TÀI LIỆU TRẮC NGHIỆM, BÀI GIẢNG PPT CÁC MÔN CHUYÊN NGÀNH Y DƯỢC HAY NHẤT CÓ TẠI “TÀI LIỆU NGÀNH Y DƯỢC HAY NHẤT” ;https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. TÀI LIỆU LUẬN VĂN – BÁO CÁO – TIỂU LUẬN (NGÀNH Y DƯỢC). DÀNH CHO SINH VIÊN CÁC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC VÀ CÁC TRƯỜNG KHÁC, GIÚP SINH VIÊN HỆ THỐNG, ÔN TẬP VÀ HỌC TỐT KHI HỌC TÀI LIỆU LUẬN VĂN – BÁO CÁO – TIỂU LUẬN (NGÀNH Y DƯỢC)
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ĐỀ TÀI ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA BA PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO ỐI VÀ QUY CÁCH SỬ DỤNG DEMECOLCINE KHI TẠO TIÊU BẢN NHIỄM SẮC THỂ THAI Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM - hướng Sinh lý động vật Mã số: LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH SINH HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Thành phố Hồ Chí Minh – Tháng Lời cảm ơn Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn thầy tận tình dạy dỗ chúng em thời gian vừa qua Xin cám ơn Ban giám hiệu trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp HCM ban lãnh đạo bệnh viện Từ Dũ Tp HCM hỗ trợ giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Xin gởi lời tri ân sâu sắc đến cô Trần Thị Dân thầy Phùng Như Toàn, người trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành luận văn Và cho gởi lời cám ơn chân thành đến anh Hoan, bạn Quyên, Phú, Ngân, chị Liên, chị Oanh, chị Trang, bạn Hoàng, Trâm, anh Cường anh chị Khoa Di Truyền bệnh viện Từ Dũ, người hỗ trợ nhiều trình thực đề tài Cám ơn thầy cô dành thời gian quý báu để đọc đóng góp ý kiến giúp cho luận văn hoàn thiện i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AF (amniotic fluid specific): đặc trưng dịch ối AFP: alpha-fetoprotein bFGF(basic fibroblast growth factor): nhân tố phát triển nguyên bào sợi DMSO: dimethyl sulphoxide DVME medium: môi trường Dulbecco-Vogt modified Eagle's E (epithelioid): dạng biểu mô F (fibroblastic): dạng nguyên bào sợi F12: môi trường Ham's F12 FBS (Fetal bovine serum): huyết phơi bị FISH (Flourescence in situ hybridization): kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang FSH (human follicle-stimulating hormone ): hóc-mơn kích thích nang trứng GH (growth hormon): hóc-mơn sinh trưởng hCG (human chorionic gonadotropin): kích dục tố màng đệm người LH (human luteinizing hormone): hóc-mơn hồng thể hố mFISH (multi-color flourescence in situ hybridization): kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang nhiều màu NST: nhiễm sắc thể PBS: phosphate buffered saline solution SD (Standard Deviation): độ lệch chuẩn SF medium (serum-free medium): môi trường không huyết α MEM: α -modified minimum essential medium ii DANH MỤC CÁC BẢNG, HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Các bảng Bảng 3.1: Phân bố theo tình trạng lẫn máu mẹ mẫu ối Bảng 3.2: Tuổi thai mẫu vào thời điểm chọc ối Bảng 4.1: Tỷ lệ thành công phương pháp nuôi cấy tế bào ối Bảng 4.2: Số lượng mẫu nuôi cấy đạt mức phát triển Bảng 4.3: Phân bố (%) mẫu theo thời gian xuất tế bào bám tạo cụm phương pháp Trang 23 23 33 38 41 Bảng 4.4: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức phát triển (+) phương pháp Bảng 4.5: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức phát triển (++) 42 44 mẫu