mẫu khoảng nồng độ 1.0 - 50.0 μg/mL cho cho ursolic acid Phương trình đường chuẩn có dạng y = ax + b, y x diện tích peak nồng độ tương ứng Phương trình đường chuẩn ursolic acid tính tốn y = 37.27x + 8.988 với hệ số tương quan R2 = 0.999 Xử lý định lượng Hàm lượng ursolic acid loại cao tính sau: Dựa vào cơng thức (1) sau: X = C ∗V ∗ f ( ) m Với X: hàm lượng chất cần khảo sát có mẫu (µg/mg) Co: nồng độ chất có dung dịch mẫu tính từ đường chuẩn (µg/mg) V: thể tích định mức mẫu (mL) m: khối lượng mẫu phân tích (µg) F: hệ số pha lỗng (nếu có) Phần trăm ursolic acid khô: Phần trăm acid khơ tính theo phương trình sau: % DL = X∗m m ∗ 10 ∗ 100 ( ) Trong % DL = Phần trăm acid khô X = Hàm lượng acid mẫu (mg/g) mex = Khối lượng cao thô (g) mdl = Khối lượng khô (g) Phần trăm ursolic acid tươi: Phần trăm acid tươi tính theo phương trình sau % FL = DL ∗ 100 ( ) (100 − W) Trong % FL = Phần trăm ursolic acid tươi DL = Phần trăm ursolic acid khô W = Phần trăm độ ẩm KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết điều chế loại cao từ Bần trắng Để khảo sát hàm lượng ursolic acid, 16 loại cao (2 loại già – non x loại cao loại x mùa mưa-nắng) Bần trắng điều chế Kết trình bày Bảng Bảng Khối lượng (g) loại cao phân đoạn mẫu khảo sát Mùa mưa Loại cao Mùa nắng SOALM SOALY SOALM SOALY Cao thô ethanol 7.7210 6.5450 8.1790 7.8970 Cao n-Hexane 0.7666 0.8716 0.5173 0.8197 Cao Ethyl acetate 0.6779 0.6766 1.1946 1.3974 Cao nước 3.9977 4.0423 4.9687 4.1923 3.2 Giải đoán cấu trúc ursolic acid Hợp chất SA1 thu dạng bột màu trắng Phổ 1H–NMR (hình 6) SA1 cho thấy tín hiệu proton olefine δH 5.21 (1H, t, 3.5 Hz, H-12) Ở vùng từ trường cao có tín hiệu proton methyl mũi đơn cộng hưởng H 0.76 (3H, s, H-24), 0.83 (3H, s, H-26), 0.94 (3H, s, H-25), 0.96 (3H, s, H-23), 1.10 (3H, s, H-27) tín hiệu methyl mũi đơi H 0.87 (3H, d, J = 6.5 Hz, H-29) 0.95 (d, J = 6.5 Hz, H-30) Dự đoán hợp chất SA1 triterpen có khung ursan-12-en Điều phù hợp với phổ 13C–NMR (hình 7) SA1 có 30 tín hiệu carbon, có carbon olefin δC 126.9 (C–12) 139.6 (C–13) Đây tín hiệu đặc trưng nối đơi C12 – C13 khung ursan–12–en Ngồi ra, phổ 13C–NMR cịn có carbon carbonyl δC 181.7 chứng tỏ SA1 có nhóm –COOH Ngồi ra, phổ NMR hợp chất SA1 cịn cho thấy có diện nhóm hydroxyl, bao gồm tín hiệu proton mũi đơi–đơi proton oxymethine H 3.14 (1H, dd, J =4.5, 11.5 Hz, H–3) phổ 1H–NMR tín hiệu carbon carbinol C 79.7 (C–3) phổ 13C–NMR Phân tích số ghép H–3 cho thấy proton H–3 chẻ mũi với proton H–2a với số ghép 11.5, nên H–3 vị trí trục (hay vị trí α) Hình Phổ 1H-NMR hợp chất ursoic acid (SA1) 2.98 0.780 3.07 9.90 3.10 3.00 2.98 1.120 0.977 0.968 0.961 0.892 0.879 0.851 0.780 3.00 0.892 0.879 0.851 3.10 0.977 0.968 0.961 9.90 1.16 3.170 3.161 3.147 3.138 1.120 3.07 1.00 5.236 5.229 5.222 –OH vị trí xích đạo (hay vị trí β) 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 f1 (ppm) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 60 58 56 54 52 50 48 46 44 42 40 38 36 f1 (ppm) 34 32 30 28 26 24 22 20 Hình Phổ 13C-NMR hợp chất ursoic acid (SA1) 18 16 14 Hình Phổ HR-ESI-MS hợp chất ursoic acid (SA1) Khối phổ phân giải cao (hình 8) cho mũi ion phân tử giả m/z 479.3495 [M+Na]+ (theo tính tốn lý thuyết [C30H48O3+Na]+, 479.3501) So sánh số liệu phổ NMR hợp chất SA1 với ursolic acid [22] trình bày bảng thấy