Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 Khảo sát khả nhân giống Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana (Pierre) Sealy) in vitro Nguyễn Văn Kết1,*, Nguyễn Thị Cúc1, Nguyễn Trung Thành2 Khoa Nông Lâm, Đại học Đà Lạt, 01 Phù Đổng Thiên Vương, Đà Lạt, Việt Nam Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN, 334 Nguyễn Trãi, Hà Nội, Việt Nam Nhận ngày 09 tháng năm 2014 Chỉnh sửa ngày 20 tháng năm 2014; Chấp nhận đăng ngày 18 tháng năm 2014 Tóm tắt: Hạt Trà my hoa đỏ độ tuổi khác thu thập huyện Đạ Hoai, tỉnh Lâm Đồng khử trùng dung dịch calcium hypochlorite (Ca(OCl)2) 7% 20 phút, sau ni cấy mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BA, 30g/l sucrose 1g/l than hoạt tính, sau 60 ngày ni cấy hạt 30 ngày tuổi có tỷ lệ nảy mầm cao thời gian nảy mầm sớm Các chồi Trà my hoa đỏ in vitro nuôi cấy loại môi trường khoáng khác để xác định thành phần muối khoáng thích hợp, sau có mơi trường khống thích hợp tiếp tục khảo sát bổ sung nồng độ chất kích thích sinh trưởng BA TDZ để xác định nồng độ chất kích thích sinh trưởng thích hợp cho việc tạo chồi Kết cho thấy môi trường WPM mơi trường thích hợp cho sinh trưởng phát triển Trà my hoa đỏ Mơi trường WPM có bổ sung mg/l TDZ mơi trường thích hợp cho q trình hình thành chồi (3,53 chồi mới) Các chồi Trà my hoa đỏ in vitro có - đốt - ni cấy mơi trường có thay đổi khác nồng độ IBA (1; 3; 7mg/l) NAA (0,1; 0,3; 0,5 0,7mg/l), kết sau 30 ngày nuôi cấy cho thấy môi trường WPM có bổ sung 5mg/l IBA 0,5mg/l NAA mơi trường thích hợp cho tạo rễ (14 rễ/chồi) Từ khóa: in vitro, nhân giống, Trà my hoa đỏ, Camellia Mở đầu* hình dáng tính q chúng Ngồi tự nhiên số cá thể lồi cịn phạm vi phân bố hẹp nên đứng trước nguy tuyệt chủng Cây Trà my hoa đỏ loài đặc hữu hẹp Việt Nam, phân bố khu vực giáp ranh tỉnh Lâm Đồng Đồng Nai nơi có hệ sinh thái rừng hỗn giao tre nứa thân gỗ [1, 2] Cây Trà my hoa đỏ gần nhiều người quan tâm dùng làm cảnh nhờ vào vẻ đẹp độc đáo màu sắc, cấu tạo hoa, Cây Trà my nhân giống nhiều phương pháp như: gieo hạt, giâm cành, chiết cành, ghép cành Tuy nhiên, phương pháp tồn số nhược điểm như: phụ thuộc vào mùa vụ hạt chín, tỷ lệ nảy mầm thấp, hạt phân ly tính trạng, hệ số nhân giống thấp Ni cấy mơ tế bào khắc phục nhược điểm trên, việc áp dụng phương pháp vào _ * Tác giả liên hệ ĐT.: 84-63.3834051 Email: ketnv@dlu.edu.vn 17 18 N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 nhân giống Trà my giải pháp cần xem xét, nghiên cứu Vì chúng tơi thực nghiên cứu: “Khảo sát khả nhân giống Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana) in vitro” nhằm bảo tồn phát triển nguồn gen thực vật quí Vật liệu phương pháp nghiên cứu Chồi Trà my hoa đỏ in vitro tháng tuổi cấy loại môi trường khác nhau: MS, ½ MS (ĐL), ½ MS (ĐL + VL), WPM, ½ WPM (ĐL) để xác định thành phần muối khống thích hợp cho sinh trưởng phát triển Trà my hoa đỏ in vitro, sau tiếp tục cấy mơi trường có bổ sung BA TDZ với nồng độ khác để khảo sát mơi trường nhân chồi thích hợp Giai đoạn tạo rễ 2.1 Vật liệu Mẫu ban đầu Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana Sealy) thu thập Di linh, Đambri, Đạ Huoai, Lâm Đồng Hóa chất dùng khử trùng mẫu Tween® (Fluka, Đức) calcium hypochlorite (Ca(OCl)2) dạng bột nguyên chất 99,9% (Sigma, Mỹ) 2.2 Phương pháp nghiên cứu Giai đoạn tạo mẫu vô trùng Quả trà mi sau thu tách bỏ vỏ lấy hạt khử trùng dung dịch calcium hypochlorite (Ca(OCl)2) 7% 20 phút, sau ni cấy mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BA, 30g/l sucrose 1g/l than hoạt tính để khảo sát khả nảy mầm hạt Trà my hoa đỏ độ tuổi khác nhau: 10, 20, 30, 60 90 ngày Giai đoạn nhân chồi Chồi Trà my hoa đỏ in vitro có 3-4 đốt với 4-5 cấy mơi trường có bổ sung tổ hợp IBA (1; 3; 7mg/l) NAA ( 0,1; 0,3; 0,5 1,0 mg/l) để khảo sát môi trường rễ Chỉ tiêu theo dõi Số lượng (lá/chồi), số lượng rễ (rễ/chồi), tỷ lệ rễ (%), số lượng chồi (chồi/ mẫu cấy), số lượng đốt (đốt/chồi), chiều cao chồi (cm), chiều dài rễ (cm), khối lượng tươi (mg), thời gian nảy mầm (ngày), tỷ lệ nảy mầm (%) Kết thảo luận 3.1 Giai đoạn tạo mẫu vô trùng Ảnh hưởng tuổi hạt lên trình nảy mầm hạt Trà my hoa đỏ in vitro Kết nghiên cứu ảnh hưởng độ tuổi hạt lên tỷ lệ nảy mầm, thời gian nảy mầm, số đốt, số trình bày tóm tắt Bảng Bảng Tỷ lệ nảy mầm, thời gian nảy mầm, số đốt, số hạt Trà my hoa đỏ độ tuổi khác sau 60 ngày nuôi cấy Tuổi hạt 10 ngày Tỷ lệ nảy mầm (%) 33,3d* Thời gian nảy mầm (ngày) 36,7ab Số đốt thân/cây 1,7cd Số lá/ Cây 0,7b 20 ngày 93,3a 23,3bc 3,0bc 4,3a 30 ngày 100,0 a 13,3c 5,0bc 5,0a 60 ngày 73,3 bc 30,0b 2,3a 3,0ab 33,3 d 46,7a 2,0cd 2,0ab 90 ngày Chú thích: *: cột có ký tự giống khác biệt nghiệm thức khơng có ý nghĩa phân hạng LSD mức p ≤ 0,05 N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 Kết trình bày Bảng Hình 1b cho thấy, tỷ lệ nảy mầm, thời gian nảy mầm, số đốt thân, số phụ thuộc vào tuổi hạt Tuổi hạt thí nghiệm tính từ hoa thụ phấn đến thu hái mẫu Tỷ lệ nảy mầm, số đốt thân, số tăng dần từ hạt trà my có độ tuổi từ 10 đến 30 ngày tuổi đạt cao hạt 30 ngày tuổi, sau đó, giảm dần hạt 60, 90 ngày tuổi Điều giải thích hạt 10 ngày tuổi, 20 ngày tuổi măc dù xuất cấu trúc phôi chưa hồn chỉnh tích lũy hợp chất hữu nội nhũ chưa đầy đủ cho nảy mầm Hạt 30 ngày tuổi cấu trúc phôi hồn chỉnh, tích lũy dinh dưỡng dự trữ cần thiết nội nhũ đầy đủ cho hạt nảy mầm Ở hạt 60 ngày tuổi 90 ngày tuổi trưởng thành 19 tích lũy đầy đủ chất dinh dưỡng cần thiết chúng tích lũy số lượng lớn chất ức chế sinh trưởng ABA hợp chất phenol, giảm hàm lượng chất kích thích sinh trưởng auxin, GA3 cytokinin làm cho cân hormone (chủ yếu cân