ối phương pháp Bảng 4.6: Thời gian nuôi cấy tế bào ối phương pháp Bảng 4.7: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức (+) mẫu ối có 46 51 tuổi thai khác Bảng 4.8: Phân bố (%) số mẫu theo thời gian bám tạo cụm 56 mẫu ối nhóm có tình trạng lẫn máu mẹ khác Bảng 4.9: Số cụm NST trung bình quang trường lơ thí nghiệm Bảng 4.10: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung lơ thí nghiệm Bảng 4.11: Trung bình số cụm NST quang trường theo liều 59 64 lượng demecolcine xử lý mẫu 60 phút 68 Bảng 4.12: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung liều lượng demecolcine khác xử lý mẫu 60 phút Bảng 4.13: Trung bình số cụm NST quang trường lô 68 69 theo thời gian xử lý với liều demecolcine 0,25 µg/ml Bảng 4.14: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung lơ thí nghiệm 70 mức thời gian xử lý với liều demecolcine 0,25 µg/ml Hình Hình 2.1: Hình minh họa thủ thuật chọc ối hỗ trợ siêu âm Hình 2.2: Hình minh họa việc ni cấy tế bào thu nhận từ dịch ối Hình 2.3: NST băng tạo kỹ thuật nhuộm khác 13 Hình 4.1: Cụm tế bào ối ni cấy phương pháp có nhiều tế bào phân chia (100x) 39 Hình 4.2: Cụm tế bào ối ni cấy phương pháp có độ dày mức độ trung bình (100x) 39 Hình 4.3: Cụm tế bào ối ni cấy phương pháp có độ che phủ mức độ dày (100x) 40 Hình 4.4 (a), (b): Các cụm tế bào ối ni cấy phương pháp có độ che phủ mức độ dày (100x) Hình 4.5: Một số mẫu thu hoạch phương pháp phương pháp 40 48 Hình 4.6: Các tế bào giai đoạn khác trình phân bào (200x) Hình 4.7: Các tế bào có NST trạng thái khác (200x) 62 63 Hình 4.8: Bộ NST tế bào chất tạo lớp mờ bao bọc NST độ bung mức + (200x) Hình 4.9: Hai cụm NST có độ bung mức ++ +++ (200x) 65 66 Hình 4.10: Bộ NST có độ bung mức +++ (A) NST đồ tương ứng (B) (200x) 66 Biểu đồ Biểu đồ 4.1: Tỷ lệ thành công – thất bại phương pháp Biểu đồ 4.2: Tỷ lệ mẫu nuôi cấy đạt mức phát triển 35 36 Biểu đồ 4.3: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức phát triển (++) phương pháp 45 Biểu đồ 4.4: Thời gian nuôi cấy phương pháp 47 Biểu đồ 4.5: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức (+) nhóm tuổi thai 53 Biểu đồ 4.6: Phân bố (%) mẫu theo thời gian bám tạo cụm nhóm có tình trạng lẫn máu mẹ khác 57 Biểu đồ 4.7: Số cụm NST trung bình lơ theo liều lượng demecolcine thời gian xử lý với chất 60 Biểu đồ 4.8: Số cụm NST trung bình lơ theo theo thời gian xử lý với liều demecolcine 0,25µg/ml 70 MỤC LỤC Trang Phụ lục bìa Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng, hình biểu đồ i ii CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tế bào ối người 2.2 Nuôi cấy tế bào 2.3 Nuôi cấy tế bào ối người 2.4 Các kỹ thuật kiểm tra số lượng cấu trúc NST 11 2.5 Demecolcine 14 2.6 Một số nghiên cứu nuôi cấy tế bào ối người giới Việt Nam CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng nghiên cứu địa điểm thực 20 3.2 Nội dung nghiên cứu 20 3.3 Thiết bị hóa chất 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.5 Phương pháp toán học sử dụng nghiên cứu 21 22 31 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Xác định phương pháp nuôi cấy hiệu 4.2 Bước đầu xác dịnh liều lượng demecolcine thời gian ủ với chất tạo tiêu NST thai 32 58 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận 5.2 Đề nghị 72 73 Cơng trình tác giả công bố 74 Tài liệu tham khảo 75 Phụ lục CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh lý nhiễm sắc thể (NST) nguyên nhân gây dị tật bẩm sinh cho thai nhi Những dị tật nặng gây sẩy thai, thai lưu trẻ chết sau sinh Ví dụ dạng đột biến thể tam nhiễm liên quan 52% với trường hợp sẩy thai, hội chứng Tơcnơ (Turner) (45,XO) liên quan 18% trường hợp sẩy thai, chiếm tỷ lệ cao nhất; tiếp đến tam nhiễm cặp NST số 16 liên quan 16,4% trường hợp, đột biến dạng chuyển đoạn không tương hỗ liên quan 3% [49] Những dị tật nhẹ chậm phát triển trí tuệ hay vơ sinh khơng đe dọa tính mạng thai nhi, thường khơng điều trị được, chúng tồn suốt đời trẻ Do tạo gánh nặng cho xã hội rối loạn tâm sinh lý trẻ trưởng thành Vì cần hạn chế việc sinh trẻ dị tật bệnh lý NST từ trước sinh vai trị quan trọng chẩn đoán tiền sản Một phương pháp chẩn đoán tiền sản phổ biến phân tích NST Phân tích NST với khám, siêu âm theo dõi, làm xét nghiệm cần thiết giúp xác định đến 99,3% tổng số ca dị tật phát (số liệu bệnh viện Từ Dũ từ tháng 6/2000 đến tháng 6/2001) Đối với trường hợp nghi ngờ thai nhi mang bất thường cấu trúc số lượng NST, việc phân tích NST thực qua chọc rút nước ối (chọc ối) sau ni cấy tế bào nước ối thai nhi, nuôi cấy tế bào lympho máu đứa trẻ, sau dùng kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang (kỹ thuật FISH) hay nhuộm (nhuộm thường quy nhuộm băng) khảo sát NST đồ Đây xét nghiệm có ích lợi lớn, khơng giúp chẩn đốn mà cịn giúp bác sĩ điều trị dự đoán khả bất thường xuất lại đứa sau [2] Xét nghiệm kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang cho kết nhanh hơn, khoảng ngày – tuần, nhiên xét nghiệm đắt tiền khảo sát bất thường số luợng cặp NST số 13, 18, 21 cặp NST giới tính Khuynh hướng xét nghiệm sàng lọc trước sinh nước ta nghiêng kỹ thuật nhuộm băng khảo sát NST đồ Kỹ thuật cho phép khảo sát đột biến số lượng cấu trúc NST thai nhi với chi phí rẻ khoảng 10-20% Tuy nhiên, nhược điểm kỹ thuật thời gian lâu để có kết quả, khoảng – 2,5 tuần Bên cạnh việc tiến hành kỹ thuật đến chưa cho kết ổn định, tỷ lệ nuôi cấy thành công thời gian nuôi cấy tế bào chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố tuổi thai, tình trạng lẫn máu mẹ, phương pháp ni cấy tế bào ối…Phương pháp nuôi cấy tế bào ối bình cấy flask dùng phổ biến có thời gian ni cấy dài tiêu hao hóa chất tạo tiêu NST chưa cho nhiều cụm NST so với phương pháp nuôi cấy in situ Nhằm chọn phương pháp nuôi cấy tế bào ối vừa hiệu vừa tiết kiệm, đồng thời xem xét kỹ thuật tối ưu thu hoạch tiêu NST chất lượng tốt dùng demecolcine xử lý mẫu, thực đề tài: “Đánh giá hiệu ba phương pháp nuôi cấy tế bào ối quy cách sử dụng demecolcine tạo tiêu NST thai” 1.2 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU (1) Lựa chọn phương pháp nuôi cấy tế bào ối hiệu (2) Xác định liều lượng demecolcine thời gian xử lý mẫu với chất để tạo tiêu NST tốt 7.3 Mức (++) Thời điểm (ngày) Tuổi thai ≤5 6-7 8-9 10-11 ≥12 ≤20 47 28 79 21-25 3.0 24.0 18.0 1.0 0.0 46 Tổng cột 71 46 125 ≤20 1.896 44.872 29.072 2.528 0.368 21-25 1.104 26.128 16.928 1.472 Giá trị P 0.09689395 Lý thuyết Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy thời gian cần thiết để phát triển đạt mức (++) mẫu nhóm tuổi khơng khác Phụ lục 8: Thời gian nuôi cấy theo tuổi thai Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count ≤20 21-25 Sum