có tương hợp, đề nghị cấu trúc hợp chất SA1 ursolic acid Bảng Dữ liệu phổ NMR SA1 so sánh với tài liệu tham khảo STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Ursolic acid [22] (CD3OD) SA1 (CD3OD) δH, J (Hz) – – 3.14 (1H, dd, 11.5, 4.5) – – – – – – – – 5.21 (1H, t, 3.5) – – – – – 2.18 (1H, d, 11.5) – – – – 0.96 (3H, s) 0.76 (3H, s) 0.94 (3H, s) 0.83 (3H, s) 1.10 (3H, s) – 0.87 (3H, d, 6.5) 0.97 (3H, d, 6.5) δC 39.8 27.9 79.7 δC 39.8 27.8 79.6 40.0 56.7 19.4 34.3 40.8 47.8 38.1 24.3 126.9 139.6 43.2 29.2 25.3 47.8 54.4 40.4 40.4 31.7 38.1 28.7 16.0 16.3 17.6 24.0 181.6 17.8 21.5 39.9 56.7 19.4 34.3 40.7 47.6 38.1 24.3 126.8 139.6 42.8 29.2 25.3 47.6 54.3 40.4 40.4 31.7 38.1 28.7 16.0 16.3 17.6 24.0 181.6 17.8 21.5 3.3 Phân tích định lượng ursolic acid từ 16 loại cao 3.3.1 Xây dựng đường chuẩn Số liệu xây dựng đường chuẩn ursolic acid trình bày Bảng đồ thị Bảng Số liệu đường chuẩn ursolic acid Nồng độ (µg/ mL) Diện tích 64.6 187.9 10 365.4 25 962.5 50 1865.6 dien tich peak Đồ thị Đường chuẩn ursolic acid 2000 1500 Ursolic acid 1000 y = 37,276x + 8,9881 R² = 0,9995 500 0 20 40 60 nong (µg/ mL) 3.3.2 Hàm lượng ursolic acid có loại cao Từ đường chuẩn xây dựng cho ursolic acid tiến hành định lượng acid mẫu cao Bần trắng thu hoạch theo thời gian mùa năm rừng ngập mặn Cần Giờ Ví dụ: hình sắc ký đồ HPLC mẫu cao nước-lá già-Bần trắng Hình sắc ký đồ định lượng ursolic acid mẫu cao nước-lá già-Bần trắng Từ kết sắc ký đồ, tính tốn hàm lượng ursolic acid theo công thức (1-3) Kết hàm lượng ursolic acid trình bày Bảng cho thấy: Trong mẫu cao thô, hàm lượng ursolic acid cao mẫu SOALY (10.87 mg/g) thu mùa mưa Mùa mưa hay mùa nắng không ảnh hưởng nhiều tới hàm lượng ursolic acid lồi Nhìn chung hàm lượng ursolic cao thô già thu hái mùa nắng mùa mưa gần với hàm lượng ursolic cao thô non thu hái mùa mưa (~ 10 mg/g) Vì vậy, phát triển bền vững cây, nên thu hái già để thu lấy ursolic acid Bảng Hàm lượng ursolic acid (mg/g) loại cao từ Bần trắng Mùa nắng Mùa mưa Loại cao SOALM SOALY SOALM 9.32 ± 0.09 10.87 ± 0.11 10.57 ± 0.11 Cao thô ethanol Cao n-Hexane (0.39%) (0.43%) (0.43%) 6.52 ± 0.09 (0.24%) 65.00 ± 0.56 118.31 ± 1.96 100.04 ± 1.89 122.12 ± 1.93 Cao Ethyl acetate 35.50 ± 0.38 38.93 ± 0.41 21.07 ± 0.21 Cao nước SOALY - - 2.50 ± 0.01 2.51 ± 0.01 - Kết từ Bảng cho thấy hàm lượng ursolic acid cao cao hexan mẫu non (SOALY) thu mùa nắng Hầu hết cao nước khơng có có ursolic acid, ursolic acid tập trung nhiều cao hexan Điều giải thích ursolic acid phân cực, tan tốt dung môi n-hexane Vì vậy, hexan dung mơi thích hợp ly trích acid khỏi Bách khoa toàn thư y học cổ truyền Trung Quốc [23], [24] báo cáo diện hàm lượng cao ursolic acid số loài (Bảng 9) Nhận thấy hàm lượng ursolic acid 3% toàn Pyrola rugosa Vì vậy, hàm lượng ursolic acid (0.43%) già-mùa nắng non-mùa mưa Sonneratia alba thấp so với số loài so sánh bảng Bảng Hàm lượng cao ursolic acid, số thuốc Trung Quốc [23], [24] Loài Bộ phận tươi Pyrola rugosa Toàn Pyrola incarnata Toàn Photinia serrulata Lá Eriobotrya japonica Lá a : phần tươi Phần trăm (%) a a a 3.00 2.06 1.50 b 0.68 b : phần khô KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Ursolic acid khảo sát định lượng HPLC 16 cao chiết (4 cao x mùa mưa – nắng x loại già –non) Kết cho thấy ursolic acid tập trung nhiều cao