ABA/GA3) lệch phía tích lũy nhiều ABA Chính có mặt hàm lượng cao ABA ức chế tổng hợp enzyme thủy phân cần cho nảy mầm, trạng thái ngủ Do đó, hạt cần thời gian định để giảm hàm lượng ABA xuống mức tối thiểu [3] Vì vậy, hạt cần thời gian dài để giảm hàm lượng ABA nội sinh, tăng hàm lượng GA3 chúng chuyển từ trạng thái ngủ sang trạng thái hoạt động Hình a Quả Trà my hoa đỏ tự nhiên, b hạt Trà my hoa đỏ độ tuổi khác sau 60 ngày nuôi cấy 3.2 Giai đoạn nhân chồi Ảnh hưởng môi trường khoáng lên sinh trưởng phát triển Trà my hoa đỏ in vitro Bảng Các tiêu sinh trưởng Trà my hoa đỏ mơi trường khống khác sau 90 ngày ni cấy Mơi trường 1/2WPM (ĐL) WPM MS 1/2MS (ĐL) ½ MS (ĐL + VL) Số lá/ chồi 1,90b* 3,60a 1,90b 2,60b 2,00b Số đốt/ chồi 2,00b 3,10a 1,90bc 2,40ab 1,20c Chiều cao chồi (cm) 1,32cd 1,69a 1,41bc 1,52ab 1,16d Chú thích: *: cột có ký tự giống khác biệt nghiệm thức khơng có ý nghĩa phân hạng Duncan’s Mutiple Range Test mức p ≤ 0,05 20 N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 Kết nghiên cứu trình bày Bảng Hình 2a cho thấy tiêu sinh trưởng số lá, số đốt, chiều cao phụ thuộc lớn vào môi trường nuôi cấy Trên môi trường ½ MS đa lượng vi lượng sinh trưởng chồi thấp nhất, chồi đạt chiều cao 1,16 cm, số đốt số tăng không đáng kể Trên môi trường MS chồi sinh trưởng tốt tháng đầu tiên, tháng thứ hai trở chồi sinh trưởng chậm dần ngừng hẳn, có tượng khô héo đỉnh chồi Riêng chồi mơi trường ½ MS đa lượng có gia tăng số đốt, số chiều cao chồi không to khỏe Sự sinh trưởng chồi đáng ý mơi trường WPM, chồi có sinh trưởng phát triển tốt nhất, tiêu số (3,6 lá), số đốt thân (3,1 đốt) chiều cao chồi (1,7 cm) vượt trội so với môi trường khác Trên môi trường WPM hàm lượng khoáng đa lượng thấp hàm lượng vitamin thiamin (B1) cao gấp 10 lần so với môi trường MS nên có tác dụng tốt cho q trình trao đổi chất, giúp cho mơ ni cấy hấp thụ trực tiếp loại vitamin môi trường nuôi cấy, đặc biệt giai đoạn nhân chồi tạo chồi Vì giai đoạn này, chồi non chưa hình thành nên khả quang hợp tự tạo chất hữu nhỏ phát triển chồi phụ thuộc vào chất hữu mơi trường ni cấy Vitamin có vai trị xúc tác q trình trao đổi chất diễn tế bào, muốn đạt sinh trưởng mạnh cho mô nuôi cấy nhà nghiên cứu thêm vào môi trường số vitamin thông thường như: nicotinic acid, pyridoxine, thiamin, glycine Trong số đó, vitamin B1 coi vitamin thiết yếu cho sinh trưởng biến dưỡng tế bào thực vật Sự phosphoryl hóa biến thiamin thành thiamin-pyrophosphat, chất cocarboxilase tương ứng với khử carboxyl acid cetonic [4, 5] Ảnh hưởng BA lên trình tạo chồi Trà my hoa đỏ Môi trường sử dụng thí nghiệm mơi trường WPM có bổ sung 3% sucrose BA với nồng độ từ - 7mg/l Kết thu sau 90 ngày nuôi cấy trình bày Bảng Bảng Các tiêu sinh trưởng Trà my hoa đỏ mơi trường có bổ sung BA nồng độ khác BA (mg/l) Số lá/ mẫu