ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA BA PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO ỐI VÀ QUY CÁCH SỬ DỤNG DEMECOLCINE KHI TẠO TIÊU BẢN NHIỄM SẮC THỂ THAI

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÂM THỤY ANH THƯ ĐỀ TÀI ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA BA PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY TẾ BÀO ỐI VÀ QUY CÁCH SỬ DỤNG DEMECOLCINE KHI TẠO TIÊU BẢN NHIỄM SẮC THỂ THAI Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM - hướng Sinh lý động vật Mã số: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH SINH HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS TRẦN THỊ DÂN Thành phố Hồ Chí Minh – Tháng 6/2011 Lời cảm ơn Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn thầy cô tận tình dạy dỗ chúng em thời gian vừa qua Xin cám ơn Ban giám hiệu trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp HCM ban lãnh đạo bệnh viện Từ Dũ Tp HCM hỗ trợ giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Xin gởi lời tri ân sâu sắc đến cô Trần Thị Dân thầy Phùng Như Toàn, người trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành luận văn Và cho gởi lời cám ơn chân thành đến anh Hoan, bạn Quyên, Phú, Ngân, chị Liên, chị Oanh, chị Trang, bạn Hoàng, Trâm, anh Cường anh chị Khoa Di Truyền bệnh viện Từ Dũ, người hỗ trợ nhiều trình thực đề tài Cám ơn thầy cô dành thời gian quý báu để đọc đóng góp ý kiến giúp cho luận văn hoàn thiện Lâm thụy Anh Thư DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾTi TẮT AF (amniotic fluid specific): đặc trưng dịch ối AFP: alpha-fetoprotein bFGF(basic fibroblast growth factor): nhân tố phát triển nguyên bào sợi DMSO: dimethyl sulphoxide DVME medium: môi trường Dulbecco-Vogt modified Eagle's E (epithelioid): dạng biểu mô F (fibroblastic): dạng nguyên bào sợi F12: môi trường Ham's F12 FBS (Fetal bovine serum): huyết phôi bò FISH (Flourescence in situ hybridization): kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang FSH (human follicle-stimulating hormone ): hóc-môn kích thích nang trứng GH (growth hormon): hóc-môn sinh trưởng hCG (human chorionic gonadotropin): kích dục tố màng đệm người LH (human luteinizing hormone): hóc-môn hoàng thể hoá mFISH (multi-color flourescence in situ hybridization): kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang nhiều màu NST: nhiễm sắc thể PBS: phosphate buffered saline solution SD (Standard Deviation): độ lệch chuẩn SF medium (serum-free medium): môi trường không huyết α MEM: α -modified minimum essential medium DANH MỤC CÁC BẢNG, HÌNH VÀi BIỂU ĐỒ Các bảng Bảng 3.1: Phân bố theo tình trạng lẫn máu mẹ mẫu ối Bảng 3.2: Tuổi thai mẫu vào thời điểm chọc ối Bảng 4.1: Tỷ lệ thành công phương pháp nuôi cấy tế bào ối Bảng 4.2: Số lượng mẫu nuôi cấy đạt mức phát triển Bảng 4.3: Phân bố (%) mẫu theo thời gian xuất tế bào bám tạo cụm phương pháp Trang 23 23 33 38 41 Bảng 4.4: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức phát triển (+) phương pháp Bảng 4.5: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức phát triển (++) 42 44 mẫu ối phương pháp Bảng 4.6: Thời gian nuôi cấy tế bào ối phương pháp Bảng 