Average Variance 79 851 10,7723 2,973061 43 451 10,4883 6,11296 df MS F P-value F crit 2,24233 0,55067 0,4595 3,920 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 2,24233 Total 488,643 120 4,07203 F=0,551Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy tỷ lệ thành cơng khơng khác theo tình trạng lẫn máu mẹ Phụ lục 10: Số mẫu đạt mức phát triển theo tình trạng mẫu ối 10.1 Có tế bào bám tạo cụm Tình trạng Khơng lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Giá trị P Tổng Lý thuyết hàng Có Khơng 96.762 4.2378 19.161 0.839 21.077 0.923 Có Khơng 97 101 18 20 22 22 137 143 Khơng lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình 0.265327 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy số mẫu có tế bào bám tạo cụm khơng khác theo tình trạng lẫn máu mẹ 10.2 Mức (+) Tình trạng Đạt Không đạt Tổng hàng Không lẫn máu mẹ 95 101 Ít lẫn máu mẹ 17 20 Lẫn máu mẹ mức trung bình 20 22 Tổng cột 132 11 143 Không lẫn máu mẹ 93.23076923 7.769230769 Ít lẫn máu mẹ 18.46153846 1.538461538 Lẫn máu mẹ mức trung bình 20.30769231 1.692307692 Giá trị P 0.367651174 Lý thuyết Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy số mẫu đạt mức (+) không khác theo tình trạng lẫn máu mẹ 10.3 Mức (++) Tình trạng Thành cơng Thất bại Tổng hàng Khơng lẫn máu mẹ 89 12 101 Ít lẫn máu mẹ 17 20 Lẫn máu mẹ mức trung bình 19 22 Tổng cột 125 18 143 Không lẫn máu mẹ 88.28671 12.71329 Ít lẫn máu mẹ 17.48252 2.517483 Lẫn máu mẹ mức trung bình 19.23077 2.769231 Giá trị P 0.916869 Lý thuyết Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy số mẫu đạt mức (++) khơng khác theo tình trạng lẫn máu mẹ Phụ lục 11: Phân bố mẫu theo thời gian đạt mức phát triển theo tình trạng lẫn máu mẹ 11.1 Có tế bào bám tạo cụm 11.1.1 Xét nhóm mẫu Thời gian (ngày) Tình trạng Tổng hàng ≤5 6-7 ≥8 Không lẫn máu mẹ 92 97 Ít lẫn máu mẹ 15 18 Lẫn máu mẹ mức trung bình 19 22 Tổng cột 126 137 Không lẫn máu mẹ 89.21168 4.956204 2.832117 Ít lẫn máu mẹ 16.55474 0.919708 0.525547 Lẫn máu mẹ mức trung bình 20.23358 1.124088 0.642336 Giá trị P 0.051011 Lý thuyết Kết quả: P (X Bác bỏ giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm khác nhóm theo tình trạng lẫn máu mẹ 11.1.2 Xét nhóm khơng lẫn máu mẹ lẫn máu mẹ Thời gian (ngày) Tình trạng Tổng hàng ≤5 6-7 ≥8 Không lẫn máu mẹ 92 97 Ít lẫn máu mẹ Tổng 15 18 cột 107 115 Không lẫn máu mẹ 90.25217391 5.060869565 1.686956522 Ít lẫn máu mẹ 16.74782609 0.939130435 0.313043478 Giá trị P 0.05107113 Lý thuyết Kết quả: P (X Bác bỏ giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm khác nhóm khơng lẫn máu mẹ nhóm lẫn máu mẹ 11.1.3 Xét nhóm khơng lẫn máu mẹ lẫn máu mẹ mức trung bình Tình trạng Thời gian (ngày) Tổng ≤5 6-7 ≥8 hàng Không lẫn máu mẹ 92 97 Lẫn máu mẹ mức trung bình 19 22 Tổng cột 111 4 119 Lý thuyết Không lẫn máu mẹ 90.47899 3.260504 3.260504 Lẫn máu mẹ mức trung bình 20.52101 0.739496 0.739496 Giá trị P 0.236126 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm không khác nhóm khơng lẫn máu mẹ nhóm lẫn máu mẹ mức trung bình 11.1.4 Xét nhóm lẫn máu mẹ lẫn máu mẹ mức trung bình Tình trạng Thời gian (ngày) Tổng hàng ≤5 6-7 ≥8 Ít lẫn máu mẹ 15 18 Lẫn máu mẹ mức trung bình 19 22 Tổng cột 34 40 Ít lẫn máu mẹ 15.3 1.8 0.9 Lẫn máu mẹ mức trung bình 18.7 2.2 1.1 Giá trị P 0.2121 Lý