cấy 5,60c* 6,19b 7,07a 3,87d 3,47e Số đốt/ mẫu cấy 5,67b 5,25c 6,14a 3,27d 2,80e Số chồi/ mẫu cấy 1,13e 1,50d 2,86a 2,40b 1,80c Chiều cao chồi (cm) 1,68d 1,90c 2,66a 2,26b 1,67d Trọng lượng tươi (mg) 22,13e 31,56d 51,07a 41,87b 32,87c Chú thích: *: cột có ký tự giống khác biệt nghiệm thức khơng có ý nghĩa phân hạng Duncan’s Mutiple Range Test mức p ≤ 0,05 Sau 90 ngày nuôi cấy, số chồi mơi trường đối chứng thấp sau tăng lên mơi trường ni cấy có bổ sung 1mg/l BA Số chồi tiếp tục tăng đến mức cực đại mơi trường có bổ sung 3mg/l BA (2,86 chồi), tiếp tục tăng lên 5mg/l số chồi giảm dần thấp nồng độ tăng 7mg/l Nguyên nhân nồng độ chất kích thích sinh trưởng cao không gây tạo nhiều chồi mà ức chế sinh trưởng phát triển mô cấy Các nghiên cứu [6] nho ghi nhận nồng độ BA bổ sung vượt ngưỡng tối ưu làm N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 21 giảm số lượng chất lượng chồi hình thành, chí dẫn đến bất thường hình thái số loại Nhận định phù hợp với kết thu thí nghiệm tổng hợp tiêu thành phần số đốt, số lá, số chồi chiều cao chồi Hầu tất mơi trường có bổ sung BA có tăng trưởng tốt so với mơi trường đối chứng không bổ sung BA Khối lượng tươi chồi yếu tố quan trọng biểu sinh trưởng chồi Ảnh hưởng TDZ lên trình tạo chồi Trà my hoa đỏ Bảng Các tiêu sinh trưởng Trà my hoa đỏ mơi trường có bổ sung TDZ nồng độ khác TDZ (mg/l) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 Số lá/ mẫu cấy 5,60f* 6,40e 6,93d 8,33b 9,07a 8,13c Số đốt/ mẫu cấy 5,67d 4,67f 5,40e 7,00c 7,80a 7,20b Số chồi/ mẫu cấy 1,13f 1,60e 2,40d 2,80c 3,53a 3,20b Chiều cao chồi (cm) 1,68c 1,47d 1,71c 1,84b 2,25a 1,71c Trọng lượng tươi (mg) 22,13f 24,67e 27,53d 29,60c 39,00a 32,53b Chú thích: *: cột có ký tự giống khác biệt nghiệm thức khơng có ý nghĩa phân hạng Duncan’s Mutiple Range Test mức p ≤ 0,05 Sự bổ sung TDZ vào môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng phát triển chồi Tất nghiệm thức có bổ sung TDZ khác biệt so với đối chứng, bổ sung TDZ ảnh hưởng lớn đến hình thành chồi Sự hình thành chồi tăng dần tương ứng với nồng độ từ 0,5 - 2mg/l TDZ, số chồi đạt tối ưu nồng độ 2mg/l TDZ đạt 3,53 chồi, sau tiếp tục tăng nồng độ TDZ lên 3mg/l số chồi giảm xuống 3,20 chồi Kết cho thấy, việc bổ sung nồng độ TDZ cao vào môi trường nuôi cấy khơng có lợi cho việc thúc đẩy hình thành chồi mà cịn gây lãng phí hóa chất không mang lại hiệu kinh tế cao Nồng độ 2mg/l TDZ thích hợp cho hình thành chồi, nồng vượt lên cao số chồi giảm Mơi trường WPM có bổ sung 2mg/l TDZ thích hợp cho q trình nhân chồi Trà my hoa đỏ a 1/2WPM WPM MS 1/2WPM(đl) 1/2WPM(đl +vl) 22 N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 b 0mg/l BA 1mg/l BA 3mg/l BA 5mg/l BA 7mg/l BA c 0mg/l TDZ 0,5mg/l TDZ 1mg/lTDZ 1,5mg/lTDZ 2mg/lTDZ 3mg/lTDZ Hình Sự sinh trưởng phát triển chồi Trà my