4.7: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức (+) mẫu ối có 46 51 tuổi thai khác Bảng 4.8: Phân bố (%) số mẫu theo thời gian bám tạo cụm 56 mẫu ối nhóm có tình trạng lẫn máu mẹ khác Bảng 4.9: Số cụm NST trung bình quang trường lô thí nghiệm Bảng 4.10: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung lô thí nghiệm Bảng 4.11: Trung bình số cụm NST quang trường theo liều 59 64 lượng demecolcine xử lý mẫu 60 phút 68 Bảng 4.12: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung liều lượng demecolcine khác xử lý mẫu 60 phút Bảng 4.13: Trung bình số cụm NST quang trường lô 68 69 theo thời gian xử lý với liều demecolcine 0,25 µg/ml Bảng 4.14: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung lô thí nghiệm 70 mức thời gian xử lý với liều demecolcine 0,25 µg/ml Hình Hình 2.1: Hình minh họa thủ thuật chọc ối hỗ trợ siêu âm Hình 2.2: Hình minh họa việc nuôi cấy tế bào thu nhận từ dịch ối Hình 2.3: NST băng tạo kỹ thuật nhuộm khác 13 Hình 4.1: Cụm tế bào ối nuôi cấy phương pháp có nhiều tế bào phân chia (100x) 39 Hình 4.2: Cụm tế bào ối nuôi cấy phương pháp có độ dày mức độ trung bình (100x) 39 Hình 4.3: Cụm tế bào ối nuôi cấy phương pháp có độ che phủ mức độ dày (100x) 40 Hình 4.4 (a), (b): Các cụm tế bào ối nuôi cấy phương pháp có độ che phủ mức độ dày (100x) Hình 4.5: Một số mẫu thu hoạch phương pháp phương pháp 40 48 Hình 4.6: Các tế bào giai đoạn khác trình phân bào (200x) Hình 4.7: Các tế bào có NST trạng thái khác (200x) 62 63 Hình 4.8: Bộ NST tế bào chất tạo lớp mờ bao bọc NST độ bung mức + (200x) Hình 4.9: Hai cụm NST có độ bung mức ++ +++ (200x) 65 66 Hình 4.10: Bộ NST có độ bung mức +++ (A) NST đồ6tương ứng (B) (200x) 66 Biểu đồ Biểu đồ 4.1: Tỷ lệ thành công – thất bại phương pháp Biểu đồ 4.2: Tỷ lệ mẫu nuôi cấy đạt mức phát triển 35 36 Biểu đồ 4.3: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức phát triển (++) phương pháp Biểu đồ 4.4: Thời gian nuôi cấy phương pháp Biểu đồ 4.5: Phân bố (%) mẫu theo thời gian đạt mức (+) nhóm tuổi thai 45 47 53 Biểu đồ 4.6: Phân bố (%) mẫu theo thời gian bám tạo cụm nhóm có tình trạng lẫn máu mẹ khác 57 Biểu đồ 4.7: Số cụm NST trung bình lô theo liều lượng demecolcine thời gian xử lý với chất 60 Biểu đồ 4.8: Số cụm NST trung bình lô theo theo thời gian xử lý với liều demecolcine 0,25µg/ml 70 MỤC LỤC Trang Phụ lục bìa Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng, hình biểu đồ i ii CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tế bào ối người 2.2 Nuôi cấy tế bào 2.3 Nuôi cấy tế bào ối người 2.4 Các kỹ thuật kiểm tra số lượng cấu trúc NST 2.5 Demecolcine 2.6 Một số nghiên cứu nuôi cấy tế bào ối người giới Việt Nam CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 14 16 3.1 Đối tượng nghiên cứu địa điểm thực 3.2 Nội dung nghiên cứu 3.3 Thiết bị hóa chất 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.5 Phương pháp toán học sử dụng nghiên cứu 20 20 21 22 31 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Xác định phương pháp nuôi cấy hiệu 4.2 Bước đầu xác dịnh liều lượng demecolcine thời gian ủ với chất tạo tiêu NST thai 32 58 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận 5.2 Đề nghị Công trình tác giả công bố Tài