thuyết Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm khơng khác nhóm lẫn máu mẹ nhóm lẫn máu mẹ mức trung bình 11.2 Mức (+) Tình trạng Thời gian (ngày) Tổng ≤5 6-7 8-9 10-11 ≥12 Không lẫn máu mẹ 42 47 3 95 Ít lẫn máu mẹ 0 17 Lẫn máu mẹ mức trung bình 14 1 20 Tổng cột 52 70 132 Không lẫn máu mẹ 37.424 50.379 4.318 2.159 0.720 Ít lẫn máu mẹ 6.697 9.015 0.773 0.386 0.129 Lẫn máu mẹ mức trung bình 7.879 10.606 0.909 0.455 0.152 Giá trị P 0.112 Lý thuyết Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân bố mẫu theo thời gian đạt mức (+) không khác nhóm theo tình trạng lẫn máu mẹ 11.3 Mức (++) Tình trạng Thời gian (ngày) Tổng ≤5 6-7 8-9 10-11 ≥12 Không lẫn máu mẹ 51 31 89 Ít lẫn máu mẹ 0 17 Lẫn máu mẹ mức trung bình 11 19 Tổng cột 71 46 125 Không lẫn máu mẹ 2.136 50.552 32.752 2.848 0.712 Ít lẫn máu mẹ 0.408 9.656 6.256 0.544 0.136 Lẫn máu mẹ mức trung bình 0.456 10.792 6.992 0.608 0.152 Giá trị P 0.930841 Lý thuyết Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân bố mẫu theo thời gian đạt mức (++) khơng khác nhóm theo tình trạng lẫn máu mẹ Phụ lục 12: Thời gian ni cấy theo tình trạng nhiễm máu mẹ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Khơng nhiễm máu mẹ 87 Ít nhiễm máu mẹ 16 Nhiễm máu mẹ mức trung bình 19 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 13,05584 Within Groups 477,8294 Sum Average Variance 915 10,51724 4,368885 184 11,5 4,8 203 10,68421 1,672515 df MS F P-value F crit 6,527922 1,625732 0,201107 3,072429 119 4,015373 Total 490,8852 121 Kết quả: F=1,626< F0,05=3,073→ Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy thời gian ni cấy khơng khác theo tình trạng nhiễm máu mẹ Phụ lục 13: Trung bình số cụm NST theo thời gian liều lượng demecolcine Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 0,125µg/ml 0,25µg/ml 0,375µg/ml 0,5µg/ml Total 30ph Count 20 20 20 20 80 Sum 71 47 29 40 187 Average 3.55 2.35 1.45 2.3375 Variance 1.73421 0.7658 0.47105 0.8421 1.51756 60ph Count 20 20 20 20 80 Sum 69 86 44 207 Average 3.45 4.3 2.2 0.4 2.5875 Variance 1.31316 2.5368 2.06316 0.2526 3.6631 90ph Count 20 20 20 20 80 Sum 40 59 25 34 158 Average 2.95 1.25 1.7 1.975 Variance 1.26316 1.2079 0.30269 0.43158 1.1639 120ph Count 20 20 20 20 80 Sum 25 99 24 40 188 Average 1.25 4.95 1.2 2.35 Variance 0.19737 2.3658 0.1684 1.6842 3.4456 Total Count 80 80 80 80 Sum 205 291 122 122 Average 2.5625 3.6375 1.525 1.525 Variance 2.04668 2.740 0.8854 1.21456 ANO VA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Sample 15.325 5.10833 4.64394 0.00343 2.634 Columns 244.675 81.5583 74.1439 5.153E-36 2.634 Interaction 194.35 21.5944 19.6313 6.973E-26 1.9107 Within 334.4 304 1.1 Total 788.75 319 Kết quả: FR=4,644> F0,05=2,634, FC=74,144> F0,05=2,634, FI=19,631>F0,05=1,911 → Bác bỏ giả thuyết H0 (thời gian), bác bỏ giả thuyết H0 (liều lượng), bác bỏ giả thuyết H0 (thời gian x liều lượng) => Vậy số cụm NST trung bình khác theo thời gian, theo liều lượng mà cịn có tương tác hai yếu tố thời gian liều lượng giá trị trung bình Phụ lục 14: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung lơ thí nghiệm xử lý với thời gian liều lượng demecolcine khác Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 0,125µg/ml 0,25µg/ml Count 3 Sum 1.3501 1.4177 30ph Average 0.4500 0.4726 Variance 0.1963 0.1651 Count 3 Sum 1.7115 1.4124 