hoa đỏ môi trường khác sau 90 ngày nuôi cấy, A mơi trường khống khác nhau, B mơi trường bổ sung BA nồng độ khác nhau, C mơi trường có bổ sung TDZ nồng độ khác 3.3 Giai đoạn tạo rễ Ảnh hưởng IBA NAA lên trình tạo rễ Trà my hoa đỏ Bảng Các tiêu sinh trưởng Trà my hoa đỏ môi trường có bổ sung IBA NAA nồng độ khác sau 30 ngày nuôi cấy Nghiệm thức Tỉ lệ rễ (%) 0mg/l IBA+0mg/l NAA 1mg/l IBA+0,1mg/l NAA 3mg/l IBA+0,1mg/l NAA 5mg/l IBA+0,1mg/l NAA 7mg/l IBA+0,1mg/l NAA 1mg/l IBA+0,3mg/l NAA 0b 0b 100a 100a 100a 0b Số lá/ mẫu cấy 6,6f 6,8f 8,07e 9,27abc 8,6cde 6,87f Số rễ/ mẫu cấy Số đốt/ mẫu cấy 0,0i 0,0i 8,30ef 6,70f 9,80de 0,0i 5,4g 5,67fg 6,13cdef 5,93defg 6,4abcde 5,87efg Chiều cao (cm) 3,37i 3,51gh 3,73cd 3,47h 3,63ef 3,52gh Chiều dài rễ (cm) 0g 0g 1,30f 1,91b 1,36ef 0g Trọng lượng tươi (mg) 51,04i 88,05de 73,64h 76,49gh 77,36fgh 77,47fgh N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 3mg/l IBA+0,3mg/l NAA 5mg/l IBA+0,3mg/l NAA 7mg/l IBA+0,3mg/l NAA 1mg/l IBA+0,5mg/l NAA 3mg/l IBA+0,5mg/l NAA 5mg/l IBA+0,5mg/l NAA 7mg/l IBA+0,5mg/l NAA 1mg/l IBA+1mg/l NAA 3mg/l IBA+1mg/l NAA 5mg/l IBA+1mg/l NAA 7mg/l IBA+1mg/l NAA 100a 100a 100a 0b 100a 100a 100a 0b 100a 100a 100a 8,2de 9,73a 8,87bcd 6,87f 8,27de 9,53ab 8,67cde 7,0f 10,4de 10,4de 10,4de 11,30bcd 12,30abc 8,20ef 12,70ab 10,40d 14,00a 6,50f 0,0i 11,60bcd 11,30bcd 7,70g 6,20bcdef 6,27abcd 6,73ab 5,93defg 6,4abcde 6,6abc 6,6abc 6,0def 8,8a 8,47abcd 8,2bcdef 3,77bc 3,73de 3,85b 3,55fgh 3,73cd 3,96a 3,75cd 3,66de 3,66de 3,66de 3,59efg 1,33ef 1,94ab 1,45d 0g 1,39de 2,01a 1,38def 0g 1,57c 1,46d 1,33ef 23 86,67de 110,70b 51,60i 101,29c 90,54d 132,03a 70,00h 82,33efg 84,50def 84,38def 70,81h Chú thích: *: cột có ký tự giống khác biệt nghiệm thức khơng có ý nghĩa phân hạng Duncan’s Mutiple Range Test mức p ≤ 0,05 Kết trình bày Bảng Hình cho thấy bổ sung IBA NAA nồng độ khác có ảnh hưởng lớn đến hình thành số lá, số rễ, số đốt, chiều cao cây, chiều dài rễ khối lượng tươi tỷ lệ rễ Trà my hoa đỏ thành rễ Trong đó, mơi trường sử dụng 5mg/l IBA sinh trưởng phát triển bình thường, dùng nồng độ IBA lớn 5mg/l không hiệu gây lãng phí Ở nồng độ IBA cao rễ có khuynh hướng ngắn lại có xu hướng hình thành mơ sẹo Sự bổ sung IBA NAA vào mơi trường ni cấy có tác động lớn đến hình thành số rễ mẫu cấy NAA IBA có tương tác tác động lên q trình hình thành rễ Tất mơi trường có bổ sung nồng độ 3mg/l IBA trở lên kích thích hình thành rễ bất định từ chồi, rễ trắng, khỏe mạnh, lông hút phát triển tốt so với môi trường đối chứng không bổ sung IBA NAA khơng có mẫu tạo rễ Mơi trường có bổ sung 5mg/l IBA 0,5mg/l NAA môi trường tạo rễ nhiều nhất, rễ khỏe mạnh, có màu trắng có hệ thống lông hút phát triển Trong điều kiện nồng độ NAA bổ sung nồng độ IBA khác có ảnh hưởng lớn đến số rễ chồi Ở nồng độ 5mg/l IBA