liệu tham khảo Phụ lục 72 73 74 75 CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh lý nhiễm sắc thể (NST) nguyên nhân gây dị tật bẩm sinh cho thai nhi Những dị tật nặng gây sẩy thai, thai lưu trẻ chết sau sinh Ví dụ dạng đột biến thể tam nhiễm liên quan 52% với trường hợp sẩy thai, hội chứng Tơcnơ (Turner) (45,XO) liên quan 18% trường hợp sẩy thai, chiếm tỷ lệ cao nhất; tiếp đến tam nhiễm cặp NST số 16 liên quan 16,4% trường hợp, đột biến dạng chuyển đoạn không tương hỗ liên quan 3% [49] Những dị tật nhẹ chậm phát triển trí tuệ hay vô sinh không đe dọa tính mạng thai nhi, thường không điều trị được, chúng tồn suốt đời trẻ Do tạo gánh nặng cho xã hội rối loạn tâm sinh lý trẻ trưởng thành Vì cần hạn chế việc sinh trẻ dị tật bệnh lý NST từ trước sinh vai trò quan trọng chẩn đoán tiền sản Một phương pháp chẩn đoán tiền sản phổ biến phân tích NST Phân tích NST với khám, siêu âm theo dõi, làm xét nghiệm cần thiết giúp xác định đến 99,3% tổng số ca dị tật phát (số liệu bệnh viện Từ Dũ từ tháng 6/2000 đến tháng 6/2001) Đối với trường hợp nghi ngờ thai nhi mang bất thường cấu trúc số lượng NST, việc phân tích NST thực qua chọc rút nước ối (chọc ối) sau nuôi cấy tế bào nước ối thai nhi, nuôi cấy tế bào lympho máu đứa trẻ, sau dùng kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang (kỹ thuật FISH) hay nhuộm (nhuộm thường quy nhuộm băng) khảo sát NST đồ Đây xét nghiệm có ích lợi lớn, giúp chẩn đoán mà giúp bác sĩ điều trị dự đoán khả bất thường xuất lại đứa sau [2] Xét nghiệm kỹ thuật lai chỗ phát huỳnh quang cho kết nhanh hơn, khoảng ngày – tuần, nhiên xét nghiệm đắt tiền khảo sát bất thường số luợng cặp NST số 13, 18, 21 cặp NST giới tính Khuynh hướng xét nghiệm sàng lọc trước sinh nước ta nghiêng kỹ thuật nhuộm băng khảo sát NST đồ Kỹ thuật cho phép khảo sát đột biến số lượng cấu trúc NST thai nhi với chi phí rẻ khoảng 10-20% Tuy nhiên, nhược điểm kỹ thuật thời gian lâu để có kết quả, khoảng – 2,5 tuần Bên cạnh việc tiến hành kỹ thuật đến chưa cho kết ổn định, tỷ lệ nuôi cấy thành công thời gian nuôi cấy tế bào chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố tuổi thai, tình trạng lẫn máu mẹ, phương pháp nuôi cấy tế bào ối…Phương pháp nuôi cấy tế bào ối bình cấy flask dùng phổ biến có thời gian nuôi cấy dài tiêu hao hóa chất tạo tiêu NST chưa cho nhiều cụm NST so với phương pháp nuôi cấy in situ Nhằm chọn phương pháp nuôi cấy tế bào ối vừa hiệu vừa tiết kiệm, đồng thời xem xét kỹ thuật tối ưu thu hoạch tiêu NST chất lượng tốt dùng demecolcine xử lý mẫu, thực đề tài: “Đánh giá hiệu ba phương pháp nuôi cấy tế bào ối quy cách sử dụng demecolcine tạo tiêu NST thai” 1.2 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU (1) Lựa chọn phương pháp nuôi cấy tế bào ối hiệu (2) Xác định liều lượng demecolcine thời gian xử lý mẫu với chất để tạo tiêu NST tốt 7.3 Mức (++) Tuổi thai ≤20 21-25 Tổng cột Lý thuyết ≤20 21-25 Giá trị P 0.09689395 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy thời gian cần thiết để phát triển đạt mức (++) mẫu nhóm tuổi không khác Phụ lục 8: Thời gian nuôi cấy theo tuổi thai Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count ≤20 Sum 21-25 Average ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS df MS F=0,551Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy tỷ lệ thành công không khác theo tình trạng lẫn máu mẹ Phụ lục 10: Số mẫu đạt mức phát triển theo tình trạng mẫu ối 10.1 Có tế bào bám tạo cụm Tình trạng Có Không lẫn máu mẹ 97 Ít lẫn máu mẹ 18 Lẫn máu mẹ 22 mức trung bình Tổng cột Giá trị P 137 0.265327 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy số mẫu có tế bào bám tạo cụm không khác theo tình trạng lẫn máu mẹ 10.2 Mức (+) Tình trạng Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy số mẫu đạt mức (+) không khác theo tình trạng lẫn máu mẹ 10.3 Mức (++) Tình trạng Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy số mẫu đạt mức (++) không khác theo tình trạng lẫn máu mẹ Phụ lục 11: Phân bố mẫu theo thời gian đạt mức phát triển theo tình trạng lẫn máu mẹ 11.1 Có tế bào bám tạo cụm 11.1.1 Xét nhóm mẫu Tình trạng Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Giá trị P 0.051011 Kết quả: P (X Bác bỏ giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm khác nhóm theo tình trạng lẫn máu mẹ 11.1.2 Xét nhóm không lẫn máu mẹ lẫn máu mẹ Tình trạng Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Giá trị P 0.05107113 Kết quả: P (X Bác bỏ giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm khác nhóm không lẫn máu mẹ nhóm lẫn máu mẹ Tình trạng Không lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình 11.1.3 Xét nhóm không lẫn máu mẹ lẫn máu mẹ mức trung Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Giá trị P 0.236126 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm không khác nhóm không lẫn máu mẹ nhóm lẫn máu mẹ mức trung bình 11.1.4 Xét nhóm lẫn máu mẹ lẫn máu mẹ mức trung bình Tình trạng Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Lý thuyết Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Giá trị P 0.2121 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân phối mẫu theo thời gian tế bào bám tạo cụm không khác nhóm lẫn máu mẹ nhóm lẫn máu mẹ mức trung bình Tình trạng Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ 11.2 Mức Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Giá trị P 0.112 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân bố mẫu theo thời gian đạt mức (+) không khác nhóm theo tình trạng lẫn máu mẹ 11.3 Mức (++) Tình trạng Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Tổng cột Lý thuyết Không lẫn máu mẹ Ít lẫn máu mẹ Lẫn máu mẹ mức trung bình Giá trị P 0.930841 Kết quả: P (Xα=0,05=> Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy phân bố mẫu theo thời gian đạt mức (++) không khác nhóm theo tình trạng lẫn máu mẹ Phụ lục 12: Thời gian nuôi cấy theo tình trạng nhiễm máu mẹ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance Không nhiễm máu mẹ Ít nhiễm máu mẹ Nhiễm máu mẹ mức trung bình ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total 490,8852 121 Kết quả: F=1,626< F0,05=3,073→ Chấp nhận giả thuyết H0 => Vậy thời gian nuôi cấy không khác theo tình trạng nhiễm máu mẹ Phụ lục 13: Trung bình số cụm NST theo thời gian liều lượng demecolcine Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 0,125µg/ml 0,25µg/ml 0,375µg/ml 0,5µg/ml