60ph Average 0.5705 0.4708 Variance 0.0118 0.1676 Count 3 Sum 1.4857 1.6414 90ph Average 0.4952 0.5471 Variance 0.1321 0.0509 Count 3 Sum 1.6775 1.2861 120ph Average 0.5592 0.4287 Variance 0.0310 0.2244 0,375µg/ml 1.2375 0.4125 0.2448 1.3937 0.4646 0.1763 1.3516 0.4505 0.1956 1.3562 0.4521 0.1935 0,5µg/ml 1.3193 0.4398 0.2100 1.2990 0.4330 0.2188 1.2923 0.4308 0.2217 1.2990 0.4330 0.2188 12 5.7576 0.4798 0.1125 12 5.3391 0.4449 0.1477 12 5.2095 0.4341 0.1581 df MS 0.0041 0.0175 0.0048 0.1662 F 0.0248 0.1055 0.0287 Total 12 5.3245 0.4437 0.1489 12 5.8166 0.4847 0.1073 12 5.7711 0.4809 0.1113 12 5.6188 0.4682 0.1245 Total Count Sum Average Variance ANOVA 12 6.2247 0.5187 0.0701 Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 0.01235 0.05261 0.04295 5.31728 Total 5.42519 3 32 P-value 0.9946 0.9562 1.0000 F crit 2.9011 2.9011 2.1888 47 Kết quả: FR=0,025< F0,05=2,901, FC=0,106< F0,05=2,901, FI=0,029 F0,05=2,713→ Bác bỏ giả thuyết H => Vậy số cụm NST trung bình khác theo liều lượng demecolcine xử lý thu họach Phụ lục 16: Phân bố cụm NST theo độ bung lơ thí nghiệm xử lý với thể tích demecolcine khác 60 phút Độ bung Liều lượng Tổng hàng (µg/ml) +++ ++ + 0,125 49 53 0,25 (ĐC) 13 41 56 0,375 19 26 0,5 15 44 59 Tổng cột 38 153 194 Lý thuyết 0,125 0,25 (ĐC) 0,375 0,5 Giá trị P 0.820 10.381 41.799 0.866 10.969 44.165 0.402 5.093 20.505 0.912 11.557 0,078 46.531 Kết quả: P (X< χ )=0,078>α=0,05 => Chấp nhận giả thuyết H0 Vậy tỷ lệ cụm NST đạt độ bung không khác theo liều lượng demecolcine xử lý thu hoạch Phụ lục 17: Trung bình số cụm NST lơ thí nghiệm xử lý liều demecolcine 0,25µg/ml khoảng thời gian khác Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30ph 60ph (ĐC) 90ph 120ph Count Sum Average Variance 41 59 1.439024 0.402439 41 59 1.439024 0.452439 41 44 1.073171 0.519512 41 77 1.878049 1.209756 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 13.33537 Within Groups 103.3659 df MS F P-value F crit 4.445122 6.880604 0.000218 2.661108 160 0.646037 Total 163 116.7012 Kết quả: F=6,881< F0,05=2,661→ Bác bỏ giả thuyết H0 => Vậy trung bình số cụm NST khác theo thời gian xử lý demecolcine Phụ lục 18: Phân bố cụm NST theo độ bung lơ thí nghiệm xử lý liều demecolcine 0,25µg/ml khoảng thời gian thời gian khác +++ Độ bung ++ + 14 38 59 60(ĐC) 16 40 59 90 37 44 120 12 60 77 Tổng cột 15 49 175 239 30 3.702929 12.09623 43.20084 60 3.702929 12.09623 43.20084 90 2.761506 9.020921 32.21757 120 4.832636 15.78661 56.38075 Thời gian (phút) 30 Tổng hàng Lý thuyết Giá trị P 0.102879 Kết quả: P (X< χ )=0,1029>α=0,05 => Chấp nhận giả thuyết H0 Vậy tỷ lệ cụm NST đạt độ bung không khác theo thời gian xử lý demecolcine ... thai, tình trạng lẫn máu mẹ) tới hiệu nuôi c? ?y ối - Phương pháp ni c? ?y tế bào ối bình c? ?y flask (phương pháp 1) - Phương pháp nuôi c? ?y tế bào ối in situ slide flask (phương pháp 2) - Phương pháp. .. (nuôi c? ?y tháng) cho th? ?y tế bào sợi dễ dàng c? ?y chuyền, tối đa khoảng 30 lần (nuôi c? ?y 150 ng? ?y) , tế bào biểu mô khó c? ?y chuyền tối đa đến lần Sau tháng nuôi c? ?y, hầu hết tế bào phát triển nuôi c? ?y. .. ni c? ?y quan, nuôi c? ?y mô phát triển sơ cấp nuôi c? ?y tế bào Nuôi c? ?y tế bào chia thành ni c? ?y in vitro (trong phịng thí nghiệm) nuôi c? ?y in vivo (trong thể sống) Một số khác biệt tế bào nuôi cấy