thích hợp cho hình thành số lượng rễ mẫu Tuy nhiên, vào trình quan sát lấy số liệu cho thấy nồng độ 7mg/l IBA mẫu có dấu hiệu hình thành nhiều mầm rễ đoạn thân Hiện tượng cho thấy nồng độ 7mg/l IBA cao cho hình Kết tương tự số nghiên cứu khác trà my như: Camellia sinensis rễ mơi trường ½ MS lỏng, lắc 70 vịng/phút có bổ sung 3mg/l IBA cho tần số tái sinh rễ 63,2%, có 13,8 chồi chiều dài rễ đạt 0,5-1,5cm [7] Hay Camellia nitidissima Chi rễ môi trường WPM bổ sung 5mg/l IBA 0,05mg/l NAA cho 80% số chồi rễ, mẫu có 10,3 rễ [7] Nghiên cứu tác giả cho thấy sử dụng nồng độ IBA cao có khuynh hướng tạo mơ sẹo gốc, kết hợp IBA NAA làm gia tăng hiệu hình thành rễ cây, việc sử dụng loại auxin riêng rẽ không phát huy tác dụng mạnh lên hình thành rễ phối kết hợp loại auxin khác nhau, thí nghiệm phối hợp IBA NAA cho kết tốt Từ kết cho thấy, môi trường WPM có bổ sung 5mg/l IBA 0,5mg/l NAA thích hợp cho trình rễ Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana (Pierre) Selly) 24 N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 Hình Sự hình thành rễ Trà my hoa đỏ mơi trường có bổ sung nồng độ IBA NAA khác Ghi chú: a:1mg/l IBA + 0,1 mg/l NAA; b: 3mg/l IBA + 0,1 mg/l NAA; c: 5mg/l IBA + 0,1 mg/l NAA; d: 7mg/l IBA + 0,1 mg/l B: e:1mg/l IBA + 0,5 mg/l NAA; f: 3mg/l IBA + 0,5 mg/l NAA; g: 5mg/l IBA + 0,5 mg/l NAA; h: 7mg/l IBA + 0,5 mg/l i:1mg/l IBA + mg/l NAA; j: 3mg/l IBA + mg/l NAA; k: 5mg/l IBA + mg/l NAA; l: 7mg/l IBA + mg/l NAA m:1mg/l IBA + mg/l NAA; n: 3mg/l IBA + 1mg/l NAA; o: 5mg/l+ mg/l NAA; p: 7mg/l IBA + 1mg/l NAA N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 Kết luận Tỷ lệ nảy mầm hạt Trà my hoa đỏ đạt cao độ tuổi 30 ngày Mơi trường khống thích hợp cho sinh trưởng phát triển chồi Trà my hoa đỏ in vitro mơi trường WPM có bổ sung 30g/l sucrose, 8g/l agar, 1g/l than hoạt tính Mơi trường thích hợp cho giai đoạn nhân nhanh chồi Trà my hoa đỏ in vitro môi trường WPM có bổ sung 2mg/l TDZ Mơi trường thích hợp cho giai đoạn tạo rễ Trà my hoa đỏ in vitro mơi trường WPM có bổ sung 5mg/l IBA 0,5 NAA Tài liệu tham khảo [1] Phạm Hoàng Hộ (1993) Cây cỏ Việt Nam Nhà xuất trẻ [2] Nguyễn Văn Kết, Lương Văn Dũng, Võ Duẩn (2013) Đa dạng loài Trà mi (Camellia) Lâm Đồng Hội thảo quốc tế, Khoa học Công nghệ 25 phục vụ phát triển sản xuất nông nghiệp công nghệ cao tỉnh Lâm Đồng 93-96 [3] Vũ Văn Vụ (2000) Sinh lý thực vật Nhà xuất Giáo dục Gerald, C., Marie, k., Kelly C., Pullman, R., (2006), Loblolly pine (Pinus taeda L.) somatic embryogenesis: Improvements in embryogen-ic tissue initiation by supplementation of medium with organic acids, Vitamins B12 and E, Plant Science, Vol 170, Issue 3, Pages 648-658 [4] ShuoHao Huang, HaiBin Zeng, JianYun Zhang, Shu Wei, LongQuan Huang (2011) Interconversions of different forms of vitamin B6 intobacco