Total 30ph Count Sum Average Variance 1.7 60ph Count Sum Average Variance 1.3 90ph Count Sum Average Variance 1.2 120ph Count Sum Average Variance 0.1 Total Count Sum Average Variance ANO VA 2.0 Source of Variation S Sample Columns Interaction Within Total Kết quả: F =4,644> F R 0,05 24 =2,634, F =74,144> F C 0,05 =2,634, F =19,631>F I =1,911 0,05 → Bác bỏ giả thuyết H0 (thời gian), bác bỏ giả thuyết H0 (liều lượng), bác bỏ giả thuyết H0 (thời gian x liều lượng) => Vậy số cụm NST trung bình khác theo thời gian, theo liều lượng mà có tương tác hai yếu tố thời gian liều lượng giá trị trung bình Phụ lục 14: Phân bố (%) cụm NST theo độ bung lô thí nghiệm xử lý với thời gian liều lượng demecolcine khác Anova: Two-Factor With Replication SUMMARY 0,125µg/ml 0,25µg/ml 0,375µg/ml 0,5µg/ml Total 30ph 60ph 90ph 120ph Total Count Sum Average Variance ANOVA 0 Source of Variation Sample Columns Interaction Within SS 0.0 0.0 0.0 5.3 Total 5.4 Kết quả: F =0,025< F =2,901, F =0,106< F R C 0,05 0,05 =2,901, F =0,029 F =2,713→ Bác bỏ giả thuyết H 0,05 => Vậy số cụm NST trung bình khác theo liều lượng demecolcine xử lý thu họach Phụ lục 16: Phân bố cụm NST theo độ bung lô thí nghiệm xử lý với thể tích demecolcine khác 60 phút Liều lượng 0,125 0,25 (ĐC) 0,375 0,5 Tổng cột Lý thuyết 0,125 0,25 (ĐC) 0,375 0,5 Giá trị P 0,078 Kết quả: P (X< χ2)=0,078>α=0,05 => Chấp nhận giả thuyết H0 Vậy tỷ lệ cụm NST đạt độ bung không khác theo liều lượng demecolcine xử lý thu hoạch Phụ lục 17: Trung bình số cụm NST lô thí nghiệm xử lý liều demecolcine 0,25µg/ml khoảng thời gian khác Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30ph 60ph (ĐC) 90ph 120ph 41 77 1.878049 1.209756 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Kết quả: F=6,881< F0,05=2,661→ Bác bỏ giả thuyết H0 => Vậy trung bình số cụm NST khác theo thời gian xử lý demecolcine Phụ lục 18: Phân bố cụm NST theo độ bung lô thí nghiệm xử lý liều demecolcine 0,25µg/ml khoảng thời gian thời gian khác Thời gian 30 60(ĐC) 90 120 Tổng cột Lý thuyết 30 60 90 120 Giá trị P 0.102879 Kết quả: P (X< χ2)=0,1029>α=0,05 => Chấp nhận giả thuyết H0 Vậy tỷ lệ cụm NST đạt độ bung không khác theo thời gian xử lý demecolcine [...]... khi nuôi cấy trong môi trường thích hợp chúng có thể cảm ứng biệt hóa thành tế bào tạo mỡ, tạo xương, tạo máu, biểu hiện kiểu hình của tế bào nguồn gốc thần kinh và có khả năng tạo van tim [10], [40], [46] 2.2 NUÔI CẤY TẾ BÀO Trong phòng thí nghiệm, có 3 cấp độ nuôi cấy mô và tế bào động vật, đó là nuôi cấy cơ quan, nuôi cấy mô phát triển sơ cấp và nuôi cấy tế bào Nuôi cấy tế bào được chia thành nuôi. .. trình nuôi cấy Địa điểm thực hiện: Phòng Di truyền bệnh viện Phụ sản Từ Dũ Tp HCM 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU (1) Nội dung 1: Khảo sát hiệu quả 3 phương pháp nuôi cấy tế bào ối và xem xét ảnh hưởng của các điều kiện mẫu (tuổi thai, tình trạng lẫn máu mẹ) tới hiệu quả nuôi cấy ối - Phương pháp nuôi cấy tế bào ối bằng bình cấy flask (phương pháp 1) - Phương pháp nuôi cấy tế bào ối in situ trên slide flask (phương. .. trình nuôi cấy và thu hoạch in situ tế bào ối và gai nhau, bao gồm đánh giá tác động của thể tích dịch ối, loại môi