hexan; hàm lượng ursolic acid thu già tương đương nhiều so với non; già thu hái mùa nắng hay mùa mưa khơng có khác biệt đáng kể  Kiến nghị: Xây dựng quy trình chiết tách để thu ursolic acid tinh từ già Bần trắng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Premnathan M., Chandra K., Bajpai S.K and Kathiresan K (1992) A survey of some Indian marine plants for antiviral activity Botanica Marina 35, 321-324 [2] Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng, tập 2, NXB KH&KT, 2304–2306 [3] Bandaranayake W M (2002) Bioactivities, bioactive compounds and chemical constituents of mangrove plants Wetlands Ecology and Management 10, 421–452 [4] Kanchuree Chaiyadej, Hathaichanok Wongthap, Surasi Vadhanavikit and Kan Chantrapromma (2004) Bioactive constituent from the twig of Sonneratia alba Walailak J Sci & Tech., 1(1), 15-22 [5] Kjer Julia, Wray Victor, Edrada-Ebel RuAngelie, Ebel Rainer, Pretsch Alexander, Lin Wenhan, Proksch Peter (2009) Xanalteric acids I and II and related phenolic compounds from an endophytic Alternaria sp isolated from the mangrove plant Sonneratia alba Journal of Natural Products., 72, 2053-2057 [6] Nguyen Thi Hoai Thu, Lam Phuc Khanh, Nguyen The Duy, Nguyen Thi Kim Chanh, Nguyen Kim Phi Phung, Poul Erik Hansen (2011) Chemical constituents from leaves of Sonneratia alba J E Smith (Sonneratiaceae) Science & Technology Development Journal, 14(6), 11-17 [7] Nguyen Thi Hoai Thu, Lam Phuc Khanh, Poul Erik Hansen, Nguyen Kim Phi Phung (2011), Some triterpenoid and phenolic compounds from leaves of Sonneratia alba J.E Smith and their acetylcholinesterase inhibitions Journal of Science and Technology, 49(5B), 715-721 [8] Nguyen Thi Hoai Thu, Pham Nguyen Kim Tuyen, Poul Erik Hansen, Nguyen Kim Phi Phung (2015), Chemical constituents of the ethyl acetate extract of Sonneratia alba J.E Smith leaves and the cytotoxicity, acetylcholinesterase inhibition of the isolated compounds, Tạp chí hóa học, 53(2e1) 103–108 [9] Nguyen Thi Hoai Thu, Nguyen Kim Phi Phung (2016), Further chemical constituents study on Sonneratia alba’s leaves, Vietnam – Journal of Medicince – Ho Chi Minh City (Tạp chí Y học TP HCM), 20(1), 15–20 [10] Nuntavan Bunyapraphatsara1, Aranya Jutiviboonsuk, Prapinsara Sornlek, Wiroj Therathanathorn, Sanit Aksornkaew, Harry H S Fong, John M Pezzuto, Jerry Kosmeder (2003) Pharmacological studies of plants in the mangrove forest Thai Journal of Phytopharmacy, 10(2), 2546-2558 [11] Rasheda Ahmed, Sharmin Jahan Moushumi, Humayun Ahmed, Mohammad Ali, Wahid Mozammel Haq, Rownak Jahan, Mohammed Rahmatullah (2010) Serum glucose and lipid profiles in rats following administration of Sonneratia caseolaris (L.) Engl (Sonneratiaceae) leaf powder in diet Advances in Natural and Applied Sciences, 3, 171-173 [12] Tian Minqing, Dai Haofu, Li Xiaoming, Wang Bingui (2009) Chemical constituents of marine medicinal mangrove plant Sonneratia caseolaris Chinese Journal of Oceanology and Limnology, 27(2), 288-296 [13] Ashok Kumar Tiwari, V Viswanadh, Ponnapalli Mangala Gowri, Amtul Zehra Ali, S.V.S Radhakrishnan, Sachin Bharat Agawane, K Madhusudana, Janaswamy Madhusudana Rao (2010) Oleanolic acid - an α-glucosidase inhibitory and antihyperglycemic active compound from the fruits of Sonneratia caseolaris Open