plants Phytoch., Vol 72, Issue 17, Pages 2124 -2129 [5] Võ Thị Thu Hà (2004) Nghiên cứu qui trình nhân giống dòng Camellia sinensis (L) O Kuntze suất cao lâm đồng kỹ thuật nuôi cấy mô in vitro Luận văn thạc sỹ - Sinh học Thực nghiệm, Đại học Đà Lạt [6] Jinfeng Lü, Rong Chen, Muhan Zhang, Jaime A Teixeira da Silva, Guohua Ma (2013), Plant regeneration via somatic embryogenesis and shoot organogenesis from immature cotyledons of C nitidissima Chi J of Plant Physiol., Vol 170, Pages 120-121 [7] Kowallik W (1982) Blue light effects on respiration Annu Rev, Plant physiol 33:51-72 , Propagation of Camellia piquetiana (Pierre) Sealy in vitro Nguyễn Văn Kết1, Nguyễn Thị Cúc1, Nguyễn Trung Thành2 Dalat University, 01 Phù Đổng Thiên Vương, Đà Lạt, Vietnam Faculty of Biology, VNU University of Science, 334 Nguyễn Trãi, Hanoi, Vietnam Abstract: Seeds of Camellia piquetiana Sealy in different ages were collected at Đạ Hoai district, Lâm Đồng province disinfected with a solution of calcium hypochlorite (Ca(OCl)2) 7% and 6% in 20 minutes, followed by culturing on MS media supplemented with 0.5 mg/l BA, 30 g/l sucrose and 1g/l activated charcoal, after 60 days of culture, 30-day-old seeds the rate of germination of seed germination are the highest and germination time is the earliest The shoots were cultured on different types of minerals medium to determine the mineral composition suitable, after appropriate minerals medium continue examining additional levels of plant growth regulator stimulants BA and TDZ to determine the concentration of growth stimulants suitable for creating shoots This result showed that WPM environment is most suitable medium for the growth and development of Camellia piquetiana Sealy WPM media supplemented with mg/l TDZ was the most suitable medium for the formation of shoots (3.53 shoots/explant) The shoots were cultured on medium change different concentrations of IBA (1, 3, and mg/l) and NAA (0.1; 0.3; 0.5 and mg/l), the results after 30 days of culture showed that WPM media supplemented with mg/l IBA + 0,5 mg/l NAA is the most optimal medium for rooting (14 roots/shoot) Keywords: in vitro, Propagation, Camellia ... chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 nhân giống Trà my giải pháp cần xem xét, nghiên cứu Vì thực nghiên cứu: ? ?Khảo sát khả nhân giống Trà my hoa đỏ (Camellia. .. trình rễ Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana (Pierre) Selly) 24 N.V Kết nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Cơng nghệ, Tập 30, Số (2014) 17-25 Hình Sự hình thành rễ Trà my hoa đỏ mơi... phát triển chồi Trà my hoa đỏ in vitro mơi trường WPM có bổ sung 30g/l sucrose, 8g/l agar, 1g/l than hoạt tính Mơi trường thích hợp cho giai đoạn nhân nhanh chồi Trà my hoa đỏ in vitro môi trường