trường lên thời gian và số cụm tế bào trong nuôi cấy sơ cấp, và đánh giá ảnh hưởng của chất kiềm hãm, nhiệt độ, độ ẩm và tốc độ lưu thông khí lên chất lượng cụm NST kỳ giữa thu hoạch từ tế bào ối và gai nhau nuôi cấy sơ cấp [53], [54], [55] Pan và cộng sự (2006) khảo sát hiệu quả của phương. .. nghiên cứu của Namba và Hyodo (1980) tiến hành nuôi cấy dài ngày (nuôi cấy 7 tháng) cho thấy tế bào sợi dễ dàng cấy chuyền, và tối đa được khoảng 30 lần (nuôi cấy 150 ngày), trong khi tế bào biểu mô khó cấy chuyền và tối đa chỉ 2 đến 5 lần Sau 6 tháng nuôi cấy, hầu hết tế bào phát triển trong nuôi cấy là tế bào biểu mô Về hình thái, quan sát được 2 loại tế bào, loại Golgi và loại hình sợi Các tế bào loại... 3.4.1.4 Phương pháp đánh giá kết quả Phương pháp nuôi cấy tế bào hiệu quả được xác định là các phương pháp có tỷ lệ nuôi cấy thành công cao, tế bào phát triển nhanh, thời gian nuôi cấy ngắn  Các chỉ tiêu khảo sát (1) Tỷ lệ thành công, thất bại của các mẫu nuôi cấy ở mỗi phương pháp (2) Mức độ phát triển của các mẫu nuôi cấy: đánh giá và phân loại mức độ phát triển dựa trên số lượng, kích thước và mức độ... dịch Nhau thai Khoang ối Tế bào Vách tử cung Nuôi cấy tế bào (3) Nghiên cứu sinh hóa và NST (4) Hình 2.2: Hình minh họa việc nuôi cấy tế bào thu nhận từ dịch ối (nguồn http://jon.visick.faculty.noctrl.edu/120/slides/slides17.pdf) Năm 1980, khi thực hiện các nghiên cứu nuôi cấy tế bào ối, người ta dựa vào hình thái chia các tế bào nuôi cấy từ dịch ối làm 2 loại, tế bào dạng biểu mô và tế bào dạng sợi... hiệu quả của phương pháp nuôi cấy và thu hoạch in situ các tế bào ối để chẩn đoán tiền sản, kết quả phương pháp mới cho tỷ lệ nuôi cấy thành công là 100% và cụm NST tốt hơn phương pháp truyền thống [33] Sun và cộng sự (2007) nghiên cứu làm tăng tỷ lệ thành công khi nuôi cấy bằng cách thay môi trường nếu có sai sót trong khi thu nhận tế bào ối nuôi cấy và tách tế bào ối khỏi các dịch ối bất thường cùng... xử lý hiện băng các tế bào sau nuôi cấy cho kết quả có tính chính xác và hiệu quả chẩn đoán rất cao, vì vậy phương pháp này thường được dùng để kiểm chứng cho kết quả các phương pháp chẩn đoán tiền sản khác Trong đó phương pháp nuôi cấy chủ yếu được dùng là phương pháp 1 Tuy nhiên, do thời gian nuôi cấy tương ối dài và chất lượng tiêu bản NST chưa cao, nên việc nuôi cấy tế bào ối ở nước ta chưa phát... vùng cố định của bề mặt tế bào biến mất dẫn đến sự hoạt hóa bất thường của các phần bề mặt tế bào, ức chế di cư tế bào Demecolcine cũng tác động mạnh đến sự tổng hợp DNA trong tế bào khi nuôi cấy mật độ dày [17] Một vài nghiên cứu cho thấy khả năng đáp ứng với demecolcine khác nhau giữa tế bào thường và tế bào khối u Chỉ số phân bào trong nuôi cấy dòng tế bào khối u người bắt đầu tăng ngay khi thêm thuốc,... nguyên bào sợi, hydrocortisone, testosterone, estradiol, progesterone Mỗi nhân tố sinh trưởng kích thích sự phát triển 20-76%, với sự kết hợp từ 2-10 yếu tố, sự phát triển có thể tăng lên 48-213% 1 2.3.2 Giới thiệu một số phương pháp nuôi cấy tế bào ối Có 2 phương pháp nuôi cấy tế bào ối chính, đó là nuôi cấy bằng bình cấy flask và nuôi cấy in situ Trong đó nuôi cấy in situ gồm phương pháp nuôi cấy trên