Access Journal of Medicinal and Aromatic Plants, 1, 19-23 [14] Prabha Devi, W Solimabi, L D'Souza, S Sonak, S Y Kamat and S Y S Singbai (1997) Screening of some marine plants for activity against marine fouling bacteria Botanica Marina, 40, 87-91 [15] Simone C B Gnoatto (2008), “Evaluation of ursolic acid isolated from Ilex paraguariensis and derivatives on aromatase inhibition”, European Journal of Medicinal Chemistry, 43(9), pp 1865-1877 [16] Dong-Mei Zhang, Patrick Ming-Kuen Tang, Judy Yuet-Wa Chan, Hung-Ming Lam, Shannon Wing-Ngor Au, Siu-Kai Kong, Stephen Kwok-Wing Tsui, Mary Mui-Yee Waye, Thomas Chung-Wai Mak, Kwok-Pui Fung (2007), Antiproliferative effect of ursolic acid on multidrug resistant hepatoma cells R-HepG2 by apoptosis induction, Cancer Biology & Therapy, 6(9), pp 13811389 [17] Li J., Guo W J., Yang Q Y (2002), “Effects of ursolic acid and oleanolic acid on human colon carcinoma cell line HCT15”, World J Gastroenterol, 8(3), pp 493-495 [18] Robert Viorel Ancuceanu, MSc Pharm, PhD Candidate, and Viorica Istudor, PhD (2004), “Pharmacologically active natural compounds for lung cancer”, Alternative Medicine Review, 9(4), pp 402-419 [19] Sang-Yun Park, Eun-Ju Yang, Eun Ji Park, Beom Soo Shin, Dong Hee Na, and Kyung-Sik Song, Quantitative analysis of ursolic acid and euscaphic acid in Chaenomelis fructus by HPLC-Evaporative light scattering detection (2014), Bull Korean Chem Soc 35(7), 2210-2212 [20] Zhitao Liang, Zhihong Jiang, David Wangfun Fong, Zhongzhen Zhao, Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Oldenlandia diffusa and its substitute using high performance liquid chromatography (2009), Journal of Food and Drug Analysis, 17(2), 69-77 [21] Zhi-Rong Tan, Yao Chen, Gan Zhou, Shan Cao, Xiang-Dong Peng, YiCheng Wang, Xiu-Juan Peng, Wei Zhang, Hong-Hao Zhou, LC–MS–MS quantitative determination of ursolic acid in human plasma and its application to pharmacokinetic studies (2010), Chromatographia, 72 (11), 1107-1113 [22] Ahmad Sazali Hamzah, Nordin Hj Lajis (1998), Chemical constituents of Hedyotis herbacea, Asean Review of Biodiversity and Environmental Conservation (ARBEC), 1-6 [23] Zhou J., Xie G., Yan X (2011), Encyclopedia of traditional Chinese medicines, molecular structures, pharmacological activities, natural sources and applications, Vol 2: Isolated compounds D–G, Springer Heidelberg Dordrecht London New York, pp 389 [24] Zhou J., Xie G., Yan X (2011), Encyclopedia of traditional Chinese medicines, molecular structures, pharmacological activities, natural sources and applications, Vol 3: Isolated compounds N–S, Springer Heidelberg Dordrecht London New York, pp 24 and 90 ... cao nước -lá già -Bần trắng Từ kết sắc ký đồ, tính tốn hàm lượng ursolic acid theo công thức (1-3) Kết hàm lượng ursolic acid trình bày Bảng cho thấy: Trong mẫu cao thô, hàm lượng ursolic acid cao... thu hợp chất ursolic acid (SA1, 508,0 mg) 2.3 Xây dựng quy trình định lượng ursolic acid Chất chuẩn - Sử dụng chất chuẩn ursolic acid (Hình 4) Ursolic acid cô lập từ Bần trắng xác định cấu trúc... mơi  Xây dựng quy trình định lượng ursolic acid Sau đó, tiến hành định lượng ursolic acid từ loại cao sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)  Đánh giá hàm lượng ursolic acid có Bần trắng Kết đạt (khoa học,